HtrA1、Survivin在早发型重度子痫前期胎盘组织中的表达及意义

HtrA1、Survivin在早发型重度子痫前期胎盘组织中的表达
及意义
李春芳;苟文丽;宗璐;李扬
【摘要】目的探讨HtrAl(high temperature requirement A1,HtrAl)及Survivin 在早发型重度子痫前期(early-onsetsevere preeclampsia,ES-PE)胎盘组织中的表达及其意义.方法采用SABC法测定早发型(30例)与晚发型(35例)重度子痫前期患者胎盘组织中HtrA1及Survivin的表达.结果 HtrAl在早发型重度子痫前期胎盘组织中的表达明显高于晚发型,平均灰度值分别为142.63±3.48和158.72±4.26(平均灰度值与表达强度成负相关),差异有统计学意义(P＜0.05);Survivin在早发型重度子痫前期胎盘组织中的表达明显低于晚发型,平均灰度值分别为138.32±3.26和126.47±2.85,差异有统计学意义(P＜0.05);HtrA1和Survivin在子痫前期胎盘组织中的表达呈负相关(r=-0.67,P＜0.05).结论 HtrA1、Survivin与早发型重度子痫前期的发生密切相关,提示早发型重度子痫前期与晚发型发病机制可能不同.
【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》
【年(卷),期】2014(035)005
【总页数】4页(P678-681)
【关键词】HtrAl;Survivin;早发型重度子痫前期;胎盘
【作者】李春芳;苟文丽;宗璐;李扬
【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安 710061;西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安 710061;西安交通大学医学院第一附
属医院妇产科,陕西西安 710061;西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安 710061
【正文语种】中文
【中图分类】R714.24
子痫前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有疾病，易伴发严重母婴并发症，尤其
是早发型重度子痫前期，发病早、病情重、母婴预后差，是导致母婴死亡的重要原因。

起病于34周前的重度子痫前期称为早发型(early-onset severe preeclampsia，ES-PE)，在此后发病者称为晚发型重度子痫前期。

Htr A1(high temperature requirement A1)是一种具有热休克蛋白性质的膜丝氨酸蛋白酶。

既往研究发现［1］，Htr A1参与早期妊娠胎盘发育，可能与滋养细胞增殖分化及凋亡有关；Survivin是迄今发现的最强凋亡抑制因子，与细胞凋亡密切相关［2］。

目前，认为早发型与晚发型重度子痫前期可能存在不同的病因和发病机制［3-4］，早发型重度子痫前期更倾向于一种胎盘性疾病。

因此，推测Htr A1及Survivin与早发型重度子痫前期发生有关。

本研究通过测定早发型与晚发型重度子痫前期患者胎盘组织Htr A1及Survivin的表达，初步阐明早发型与晚发型可能存在不同的发病机制。

1.1 研究对象选取2013年1月至2014年1月在西安交通大学医学院第一附属医院产科住院行剖宫产的65例子痫前期患者及60例正常妊娠患者作为研究对象。

其中早发型重度子痫前期30例，非妊高病早产组30例作为对照，两组平均年龄(28.4±2.3)岁，平均孕期(31.4±2.2)周，差异无统计学意义；晚发型重度子痫前期35例，正常足月组30例作为对照，两组平均年龄(28.8±1.8)岁，平均孕期(36.4± 2.7)周，差异无统计学意义。

各组患者平均年龄差异无统计学意义(t=1.26，P＞0.05)。

所有孕妇均无烟酒等嗜好；既往均无糖尿病、心脏病及肝肾疾病史，无其
他妊娠合并症及并发症；均已签署知情同意书。

重度子痫前期诊断及分类严格按照人民卫生出版社出版的《妇产科学》第8版之分类标准。

妊娠34周之前发病者为早发型重度子痫前期。

重度子痫前期诊断标准：BP≥160/110 mm Hg；尿蛋白≥2.0 g/24 h或随机尿蛋白≥(⧺)或有其他脏器损害的指标异常。

1.2 研究方法
1.2.1 标本收集及处理剖宫产胎盘娩出后即时自胎盘母体面中央取绒毛组织约1 cm×1 cm×1 cm，充分漂洗后置40 g/L多聚甲醛溶液中固定24 h以上，常规石蜡包埋，制成蜡块，-20℃干燥保存，待切片、染色。

