鳜弹状病毒糖蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

鳜弹状病毒糖蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定
张彦冰;叶加鑫;孙威;刘晓丹;林强
【期刊名称】《水产科学》
【年(卷),期】2024(43)2
【摘要】近年来,鳜弹状病毒引起的病害频发,该病毒传播快,致病性强,是引起鳜病害的主要病原之一。

鳜弹状病毒基因组编码5个结构蛋白,其中糖蛋白G是病毒表面的主要抗原,为实现该抗原蛋白的大量表达,利用分子克隆技术将鳜弹状病毒糖蛋白G片段插入杆状病毒穿梭载体pFastBac1中转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,筛选阳性克隆获得重组转移载体pFastBac-G,再将其转化至大肠杆菌DH10Bac 感受态细胞,经蓝白斑与抗性筛选后获取重组杆粒rBacmid-G,随后利用脂质体转染法将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒。

将获取到的P3代重组病毒感染Sf9昆虫细胞进行重组蛋白的SDS-PAGE检测,成功表达后利用镍离子亲和层析柱纯化目的蛋白,随后对重组蛋白进行Western blot鉴定,结果显示在大于50 ku 处有一条特异性条带,而对照组无条带,表明制备的抗原能与抗体特异性结合。

结果表明,鳜弹状病毒糖蛋白G在杆状病毒表达系统成功表达。

本试验结果可为鳜弹状病毒糖蛋白G疫苗的研发和大规模生产提供技术支撑。

【总页数】8页(P281-288)
【作者】张彦冰;叶加鑫;孙威;刘晓丹;林强
【作者单位】中国水产科学研究院珠江水产研究所;扬州大学动物科学与技术学院【正文语种】中文
【中图分类】Q786
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