Bmi-1在宫颈癌组织中的表达及相关性研究

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B m i一1在宫颈癌组织中的表达及相关性研究
高巧玲吕新全李惠翔
【摘要】目的检测不同宫颈病变中B m i一1的表达，探讨其与宫颈癌各临床病理因素的关系及意义。

方法以宫颈癌、慢性宫颈炎组织为材料，采用免疫组化染色法检测B m i—l蛋白表达水平，并用原住杂交法检测B m i—l m R N A表达水平。

结果免疫组化结果显示，B m i—l蛋白在宫颈癌组织中的表达明显高于慢性宫颈炎组织(P< 0．05)。

原位杂交结果显示，宫颈癌组织的B m i—l m R N A表达水平明显高于慢性宫颈炎组织(P<0．05)。

B m i—l 的表达与宫颈癌肿瘤分级、临床分期等密切相关(P<0．05)，而与患者的年龄、病理分型等无关(P>0．05)。

结论B m i—l在宫颈癌组织的表达状态与其发生发展关系密切，可作为反映宫颈癌生物学行为的有效指标之一。

【关键词】Bm i—l；宫颈癌；免疫组织化学；原位杂交
E xpr e s s i on and cl i ni c al s i gni f i c ance of B m i一1on coge ne i n c er vi c al ca r c i nom a G A O Q i ao—l i ng，L U X i n—qua n，Ll H ui—xi ang．s t aff R o om of Pat hol ogy．B as i c M edi cal C ol l ege of Z heng zhou U ni ver si t y，
Z heng zhou450052，C hi na
【A bst r act】O bj ect i ve T o i n vest i gat e t he e xpre s si on and it s cl i ni copa t hol ogi c si gni f i ca nc e of B m i一1i n di f f e r ent cer vi c al di seases．M et hods I m m unocyt o chem i s t r y w a s used t o exam i ned B m i一1
pr ot ei n e xpre s si on i n ce r vi ca l car ci nom a and c hr oni c cer vi ci t i s t i s s ue．The m R N A e xpre s si on of B m i一1 w a s exam i ned by i n si t u hybr i dzat i on．R es ul t s I m m unocyt o chem i s t r y dem ons t r at ed t ha t t he l ev el s of B m i——1pr ot ei n i n ce r vi ca l car ci nom a s am p l es w e re si gni f i c ant l y hi gher t han t hos e i n c hr oni c cer vi c i t i s t i s—S U eS(P<0．05)．I n si t u hybr i dr at i on r esu l t s s ho w s t hat t he l eve l s of B m i一1m R N A i n ce r vi ca l ca r ci no-m a s am p l es w e re si gni fi cant l y hi ghe r t ha n t hos e i n c hr oni c cer vi c i t i s t i ssues(P<0．05)．E xpr es si on of B m i一1w a s cor r el a t e d w i t h t um o r gra di ng and cl i ni cal st a ge(P<0．05)．O n t he ot he r hand，i t w a s not cor r el at e d w i t h a ge or pa t hol ogi ca l t ype(P>O．05)．C oncl usi ons O ver expr es s i on of B m i一1i n cer vi—cal car ci nom a enhan ces c ar ci nogenes i s and i n vasi on．I t’S possi bl e t ha t B m i一1s er v e s as a goo d pr ogno s—t ic f ac t or t o i ndi cat e bi ol ogi c beh avi or of ce r vi ca l ca r ci nom a。

【K ey w ords】B m i一1；C er vi cal car ci nom a；Im m unohi st ochem i st r y；I n si t u hybr i di z at i on
B m i—l基因(B ce l l—s pec i f i c M L V i nt egr at i onsi t e—
1)是1991年首次被H aupt等…在鼠淋巴瘤中发现的
一种原癌基因，属于多梳基因家族(pol ycom e of G e ne s，
PcG)，与e—m yc协同作用引起细胞的转化和肿瘤形
成。

文献报道，Bm i—l基因编码的蛋白在多种恶性肿
瘤中处于高表达状态，如肺癌、胰腺癌、肝癌、结肠癌及
乳腺癌等【2。

J。

目前国内少见B m i一1的表达与宫颈
癌关系的报道，本研究旨在检测B m i—l在宫颈癌组
织中的表达，并探讨其与宫颈癌临床病理因素的关系
及意义。

1资料与方法
1．1一般资料：从郑州大学第一附属医院病理科
2008年1月至2009年10月存档的手术及活检蜡块
D O I：10．3760／em a．j．i ss n．1674-4756．2010．17．008
作者单位：450052郑州大学基础医学院病理学教研室
通信作者：吕新全17
中，随机选取临床资料完整的宫颈癌病例42例，因子宫肌瘤或卵巢肿瘤手术切除标本的中、慢性宫颈炎组织病例34例，本次检测前经资深病理医师复查。

