癣灵药水质量标准的研究

癣灵药水质量标准的提高研究
学生姓名：杨薇
指导老师：黄若干
实习单位：广西盈康药业有限责任公司
摘要目的对癣灵药水现行质量标准进行重新研究，以提高其质量控制指标。

方法采用薄层色谱法对土荆皮、黄柏、苦参、洋金花进行定性鉴别，采用HPLC法对处方中主要成分盐酸小檗碱进行含量测定。

结果土荆皮、黄柏、苦参、洋金花的薄层色谱均具有特征性的斑点，盐酸小檗碱平均回收率为99.0%（RSD=1.26），线性范围为0.0616～1.1088μg（r=0.9999）。

结论研究结果表明，本法具有较好专属性和重现性，可作为提高癣灵药水质量标准的参考依据。

关键词癣灵药水；土荆皮；黄柏；苦参；洋金花；盐酸小檗碱；薄层色谱；HPLC 癣灵药水系由土荆皮、黄柏、苦参、洋金花等中药组成的复方酊剂，临床上用于治疗脚癣、手癣、体癣、股癣等皮肤癣症。

原质量标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第八册，为更有效地控制本品质量，本文对本品质量标准进行了较为全面的研究，增加了方中土荆皮、黄柏、苦参、洋金花等四味药材的薄层色谱鉴别，采用HPLC法对黄柏中的盐酸小檗碱进行含量测定。

结果如下。

1.仪器与试药日本岛津公司LC—10ATVP高效液相色谱仪，SPD—10AVP紫外检测仪;威玛龙色谱工作站;BP211D十万分之一电子天平;重庆贝克得公司BYCDE939型薄层板制板机；青岛海洋化工厂硅胶G；乙腈为一级色谱醇(天津四友);其余试剂均为分析纯。

2.对照品和对照药材土荆皮乙酸、盐酸小檗碱、苦参碱、硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱等对照品和土荆皮、黄柏、苦参、洋金花等对照药材均购自中国药品生物制品检定所。

3.实验方法和结果
3.1土荆皮的薄层鉴别取本品2.5ml，蒸干，残渣用5ml甲醇溶解，滤过，作为供试品溶液。

另取土荆皮对照药材1.0g，加甲醇20ml，超声处理20min，放冷，滤过，作为对照药材溶液。

再取土荆皮乙酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液作为对照品溶液。

按处方比例及工艺制备不含土荆皮药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各5
μl，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙脂-甲酸（14：4：0.5）为展开剂展开，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性溶液无干扰。

薄层色谱图见图1。

1.供试品1
2. 土荆皮乙酸对照品
3.供试品2
4. 土荆皮对照药材
5. 缺土荆皮阴性溶液
6.供试品3
图1 癣灵药水中土荆皮薄层色谱鉴别图
3.2黄柏的鉴别取本品10ml，置水浴上蒸至近干，加水10ml，搅拌均匀，加稀盐酸调pH至2，用棉花滤过，再加浓氨试液调pH至13，转移至分液漏斗中，用1，2-二氯乙烷萃取2次，每次10ml，合并1，2-二氯乙烷提取液，用水洗涤两次，每次5ml，取1，2-二氯乙烷提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml，作为供试品溶液。

另取黄柏对照药材0.1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液。

再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

按处方比例及工艺制备不含黄柏药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各4 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-冰乙酸-水（10：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

阴性溶液无干扰。

薄层色谱图见图2。

1. 缺黄柏阴性溶液
2. 供试品1
3.黄柏对照药材
4. 盐酸小檗碱对照品 5供试品2 6.供试品3
图2 癣灵药水中黄柏薄层色谱鉴别图
3.3苦参、洋金花的鉴别取苦参对照药材0.5g，加乙醇15ml，超声处理30分钟，
滤过，滤液浓缩至1ml，作为对照药材溶液；再取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

另取洋金花对照药材1g，加浓氨试液1ml，加1，2-二氯乙烷15ml，摇匀，浸渍3小时，超声处理1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为对照药材溶液，另再取硫酸阿托品对照品、氢溴酸东莨菪碱对照品，加甲醇制成每1ml各含4mg的混合溶液，作为对照品溶液。

按处方比例及工艺分别制备不含苦参、洋金花药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取鉴别（2）项下的供试品溶液及上述溶液各6 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇-氨水（10：10：2：0.5）为展开剂，置以浓氨试液预饱和10分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，依次喷以亚硫酸钠的75%乙醇饱和溶液和碘化铋钾试液。

供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙色斑点。

阴性溶液无干扰。

薄层色谱图见图3。

1.供试品1
2. 缺苦参阴性溶液
3.苦参对照药材
4. 苦参碱对照品
5. 供试品2
6. 缺洋金花阴性溶液
7.洋金花对照药材
8.东莨菪碱和阿托品对照品混合溶液
9.供试品3
图3 癣灵药水中苦参、洋金花薄层色谱鉴别图
3.4黄柏的含量测定
3.4.1色谱条件色谱柱：日本岛津公司ODS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇－0.05mol／L磷酸三钠溶液（38：62），流速：1.0ml/min，检测波长：348nm，进样量10μl。

3.4.2线性关系考察精密吸取盐酸小檗碱对照品试液（每ml含盐酸小檗碱0.3mg）0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0ml，分别置10ml的容量瓶中，加流动相至刻度，精密吸取上述对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