1.2.2 试剂及方法 Htr A1抗体(美国Abcam)，兔抗人Survivin多克隆抗体(北京中杉)。

采用SABC法测定胎盘组织中Htr A1及Survivin的表达。

实验步骤按试剂盒说明进行。

1.2.3 判定标准采用德国LEICA公司生产的生物医学图像分析系统(Q550CW)进行灰度定量分析。

由显微摄像机将切片图像输入计算机，每张切片随机选取5个不重叠的40倍视野，分别计算每视野的Htr A1、Survivin平均灰度值，进而求出每例胎盘标本的平均灰度值。

用平均灰度值代表Htr A1、Survivin在胎盘的表达水平。

阳性区表达的强弱和灰度值呈负相关，灰度值越大则阳性表达越弱。

1.3 统计学处理所有数据均采用SPSS 14.0统计软件处理，结果用表示。

组间比较采用t检验，相关分析采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 Htr A1及Survivin在胎盘组织的定位表达两组孕妇胎盘组织中均可检测到Htr A1及Survivin表达。

Htr A1主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞、细胞滋养细胞及蜕膜细胞，胎盘绒毛和蜕膜的间质中也有表达，定位于细胞浆，随孕周增加，Htr A1表达逐渐增强；早发型重度子痫前期胎盘染色较晚发型重度子痫前期深，并且分布较集中。

Survivin主要表达于胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞及细胞滋养细胞胞浆中，随孕周增加，Survivin表达逐渐降低；早发型重度子痫前
期胎盘染色较晚发型重度子痫前期浅(图1、图2)。

2.2 两组孕妇胎盘组织中Htr A1及Survivin的表达情况对Htr A1、Survivin在胎盘组织中的表达分别进行正态性检验(WHtrA1=1.256，P=0.372；
WSurvivin=1.824，P=0.388)，方差齐性检验(FHtrA1=1.172，P=0.328；FSurvivin=1.756，P=0.365)，P＞0.05，可知均服从正态分布。

在正常妊娠患者胎盘组织中，Htr A1的表达随着孕周的增加而增强，Survivin的表达随着孕周的
增加而降低，早产组与足月组比较有显著统计学差异(表1)。

与晚发型重度子痫前期比较，早发型重度子痫前期孕妇胎盘组织中Htr A1表达明显增高，平均灰度值明显低于晚发型(t=4.36，P= 0.02)，差异有统计学意义；Survivin表达早发型重
度子痫前期较晚发型明显降低，平均灰度值明显高于晚发型(t=3.87，P=0.03)，
差异有统计学意义(表2)。

2.3 胎盘组织中Htr A1及Survivin表达的相关性对胎盘组织中的Htr A1及Survivin表达水平进行直线相关回归分析，结果显示Htr A1及Survivin的表达水平呈负相关(r=-0.67，P＜0.05)。