患者年龄34—74岁，平均(47±8)岁，所有病例在取材前均未接受任何治疗。

其中宫颈癌病例包括鳞癌36例，腺癌4例，腺鳞癌2例；肿瘤分级高分化(I级)13例，中分化(Ⅱ级)19例，低分化(m级)10例。

根据2000年再次修订的国际妇产科联盟(FI G O)提出的标准对官颈癌病例进行临床分期：I期29例，Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期2例，均无淋巴转移d
1．2免疫组织化学方法：采用免疫组化SP法，Bm i一1抗体以1：50稀释后按照SP一9000／9001／9002免疫组化三步法试剂盒说明和Z L I一9017／9018／9019浓缩型D A B试剂盒使用说明进行。

用PB S代替一抗做阴性对照，以已知B m i—l阳性表达胃癌组织切片为阳性对照。

1．3原位杂交法：将待检测的石蜡切片脱蜡常规至
18
主国塞厦匿刭垫!Q 生2旦苤!!鲞筮!!麴剑壁塑!塾型堕!望剑丛鲤!垡堡!业：垫!Q ：!丛：!Z ：丛!：!!
水，以3％H ：O ：室温灭活内源性过氧化物酶，0．3％
T r i t on
X 一100／PB S 透膜，滴加3％柠檬酸新鲜稀释的
胃蛋白酶消化以暴露m R N A 核酸片段，l ％多聚甲醛进行后固定，以20“l 不含探针的预杂交液，置湿盒内42℃预杂交3—4h ，倾去预杂交液，滴加含生物素标记探针(15ng ／20“)的杂交液50一，覆盖蜡膜．42℃杂交12—16h 。

杂交后以0．1×SS C 于42℃下充分洗片，1％乙酰化B SA 室温封闭内源性生物素，以A l ka ．
1i n e Pho s phat as e
St r ept avi di n(S A —A P)和B C I P ／N B T
避光显色，核固红复染，最后梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

用无探针的杂交液孵育组织切片作阴性对照，用已知B m i —l 的m R N A 阳性表达胃癌组织切片为阳性对照。

1．4
免疫组化及原位杂交结果判定：免疫组化结果
B m i —l 蛋白阳性信号位于细胞质和细胞核内，呈棕黄色颗粒样。

原位杂交结果B m i 一1的m R N A 阳性信号位于细胞质内，呈蓝紫色。

每张切片于光学显微镜高倍镜下随机观察10个视野(每个视野观察细胞数不少于100个)。

采用半定量计分法，即以0～4分来判定阳性细胞的百分比：无阳性细胞评0分；阳性细胞百
分比<10％评1分；阳性细胞百分比>10％但<50％评2分；阳性细胞百分比>50％但<80％评3分；阳性细胞百分比>80％评4分。

染色强度染色强度根据无、弱、中、强分别计为0—3分；最终评分是两个指标的乘积H J 。

1．5统计学方法：应用SP SS l 3．0统计软件进行统计学分析，资料采用均数±标准差(蟊±s)表示，两组均数比较用t 检验(￡一T es t )，两组以上均数比较用方差分析(A N V O A )，检验水准仅=0．05。

2结果
2．1
免疫组化分析B m i —l 蛋白的表达：B m i —l 蛋白
阳性表达主要表现为细胞质和细胞核内呈棕黄色颗粒样(图1)。

42例宫颈癌中表达水平(7．64-1．3)明显。

高于34例慢性宫颈炎(4．44-1．5)，差异有统计学意义(P <0．05)。

2．2原位杂交分析B m i —I m R N A 的表达：B m i —l m R N A 在宫颈癌组织中表达阳性信号位于细胞质内，呈蓝紫色(图2)，42例宫颈癌中表达水平(6．45±1．58)明显高于34例慢性宫颈炎(4．23±1．70)，差异有统计学意义(P <0．05)。

图l
免疫组化染色显示B m i 一1在宫颈病变组织中的表达(SP 法，苏木素复染)A ：慢性官颈炎(x 100)；B ：宫颈癌(×100)；C ：宫颈癌(x400)
图2原住杂交显示B m i —l m R N A 在宫颈病变组织中的表达(B C IP ／N B T 显色，核田红复染)
A ：慢性宫颈炎(×100)；
B ：宫颈癌(×100)；c ：宫颈癌(x400)
2
3
B m i ～1在宫颈癌的表达与临床病理因素的关
系：宫颈癌中B m i 一1
的蛋白表达与各临床病理因素
史垦塞盥医趔!Q!Q至!旦筮21鲞筮!!翅Q!垫壁＆坚些堂堂堕垡型丛鲤堕些坠P：垫!Q：型：12。

