小提DNA
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。
以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。
接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。
之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。
最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。
接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。
然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。
最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。
3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。
首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。
高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。
然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。
首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。
然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。
这些方法在植物科学研究中被广泛使用。
在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。
植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。
需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。
样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。
此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。
提dna步骤及原理
提dna步骤及原理DNA提取是一种分离纯化DNA的过程，它可以用于分子生物学的各种实验和研究。
以下是DNA提取的步骤及原理：步骤1：细胞破碎首先，需要将目标细胞破碎以释放DNA。
这可以通过机械方式（如刮取细胞）或者化学方式（如孵育细胞在酶溶液中）来完成。
破碎细胞的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
步骤2：细胞溶解接下来，要将破碎细胞中的蛋白质和其他细胞组分溶解。
这可以通过加入表面活性剂（如SDS）来破坏蛋白质的结构，使其变为可溶解状态。
细胞溶解的目的是除去蛋白质和其他细胞成分，保留DNA。
步骤3：蛋白质沉淀通过加入盐类，可以使DNA溶液中的蛋白质形成沉淀。
盐类中的离子与蛋白质形成复合物，使其聚集在一起并沉淀到溶液底部。
这一步的目的是除去大部分蛋白质，净化DNA溶液。
步骤4：DNA沉淀将溶液中的DNA沉淀到管壁上，可以通过加入酒精或其他有机溶剂来实现。
这些溶剂改变了DNA溶液的物理性质，使DNA变得不溶于水而沉淀。
这一步的目的是分离纯化DNA。
步骤5：洗涤和纯化DNA最后，通过洗涤沉淀的DNA，可以除去残留的盐类和其他杂质。
洗涤可以使用乙醇或其他缓冲液。
洗涤后，可以用缓冲液溶解DNA并进一步纯化。
DNA提取的原理是基于DNA和其他细胞成分的物理和化学特性的差异。
其中，细胞破碎和溶解步骤破坏了细胞膜和核膜，并释放了DNA。
蛋白质沉淀和DNA沉淀步骤利用了盐类和有机溶剂对不同分子的溶解性差异，将蛋白质和DNA分离。
洗涤步骤则进一步清洁和纯化DNA。
整个过程旨在从复杂的细胞混合物中分离纯化出DNA，以便在后续实验中进行分析和应用。
第二课 碱裂解法小量提取质粒DNA
2. 1% SDS（十二烷基磺酸钠）：是一种阴离子表 面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些 蛋白质变性。
实验原理
• 溶液III：醋酸钾溶液，Ph4.8