3.1 早发型与晚发型重度子痫前期的差异与晚发型比较，早发型重度子痫前期发病早，更易出现各种严重合并症，严重危害母婴健康。

目前，被广泛接受的重度子痫前期发病机制学说为两阶段模式［5］：第一阶段，妊娠早期滋养层细胞浸润不足，导致胎盘“浅着床”和螺旋动脉重铸不良，胎盘低灌注。

第二阶段，胎盘缺血再灌注损伤，胎盘因子释放入母体血液循环，导致系统性炎症和内皮损伤。

大多数学者认为［4，6］早发型与晚发型重度子痫前期发病机制不同，研究发现ES-PE患者
的胎盘组织凋亡明显增加，滋养细胞侵入受限，胎盘着床较浅，螺旋小动脉狭窄。

早发型重度子痫前期起源于胎盘，母胎界面发生的病理生理改变导致各种因子通过血液循环播散到全身，引发全身各脏器功能改变，同时滋养细胞分化增殖、凋亡和功能异常，使滋养细胞浸润能力受损，导致子宫螺旋小动脉生理重铸过程障碍，胎
盘“浅着床”，胎盘灌注减少，缺血缺氧，产生更多的毒性因子及代谢产物，血管内皮功能受损，形成恶性循环。

而晚发型重度子痫前期的发生过程更倾向于母体性疾病，是机体与疾病之间一个长期耐受最终失衡的过程，发病较晚，病情多不严重。

3.2 Htr A1、Survivin与重度子痫前期的关系胎盘滋养层细胞浸润功能与细胞增殖、凋亡有关，而重度子痫前期发病机制之一即为胎盘滋养细胞侵袭能力降低，胎盘“浅着床”［7］。

Htr A1是一种具有热休克蛋白性质的膜丝氨酸蛋白酶，属于Htr A丝氨酸蛋白酶家族。

既往研究发现，Htr A1参与早期妊娠胎盘发育，可能
与滋养细胞增殖分化及凋亡有关，进而推测Htr A1与子痫前期发生有关［8-9］。

我们既往研究发现［10-11］，正常妊娠时Htr A1在胎盘组织中的表达随着妊娠
的进展而逐渐增强。

本研究亦发现，足月产组胎盘组织Htr A1表达较早产组高，说明早孕期滋养细胞增殖分化活跃，分泌Htr Al增多。

Htr Al可降低滋养细胞侵
袭能力，调控滋养细胞侵蚀深度及范围，孕晚期Htr Al升高，促进滋养细胞凋亡，与胎盘组织成熟老化有关；子痫前期胎盘组织中Htr A1的表达高于正常妊娠，初步提示滋养细胞侵袭能力降低与子痫前期的发生有关［12］。

本研究发现与晚发
型比较，早发型重度子痫前期Htr A1表达明显增高，进一步说明早发型重度子痫前期的发病与胎盘滋养细胞浸润密切相关，与既往研究一致［4，6］。

Survivin是迄今发现的最强凋亡抑制因子，滋养细胞侵袭能力与细胞凋亡增殖有关。

随着妊娠的进展，胎盘滋养细胞凋亡增加，Survivin表达随孕周增加而降低。

本研究发现，足月产组胎盘组织Survivin表达较早产组降低，差异有显著性。

我
们既往研究［13-14］已发现子痫前期患者胎盘组织中Survivin表达明显低于正
常妊娠，且与病情严重程度成负相关，病情越重，Survivin表达越低，提示子痫
前期的发生与滋养细胞凋亡异常增加，侵袭能力下降有密切关系。

本研究发现，与晚发型比较早发型重度子痫前期Survivin表达明显降低，提示早发型胎盘滋养细
胞功能异常更为明显，与KADYROW等［2］研究一致。

但其导致滋养细胞浅植
入的具体机制尚待进一步研究。

早发型重度子痫前期的发生与胎盘功能异常关系密切。

因此，Htr A1及Survivin
等与滋养细胞侵袭能力相关的因子，其表达程度与早发型重度子痫前期的发生关系密切。

本研究发现早发型重度子痫前期胎盘组织中Htr A1的表达明显高于晚发型，差异有显著性；Survivin的表达明显低于晚发型重度子痫前期，差异有显著性，
且二者表达呈负相关(r=-0.67，P＜0.05)。

提示早发型重度子痫前期的发生与胎盘滋养细胞增殖凋亡有关，增殖能力降低，凋亡增加，导致滋养细胞侵袭能力降低。

因此，早发型重度子痫前期发病机制更倾向于胎盘滋养细胞侵袭能力降低，胎盘浅着床，缺血缺氧，释放某些物质引起血管内皮细胞损伤，导致出现子痫前期的临床表现［15-16］。

