布鲁氏菌分泌蛋白BspI生物信息学分析及多克隆抗体制备

布鲁氏菌分泌蛋白BspI生物信息学分析及多克隆抗体制备
肖洋洋;马忠臣;李芮芮;陈创夫;郑炜;王勇;王鹏雁
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2022(49)8
【摘要】【目的】试验旨在对布鲁氏菌分泌蛋白BspI进行生物信息学分析,构建
原核表达载体,获得BspI蛋白并制备其多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功
能提供材料。

【方法】使用在线软件对BspI蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,参照布鲁氏菌16M株BspI基因序列(GenBank登录号:DK63_1233)设计引
物,PCR扩增目的基因后连接至pMD19-T克隆载体并筛选阳性克隆,将目的基因连接到pET-28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG诱导蛋白表达,并进行SDS-PAGE分析,用镍柱亲和层析方法纯化蛋白,纯化后的蛋白与弗
氏佐剂混合免疫试验兔,采血分离血清,通过Western blotting、间接ELISA法进行多克隆抗体特异性及抗体效价分析。

【结果】BspI蛋白为不稳定亲水性蛋白,存在
跨膜结构,无信号肽区域,有13个磷酸化位点和7个抗原决定簇,二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲组成。

PCR成功扩增出675 bp的BspI基因,成功构建了pET-28a-BspI表达载体。

SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,成功表达出25.3 ku的蛋白,纯化后无明显杂带,制备的多克隆抗体能够特异性地与BspI 蛋白结合。

间接ELISA结果显示,BspI蛋白多克隆抗体效价为1∶409600。

【结论】制备的兔源BspI蛋白多克隆抗体可以特异性识别BspI蛋白,该蛋白具有较好的反
应原性。

试验结果为进一步研究BspI蛋白在布鲁氏菌的胞内寄生中发挥的作用提
供了参考。

【总页数】10页(P3112-3121)
【作者】肖洋洋;马忠臣;李芮芮;陈创夫;郑炜;王勇;王鹏雁
【作者单位】石河子大学动物科技学院;绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心;动物疾病防控兵团重点实验室
【正文语种】中文
【中图分类】S852.614
【相关文献】
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