– 当加入pH4.8的酸性乙酸钾降低溶液pH值，使溶液 pH值恢复较低的近中性水平时， 质粒的两条小分子 单链可迅速复性恢复双链结构，但细菌染色体DNA 则难以复性。 – SDS遇到钾离子后变成十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate, PDS），而PDS是不溶于水的，而 高浓度的盐使得沉淀更完全。SDS极易和蛋白质结 合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离 子置换所产生的大量沉淀可将绝大部分蛋白质沉淀。 – 同时，尽管SDS并不与DNቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ分子结合，由于大肠杆 菌的基因组DNA很长，很容易和变性的蛋白质缠绕 在一起。在离心时，大部分主染色体与细胞碎片， 变性蛋白质等缠绕一起被沉淀，而复性的质粒DNA 以可溶性状态留在上清夜中。
第二课
碱裂解法小量提取质粒DNA
• 碱裂解法是较常用的质粒DNA提取方法。其优 点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经 纯化后可满足多数的DNA重组操作。
质粒（plasmid）通常指细菌中独立于染色 体外，能自主复制的遗传因子，它能够稳定 地遗传某些性状。天然的质粒都是环状双链 DNA，大小从5kb到400kb不等。质粒虽然 独立于染色体外自主复制和遗传，但其复制
8. 微量离心机上，12000rpm离心10min。 9. 将上清液转移到另一新的1.5ml离心管中。 10. 加入5 ul RNaseA, 37 ℃保温30min; 11. 加入等体积酚/氯仿（1：1），震荡1min。 12. 12000rpm,离心3-5min。 13. 小心转移上层溶液至一新的离心管，弃去 中层的蛋白质和下层的有机相。 14. 加入等体积氯仿，震荡1min 。
DNA的提取的原理和方法
DNA的提取的原理和方法DNA的提取的原理和方法一、实验原理DNA是生物体遗传信息的主要载体，它是一种长链的生物高分子，由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶）按照特定的顺序排列组成。
DNA主要存在于细胞的细胞核中，也有一些存在于线粒体和叶绿体中。
DNA提取的原理主要是利用不同物质在特定溶剂中的溶解度不同，通过控制溶剂的种类和条件，将DNA从细胞中分离出来。
在DNA提取过程中，通常需要使用一些化学物质，如苯酚、氯仿等，来破坏细胞膜和核膜，使DNA释放出来。
同时，还需要使用蛋白酶等酶类物质来消化蛋白质，以便更好地分离DNA。
二、实验方法1.材料准备提取DNA的材料可以是动物组织、植物组织、微生物等。
不同的材料需要采用不同的处理方法，以最大限度地获得高质量的DNA。
例如，对于植物组织，可以使用液氮研磨法或CTAB法等方法进行提取。
2.细胞裂解细胞裂解是DNA提取的关键步骤之一，目的是破坏细胞膜和核膜，使DNA释放出来。
常用的裂解方法有机械法、化学法和酶法。
机械法包括研磨、超声波等；化学法使用化学物质如苯酚、氯仿等；酶法使用蛋白酶等酶类物质来消化蛋白质。
3.蛋白质去除在细胞裂解后，蛋白质也会随着DNA一起释放出来。
为了获得纯净的DNA，需要去除蛋白质。
常用的去除蛋白质的方法有苯酚/氯仿抽提法和盐析法。
苯酚/氯仿抽提法利用苯酚和氯仿的特性，将蛋白质和DNA分离开来；盐析法则是利用高浓度的盐溶液使蛋白质沉淀，而DNA则溶解在上清液中。
4.DNA沉淀去除蛋白质后，需要通过一定的方法将DNA沉淀下来。
常用的沉淀方法有乙醇沉淀法和盐析法。
乙醇沉淀法利用乙醇能够使DNA沉淀的特性，将DNA从溶液中分离出来；盐析法则是利用高浓度的盐溶液使DNA沉淀，然后通过离心等方法将DNA 收集起来。
5.DNA洗涤和溶解DNA沉淀后，需要用70%乙醇洗涤数次以去除杂质，然后用适量的TE缓冲液或去离子水溶解DNA。
TE缓冲液是一种常用的维持DNA稳定的缓冲溶液，含有Tris-HCl和EDTA二钠等成分。
DNA提取步骤及注意点
提取DNA：CTAB法
预先准备：黄枪头、蓝枪头（最好剪去头部），小研钵，2ml离心管，液氮
药品：CTAB、β-巯基乙醇、RNA消化酶、冰冻酒精、NaAc
1 取叶片于研磨中，在磨好的样品中加入1-2ml CTAB，20-40ul的
β-巯基乙醇,等溶化成稀糊状态时倒入2ml离心管。
2 加入1-2ul RNA 消化酶-----可不加
3 放入65℃水浴锅加热30min,每隔五分钟上下颠倒几次
4 离心15min 12000r 温度无要求；
5 取上清夜800-1000ul；加入等体积 24：1的三氯甲烷：异戊醇和
苯酚(未加) 上下颠倒3-5min；离心10min 12000r
6 取上清液800-1000ul；再加入等体积24：1的三氯甲烷溶液，上
下颠倒3-5min；离心10min 12000r
7 取上清液600-800ul；加入1/10上清液体积的 3M NaAc之后上下
颠倒3-5min 一般加入70ul左右的3M NaAc
8 先静置3-5min，后加冰冻酒精，加满为止，摇晃3-5min
9 放在-20℃冰箱过夜（静置12小时）
10弃掉上层液体，加入1ml 的70%酒精，摇晃3-5min，
