RP-HPLC法测定参芪肝康胶囊中水飞蓟宾的含量

RP-HPLC法测定参芪肝康胶囊中水飞蓟宾的含量
王婷;于雪;李飞
【摘要】目的建立反相高效液相色谱法测定参芪肝康胶囊中水飞蓟宾的含量.方法色谱柱:Dia-monsil C18(200 mm×4.6mm,5μm)；流动相:甲醇-0..5％醋酸(48:52,v/v)；流速:1.0mL/min;柱温:25℃；检测波长287 nm.结果水飞蓟宾的线性范围:12.0 ～240 μg/mL(r =0.999 7),平均回收率为97.0％(RSD=1.9％).结论该方法专属性强,结果准确,可用于参芪肝康胶囊的质量控制.%Objective To establish a RP-HPLC method for the determination of silybin in Shenqigankang capsules. Methods A Diamonsil CI8 column(200 mm ×4. 6 mm,5μm)was used. The mobile phase: methanol-0. 5% glacial acetic acid solution(48:52,v/v) ,and the flow rate was 1. 0 mL/min. Detection was performed at wavelength of 287 nm under 25 t. Results The calibration curves were linear in the ranges of 12.0 ~ 240 n.g/mL( r = 0. 999 7 ). The average recovery rate was 97. 0% (RSD = 1. 9% ). Conclusion This method is accurate and the exclusive for quality control of Shenqigankang capsules.【期刊名称】《实用药物与临床》
【年(卷),期】2011(014)006
【总页数】2页(P492-493)
【关键词】RP-HPLC;参芪肝康胶囊;水飞蓟宾
【作者】王婷;于雪;李飞
【作者单位】沈阳药科大学高等职业技术学院,沈阳110016;中国医科大学附属盛
京医院药学部,沈阳110004;沈阳药科大学高等职业技术学院,沈阳110016
【正文语种】中文
参芪肝康胶囊是由茵陈、党参、水飞蓟、五味子、当归、黄芪6味药材与刺五加
浸膏组成的复方中药制剂，具有祛湿清热，调和肝脾之功效。

临床适用于湿热内蕴与肝脾不和所致的急、慢性肝炎［1］。

其中水飞蓟已成为目前世界性的保肝植物，以其为主药的制剂已广泛用于治疗急慢性肝炎及肝硬变等。

水飞蓟素为保肝的主要活性成分，具有抗氧化、降血脂、清热解毒和疏肝利胆的作用，其中活性最强的是水飞蓟宾［2］。

因此，制剂中水飞蓟宾的含量测定对该制剂的质量控制具有重要意义。

参芪肝康胶囊现行质量标准［1］中含量测定项下，采用高效液相色谱法测定茵陈中绿原酸的含量。

为提高其质量标准，全面有效地控制参芪肝康胶囊的质量，本文建立了测定参芪肝康胶囊中水飞蓟宾含量的HPLC方法。

1 仪器与试剂
LC-10ATvp-UV高效液相色谱仪，ANASTAR色谱数据处理系统，BS110S电子
分析天平(Sartorius)。

参芪肝康胶囊(编号 01、02、03)，规格:10 g/袋(自制)。

水飞蓟宾对照品(中国药品生物制品检定所)。

甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯;水为重蒸水(自制)。

2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性实验色谱柱Diamonsil C18(200mm × 4.6mm，5μm，迪玛公司);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸(48∶52，v/v);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检
测波长:287 nm;理论板数按水飞蓟宾计算不低于3000。

2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取水飞蓟宾对照品适量，置100mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1.2 mg/mL的水飞蓟宾对照品储备液。

精密量取水飞蓟宾储备液0.4mL，置10mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，
摇匀，制成浓度为48μg/mL的水飞蓟宾对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备取七味药粉末，按制剂工艺制备［1］，研细，精密称定0.1 g，加水10mL，用乙醚萃取3次，每次10mL，合并乙醚萃取液，蒸干，残
渣加甲醇溶解并定容至2mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为
供试品溶液。

