蒽酮-硫酸法测多糖

蒽酮硫酸比色法测定多糖含量之杨若古兰创作
一. 实验道理
糖类在较高温度下可被浓硫酸感化而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，构成糠醛的衍生物呈蓝绿色.该物资在620 nm处有最大接收，在150 µg/mL范围内，其色彩的深浅与可溶性糖含量成反比.该法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg摆布就能进行测定.
二. 试剂器材
蒽酮试剂：精密称取0.1g蒽酮，加80%浓H2SO4100 mL使溶解，摇匀.当日配制使用；
葡萄糖尺度液：将无水葡萄糖置于五氧化二磷干燥器中，12hr后精密称取100mg，用蒸馏水定容至100ml；
其他器材：分析天平、分光光度计、容量瓶(100ml、50ml、10ml)、烧杯、具塞试管、移液器、移液器吸头、涡旋振荡器和废液缸等.
三. 操纵步调
样品的测定
将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确汲取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一路置于沸水浴中加热15min.取出，敏捷浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做23个反复.
在625nm波长下敏捷测定各管吸光值.根据葡萄糖含量的尺度曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量. 四. 留意事项
该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不单可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包含淀粉、纤维素等（由于反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.
在没有须要过细划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去很多麻烦，是以，有特殊的利用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应留意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会由于细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而添加了测定误差. 分歧的糖类与蒽酮试剂的显色深度分歧，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因分歧糖类的比例分歧形成误差，
但测定单一糖类时则可防止此种误差.。