11离心5min 12000r,去掉上清液，再加1ml的70%酒精，摇晃3-5min，12离心5min 12000r去掉上清液，尽量把离心管内的残留液吸干
13放入超净工作台风干；加入70-100ul的灭菌水。
DNA的提取方法
DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本，以供后续实验和分析使用。
这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.高盐法：高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。
首先，待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。
接下来，加入裂解缓冲液，通常含有高浓度的盐并对抗离子泵，从而使细胞膜破裂并释放DNA。
裂解后，使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。
最后，通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。
2.CTAB法：CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为一种阴离子表面活性剂，可以结合在DNA和脂质上，并形成沉淀，从而使DNA分离出来。
首先，样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中，含有CTAB、盐和EDTA等。
接下来，DNA与其他细胞组分一起沉淀，通过聚乙二醇进行沉淀，并通过离心分离。
然后，洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。
3.柱式纯化法：柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。
该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。
首先，细胞或组织样品经过裂解后，溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。
然后，将样品通过柱子，DNA与硅胶膜相互作用，并形成强烈的结合，同时其他细胞组分被清除。
接着，使用洗涤缓冲液去除杂质，最后使用低盐缓冲液来释放DNA。
这种方法可以提供高纯度的DNA样本，适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。
4.磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。
该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。
首先，待提取的细胞或组织样本被裂解，并加入磁珠和DNA结合缓冲液。
接下来，通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来，并洗涤去除杂质。
最后，通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。
实验一 DNA提取
实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
质粒小提的原理和提取过程中的注意事项
质粒小提的原理和提取过程中的注意事项质粒小提是一种常用的实验方法，用于从细菌中提取质粒DNA。
其原理和提取过程中有一些注意事项，下面是详细介绍。
质粒小提的原理：质粒小提的原理是利用离心法将大量细菌聚集在一起，然后使用碱解液溶解细菌细胞壁和膜，将质粒DNA释放到溶液中。
接下来，通过加入特定的盐和有机溶剂，将质粒DNA与其他细胞成分分离开来。
最后，通过离心将质粒DNA沉淀下来，即完成了质粒小提。
质粒小提的提取过程中的注意事项：1.使用无菌操作：在整个提取过程中，确保使用无菌操作，以防止外源性DNA的污染。
使用无菌平台和器具，并且在实验室操作台上清洁表面。
2.选择适当的细菌培养基：选择适当的培养基和条件来培养细菌，以获得最佳的质粒DNA产量。
选择含有适当选择抗生素的培养基，以确保只有含有目标质粒的细菌生长。
3.对细菌进行预处理：在提取过程之前，对细菌进行适当的预处理是很重要的。
通常，细菌应该处于对质粒DNA产生最佳条件的生长阶段。
此外，使用良好的细菌培养方法，以确保质粒DNA在细菌中的稳定和延长拷贝数。
4.合理选择裂解液：选择适当的裂解液可以有效地裂解细菌细胞壁和膜，释放质粒DNA。
常用的裂解液包括碱、酶和界面活性剂。
根据不同的细菌类型和质粒特性，选择合适的裂解液方法。
5.应用适当的离心条件：离心是质粒小提过程中一个非常重要的步骤，可以将质粒DNA与其他组分分离开来。
确定适当的离心速度和离心时间，以确保质粒DNA能够沉淀下来，并且去除其他细胞残留物。
6.保存提取的质粒DNA：提取到的质粒DNA需要正确保存，以避免降解和污染。
