不同方法对人参皂苷Re提取效果的影响_孙雨薇

中 图 分 类 号 ：TS201.1
文 献 标 识 码 ：B
文 章 编 号：1002-0306（2014）14-0301-04
doi：10.13386/j.issn1002-0306.2014.14.058
西洋参（Panax quinquefolium L.）系五加科人参 属多年生草本植物。我国自20世纪80年代大面积成 功引种西洋参以来，已发展成为继美国、加拿大后世 界第三大西洋参生产国和世界第一大消费国。西洋 参味苦，性凉，入心、肺、肾经，功能以补益为主，可滋 阴降火、益气生津[1]。药理研究表明，西洋参生药活性 成分为皂苷类成分[2]，为主要次生代谢产物，按其皂 苷元的不同分为：达玛烷型四环三萜类皂苷、齐墩果 酸型五环三萜皂苷、奥克梯隆型皂苷及其他类型皂 苷，目前为止，从西洋参中已发现60多种人参皂苷[3]。
Abstract：In this experiment，six conventional methods were used to extract panax quinquefolium saponin from
leaves，and HPLC-UV method was used to detect the content of six kinds of method for extracting monomer
目前，国内外对西洋参根中人参皂苷含量及生 理活性的研究很多[4-10]，但对西洋参叶中皂苷含量及 提取方法的研究甚少。本文采用六种不同的常规提 取方法提取西洋参叶中的皂苷成分，并利用HPLC-UV 法测定六种提取方法下单体皂苷Re的含量，系统考 察不同提取方法提取西洋参叶皂苷效果的差异，从 而确定最佳西洋参叶中皂苷的提取方法，为西洋参
表1 梯度洗脱程序 Table 1 The program of gradient elution
时间（min） 0
乙腈（A，%） 18
水（B，%） 82
4
20
80
8
25
75
10
30
70
25
40
60
30
18
82
10μL。在表1梯度洗脱条件下，Re保留时间在15.2min 左右，且分离效果好，能够满足人参皂苷Re的检测分 析要求。
Effect of different kinds of conventional extraction methods on the contents of ginsenoside Re from Panax quinquefolium L. leaf
SUN Yu-wei，WANG Shan-shan，XU Hao，YU Yong，WU Ming-hui，DING Zhi-en* （College of Tea and Food Technology，Anhui Agriculture University，Hefei 230036，China）
表2 不同提取方法对西洋参叶总皂苷提取得率的影响
Table 2 Effect of different extraction methods on total saponin content of Panax quinquefolium L. leaf
项目
样品1 样品2 样品3 样品4 样品5 样品6
详见表627hplc法测定样品re含?结果取121六种供试品溶液分别进?re含?测定2014?第14期303scienceandtechnologyoffoodindustry表6回收率实验结果table6resultsofrecoverytest对照品测定含?回收率样品号加入?总?mgmgmg1234560221067805600432051403701200138918771738161217011537972999991198191983359896297283983300935平均rsd回收率工艺技术洋参叶皂苷有利于西洋参的综合利用对充分开发利用和保护药用植物资源有重要意义
the retention time of Re was 15.2min，and the chromatographic peak was clear and distinguished.
Key words：Panax quinquefolium L. leaf；ginsenoside Re；conventional extraction；HPLC-UV
ginsenoside Re，to investigate the content of different extraction methods monomer ginsenoside Re，finally，to
determine the bestextraction method. The results showed that：in the premise of ether degreasing，we used
2014年第14期 301
Science and Technology of Food Industry
工艺技术
1.2.1.2 乙醚脱脂-甲醇超声提取法 取干样品约 0.5g，精密称定，置于索氏提取器中，用乙醚脱脂1h， 残渣挥尽乙醚，置具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇，超 声 提 取 1h，放 冷 ，过 滤 ，滤 液 定 容 到 25mL 容 量 瓶 ，即 得供试样品（样品2）。 1.2.1.3 甲醇超声提取法 取干样品约0.5g，精密称 定 ，置 于 具 塞 锥 形 瓶 中 ，加 入 20mL 甲 醇 ，超 声 提 取 1h，放 冷 ，过 滤 ，滤 液 定 容 到 25mL 容 量 瓶 ，即 得 供 试 样品（样品3）。 1.2.1.4 水浸提法 取干样品约0.5g，精密称定，置 于具塞锥形瓶中，加入20mL纯水，50℃水浴提取1h， 过滤，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容到25mL容量瓶， 即得供试样品（样品4）。 1.2.1.5 甲醇浸提法 取干样品约0.5g，精密称定， 置于具塞锥形瓶中，加入20mL甲醇，50℃水浴提取1h， 过滤，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容到25mL容量瓶， 即得供试样品（样品5）。 1.2.1.6 微波辅助提取法 取干样品约0.5g，精密称 定，置于具塞锥形瓶中，加入20mL纯水，在微波炉中 微波提取3次（每次加热至沸腾3次），放冷，过滤，蒸 干，残渣加甲醇溶解，定容到25mL容量瓶，即得供试 样品（样品6）。 1.2.2 对照品溶液的制备 取人参皂苷Re对照品 20mg，精密称定，加入甲醇，溶解，制成2.0mg/mL的溶 液，即得人参皂苷Re对照品溶液。 