血凝块DNA提取方法探讨(1)

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血凝块DNA提取方法探讨(1)

no m a trea ted with c i sp l a ti n.Ora lOnco,l2003,39(2):157 9Nakaya m a K,Kanzak iA,Oga wa K,et a.l Copper2transpor2 ti ng P2type adenosi ne triphosphatase(ATP7B)as a c isplati n based che m ores i stance m arker i n ovar i an carc i no m a:co m2 parati ve analysis w it h expressi on ofMD R1,MR P1,MR P2, L R P and BCRP.Int J Cancer,2002,101(5):48810Safae iR,H o we ll SB.Copper transporters regu l ate t he cell u2 lar phar m acolo gy and sensiti vity to P t drugs.Cr it R ev OncolH em ato,l2005,53(1):1311Katano K,Ko ndo A,Sa faei R,et a.l A cqu isiti on of resi st2 ance to c i sp l a tin is acco mpan ied by changes i n the ce ll u lar phar m acolog y of copper.Cancer R es,2002,62(22):6559 12Katano K,Sa fae i R,Sa m i m i G,et a.l The copper export pu m p ATP7B modulates t he cell u l ar phar m acol ogy of carbo p l atin i n ovarian carci no m a cell s.Mol Phar m aco,l2003,64(2):466(2005209212收稿责任编辑王曼)血凝块DNA提取方法探讨*何欣孙哲郭涛李韶华温巍王立东#郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科郑州450052#通讯作者,E2ma i:l l d wang@关键词血凝块;DN A提取;冰冻切片中图分类号R735.1摘要目的:探讨血凝块DNA提取的方法。