使用无菌的保存管和适当的缓冲液，如TE缓冲液，在低温（通常-20°C）下保存质粒DNA。
以上是质粒小提的原理和提取过程中的注意事项的详细介绍。
在操作过程中要严格控制操作条件，以获得高质量的质粒DNA。
dna提取方法
dna提取方法DNA提取方法。
DNA提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取方法的选择对后续实验结果有着重要影响，因此需要根据具体的实验目的和样本类型选择合适的提取方法。
下面将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.酚/氯仿提取法。
酚/氯仿提取法是最早应用的DNA提取方法之一，它利用酚和氯仿的不同密度来分离DNA、RNA和蛋白质。
首先，将生物样本溶解在盐溶液中，然后加入等体积的酚/氯仿混合液，混合均匀后离心。
DNA会沉淀在上清液和酚层之间的界面上，可以用吸管或者移液器将其吸取出来。
这种方法操作简单，适用于提取中小片段的DNA。
2.离心柱法。
离心柱法利用离心柱中的硅胶膜或硅胶颗粒来吸附DNA，通过离心将其他杂质分离。
首先，将生物样本溶解在裂解液中，然后加入乙醇使DNA沉淀，将混合液加入离心柱中，离心后DNA会被固定在柱子上，然后通过洗涤和离心的步骤去除杂质，最后用去离子水洗脱DNA。
离心柱法提取的DNA纯度高，适用于高通量实验。
3.磁珠法。
磁珠法是近年来发展起来的一种DNA提取新方法，它利用表面修饰的磁珠与DNA的亲和性来实现DNA的分离纯化。
首先，将生物样本与磁珠混合，磁珠上的表面修饰物能够与DNA结合，然后利用磁力将磁珠与DNA一起沉淀，将上清液去除，再进行洗涤和溶解步骤，最后用磁场将磁珠与DNA分离。
磁珠法可以高效地提取DNA，并且适用于自动化操作。
4.酶解法。
酶解法是一种通过酶的作用来分解细胞壁和膜，释放DNA的方法。
首先，将生物样本加入含有蛋白酶和细胞壁裂解酶的裂解液中，经过一定时间的酶解后，细胞壁和膜会被破坏，DNA被释放出来。
然后通过加入蛋白酶抑制剂来停止酶的作用，最后进行离心等步骤来分离DNA。
酶解法适用于提取含有细胞壁和膜的样本。
综上所述，DNA提取方法的选择应根据实验的具体要求和样本的特点来确定。
不同的提取方法有着各自的优缺点，科学家们可以根据实际情况选择合适的方法来提取DNA，以保证后续实验的顺利进行。
质粒微型试剂盒dna提取基本步骤
质粒微型试剂盒dna提取基本步骤质粒微型试剂盒DNA提取基本步骤DNA提取是分子生物学研究中的关键步骤之一，而质粒微型试剂盒则是一种常用的DNA提取工具。
下面将介绍质粒微型试剂盒DNA 提取的基本步骤。
第一步：样本准备需要准备待提取DNA的样本。
可以是细菌培养物、动物组织或植物材料等。
将样本转移到离心管中，并进行离心，将细胞沉淀在离心管底部。
第二步：细胞溶解将样本中的细胞溶解，常用的方法是加入裂解液，通过裂解液中的化学物质或酶的作用，使细胞膜和核膜破裂，释放出DNA。
裂解液中的成分可以包括缓冲液、蛋白酶K和SDS等。
第三步：蛋白质沉淀为了去除样本中的蛋白质，需要进行蛋白质沉淀。
可以通过加入盐溶液或乙醇来使蛋白质凝集沉淀。
然后，离心管进行离心，使蛋白质沉淀到离心管底部。
第四步：DNA沉淀将上一步得到的蛋白质沉淀去除后，可以通过加入乙醇使DNA沉淀。
乙醇可以使DNA分子凝聚形成沉淀，然后通过离心将DNA沉淀到离心管底部。
第五步：洗涤和溶解将DNA沉淀洗涤去除离心管中的杂质，常用的洗涤液包括乙醇和盐溶液。
然后，使用适当的缓冲液溶解DNA沉淀，使其溶解成无色透明的溶液。
第六步：测定DNA浓度可以使用紫外吸收光谱法或荧光染料法等方法测定DNA的浓度。
通过测定吸光度或荧光强度，可以确定提取得到的DNA的浓度。
以上就是质粒微型试剂盒DNA提取的基本步骤。
通过这些步骤，我们可以从样本中提取到高质量的DNA，并用于后续的实验研究。
DNA提取是分子生物学领域中不可或缺的一步，它为我们揭示生物的遗传信息提供了基础。
希望这些步骤能够对您有所帮助！。
DNA提取(苯酚-氯仿小体法)
苯酚-氯仿法小提DNA试剂配制：1：细胞裂解液：0.32 M 的蔗糖；5 mM 的MgCl22：DNA稀释缓冲液：0.375 M的NaCl；12 mM的Tris-HCl [PH 7.5]3：10%的SDS [PH 7.2]4：5 M的NaCl5：苯酚-氯仿混合液V/V = 1:16：无水乙醇和70%的乙醇DNA 抽提：1、收集白细胞:500 μl新鲜/冻存全血(EDTA-2Na抗凝),加入1 ml的细胞裂解液充分混匀后孵育10分钟，,13000 rpm离心15 sec/3min；2、洗涤白细胞:离心后弃去上清液,加入1ml双蒸水重悬沉淀,将沉淀充分吹打使起完全溶解后, 13000 rpm离心1 /5min；3、稀释DNA，去除蛋白:弃离心后上清液，加入80 μl DNA 稀释缓冲液,重悬沉淀，完全溶解后，加入10 μl 10% SDS 和5 M NaCl 100μl，用手摇匀,再加双蒸水240 μl稀释DNA；4、加入300 μl苯酚-氯仿-异戊醇溶液(V/V=25:24:1,PH=7.5).盖紧试管,彻底混合均匀后, 13000 rpm离心12 min;5、取上清相转至另一1.5 ml EP管中，加入上清液体积比的1.5-2倍体积的预冷无水乙醇。
