实验14植物细菌病害抗性鉴定

实验14 植物细菌病害抗性鉴定
植物病原细菌是引起植物病害的主要病原生物之一，虽然不及真菌病害种类多和危害
大，但有些细菌病害是生产上的重要问题，如水稻白叶枯病，多种作物的青枯病、根癌病（冠
癭病），大白菜软腐病、猕猴桃溃疡病等。

用化学方法防治细菌病害大多效果不很理想，而
且污染环境。

因此，抗病品种的选育及利用就成为防治细菌病害的重点。

通过传统育种也能
选育抗病品种，但不能利用亲缘关系较远的抗性资源，而利用野生抗源很难获得抗病优质高
产的作物品种（因抗性常常和不良农艺性状相连锁）。

近年来，由于植物转基因技术的不断
改进以及对植物和病原物相互作用的深入了解，使利用基因工程技术选育抗病品种成为一条
有效的途径。

抗病性鉴定是抗病育种的重要基础。

本实验重点学习目前普遍采用的几种植物细菌病害
抗性鉴定的方法及步骤。

Ⅰ 大田病圃法
利用自然病原，对田间发病情况进行调查，根据病情指数等确定植物品种对特定细菌病
害的抵抗能力（抗病性）。

例如，孙升（1999）对辽宁果树所国家李杏种质资源圃保存的400
余个李品种对细菌性穿孔病抗性进行了调查，结果表明，品种间差异甚大，并发现了一些免
疫或极低感病品种，为李栽培和抗病育种提供了种质。

现将调查方法及分级标准介绍如下：
1．枝条每份种质资源调查l～3年生的枝条10个，测量枝条长度，调查病斑数，计
算每米枝条平均病斑数，井划分感病级别（见表5－2）。

2．果实每品种从树的不同部位随机调查200～400个果，计算病果率，井对果实的感
病性进行分级（见表5－2）。

3．叶片从每个品种各株树的不同部位随机采叶500～600片，于室内混均后，分级记
数调查200～300片叶，记载标准如下：
级别分级标准
1级：叶片无病斑；
3级：每叶病斑l～5个；
5级：为每叶病斑6～10个；
7级：为每叶病斑11～15个；
9级：为每叶病斑16个以上。

根据上述分级计算病情指数，并根据病情指数，将品种的感病性分为6级（见表5－2）。

表5－2 李细菌性穿孔病抗性分级标准
级别枝条病斑数（块/m）病果率（%）叶片病情指数免疫（0）0 0 0 极低感（1） 0.1～3.9 0.1～1.9 0.1～14.9
低感（3） 4.0～7.9 2.0～3.9 15.0～24.9
中感（5） 8.0～11.9 4.0～5.9 25.0～34.9
高感（7） 12.0～15.9 6.0～7.9 35.0～44.9
极高感（9）≥16 ≥8 ≥45
黄琼等（2000）同样采用大田病圃法，对158份蚕豆品种（系）对蚕豆细菌性茎疫病抗性进行了鉴定。

其做法是，在云南省历年蚕豆茎疫病发生严重的宾川设置病圃，实行统一供种，按统一方案种植，并于蚕豆苗期及结荚期进行2次茎疫病调查，发病率按田间植株枯死率计算，分级标准如下：
级别分级标准
免疫：发病率0～1%；
高抗（HR）：1%＜发病率＜5%；
抗（R）： 5%＜发病率＜10%；
感（S）： 10%＜发病率＜20%；
高感（ HS）： 发病率＞20%。

Ⅱ大田或网室接种法
一、实验用具
超静工作台，光照培养箱，高压灭菌锅，接种针，毛玻璃，小喷雾器、喷粉器，滴瓶，保湿桶，铅笔，指形管，酒精，塑料薄膜（或玻璃），滑石粉，注射器等。

二、方法步骤
将分离的菌株接种到大田、网室或温室的植物材料上，根据发病情况鉴定植物品种、品系或种质的抗病性。

具体方法及步骤如下：
1．植物材料的准备将待鉴定的植物品种或种质播种在大田、网室或温室内，以备接种。

2．菌株的分离与接种从病叶分离菌株，冻干保存，接种前将供试菌株移植在NA斜面上，并稀释到一定的浓度，接种用菌悬液浓度一般为3×108cfu·mL-1。

接种的时间与方法因植物、病害而异，例如，番茄细菌性斑点病可在4叶期喷雾接种，而水稻细菌性条斑病在孕穗期采用针刺接种法效果最佳。

3．病情记载及分级标准接种后7～15d调查发病情况，记载病级。

病情分级标准不仅因植物、病害而异，即使同一植物的同一病害，采用不同的接种方法，自然就有不同的发病状态，评价其病情的标准也就不同。

例如番茄细菌性斑点病抗性鉴定的分级标准是（赵廷昌等，2000）：
级别分级标准
1级：无病斑；
3级：病斑1～10个／株；
5级：病斑 11～20个／株；
7级：病斑21～40个／株；
9级：病斑大于40个／株。

水稻细菌性条斑病针刺接种病情的分级标准是（许志刚等，1994）：
级别分级标准
0级高抗（HR）：刺孔干枯，孔周围无病变组织；
1级抗（R）：刺孔边绿有病变组织，长度在5mm以内；
3级中抗（mR）：病斑长度在6～10mm之间，无菌脓泌出；
5级中感（MS）：病斑长度在11～20mm之间，有菌脓可见；
7级感（S）：病斑长度在21～30mm之间，菌脓多；
9级高感（HS）：病斑长度＞30mm，菌脓很多。

三、作业思考题
1．大田病圃法与网室接种法有何区别？
2．在利用接种法进行植物细菌病害抗性鉴定过程中，应注意哪些问题？
(陈学森)。