益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠vegf基因表达及线粒体凋亡通路的影响

3
开皮肤，钝性分离双侧颈总动脉，分别结扎近心端与
3.1
结
果
各组大鼠海马区域 VEGF 阳性细胞数比较
方组 VEGF 阳性细胞数明显增多（P<0.05）。
术组只进行上述相应的手术步骤，不进行结扎，只分
离暴露双侧颈总动脉阻断其血流供应。
表1
造模成功后将实验大鼠随机分为 4 组：模
各组大鼠海马区域 VEGF 阳性细胞数 （x±s）
2
2.1
方
的活性和 ATP 的含量。
法
动物模型的制备
2.4
大鼠适应性喂养 1 周后，参照
经典的 2-VO 法（双侧颈动脉结扎方法） 建立模型。
验均采用双侧检验，P<0.05 为差异有统计学意义。
采用 10% 水合氯醛（0.3定，将颈前部的毛发剃除干净、消毒、切
Ⅰ～Ⅴ的活性及 ATP 含量，从而保护脑部神经细胞，改善脑代谢，减轻氧化损伤，这可能是该方治疗血管性痴呆
的作用机制之一。
关键词
益肺宣肺降浊方；血管性痴呆；血管内皮生长因子；线粒体调亡
中图分类号：R285.5
文献标识码：A
血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）是指由各种
文章编号：1003-0719（2020）01-0060-03
性痴呆的作用机制。
20170220 ；Morris 水迷宫由广西中医药大学第一附属
医院提供。
基金项目：国家自然科学基金项目（编号：81874453）
通信作者：唐农（1962—），教授，主任医师，研究方向：中医药防治老年病；E-mail: tn9689@
·60 ·（总 60 ）
广西中医药 2020 年 2 月第 43 卷第 1 期
型对照组、假手术组、益肺宣肺降浊方组、安理申组，
每组 25 只。益肺宣肺降浊方组:剂量为 1.5 g/（kg·d），
组 别
n
假手术组
25
每天灌胃 1 次，灌胃容量为 10 ml/kg；安理申组：剂量
模型对照组
模型对照组及假手术组: 给予等容量的生理盐水灌
益肺宣肺降浊方组
为 0.4 mg/（kg·d），分 2 次灌胃，灌胃容量为 10 ml/kg；
脑血管因素所致的以记忆和认知功能障碍为主要特
1
征的综合征，目前是导致老年人致残的三大疾病之
1.1
［1］
一 。随着人口老龄化，脑血管疾病发生率逐年上升，
VD 的发病率也在逐渐增长，给社会和家庭带来沉重
［2］
的经济负担 。由于血管性痴呆发病原因及病理机制
十分复杂，目前其发病机制尚不清楚。我们在前期的
研究中发现［3］，缺血后脑细胞的损伤与自由基代谢的
增多（P<0.05）；与假手术组比较，模型对照组大鼠海马组织 ATP 含量及线粒体呼吸链各复合物的活性均明显降
低（P<0.05）;与模型对照组比较，安理申组及益肺宣肺降浊方组大鼠海马组织线粒体复合物Ⅰ～Ⅴ的活性及
ATP 含量明显升高，有统计学意义（P<0.05）。结论：益肺宣肺降浊方能上调 VEGF 表达，显著升高线粒体复合物
实验材料
动物
健 康 雄 性 大 鼠 ，SPF 级 ，100 只 ，体 质 量
200±20 g，购于广西医科大学实验动物中心，动物合格
证号：SCXK（桂）2005－0003。大鼠行为测试无异常，
给予自由饮水与摄食，日光辅助照明，至少每日维持
在 12 h 以上。湿度适中，按时通风，更换垫料。
1.2
药物
益肺宣肺降浊方（由桔梗、杏仁、人参、麦
杂交试剂盒，均为武汉博士德生物工程有限公司产
的经验方，本研究通过观察益肺宣肺降浊方对血管性
品；三磷酸腺苷（ATP）和线粒体呼吸链复合物测定试
痴呆模型大鼠脑内血管内皮生长因子（VEGF）基因表
剂 盒 ，为 上 海 酶 联 生 物 技 术 有 限 公 司 产 品 ，批 号 ：
达及大脑皮层线粒体功能的影响，探讨该方治疗血管
［4］
2.2
统计学方法
45.674.59 ①
25
42.384.26 ①
注：与模型对照组比较，①P<0.05
末次灌胃 24 h 后，麻醉并
各组大鼠海马组织 ATP 含量及线粒体复合物Ⅰ
处死大鼠，断头取脑组织，去除嗅球和小脑，取大鼠缺
3.2
组织，常规切片脱蜡、染色、封片，在光镜下观察 30 个
大鼠海马组织 ATP 含量及线粒体呼吸链各复合物的
紊乱密切相关，是缺血性脑损伤的关键环节。VEGF
冬、黄芪、三七、苏子、石菖蒲、酒大黄组成），以上药材
表达在缺血性脑损伤的血管反应中可促进新生血管，
由我院药剂科统一采购，并在医院制剂室制备成浓缩
改善脑损伤。同时线粒体作为细胞能量代谢重要的
器管，是生成能量的主要场所，发生缺血改变时线粒
体氧化分解功能障碍，可使学习记忆的关键区域（海
层线粒体功能的影响。方法：将 100 只健康雄性 SPF 级 SD 大鼠随机分为假手术组、模型对照组、安理申组、益肺
宣肺降浊方组，每组 25 只。采用免疫组化法检测大鼠脑内 VEGF 表达、用比色法检测线粒体复合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，
Ⅳ，Ⅴ的活性和 ATP 的含量。结果：与模型对照组比较，安理申组和益肺宣肺降浊方组 VEGF 阳性细胞数明显
标本采集及指标检测
VEGF 阳性细胞数
7.820.63
25
25.340.86
25
安理申组
胃，1 次/天。各组均连续灌胃 28 d。
2.3
见
表 1。与模型对照组比较，安理申组和益肺宣肺降浊
远心端，剪断其中间阻断血流，缝合皮肤、消毒。假手
分组
采用 SPSS 20.0 统计软件进行分析，
计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，所有的统计检
马、皮层）区域受损，出现记忆力和认知功能下降。益
肺宣肺降浊方是广西名中医唐农教授临床治疗痴呆
液，
浓度为 0.15 g/ml。安理申口服制剂[卫材（中国）药业
有限公司生产，
国药准字 H20070181，
批号：
130635A]。
1.3
主要试剂及仪器
兔抗大鼠 VEGF 多克隆抗体、
即用 SABC 免疫组化染色试剂盒和 VEGFmRNA 原位
益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠 VEGF 基因
表达及线粒体凋亡通路的影响
雷裕君 1，吴
（1. 广西中医药大学第一附属医院，广西
摘
要
鹏 1，黄立武 1，唐
南宁
农 2，林
飞1
530023；2. 广西中医药大学，广西
南宁
530200）
目的：观察益肺宣肺降浊方对血管性痴呆大鼠脑内血管内皮生长因子（VEGF）基因表达及大脑皮
血侧大脑作 VEGF 测定，主要取大鼠大脑的海马区的