反复颠倒数次后,可见有絮状DNA沉淀析出；6、13000 rpm离心5 min,去上清水相。
加入和无水乙醇等量的70%预冷乙醇洗去DNA中的盐后,离心5 min。
用100 μl ddH2O或50 μl TE保存DNA备用。
为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。
加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。
也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。
质粒小提步骤
质粒小提（AxyPrep质粒DNA小量试剂盒）本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。
适合从1-4ml细菌培养物中提取多至20ug高纯度的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Rnase A:50mg/ml,室温可贮存6个月，长期贮存于-20℃。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加入Rnase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗涤液，室温密闭贮存。
二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三、实验准备1、第一次使用前，Rnase A全部加入Buffer S1中，4℃贮存。
2、准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3、第一次使用前，Buffer W2 concentrate 中加入指定体积的无水乙醇。
4、使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。
四、操作步骤1、取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12000*g离心1min，弃尽上清。
2、加250ul Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
*确认Buffer S1中已加入Rnase A3、加250ul Buffer S2，温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
DNA提取方法及注意事项
常用的CTAB法抽提叶片DNA1. 称取适当重量的叶片组织于研钵中，加入适量石英砂和PVP, 在液氮中将之研磨成细粉。
2.将粉末快速转移至2 ml EP管中，加入800μl预热的2 % CTAB抽提缓冲液溶液，但总体积不应超过管容积的一半。
3. 65℃水浴60-90min，每隔5-10分钟颠倒混匀一次。
取出冷却至室温后，加入等体积的氯仿-异戊醇（24：1），轻轻混匀。
室温，12000 g离心10min。
4. 转移上清液至一个新的2 ml EP管中，记录其体积。
加入1/10管体积的10％的CTAB溶液，轻轻混匀。
加入等体积的氯仿-异戊醇（24：1），轻轻混匀。
室温，12 000 g离心10min。
5. 用切掉尖端的枪头吸取上清，转移上清液至一个新的1.5 ml EP管中，记录其体积。
加入等体积的预冷的异丙醇或加入2倍体积的预冷无水乙醇，轻轻混匀，-20℃放置30min或过夜。
6. 4℃，10000g离心5min，弃上清，70%乙醇洗涤两次，风干，溶于适量体积的TE缓冲液中。
所需试剂：1M Tris-HCl（PH 8.0）取121.1g Tris碱溶于800ml蒸馏水，冷却后加入约42ml浓HCl调PH 为8.0，定容至1 L，高压灭菌。
5M NaCl取292.2g NaCl溶于800ml蒸馏水，定容至1 L，高压灭菌。
0.5 M EDTA（PH 8.0）取186.1g EDTA-Na2.2H2O溶于800ml蒸馏水，加热搅拌溶解后加入约20gNaOH调PH为8.0，定容至1 L，高压灭菌。
2%CTAB (1L)CTAB 20g 2%1M Tris（PH 8.0）100ml 100 mM 0.5 M EDTA（PH 8.0）40 ml 20 mM 5M NaCl 280ml或81.8g 1.4 M 定容至1L，现用现加入0.1-2%β-巯基乙醇10％CTAB（500ml）CTAB 50g 10%5M NaCl 70ml 0.7M定容至500ml1xTE （100ml）1M Tris（PH 8.0）1ml0.5 M EDTA 200μl定容至100ml高多糖和多酚含量类群的DNA提取方法I1. .称取0.1-0.2g重量的叶片组织于研钵中，剪成小段并在液氮中将之研磨成细粉。
