现代分子检测技术在食品品质控制中的应用及优势PPT资料优秀版

• 实验步骤
• 1．将新鲜嫩叶放于瓷质的研钵中，将人适量的液氮进行 研磨，待叶片磨至粉末状后加入适量的－CTAB。
• 2．500μl 65℃预热的＋CTAB 70℃保温30min，不时颠倒 混匀。
• 3．450μl酚/氯仿/异戊醇，颠倒混匀至溶液呈乳浊状—但 不要震荡，离心10000rpm， 3min，取上清。
现代分子检测技术在食品 品质控制中的应用及优势
一、转基因食品检测
• 转基因食品也称基因改造食品或基因修饰 食品 ( GeneticallyModifiedFood，GMF)。 近几年，随着转基因食品的快速发展，转 基因食品的安全性受到广泛关注，因而对 转基因食品的检测是非常必要的。
• 利用PCR 方法检测转BT 基因水稻
• 4．加入450 μl 氯仿，混匀后离心10000rpm，3min，取上 清。
• 5．加入600μl异丙醇，颠倒混匀，-20℃放置30min。
• 6．12000rpm，4℃/5min，弃上清。
• 7．用800μl预冷的70％乙醇洗涤沉淀（注意不要吹散沉淀） 。
• 8．离心后吸去残余乙醇。
• 9．待乙醇挥发后加入20-50μl TE缓冲液（含1％RNase A） ，温和混匀。
Analyte =antigen
Analyte =antibody
Incubate.
扩增后，在凝 江涛等成功地制备出针对黄曲霉毒素具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体，建立了检测食品中总黄曲霉毒素的间接竞争 ELISA 检测
方法，为开展全国性总黄曲霉毒素污染调查提供了技术支持。
胶电泳检测中， 酶联免疫(ELISA)原理：
• 黄曲霉毒素：
•
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的
癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强
的剧毒物质。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素
B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。
•
B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，
棉花种子，一些干果中常能检测到。
酶联免疫(ELISA)原理：
1. Coat solid phase with antigen when analysing antibody antibody when analysing antigen
酶联免疫(ELISA)原理：
其条带位置在 6．12000rpm，4℃/5min，弃上清。
Analyte =antigen
Analyte =antibody
300bp左右。 Incubate.
在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。 Add sample.
• tRNALeu： 植物 叶绿体内源参照 基因，长180bp， 如图4，经PCR 扩增后，在凝胶 电泳检测中，
在凝胶电泳检测
中，其条带位置 在100bp至200bp 中间位置。
• Cry1Ac基因是一 江涛等成功地制备出针对黄曲霉毒素具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体，建立了检测食品中总黄曲霉毒素的间接竞争 ELISA 检测
方法，为开展全国性总黄曲霉毒素污染调查提供了技术支持。
段长301bp的碱 Add substrate
• 10．取5μl样品进行琼脂糖凝胶电泳，其余的样品-20℃保 存。
电泳结果
• CaMV35S 启动子是 一段长 195bp 的碱 基序列，如图1所 示，经过PCR扩增 后，在凝胶电泳检 测中，其条带位置 在200bp左右。
• NOS终止子是一 段长165bp的碱基 序列，如图2所示， 经过PCR扩增后，
Analyte = antigen Incubate, wash
Analyte =antibody
2. Block free binding sites. Incubate. Wash.
Analyte =antigen
Analyte =antibody
3. Add sample. Incubate. Wash
• 原理：由于 Bt 水稻基因中含有CaMV35S（花椰 菜花叶病毒）启动子、根瘤农杆菌的NOS终止子 和Cry1Ac基因，因此，在检测水稻中是否含有转 基因水稻成分时，可选择检测CaMV35S启动子、 NOS终止子和Cry1Ac基因的存在与否，如果存在， 即可说明其中存在转基因水稻成分。
• 方法：经DNA的提取，PCR扩增，通过凝胶电泳 来判断样品是否为BT转基因水稻
Analyte =antibody
7．用800μl预冷的70％乙醇洗涤沉淀（注带位置在 200bp左右。
• 在这种方法中，DNA 的提取是关键，PCR 的成功与否关系到整个实验的准确性。
• 核酸检测能为转基因水稻的筛选鉴定及为 安全性评价提供直接的数据，成为转基因 水稻安全性检验中一项重要的技术手段。
二、天然毒素的检测技术
• ELISA（酶联免疫吸附剂测定）试剂盒检测黄曲 霉毒素
Analyte =antigen
Analyte =antibody
4. Add conjugate. Incubate. Wash.
E
E
E
E
Analyte =antigen
Analyte =antibody
5. Add substrate 6. Incubate, stop, measure colour change
Colourless
ENZYME
OD
CONCENTRATION
• 江涛等成功地制备出针对黄曲霉毒素具有 江涛等成功地制备出针对黄曲霉毒素具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体，建立了检测食品中总黄曲霉毒素的间接竞争 ELISA 检测
方法，为开展全国性总黄曲霉毒素污染调查提供了技术支持。
高亲合力、高特异性的单克隆抗体，建立 Analyte =antigen
9．待乙醇挥发后加入20-50μl TE缓冲液（含1％RNase A），温和混匀。
基序列， 如图3 薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法，由于其检测周期长，程序复杂，所需试剂繁多等缺点已远远
不能满足现代检测要求。
所示，经过PCR tRNALeu： 植物叶绿体内源参照基因，长180bp，如图4，经PCR扩增后，在凝胶电泳检测中， 其条带位置在200bp左右。