2.2.3 阴性溶液的制备按处方制备不含水飞蓟药材的样品，照“2.3”项下方法制
成阴性溶液。

2.3 测定法分别精密吸取“2.2”项下的3种溶液各10μL，注入液相色谱仪，记
录色谱图，测量峰面积，按外标法计算，即得。

见图1。

2.4 线性关系考察精密量取对照品储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 和 2.0mL，分别置 10mL棕色量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积。

以峰面积(Y)对其浓度(X)进行线性回归，水飞蓟宾的回归方程和线性范围:Y=9.062 ×103X- 1.352×104，r=0.9997(12.0～
240μg/mL)
图1 色谱图注:A.水飞蓟宾标准溶液的典型色谱图，B.参芪肝康胶囊提取液的色谱图，C.不含水飞蓟药材的阴性溶液的典型色谱图。

1、2水飞蓟宾
2.5 精密度实验取“2.2.2”项下的同一供试品溶液连续进样，测定6次，每次进
样10μL，记录峰面积，水飞蓟宾的RSD为0.6%。

结果表明，本方法精密度较好。

2.6 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h 测定峰面积值，计算含量。

结果表明，样品室温放置24 h稳定，水飞蓟宾含量的RSD为
1.3%。

2.7 重复性实验称取同一批号的参芪肝康胶囊(编号:01)6份，按“2.2.2”项下方
法操作，制备供试品溶液。

依次进样，以色谱峰面积按外标法计算。

水飞蓟宾平均含量为1.143 mg/g，RSD为1.9%。

表明本方法重现性较好。

2.8 加样回收率实验称取已知含量的同一批参芪肝康胶囊(编号:01)9份，精密称定，每份0.05 g，分别精密量取混合对照品储备液0.025、0.050、0.075mL，照“2.2.2”项下方法操作，所得供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标
法计算。

水飞蓟宾的方法回收率为97.0%，RSD为1.9%，结果见表1。

2.9 供试品的含量测定取3批样品，照“2.2.2”项下方法操作，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算参芪肝康胶囊中水飞蓟宾含量。

结果见表2。

表1 参芪肝康胶囊中水飞蓟宾的回收率成分重量(g) 含量(g) 添加量(mg) 测量值
(g) 回收率(%) 平均值(%) 相对标准偏差(%)0.0500 0.05715 0.024 0.07984
94.50.0497 0.05681 0.024 0.07995 96.40.0497 0.05681 0.024 0.07991
96.30.0503 0.05749 0.048 0.1031 95.0水飞蓟宾 0.0498 0.05692 0.048 0.1050 100.2 97.0 1.90.0495 0.05658 0.048 0.1026 95.90.0501 0.05726 0.072
0.1273 97.30.0508 0.05806 0.072 0.1290 98.50.0509 0.05818 0.072 0.1292 98.6
表2 参芪肝康胶囊中水飞蓟宾的含量(n=5)胶囊编号水飞蓟宾(每个胶囊) 相对标
准偏差(%)01 0.457 1.902 0.450 1.203 0.463 1.4060621 0.066 1.5
3 讨论
3.1 有关水飞蓟宾的含量测定方法有紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法，本文采用反相高效液相色谱法测定了水飞蓟含量，为该制剂的质量标准提供依据［3］。

3.2 实验过程中发现，采用高效液相色谱法测定水飞蓟宾对照品出现2个色谱峰，
水飞蓟宾对照品由2个异构体构成，且很难得到单一成分。

故用水飞蓟宾对照品2个异构体所得的峰面积之和来定量，以控制参芪肝康胶囊的质量。

3.3 水飞蓟宾是木脂素黄酮类化合物，易溶于有机溶剂，样品直接加甲醇超声提取，HPLC法色谱图中有较多杂质峰，改用乙醚、乙酸乙酯、饱和正丁醇萃取后，残渣加甲醇溶解，比较后发现，用乙醚萃取水飞蓟宾色谱峰与杂质峰达到基线分离。

参考文献:
［1］国家药品监督管理局.国家药品中药标准.内科肝胆分册［S］.2009:10-11. ［2］刘新波.水飞蓟［J］.黑龙江科技信息，2010，9:49-49.
［3］冯希勇，朱小虎，邢海燕.高效液相色谱法测定水飞蓟的含量［J］.甘肃中医，2009，22(4):73-74.。