肾衰复颗粒的质量标准研究

肾衰复颗粒的质量标准研究
李裕基;刘纪青;熊明玲
【摘要】目的:制定肾衰复颗粒的质量标准.方法:用薄层色谱法对黄芪、丹参、大黄、益母草进行定性鉴别,用高效液相色谱法测定肾衰复颗粒中甜菜碱含量.结果:用薄层色谱法做为定性鉴别效果较好,甜菜碱浓度线性范围为0.40～2.40 μg;平均回收率为98.99%,RSD为0.86%(n=6)结论:建立的方法可作为本品的质量标准.【期刊名称】《河北中医药学报》
【年(卷),期】2011(026)002
【总页数】2页(P43-44)
【关键词】肾衰复颗粒;薄层色谱法;甜菜碱;高效液相色谱法
【作者】李裕基;刘纪青;熊明玲
【作者单位】广东省深圳市康宁医院,深圳,518001;广东省深圳市中医院,518033;广东省深圳市中医院,518033
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
肾衰复颗粒由黄芪、丹参、大黄、益母草、枸杞子等组成,具有益气养阴,活血化瘀,解毒泄浊的功效。

用于各种原因所致的慢性肾功能不全氮质血症期和尿毒症早期。

本品由深圳市中医院制剂室制成,为控制本品的质量,笔者用薄层色谱法对黄芪、丹参、大黄、益母草进行定性鉴别,用高效液相色谱法测定肾衰复颗粒中甜菜碱含量,
制定肾衰复颗粒的质量标准。

结果表明本方法效果较好,可用于控制本品的内在质量。

1 实验材料
1.1 仪器与试剂 HPLC仪,色谱柱:包括 LC-10AT型泵、SPD-10A型紫外检测器（日本岛津公司）;N2000型色谱工作站（浙江大学）;FA/JA型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）;乙晴（色谱纯,美国天地公司）;其它试剂均为分析纯,水为超纯水。

硅胶 G、硅胶 H（青岛海洋化工厂）。

1.2 材料黄芪对照药材、丹参对照药材、大黄对照药材、益母草对照药材、大黄素、大黄酚、盐酸水苏碱、甜菜碱对照品均购自中国药品生物制品检定所;试验所用饮片均来源于深圳市中医院中药房,由本院药检室鉴定,枸杞为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果实。

其它均符合《中国药典》规定。

肾衰复颗粒（深圳市中医院制剂,批号:100301 100315 100330）。

2 定性鉴别
2.1 黄芪[1]的鉴别取黄芪 10g,研细,加乙醇 40mL。

超声处理 1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加水 10mL,微热使溶解。

用水饱和的正丁醇振摇提取 3次,每次 20mL合并正丁醇提取液。

用氨试液洗涤 2次,每次 20m L,弃去氨液,正丁醇蒸干,残渣加水 5 mL 使溶解,通过已处理的D 101型大孔树脂柱（内径 1.5 cm,长 12 cm）,以水 50mL 洗脱,弃去水液,再用40%的乙醇 30mL洗脱,弃去40%的乙醇溶液,继用 70%的乙醇 50mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加乙醇 1m L使溶解,作为供试品溶液。

另取黄芪对照药材 1g,同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μL,分别点于同一硅胶G板上,以三氯甲烷 -甲醇 -水（13︰ 7︰ 2）的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%的硫酸乙醇溶液,供试品中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。

2.2 丹参[1]的鉴别取丹参 10 g,研细。

用石油醚 20 m L,振摇,静置 1h,滤过,滤液挥
干,残渣加乙酸乙酯 1 m L使溶解,作为供试品溶液,另取丹参对照药材 1g,同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法试验,吸取上述二种溶液各10μL,分别点于同一含羧
甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上,以苯 -乙酸乙酯（19︰ 1）为展开剂,展开,取出,晾干。

供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的红色斑点。

2.3 大黄[2-3]的鉴别取大黄 10g,研细,加三氯甲烷10mL,滤过,滤液蒸干,加三氯甲
烷 1mL使溶解,作为供试品溶液。

取大黄对照药材 0.2 g,研细,加三氯甲烷10mL,
滤过,滤液蒸干,加三氯甲烷 1m L使溶解,作为大黄对照药材溶液。

再取大黄素、大黄酚对照品,加三氯甲烷分别制成每 1mL含 1mg的溶液,作为大黄素、大黄酚对照品溶液。

照薄层色谱法试验,吸取上述四种溶液各10μL,分别点于同一含羧甲基纤
维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上,以石油醚（60℃）-甲酸乙酯 -甲酸（15︰5
︰ 1）的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯（365nm）下检视。

供试
品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同橙黄色荧光主斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点,置氨气中熏后,日光下检视,斑点变为红色。

2.4 益母草[4]的鉴别取益母草 10 g,研细,加乙醇50mL,振摇使溶解,滤过,滤液置水浴上浓缩至约 5mL,加无水乙醇 50m L,搅拌,滤过,滤液置水浴上浓缩至约1mL,作
为供试品溶液。

取盐酸水苏碱对照品,加无水乙醇制成含每 1mL含 1mg的溶液,作为对照品溶液。

照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各10μL,分别点于同一含羧
甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上,以正丁醇 -盐酸 -乙酸乙酯（8︰ 3︰ 1）为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。

