需氧革兰阳性杆菌

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三、枯草芽胞杆菌
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生物学性状——形态染色

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青霉素抑制试验 接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，
37℃24h
生长 受抑制不生长
•串珠和青霉素抑制联合试验：
青霉素纸片 抑菌环 串珠形成区 兔血琼脂平板
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其它实验
• 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体
• NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10% 马血清的平板，10%CO2、37℃、24～48h，有毒株 形成荚膜—黏液型菌落，无毒株不形成荚膜—粗糙型 菌落
肉汤增 菌培养
2%兔血清肉汤4－8h
动 力 观 察
生 化 反 应 串 珠 试 验 噬 菌 体 裂 解 荚 膜 肿 胀 试 验 青 霉 素 抑 制
G染色镜检
毒 力 试 验
菌落特征
确定报告
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戊烷脒多粘菌素琼脂
基础培养基 25μg/L戊烷脒: 杀灭利什曼原虫等寄生虫 3000IU/L多粘菌素 2%脱纤维羊血
需氧革兰阳性杆菌
芽胞杆菌属 Bacillus 李斯特菌属 Listeria 需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种 与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides） 巨大芽胞杆菌（B.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）
• 毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种 •植物凝集素试验：荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应 •Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断
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临床意义

蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus
食物中毒：含菌量达105/g以上，夏、秋季
多见，中毒食物大多无腐败、变质现象， 感官性状正常，应引起注意
丹毒斯菌属 Erysipelothrix
加德纳菌属 Gardnerella
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临床意义 引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭 疽、肠炭疽、败血性炭疽，烈性传染病, 死亡率极 致病因子： – 荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 – 炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子 病后可获得持久免疫力

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微生物学检查
标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、 呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死蓄。 标本的处理：液体标本取沉渣分离培养； 固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非 芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直 接分离培养

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Ascoli试验
皮毛、腐 败脏器等
或荚 荚膜 膜荧 肿光 胀抗 试体 验染 色
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检验方法
涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、 有明显荚膜和芽胞—初步报告 荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验 核酸检测：核酸杂交 分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性 培养基。 2%兔血清肉汤增菌→分离培养

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鉴定试验
菌落特征 形态染色 生化试验:表13－1 串珠试验: 接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml) 的肉汤中，37℃ 6h，大而均匀成串的圆球 状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关， 类炭疽无此现象

炭疽芽胞杆菌
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炭疽芽胞杆菌
革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、 无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于菌体， 位于菌体中央，多在有氧条件下形成，25～30℃，在 培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中， 都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞， 尸体严禁解剖
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普琼平板：灰色、粗糙型菌 落；卷发状边缘（低倍镜下） BAP：不溶血 NaHCO3 BAP： －－有毒株产生荚膜呈黏液 型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴 别要点) －－无毒株—粗糙型菌落
呕吐型——耐热肠毒素 腹泻型——不耐热肠毒素 全眼球炎（外伤后） 心内膜炎、败血症和脑膜炎
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蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus


形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆、 有芽胞、周鞭毛、无荚膜 培养特性：需氧或兼性厌氧，最适 温度30~35℃，营养要求不高。 普通琼脂平板：菌落较大，灰白色， 表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽 BAP 有β溶血 卵黄平板—生长迅速，培养3h后， 虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷 脂而形成白色的混浊环，称乳光反 应或卵黄反应
痰、呕吐物、CSF 及炎症分泌物
核 酸 检 测 直接涂片
2%兔血清肉 汤快速增菌 37℃4h
荚膜染色
G染色
0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖
涂片G染色、 荚膜染色 初步报告
初步报告
百度文库
快速检验程序
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分离培养 检验程序
法定报告传染病，发现疑是病例应于24小时内上报CDC
皮毛、腐败脏器等
血液
以NG制成悬液 经加温或饱和 尿素处理 BAP或戊 烷脒平板

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抗原
菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性 不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体 反应，称Ascoli热沉淀反应 荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关 芽胞抗原： 炭疽毒素Anthrax toxin： 由保护性抗原、 致死因子、水肿因子形成。

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抵抗力
耐热、耐干燥 对氧化剂敏感 对青霉素、磺胺类抗生素敏感


肉汤培养基：絮状 沉淀 明胶—37℃18～24h 表面液化成漏斗状， 由于细菌沿穿刺线 向四周扩散形成倒 松树状。
培养特性
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生化反应
葡萄糖+ 、麦芽糖+ 、蔗糖+、 卵磷脂酶弱+、触酶+ 硝酸盐还原试验+、VP＋、吲哚－、硫化氢 －、柠檬酸盐－、尿素－ 明胶液化＋ 胨化牛乳：在牛乳中生长2～4天后牛乳凝固 并缓慢胨化
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生化反应
葡萄糖＋、蔗糖＋、麦芽糖＋等 卵磷脂酶+ 、VP＋ 胨化牛乳＋、液化明胶＋， 多次传代后生化特性常可改变

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微生物学检查
呕吐物、残留食物等 活菌计数 接种 BM BAP 卵黄琼脂平板 直接涂 片染色 镜检
37℃18~24h
动物试验
生化反应
血清凝集
报告结果
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结果解释
因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到 本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引 起食物中毒的病原菌。 从食物中分离出菌数≥105CFU/g，提示本菌 活跃生长，构成潜在危险 从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或) 呕吐物中分离到的菌株属同一血清型