westernblot内参选择

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内参抗体种类很多,比如β—actin、β-tubunlin、GAPDH、Lamin B等，那么针对自己的实验，我们该如何选择呢?下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则：
一.样本种属来源：
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。

1、哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、β—tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,K atp ase等。

2、植物来源实验样本，则可以选择plant actin、Rubisco等。

3、其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参.
二。

目的蛋白分子量：
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小.通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。

比如目的蛋白分子量为45KD，此时不适宜选择β—actin 作为内参，可以考虑选择GAPDH或者β—tubulin作为内参.
三.目的蛋白表达部位：
就一般的蛋白检测来说,β—actin、β—Tubulin抗体等就可以了,而针对于核蛋白的定量，特别是样本蛋白就是核蛋白时,选择恰当的核蛋白内参则更能体现内部参照的价值.常用的核内参抗体有Lamin A、Lamin B、Histone H3,除此之外,其它常见的核蛋白内参还有PCNA、K70、K80等，在一些文献报道中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c—Fos等都有使用.而对于膜蛋白检测，常用的内参抗体为Na，K ATPase.对于线粒体蛋白的检测，常用VDAC1和COX IV作为内参抗体.
以上几条原则只是针对通常情况，但是需要注意的问题是—-内参的选择需要考虑实际的试验环境,比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。

比如在涉及细胞增殖相关试验中,c—Jun由于自身表达变化就不适合做内参；而在凋亡实验时，TBP、Lamin等也不适合作为内参。

因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献,在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常，应考虑这方面因素。