提dna步骤及原理

提dna步骤及原理DNA提取是一种分离纯化DNA的过程，它可以用于分子生物学的各种实验和研究。

以下是DNA提取的步骤及原理：步骤1：细胞破碎首先，需要将目标细胞破碎以释放DNA。

这可以通过机械方式（如刮取细胞）或者化学方式（如孵育细胞在酶溶液中）来完成。

破碎细胞的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。

步骤2：细胞溶解接下来，要将破碎细胞中的蛋白质和其他细胞组分溶解。

这可以通过加入表面活性剂（如SDS）来破坏蛋白质的结构，使其变为可溶解状态。

细胞溶解的目的是除去蛋白质和其他细胞成分，保留DNA。

步骤3：蛋白质沉淀通过加入盐类，可以使DNA溶液中的蛋白质形成沉淀。

盐类中的离子与蛋白质形成复合物，使其聚集在一起并沉淀到溶液底部。

这一步的目的是除去大部分蛋白质，净化DNA溶液。

步骤4：DNA沉淀将溶液中的DNA沉淀到管壁上，可以通过加入酒精或其他有机溶剂来实现。

这些溶剂改变了DNA溶液的物理性质，使DNA变得不溶于水而沉淀。

这一步的目的是分离纯化DNA。

步骤5：洗涤和纯化DNA最后，通过洗涤沉淀的DNA，可以除去残留的盐类和其他杂质。

洗涤可以使用乙醇或其他缓冲液。

洗涤后，可以用缓冲液溶解DNA并进一步纯化。

DNA提取的原理是基于DNA和其他细胞成分的物理和化学特性的差异。

其中，细胞破碎和溶解步骤破坏了细胞膜和核膜，并释放了DNA。

蛋白质沉淀和DNA沉淀步骤利用了盐类和有机溶剂对不同分子的溶解性差异，将蛋白质和DNA分离。

洗涤步骤则进一步清洁和纯化DNA。

整个过程旨在从复杂的细胞混合物中分离纯化出DNA，以便在后续实验中进行分析和应用。

血凝块DNA提取方法探讨

血凝块DNA提取方法探讨何欣;孙哲;郭涛;李韶华;温巍;王立东【期刊名称】《郑州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2006(041)001【摘要】目的:探讨血凝块DNA提取的方法.方法:利用血凝块融化液直接进行DNA提取,并通过血凝块融化液涂片、血凝块冰冻切片以及琼脂糖电泳鉴定所提DNA的质和量.并与常规研磨法提取DNA进行比较.结果:利用血凝块融化液直接提取DNA浓度可高达(13.9±10.4)mg/L,A(260 nm)/A(280 nm)为1.85±0.11;高于研磨法的(9.70±4.1)mg/L和1.74±0.08(P＜0.05).血凝块融化液中以及血凝块冰冻切片中均含有较多的有核细胞.结论:利用血凝块的融化液直接进行DNA提取是一种简便、实用的DNA提取方法.【总页数】2页(P56-57)【作者】何欣;孙哲;郭涛;李韶华;温巍;王立东【作者单位】郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科,郑州,450052;郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科,郑州,450052;郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科,郑州,450052;郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科,郑州,450052;郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科,郑州,450052;郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室,郑州大学第一附属医院内科,郑州,450052【正文语种】中文【中图分类】R735.1【相关文献】1.两种血凝块基因组DNA提取方法的比较 [J], 任来峰2.人血凝块DNA三种提取方法的比较 [J], 张敏;李三相;贾海军;兰小平;杨亚军3.两种提取人血凝块基因组DNA方法的比较 [J], 朱建立;李晓天;温战迎;王巨才;赵阳;华海婴;何美霞4.高通量自动化磁珠提取血凝块DNA的方法研究 [J], 潘亭亭;汪伟伟;吉栩5.应用改良法从冷冻血凝块中提取基因组DNA [J], 邹春波;俞星;韩春姬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

凝血块核酸提取-概述说明以及解释

凝血块核酸提取-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述凝血块核酸提取是一种常见的分子生物学技术，用于从凝血块中提取核酸（包括DNA和RNA）。

凝血块，也称为血栓，是由凝血因子和血小板在血液凝固过程中形成的固态物质。

在医学领域，凝血块的形成常常是疾病如心脏病和中风的根源。

因此，研究凝血块中的核酸成分对于深入理解这些疾病的发生机制具有重要意义。

凝血块核酸提取的过程涉及到破坏凝血块的结构，并提取其中的核酸分子。

随着生物技术的不断发展，提取核酸的方法也在不断改进，使得提取效率和纯度更高。

通过凝血块核酸提取，研究人员可以获得凝血块中的基因组DNA、转录组RNA等核酸样本。

这些样本可以被用于各种分子生物学研究，如基因突变的检测、特定基因的表达分析等。

本文将介绍凝血块核酸提取的原理、方法和应用。

首先，我们将探讨凝血块核酸提取的原理，包括凝血块的组成和核酸在凝血块中的存在形式。

接着，我们将详细介绍凝血块核酸提取的方法，包括常用的提取试剂、步骤和注意事项。

最后，我们将探讨凝血块核酸提取在医学和生命科学研究中的应用，以及未来的发展趋势。

通过本文的阅读，读者将对凝血块核酸提取有一个全面的了解，从而为相关研究和技术应用提供指导和参考。

1.2 文章结构文章结构包括引言、正文和结论三个部分。

引言部分介绍了文章的背景和研究意义，概述了凝血块核酸提取的主要内容，并提出了本文的目的。

正文部分详细介绍了凝血块核酸提取的原理、方法和应用。

在原理部分，解释了凝血块中存在的核酸的来源以及提取的原理和步骤。

在方法部分，介绍了凝血块核酸提取的具体操作方法和关键步骤。

在应用部分，列举了凝血块核酸提取的实际应用场景和重要价值。

结论部分对全文进行总结，指出凝血块核酸提取的能力和潜力，并展望了未来可能的研究方向和改进方向。

最后，给出了对凝血块核酸提取的结论，强调其在医学、科研和临床实践中的重要性和应用前景。

通过以上结构的编排，读者可以清晰地了解凝血块核酸提取的背景和意义，了解其原理、方法和应用，最终了解到该领域的研究现状和展望。

实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)

实验一、血液标本提取DNA（蛋白酶K-酚抽提法）一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。

二、实验步骤：1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min（1.5mlEP管）。

轻轻去上清液（血浆），吸出淡黄色悬浮液（白细胞层）置于另一2.0mlEP管中。

（约50μl）2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液，37℃1h，3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml（约4μl），充分混匀，37℃震荡12-24h或37℃1h后，56℃水浴3h。