供试品色谱中,在与对照品色谱相
应的位置上显相同的橙红色的斑点。

3 甜菜碱[5]含量测定
3.1 供试品溶液的制备取枸杞子剪碎,取约 10 g,精密称定,加80%甲醇 50m L,超声提取30min,放冷,滤过,用 80%甲醇溶液 30m L,分次洗涤残渣和滤器,合并洗液和
滤液,蒸干,残渣加 0.1mol/L盐酸溶液10m L使溶解,加入活性炭 1 g,置水浴中加热
2min,边加热边搅拌,放冷,滤过,用 0.1mol/L盐酸 15mL分次洗涤烧杯和滤器,合并洗液和滤液,加入新配制的 2.5%硫氰酸铬铵溶液 20mL,搅拌均匀,置冰浴中放置 3 h。

用 G4垂熔漏斗滤过,沉淀用少量冰水（约 10 mL）洗涤,抽干,残渣用丙酮
15m L分次溶解并抽干,在丙酮液中滴加 0.5%硫酸银溶液（约 5m L）至不再有沉淀产生,放置,滤过,用70%乙醇 20m L分次洗涤沉淀和容器,合并洗液和滤液,置水浴上浓缩至约 1 mL,放冷,加入与硫酸银等当量的1%氯化钡溶液（约 1.7 mL）,蒸干,残渣加水适量使溶解,转移至 50m L量瓶中并用水稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液用0.45μm滤过,作为供试品溶液。

3.2 对照品溶液的制备取甜菜碱对照品适量,精密称定,用水溶解并制成每 1mL含80μg的溶液,即得。

3.3 阴性对照溶液按处方的工艺要求制备缺枸杞子的阴性样品,同供试品溶液制备方法制成空白对照溶液。

3.4 色谱条件和系统适用性试验色谱柱:YWGC18（粒度10μm）;流动相:乙腈 -0.05mol/L磷酸二氢钾 -磷酸（15︰ 85︰ 0.18）;检测波长为 192 nm;柱温:30℃;流速:1mL/min。

测得对照品、样品和阴性对照样品色谱图。

3.5 线性关系考察精密吸取对照品溶液 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以对照品的量（μg）为横坐标,峰面积（A）为纵坐标作标准曲线,得回归方程:A=406 796.973C-12 232.568（r=0.999 7）,结果表明甜菜碱进样量为10μL,在 0.20～1.20μg范围内,其对照品的量与峰面积呈良好的线形关系,含量测定采用外标法。

3.6 精密度试验精密吸取浓度为 0.08mg/mL的对照品溶液10μL,连续重复进样 6次,测定甜菜碱峰面积值,结果RSD为0.64%,表明精密度良好。

3.7 稳定性试验取枸杞子剪碎,取约 1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,按供试品溶液的制备方法,制得供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液10μL于 0、 2、 4、 8、 24
h后,进样,记录色谱图与峰面积,结果RSD为 0.91%,表明样品溶液在 24 h内稳定性良好。

3.8 重现性试验取同一批枸杞子药材,按上述含量测定方法,分别制备 6份供试品液,精密吸取供试品液各10 μL注入液相色谱仪,记录色谱图与峰面积,结果 RSD为0.86%,表明本法测定的重现性良好。

3.9 加样回收率试验取已知含量为 3.269mg/g的枸杞子,剪碎,取约 5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,共 6份,再分别精密加入甜菜碱对照品溶液（溶剂为甲醇,浓度为0.08mg/m L）7.5mL,然后按供试品溶液制备项下的方法操作测定,记录色谱图,考察本方法的加样回收率,结果本方法的加样回收率为 98.99%,RSD为 0.86%。

3.10 样品的测定结果 3批样品甜菜碱含量测定结果:100301样品结果为
0.74%,100315样品结果为 0.61%,100330样品结果为 0.52%。

4 讨论
本试验曾对另外几种中药饮片进行薄层色谱鉴别,经重复性试验未达到理想的效果,考虑黄芪、丹参、大黄、益母草在处方中相对用量较大,所以采用薄层色谱法对本品中的黄芪、丹参、大黄、益母草进行定性鉴别,结果表明方法较好。

用高效液相色谱法测定本品中甜菜碱的含量。

提取方法的比较:曾比较了 80%甲醇加热回流 30 min,超声处理 20、30、60min 等样品提取方法,结果显示超声提取 30min,即可将供试品中甜菜碱提取完全,故提取方法采用超声处理提取时间定为 30min。

参考文献
[1] 刘桂珍,刘纪青,廖朝峰,等 .完善滋肾降糖丸的质量标准研究 [J].河北中医药学报,2011,26（1）:33-34
[2] 吕武清,龙新华.中成药中的药材薄层色谱鉴别 [S].北京:人民卫生出版
社,1996.47-470
[3] 李丽华,窦玉红,李国川.高效液相法测定小承气胶囊中大黄素的含量 [J].河北中医药学报,2008,23（3）:41
[4] 严优芍,李卫民.HPLC测定益母草分散片中盐酸水苏碱的含量 [J].广东药学学报,2006,22（6）:604-606
[5] 袁秀枝,刘焱文,孙绪举,等.HPLC测定复方龟鹿颗粒中甜菜碱的含量 [J].中国中药杂志,2006,31（6）:225
（2011-01-26 收稿）。