简洁提真菌DNA方法
改进CTAB法提DNA：摇菌：100mL 的三角瓶中，置于26~28°下摇瓶培养1~2d 后，10000r/min 离心5min 收集菌体，用多层灭菌滤纸将菌体充分吸干.基因组DNA 的提取1）取出事先冷冻的研钵，放置在冰块上，取适量吸干的新鲜菌丝体，加适量的2*CTAB提取液（含0.7% NaCl，100 mmol/L Tris HCl pH 8.0，20 mmol/L EDTA，20 g/L CTAB），2~5µ L 2-巯基乙醇和适量的灭菌普通细砂，在研钵中迅速将菌体充分研磨；2）研磨后迅速将菌液移入1.5mL的Eppendorf管中，于65 下水浴30min，水浴过程中颠倒2~3 次；3）菌液摇匀后加等体积的氯仿：异戊醇混合液（24：1，V/V）充分混匀，4 度下12000r/min 离心5min；4）将上清夜移至另一新的Eppendorf 管中，加2.5 倍体积的冰冻无水乙醇，轻轻摇匀，等沉淀出现后，4度8000r/min 离心5min；5）弃上清夜，沉淀用70 % 的酒精洗涤两次，在电烤炉的上方20cm 左右（以不烫手为准）烘干，加50~100µL 的TE 缓冲液（含10 mmol/LTris HCl，1mmol/L EDTA，pH8.0）充分溶解（如果溶解较慢可置于37度水浴器中促溶）；6）加入5µ L 浓度为10g/L 的RNA 酶，于65度消化40min；7）重复步骤3~5，所提DNA 溶液于-20下保存备用.ITS 和18SrDNA 序列的PCR 扩增ITS 序列的PCR扩增通用引物：ITS1（5 `-TCCGTAGGTGAACCTGCGG- 3 `）ITS4（5`-TCCTCCGCTTATTGATATGC- 3` ）反应总体系50µL:10 *PCR 缓冲液5µL，Mg2+（25 mmol/L）3µL，dNTP混合物（10mmol/L）1µL，ITS1 和ITS4 （浓度均为25 µmol/L）各1µ L，TaqDNA 聚合酶0.4µ L （5U/µ L），模板 2 µL，无菌水加至50µ L.PCR 反应程序：94度5min，94度30s，55度30s，72度40s，30 个循环后72度延伸8min.PCR 产物电泳染色后，用凝胶成像系统拍照.18SrDNA 的PCR 扩增采用通用引物对：NS1（5`- GTAGTCATATGCTTGTCTC- 3`）NS8 （5`-TCCGCAGGTTCACCTACGGA- 3`）反应总体系50µ L：10 *PCR 缓冲液5µ L，Mg2+（25 mmol/L）3 µL，dNTP 混合物（10mmol/L）1 µL，NS1 和NS8 （浓度均为25µ mol/L）各1µ L，TaqDNA 聚合酶0.4µ L （5U/ L），模板2µ L，无菌水加至50µ L.PCR 反应程:94 度3min，94度50s，52度1min，72度50s，30 个循环72度延伸8min.PCR 产物电泳染色后，用凝胶成像系统拍照。
质粒小提步骤
质粒小提（AxyPrep质粒DNA小量试剂盒）本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。
适合从1-4ml细菌培养物中提取多至20ug高纯度的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
一、试剂盒组成、贮存、稳定性Rnase A:50mg/ml,室温可贮存6个月，长期贮存于-20℃。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加入Rnase A后，混合均匀，4℃贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使用前，按试剂瓶上指定的体积加入无水乙醇（可用100%乙醇或95%乙醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：洗涤液，室温密闭贮存。
二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三、实验准备1、第一次使用前，Rnase A全部加入Buffer S1中，4℃贮存。
2、准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
3、第一次使用前，Buffer W2 concentrate 中加入指定体积的无水乙醇。
4、使用前，检查Buffer S2是否出现沉淀，应于37℃温浴加热溶解并冷却至室温后再使用。
四、操作步骤1、取1-4ml在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12000*g离心1min，弃尽上清。