结果表明盐酸小檗碱在0.0616～1.1088μg之间与峰面积具有良好线性关系，回归方程为Y=3447184.98X+28215.21561，r= 0.9999。

3.4.3专属性试验
对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加流动相配制成每1ml含
盐酸小檗碱20.2μg的溶液。

供试品溶液的制备精密量取本品2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性样品溶液的制备按处方配制不含黄柏的阴性样品，按拟定的方法制备成阴性样品溶液。

测定取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别注入液相色谱仪，得图4。

在盐酸小檗碱出峰处（保留时间约14.52min）无干扰。

说明方法专属性强。

A：盐酸小檗碱对照品 B：癣灵药水样品 C：缺黄柏阴性样品
图4： HPLC色谱图
3.4.4精密度试验
精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（20.2μg／ml）10μl重复进样6次，测定峰面积值，求得平均峰面积887310，相对标准偏差RSD为0.68% ，表明进样精密度良好。

3.4.5重现性实验
取同一批癣灵药水，分别平行制备6份供试品溶液，进样测定，RSD为1.89%，说明本法重复性良好（见表1）。

3.4.6加样回收率试验
精密量取含盐酸小檗碱 0.224mg／ml的癣灵药水1ml，共9份，置10ml量瓶中，设定为3个浓度（每个浓度3份），低浓度分别加盐酸小檗碱对照品溶液（含盐酸小檗碱0.11 mg／ml）各1 ml、中浓度分别加盐酸小檗碱对照品溶液（含盐酸小檗碱0.11 mg ／ml）各2 ml、高浓度分别加盐酸小檗碱对照品溶液（含盐酸小檗碱0.11 mg／ml）各3 ml，并用流动相稀释至刻度，进样测定，平均回收率为99.0%，RSD为1.26%（见表1）。

表1加样回收率试验结果
编号取样量（ml）样品含量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1
1
1
1
1
1
1
1
1
0.2241
0.2241
0.2241
0.2241
0.2241
0.2241
0.2241
0.2241
0.2241
0.1232
0.1232
0.1232
0.2464
0.2464
0.2464
0.3696
0.3696
0.3696
0.3451
0.3465
0.3489
0.4703
0.4675
0.4696
0.5874
0.5917
0.5970
98.21
99.35
101.30
99.92
98.78
99.63
98.30
99.46
100.89
99.5 1.06
3.4.7稳定性试验
取同一批号的癣灵药水供试品溶液（保存于室温条件下），于0，1，2，3，4，8，12h分别测定峰面积一次，计算得平均峰面积为944894，相对标准偏差RSD为0.48%，表明供试品溶液在12小时内稳定。

3.4.8样品的测定
精密量取癣灵药水3ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm 孔径的有机滤膜滤过，测定，即得。

（见表2。

）
表3 HPLC法测定样品中盐酸小檗碱含量结果
批号050901 050902 051101 060201 060301 060302 060401 060510 060511 060512
含量（mg/ml）0.227 0.246 0.172 0.217 0.235 0.201 0.268 0.213 0.195 0.164 0.222 0.247 0.178 0.218 0.231 0.197 0.264 0.218 0.199 0.158 0.223 0.240 0.175 0.220 0.230 0.194 0.259 0.216 0.198 0.160
平均
（mg/ml）
0.224 0.244 0.175 0.218 0.232 0.197 0.264 0.216 0.197 0.161
RSD（%） 1.18 1.55 1.71 0.70 1.14 1.78 1.71 1.17 1.06 1.90
10批平均
（mg/ml）
0.213
RSD（%）14.63
5.讨论
参照有关文献[1～2]，采用TLC法对方中土荆皮、黄柏、苦参、洋金花进行定性鉴别，专属性强，特别是鉴别（3）可同时检出苦参和洋金花药材，操作方法简便。

癣灵药水中君药黄柏的主要成分为盐酸小檗碱，本实验采用HPLC法测定癣灵药水中盐酸小檗碱的含量。

用HPLC法测定盐酸小檗碱的含量，文献报道的很多[3～5]，但癣灵药水的含量测定分析尚未见报道。

测定波长的选择，取盐酸小檗碱对照品溶液进行紫外扫描，在228.8nm、265.2 nm、348.2 nm波长处均有最大吸收，其中在228.8nm处响应值最大，但在228.8nm、265.2 nm处均有杂峰干扰，在348.2 nm处无杂峰干扰，故选择348nm波长为检测波长。

流动相的选择，参照以上文献的流动相进行实验，结果均不
理想，后选择乙腈－0.05mol／L磷酸三钠溶液（38：62）为流动相，分离效果最佳。

样品提取条件的选择，分别以不同有机溶剂进行萃取，以50%甲醇、甲醇、水、2%盐酸溶液、流动相稀释样品和不同时间超声，最终以流动相直接稀释样品最为理想、方便简单、分离效果好。

从本品10批样品测定结果看，每瓶含盐酸小檗碱的量差异较大，最高含量为0.432 mg/ml，最低含量为0.218mg/ml。

造成含量差异较大的原因可能是药材产地、采收季节、加工炮制等因素差异引起，因此黄柏原药材中盐酸小檗碱含量的高低会影响到成品制剂的质量，故投料前先测定黄柏中盐酸小檗碱的含量是控制癣灵药水成品质量的关键。

本质量标准相对于原标准更加完善、规范，方法专属、可行，可作为提高癣灵药水质量标准的参考依据。

参考文献
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