植物磷含量测定(艾老师)

植物有效磷含量的测定（游离态磷）
1．试剂配制
（1）配100 ml l0%(w/v)的高氯酸，取7.874 ml 72%的高氯酸溶液。

(高氯酸：分子量100.46，相对密度1.764)。

配800 ml 5%(w/v)的高氯酸，取31.494 ml 72%的高氯酸溶液。

（2）配制硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）：即0.5N H2SO4中含有0.4%（w/v）的钼酸铵。

①溶解0.8g钼酸铵(NH4)6Mo7O24·4H2O于100ml水中。

②然后徐徐加入5 ml的浓H2SO4（98%）。

③充分混匀，冷却后加水至200 ml。

（3）配制10%(w/v)抗坏血酸溶液（溶液B）：溶解2 g抗坏血酸于水中，最后加水至20 ml中，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱保存。

（4）工作溶液：按体积比6:1混合溶液A和溶液B。

注：工作溶液需要每天配制，配好后放置2小时后再使用。

2. 操作步骤
（1）取0.5克鲜样用液氮研磨成粉末，在4℃放置(冰上或者冰箱)至样品冻融，加入1ml 10%(w/v)的高氯酸（PCA）研磨均匀。

（2）匀浆液用5%(w/v)的高氯酸（PCA）稀释10倍，于冰上放置30分钟。

（3）于4℃，10000 g离心10分钟，上清液用于有效磷含量的测定（钼蓝法）。

（4）取2 ml工作溶液与1 ml样品上清液混合，于40℃温育20分钟。

（5）反应液在冰上冷却后，于820 nm可见光波长下测定吸收值。

如样品浓度过高，应适当稀释，使其OD值落在标线的线性范围内。

3．磷标准曲线的制作
（1）磷标准溶液配制（60 ppm P）：溶解0.230 g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于100 ml蒸馏水中，即得600 ppm P的磷标准溶液，再将600 ppm P的磷标准溶液用提取剂稀释10倍，得60 ppm P的磷标准溶液。

（2）标准曲线绘制：将60 ppm P的标准磷溶液用提取剂稀释，分别制成0.6、
1.2、
2.4、
3.6、
4.8和6 ppm P的标准系列溶液。

提取剂用10%(w/v)的高
氯酸和5%(w/v)的高氯酸按体积比1:9混合配制。

用提取剂与工作溶液的
反应液作空白。

4. 计算
植物有效磷(Pi)含量(mg Pi/g FW)=OD值*(V/m)*(V2/V1)*C
OD值—换算后待测液中磷的质量浓度(PPM：mg/L)
V —样品制备溶液的ml数，即样品所加提取剂的体积(此为0.01 L)
m —样品鲜重(g)(根据实际称得的质量计算)
V1 —吸取反应所用体积(1 ml)
V2 —反应液总体积数(3 ml)
C —样品的稀释倍数(如果样品浓度过高，需稀释至1 ml后再反应)
二十、植物总磷的测定
1. 试剂配制
（1）二硝基酚(2,6-或2,4-)：溶解二硝基酚0.25 g 100ml水中。

此指示剂的变色点约为pH3，酸性时无色，碱性时呈黄色。

（2） 4 mol/L氢氧化钠溶液：溶解NaOH 16 g于100 ml水中。

（3） 2 mol/L（1/2H2SO4）溶液：吸取浓硫酸6 ml，缓缓加入80 ml水中，边加边搅动，冷却后加水至100 ml。

（4）酒石酸锑钾溶液：称取酒石酸氧锑钾[K(SbO)C4H4O6] 0.5 g，溶解于100 ml 水中，制成0.5%的溶液。

（5）钼锑混合液：另取钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]10 g溶于450 ml水中，徐徐加入153 ml浓硫酸，边加边搅拌。

再将0.5%的酒石酸锑钾溶液100 ml 加入到钼酸铵溶液中，最后加水至1 L，充分摇匀，贮于棕色瓶中。

（6）钼锑抗试剂：临用前（当天），称取1.5 g左旋抗坏血酸，溶于100 ml钼锑混合液中，混匀。

有效期24个小时，如藏于冰箱中则有效期较长。

此试剂中H2SO4为5.5 mol/L，钼酸铵为10 g/L，酒石酸锑钾为0.5 g/L，抗
坏血酸为15g/L。

2．操作步骤
（1）称取植物样品(约0.1450 g～0.1550 g，已用剪刀剪碎)，置于消煮管中。

（2）然后加入浓H2SO4 8 mL轻轻摇匀。

（3）瓶口放一小漏斗，在电炉上消煮，300℃，30分钟。

（4）当溶液加热至微沸并全部呈棕黑色时取下，加10滴H2O2。

（5）再加热至微沸，5～10分钟，取下。

（6）稍冷后重复加H2O2 5～10滴，再消煮。

（7）如此重复2～3次，每次添加的H2O2应逐次减少。

（8）消煮到溶液呈无色或清亮后，再加热约5～10 min，以除尽剩余的H2O2，关闭电炉，让其自然冷却30分钟后，取下，继续冷却。

（9）用少量水冲洗漏斗，洗液流入消煮管，将消煮液定量地移入50ml容量瓶中，摇匀，冷却至室温。

（10）用蒸馏水定容，用滤纸过滤到50ml离心管中，供磷的测定(钼锑抗比色法)。

（11）吸取消煮液4ml注入50ml容量瓶中(根据样品浓度调整反应液数量)，加水至约30ml。

（12）加二硝基酚指示剂2滴，滴加4N NaOH溶液直至溶液变为黄色。

（13）再加2N H2SO4数滴，使溶液的黄色刚好褪去。

（14）然后加钼锑抗试剂5 ml，加水定容至50 ml。

摇匀，30 min后，用820 nm 波长进行比色测定（用空白消煮液与钼锑抗试剂的反应液调零）。

3．磷标准曲线的制作
（1）磷标准溶液配制（50 ppm P）：准确称取0.0220 g KH2PO4，溶解于40 ml 水中，加浓硫酸0.5 ml（加浓硫酸可以防止长霉菌，使溶液长期保存），转入100 ml容量瓶中，加水至刻度，得50 ppm（即50 g/ml）的P标准溶液。

吸取上述磷标液5 ml，稀释至50 ml，即得 5 ppm的P标准溶液（此溶液不宜久存）。

（2）标准曲线绘制：准确吸取5 ppm的P标液0、2、4、6、8、10 ml，分别放入50 ml的容量瓶中，加水至约30 ml，再加空白试验定容后的消煮液5 ml，调节溶液pH为3，然后加钼锑抗试剂5 ml，最后用水定容至50 ml，30 min后于波长820 nm进行比色。

4．计算
植物总磷(P)含量(mg P/g DW)=OD值*(V/m)*(V2/V1) OD值—换算后待测液中磷的质量浓度(PPM：mg/L) V —样品制备溶液的体积(0.05 L)
m —样品干重(g)(根据实际称得的质量计算)
V1 —吸取反应所用体积(根据样品浓度调整)
V2 —反应液总体积数(50 ml)。