2、加250ul Buffer S1悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
*确认Buffer S1中已加入Rnase A3、加250ul Buffer S2，温和并充分的上下翻转4-6次混合均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。
QIAGEN微量DNA提取
QIAamp DNA Micro HandbookZhang weiCarrier RNA的作用：它可以提高DNA和柱子的结合能力，尤其是对于低目标分子的样本来说。
如果加入了Carrier RNA，那么最后洗脱下来的产物中会有目的DNA和Carrier RNA。
而且Carrier RNA的量远远大于DNA的量。
因此，通过计算初始加入多少CarrierRNA 的量来确定后续实验中所需要使用的洗脱产物的量。
加入310uLBuffer AE到310ug的Carrier RNA干粉末中，充分溶解，存于-20℃保存，不要反复冻融在3次以上。
轻轻的将Buffer AL和溶解的Carrier RNA混匀，不要产生泡沫。
含有Carrier RNA的Buffer AL可以在常温下（15-25℃）放置48h。
事先溶液准备Buffer ATL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。
Buffer AL如果出现沉淀，可以在70℃下溶解。
Buffer AW1加入25mL无水乙醇。
Buffer AW2加入30mL无水乙醇。
加入Carrier RNA：小量血液提取DNA过程中，每100uLBuffer AL加入1uL溶解的Carrier RNA。
在微量组织中提取DNA中，200uLBuffer AL中加入1uL Carrier RNA。
微量血液中提取DNA（可以从1-100u1-100uL L 血液中提取基因组DNA）（微量细胞的基因组DNA提取可以使用该步骤）1)吸取100uL血液加入1.5mL离心管中2)加入Buffer ATL至最终体积为100uL3)加入10uL蛋白酶K4)加入100uLBuffer AL，关上盖子，涡旋15s5)56℃孵育10min（孵育时反复震荡几次可以增加DNA产出量）6)简单离心，甩下瓶盖上的液滴1)加入50uL无水乙醇，关上盖子，涡旋15s，室温孵育3min（如果室温超过25℃，无水乙醇可以事先冰浴）7)简单离心，甩下盖子上的液滴8)将上步的液体转移至吸附柱里，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液（个人建议可以将滤液再次吸回吸附柱内在洗脱一次）9)在吸附柱里加入500uL Buffer AW1，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液10)在吸附柱里加入500uL Buffer AW2，6000×g（8000rpm）离心1min，弃滤液11)空转20000×g（14000rpm）离心3min12)将吸附柱转移至干净的1.5mL离心管，在膜上小心加入20-100uL BufferAE或者双蒸水来溶解，室温放置1min，20,000×g(14,000rpm)离心1min。
Promega试剂盒提取DNA说明
Promega全血DNA小量提取试剂盒DNA抽提SOP1、实验场所：分子生物实验室（暂定）2、实验着装：隔离衣，塑胶手套3、实验准备：耗材：高压灭菌的黄、蓝tip和1.5mL离心管架仪器：已校准移液器（100，200，1000uL）、高速离心机、振荡器试剂：Promega全血DNA小量提取试剂盒、异丙醇、70%乙醇4、实验步骤：1）从4℃冰箱中取出装有全血的抗凝管，上下颠倒3次混匀，静置待上方盖的血液流下。
2）用镊子取N个1.5mL EP管（N=预抽提DNA血样数）垂直放于EP管架上，用防水marker笔按DNA编号在管壁和管盖上做好标记，并在DNA抽提实验记录本上对应记录血样编号、姓名及DNA编号。
保持EP管盖打开。
3）用1mL移液器取900uL cell lysis solution加入已备好1.5mL EP管中。
4）打开抗凝管盖，取300uL全血（注意勿沾血于移液器上），转移到上述1.5mL EP 管中。
每取一个血样，换一个tip头。
5）盖上EP管，室温下孵育10min。
6）室温下13000转/min离心20秒（不可延时）。
7）取出后，观察下方白色小斑块沉淀，如有则继续下一步，没有则再离心20秒。
8）打开EP管盖，手捏EP管底部，倾斜EP管口弃去部分红色上清，因表面张力无法弃去所有红色上清，抬高EP管，注视白色斑块，用100 uL移液器在不碰到白色斑块的前提下，尽量将红色上清吸尽。
9）盖上EP管，用手指弹EP管底物，将白色斑块重悬。
10）加300uL Nuclei Lysis Solution入上述EP管中，盖上EP管，上下颠倒10次混匀。