尽管研究提示早发型重度子痫前期的发生与调节胎盘滋养细胞功能的因子Htr A1、Survivin等有关，但其调控的具体机制尚不清楚，需进一步研究其调节通路，以
期阐明子痫前期的发病机制。

【相关文献】
［1］CLAUSEN T，KAISER M，HUBER R，et al.HTRA proteases：regulated proteolysis in protein quality control［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2011，12(1)：152-162.
［2］KADYROW M，KINGDOM JC，HUPPERTZ B.Divergent trophoblast invasion and apoptosis in placental bed spiral arteries from pregnancies complicated by maternal anemia and earlyonset preeclampsia/intrauterine growth restriction［J］.Am J Obstet Gynecol，2006，194(2)：557-563.
［3］RAYMOND D，PETERSON E.A critical review of early-onset and late-onset preeclampsia［J］.Obstet Gynecol Surv，2011，66 (8)：497-506.
［4］VALENSISE H，VASAPOLLO B，GAGLIARDI G，et al.Early and late preeclampsia：
two different maternal hemodynamic states in the latent phase of the disease
［J］.Hypertension，2008，52(5)：873-80.
［5］EGBOR M，ANSARI T，MORRIS N，et al.Morphometric placental villous and vascular abnormalities in early-and lateonset pre-eclampsia with and without fetal growth
restriction［J］.BJOG，2006，113(5)：580-589.
［6］ROBERTS JM，HUBEL CA.The two stage model of preeclampsia：Variations on the Theme［J］.Placenta，2009，30 (3)：32-37.
［7］NISHIZAWA H，OTA S，SUZUKI M，et parative gene expression profiling of placentas from patients with severe preeclampsia and unexplained fetal growth restriction ［J］.Reprod Biol Endocrinol，2011，9(1)：107-119.
［8］MARZIONI D，LORENZI T，ALTOBELLI E.Alterations of maternal plasma HTRA1 level in preeclampsia complicated by IUGR［J］.Placenta，2012，33(12)：1036-1038.
［9］INAGAKI A，NISHIZAWA H，OTA S.Upregulation of Htr A4 in the placentas of patients with severe pre-eclampsia［J］.Placenta，2012，33(11)：919-926.
［10］李春芳，苟文丽，宗璐，等.Htr Al在正常孕妇血清及胎盘组织中的表达及其意义［J］.西安交通大学学报：医学版，2013，34(1)：98-105.
［11］宗璐，苟文丽，郭娜.Htr A1和TGF-β1在妊娠期高血压病患者胎盘中的表达［J］.西安交通大学学报：医学版，2011，32(3)：355-358.
［12］LORENZI T，MARZIONI D，GIANNUBILO S，et al.Expression patterns of two serine protease Htr A1 forms in human placentas complicated by preeclampsia with and without intrauterine growth restriction［J］.Placenta，2009，30(1)：35-40.
［13］李雪兰，李春芳，王少丽，等.survivin蛋白及其m RNA在子痫前期患者胎盘中的表达［J］.西安交通大学学报：医学版，2010，31 (5)：631-633.
［14］LI CF，GOU WL，LI XL，et al.Reduced expression of survivin，the inhibitor of apoptosis protein correlates with severity of preeclampsia［J］.Placenta，2012，33(1)：47-51.
［15］DERWIG I，LYTHGOE DJ，BARKER GJ，et al.Association of placental perfusion，as assessed by magnetic resonance imaging and uterine artery Doppler ultrasound，and its relationship to pregnancy outcome［J］.Placenta，2013，34(10)：885-891.
［16］MOORE RJ，ONG SS，TYLER DJ，et al.Spiral artery blood volume in normal pregnancies and those compromised by preeclampsia［J］.NMR Biomed，2008，21(4)：376-380.。