1.2.3 香草醛-硫酸比色法测定总皂苷的含量 1.2.3.1 标准曲线的绘制 精密吸取人参皂苷Re对 照品10、30、50、60、80、100、120、140、160μL至10mL 容量瓶，水浴蒸干甲醇后分别加入8%香草醛乙醇溶 液（配 制 1 周 内 可 以 使 用 [11） ] 0.5mL，72% 硫 酸 溶 液 5.0mL，充分振摇混匀后置60℃恒温水浴上加热10min， 立 即 用 冰 水 冷 却 10min，摇 匀 。 以 试 剂 作 空 白 ，于 544nm波长处分别测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐 标、浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程： A=0.2387×C-0.0719，R2=0.9995。 1.2.3.2 样品中总皂苷含量的检测[12] 精密吸取1.2.1 中各样品溶液50μL，各3份，分别置于具塞试管中，按 1.2.3.1中方法显色测定吸光度，由回归方程计算总 皂苷的含量，并计算平均含量。 1.2.4 HPLC法测定人参皂苷Re 色谱条件：色谱柱 为 C18柱（250mm×4.60mm，5μm）；流动相：乙腈（A）水（B），采用梯度洗脱方式，梯度洗脱程序见表1；柱 温 35℃ ，流 速 0.5mL/min，检 测 波 长 203nm，进 样 量
2 结果与分析
2.1 香草醛-硫酸比色法检测西洋参叶总皂苷含量
由表2可以看出，样品2总皂苷含量最高，即乙醚 脱脂-甲醇超声提取法提取西洋参叶总皂苷含量最 高。西洋参叶中总皂苷含量在10%左右。六种不同提 取方法结果显示，叶中脂类对皂苷的提取有阻碍作 用，乙醚脱脂处理能够破坏植物蜡质层、各类树脂、 叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素，从而有利于提取溶 剂的渗透和皂苷类物质的溶出。未经脱脂处理的西 洋参皂苷粗提物在经大孔吸附树脂纯化时容易堵塞 树脂孔道从而降低树脂对皂苷的吸附。但对于西洋 参而言，脂类含量较低，提取之前经乙醚脱脂处理通 常用量过大或者耗时过长，而对初提物进行乙醚脱 脂处理则能够改善，使操作简单，有利于皂苷类成分 的纯化。
原料重（g） 0.5021 0.5024 0.5015 0.5010 0.5105 0.5078
总皂苷含量（%） 10.67 13.49 9.26 10.47 10.18 8.82
2.2 HPLC法线性关系考察
精 密 吸 取 1.2.2 对 照 品 溶 液 100.0、200.0、400.0、 600.0、800.0、1000.0μL 至 1mL 容 量 瓶 ，甲 醇 定 容 ，按 1.2.4 项 色 谱 条 件 分 析 ，以 人 参 皂 苷 Re 的 浓 度（X）为 横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制Re标准曲线如 图 1，并 进 行 线 性 回 归 ，得 人 参 皂 苷 Re 的 回 归 方 程 ： Y=3×106X-51802，R2=0.9991，在0.4~2.0mg/mL范围内 呈现良好的线性关系。
2.4 稳定性实验
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工艺技术
AU
0.80
Re
A
0.60
0.40
0.20
0.00 0.00 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00 24.00 28.00 min
峰面积（×106）
7
6
5
4
3
2
1
0
0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5浓度（mg/mL）图1 Re皂苷标准曲线
Fig.1 Standard curves of Re saponins
2.3 精密度实验
精密吸取对照品溶液10μL，按1.2.4项色谱条件重 复进样6次，测得人参皂苷Re峰面积的RSD=0.087%， 保留时间RSD=0.044%。结果表明，本实验仪器的精 密度良好。
Waters 液 相 色 谱 系 统（包 括 1525 Binary HPLC Pump、Waters 2707 Autosampler、Waters Temperature Control Module Ⅱ、Waters 2489 UV/Visible Detecto） 美国。
1.2 实验方法
1.2.1 西洋参叶总皂苷的提取分离 1.2.1.1 甲醇超声提取-大孔树脂柱分离纯化法 取 干样品约0.5g，精密称定，加入适量甲醇后超声提取 1h，提取液蒸干，加水溶解，上AB-8大孔树脂柱，依 次用水和80%甲醇洗脱，收集80%甲醇相蒸干，残渣 加甲醇溶解，定容至25mL容量瓶，即得供试样品（样 品1）。
工艺技术
Vol . 35 , No . 14 , 2014
不同方法对人参皂苷Ｒｅ提取效果的影响
孙雨薇，王珊珊，徐 浩，余 勇，吴明辉，丁之恩* （安徽农业大学茶与食品科技学院，安徽合肥 230036）
摘 要：采用六种常规方法提取西洋参叶中皂苷，并结合HPLC-UV检测六种提取方法下所得人参皂苷Re的含量，考 察不同提取方法下人参皂苷Re含量的差异，确定最佳西洋参叶中皂苷提取方法。结果表明：乙醚脱脂-甲醇超声提取 西洋参叶总皂苷及人参皂苷Re含量最高，在乙腈-水梯度洗脱条件下，人参皂苷Re保留时间在15.2min，色谱峰分离效 果好。 关 键 词 ：西洋参叶，人参皂苷Re，提取，HPLC-UV
methanol ultrasonic to extract panax quinquefolium saponin from leaves，then got the highest content of the
total saponins and ginsenoside Re. Results under the gradient elution condition between water and acetonitrile，
收稿日期：2013－09－26 * 通讯联系人 作 者 简 介 ：孙雨薇（1987-），女，硕士研究生，主要从 事营养 与食 品卫
生学方面的研究。 基 金 项 目 ：国家自然基金项目（30271100）。
叶的深入开发利用提供科学数据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
西洋参叶 来自安徽金寨县竺山参业有限公司 生产基地4年生植株新鲜叶片，2013年4月下旬采摘， 原料带回实验室，在80℃条件下烘干、粉碎（过40目 筛）保存，备用；乙腈 色谱纯；水 实验室制备三级 蒸馏水；甲醇 分析纯；人参皂苷Re对照品（批号： HM0523XA1） 购自上海源叶生物科技有限公司， 纯度≥98%，于4℃冷藏保存。