11）打开EP管，加100uL Protein Precipitation Solution入上述EP管中，盖上EP管，振荡器上振荡20秒。
12）室温下13000转/min离心3min。
13）在离心时，准备N个新的已消毒1.5EP管于管架上，标记DNA编号于管壁和管盖上。
质粒小提标准流程
质粒小提标准流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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DNA提取的几种方法
DNA提取的⼏种⽅法DNA提取的⼏种⽅法(1).浓盐法利⽤RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将⼆者分离，常⽤的⽅法是⽤1M 氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量⾟醇的氯仿⼀起摇荡,使乳化,再离⼼除去蛋⽩质,此时蛋⽩质凝胶停留在⽔相及氯仿相中间，⽽DNA位于上层⽔相中,⽤2倍体积95%⼄醇可将DNA 钠盐沉淀出来.也可⽤0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋⽩,再按氯仿---异醇法除去蛋⽩.两种⽅法⽐较,后种⽅法使核酸降解可能少⼀些.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加⼊适量去污剂,如SDS可有助于蛋⽩质与DNA 的分离。
在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作⽤,在氯化钠溶液中加⼊柠檬酸钠作为⾦属离⼦的烙合剂.通常⽤.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.（2）.阴离⼦去污剂法:⽤SDS或⼆甲苯酸钠等去污剂使蛋⽩质变性,可以直接从⽣物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋⽩质之间常借静电引⼒或配位键结合,因为阴离⼦去污剂能够破坏这种价键,所以常⽤阴离⼦去污剂提取DNA.（3）.苯酚抽提法:苯酚作为蛋⽩变性剂,同时抑制了DNase的降解作⽤.⽤苯酚处理匀浆液时,由于蛋⽩与DNA 联结键已断,蛋⽩分⼦表⾯⼜含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋⽩分⼦溶于酚相，⽽DNA溶于⽔相。
离⼼分层后取出⽔层，多次重复操作，再合并含DNA 的⽔相，利⽤核酸不溶于醇的性质，⽤⼄醇沉淀DNA 。
此时DNA是⼗分粘稠的物质，可⽤玻璃漫漫绕成⼀团，取出。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .（4）.⽔抽提法:利⽤核酸溶解于⽔的性质,将组织细胞破碎后,⽤低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于⽔中，使DNA充分溶解于⽔中,离⼼后收集上清液.在上清中加⼊固体氯化钠调节⾄2.6M.加⼊2倍体积95%⼄醇,⽴即⽤搅拌法搅出.然后分别⽤66%80%和95%⼄醇以及丙铜洗涤,最后在空⽓中⼲燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋⽩质含量较⾼,故⼀般不⽤.为除蛋⽩可将此法加以改良,在提取过程中加⼊SDS.2222使DNA变性那就是降解了，提出来后放-20度冰箱，如果常⽤的话可以分装后低温保存，避免反复冻融。
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小量提取菌株细胞基因组DNA方法
(1) 收集的菌体用无菌纯水（约1.5mL）悬洗，离心，共两次。
洗后用少量纯水(约100μL)悬浮分散菌体。
(2). 在100μL浓菌液中加入700μLDNA抽提液（668μL TE + 32μL 50mg/mL 溶菌酶），使溶菌酶终浓度为2mg/mL。
在V ortex上混合均匀，37℃水浴保温1h。
加入200μL10%（m/v）SDS轻轻上下颠倒摇动离心管，再加入5μL浓度为20mg/mL 得蛋白酶K至终浓度100μL/mL，55℃水浴保温3h，其间，轻轻摇动离心管4~5次，使混合液均匀分散。
(3). 将离心管内的溶液分装到两个2mL的离心管内，每管体积约500μL。
(4). 每管加入等体积（500μL）的Tris饱和酚（pH8.0），轻轻上下颠倒摇动，再加入等体积（500μL）的氯仿/异戊醇混合液（24:1，v/v）轻轻上下颠倒摇动，15000rpm离心10min，用大口吸头小心吸取（避免吸到水相与有机相之间的蛋白层）上清到干净的2mL离心管中。
(5). 加入2倍体积的冰冻无水乙醇，轻轻上下颠倒摇动，4℃，15000rpm离心10min，轻轻弃去上清液，室温风干30min。
(6). 将风干的DNA溶于100μL的TE，置4℃溶解后置-20℃保存。