塑!：!Z
的关系见表l。

两组资料均数比较用t检验(t—
Tes t)，两组以上资料均数比较用方差分析(A N V O A)
得出：宫颈癌组织中Bm i—l的蛋白表达与肿瘤分级、
临床分期等因素相关(P<0．05)，而与患者的年龄、
病理分型等无关(P>0．05)。

表1B m i一1蛋白表达与宫颈癌临床病理因素的关系
项目例数(％)Bm．i一1警白，值P值
【*±5J
年龄(岁)<4516(38．1)7．54±1．430．00l0．974
≥4526(61．9)7．564-1．27
病理分型鳞癌36(85．7)7．614-1．281．2110．309
腺癌4(9．5)7．734-I．70
腺鳞癌2(4．8)6．15"4-1．06
肿瘤分级I级13(31．0)6．264-0．5518．595<O．05
Ⅱ级19(45．2)7．88±0．85
Ⅲ级10(23．8)8．61±1．49
临床分期l期29(69．O)6．67±O．8822．130．(O．05
Ⅱ期11(26．2)8．55±1．06
Ⅲ～Ⅳ期2(4．8)10．54-0．70
3讨论
宫颈癌的发生、发展是一个复杂的生物学过程，除
人乳头瘤病毒感染外，癌基因的激活和抑癌基因的失
活，某些细胞因子、生长因子及其受体的异常也参与其
形成和发展。

目前“肿瘤于细胞”理论为宫颈癌发生
机制的研究展现新的思路，该理论认为在原发肿瘤组
织中，具备无限自我更新能力的亚群细胞称为肿瘤干
细胞(t um or s t e m cel l s，T SC)¨J，有肿瘤起始能力。

B m i—l在许多成体干细胞和肿瘤干细胞中高表达，在
干细胞的自我更新过程中发挥重要作用旧。

J。

B m i一1
基因能够负性调控i nk4a位点，下调p16h‰和p19删的
表达，抑制了c—m yc基因诱导的凋亡，最终导致肿瘤
的发生。

在乳腺癌、肺癌、直肠癌、淋巴瘤、白血病、骨
髓增生异常综合征等肿瘤中均发现B m i一1表达增
强，并与肿瘤的恶性程度、侵袭等有关哺1。

本研究采用免疫组织化学法对42例宫颈癌和34
例慢性宫颈炎组织中B m i—l的蛋白表达进行分析，
旨在观察宫颈癌组织中是否存在高水平B m i一1表
达，并分析其与临床病理因素之间的关系进行。

结果
表明宫颈癌组织中B m i一1的表达水平较慢性宫颈炎
增高(P<0．05)。

为进一步证实结果，同时采用原位
杂交法对该标本中B m i一1的m R N A进行检测，结果
证实宫颈癌组织中B m i一1的m R N A表达水平较慢性
宫颈炎增高(P<0．05)。

由此可说明B m i—l在转录19
水平以及转录后水平均呈表达上调，B m i一1可能是宫颈癌的异常分子标志物之一。

研究证实，B m i一1能够参与肿瘤的发生、发展、浸润、转移等生物学过程。

Si l va等[9-证明Bm i一1的高表达与乳腺癌的跟预后相关的某些临床病理特征密切相关。

有学者研究发现大肠癌中B m i—l的表达与TN M分期、远处转移及预后密切相关。

赵晶等¨刚研
究表明胃癌组织中B m i一1的表达与临床病理分期有关。

本研究结果显示宫颈癌组织中B m i—l蛋白的高表达与患者年龄、肿瘤病理分型无关(P>0．05)，而与肿瘤分级、病理分期等因素密切相关(P<0．05)，推测宫颈癌组织中B m i—l的高表达也是判断肿瘤发生发展、浸润、预后的有效指标之一。

综上所述，B m i一1在宫颈癌的发生、发展、浸润、转移等过程发挥重要作用，有可能成为宫颈癌诊断和判断预后的指标之一。

B m i一1的作用机制及其与肿瘤干细胞的关系还有待进一步阐明，为探索宫颈癌的诊断和治疗新途径提供理论基础。

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(收稿日期：2010—05—31)
(本文编辑：常青)。