保温过程中不时摇动，混匀反应液。

液体逐渐变粘稠，表明已有DNA释放出来，操作应轻柔。

4、酚抽提：将上述溶液冷却至室温，加等体积的Tris饱和酚（pH8.0）溶液，温和缓慢颠倒离心管10min，混匀两相成乳液。

12000rpm 5分钟，两相分层。

用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相，移至一新的2.0mlEP管中。

（小心一点，不要吸入蛋白层。

如交界处有白色沉淀，需重新抽提有机相，用酚重新抽提两次，合并水相）5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管；6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠，再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇，充分混匀；应可看到白色絮状物（DNA）。

12000rpm 5分钟，弃上清液；7、纯化：加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 离心5分钟，去上清夜，重复1次；（此过程不得振荡摇动）8、溶解：弃上清液后，自然干燥（挥发痕量乙醇）后，用30μl pH8.0TE完全溶解，保存在-20℃备用。

三、注意事项1、加样准确，操作轻柔；微量加样器绝对不能超过最大量程；2、加酚试剂时，不要接触到皮肤上，有腐蚀性；如不小心弄到，立即用清水冲洗；3、取上清液时，不可吸到下层溶液；4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。

从血液中提取DNA方法探讨[1]

anti2citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis [ J ]. Clin
Chem , 2001, 47 ( 6) : 1089.
(收稿日期 : 2006211218)
从血液中提取 DNA方法探讨
焦鹏 1 , 叶文静 1 , 常起 2 , 赵晓民 1
and joint damage p rogression in early rheumatoid arthrits: relation to IgG、IgA and IgM rheumatoid factor[ J ]. Ann Rheum D is, 1990, 49
( 11) : 906. [ 6 ] Pai S, Pai L, B irkenfeldt R, et a l. Correlation of serum IgA rheu2
从凝血中得到dna质?较高方法简?快速而且可靠得到的高质?dna适合于临床分子生物学研究而且在临床检测中使用本方法从凝血中提取的dna?但足够用于基因检测还能一血多用完成血清其他项目检测因此为临床检测和科学研究提供了很大的方?
实用医技杂志 2007年 1月第 14卷第 3期 (旬刊 ) JPMT, January. 2007, Vol. 14, No. 3 ( Issued Every Ten Days)
[关键词 ] DNA提取 ;血液 ; DNA 检测 [中图分类号 ] R737. 9 [文献标识码 ] B [文章编号 ] 167125098( 2007) 0320287203
D NA Isola tion by S im ple Rap id and Innocuous M ethod from Blood Useful in C lin ica l M olecular Testing

从人血凝块中提取基因组DNA

文章编号:1007-6611(2006)08-0881-02从人血凝块中提取基因组DNA商亚丽1,解军1,程牛亮1,牛勃2,张悦红1(1山西医科大学生物化学与分子生物学教研室,太原030001;2首都儿科研究所)摘要:目的从人血凝块中提取基因组DNA。

方法室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提。

结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32?10)mg/L,且光吸收比值A260/A280>1.8。

结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。

关键词:血凝块;DNA提取;聚合酶链式反应;多态性,限制性片段长度中图分类号:DF795.2文献标识码:AA method for DNA extr action fr om human blood clotsSHANG Ya2li,XIE Jun,CHENG Niu2liang,et al(Dept of Bio chemistry and Molecula r Biolo gy,Sha nxi Medical Univer sity, Taiyuan030001,China)Abstract:Ob jective To explor e a simple method of DNA extraction fr om human blood clots.Methods Blood clots t hawed in room temperature,homogenized extraction buffer including higher sodium chloride and higher EDTA,the homogenized samples were digested with digestion buffer and extracted with phenol2chlorofor m.Results The genomic DNA were successfully extr acted.The average quant ity of the extracted DNA was(32?10)mg/L,while A260/A280> 1.8.Conclusion The improved extraction method was reliable for obtaining high quantities of DNA from blood clot suited for PCR amplification.Key wor ds:blood clot;DNA extraction;polymer ase chain reaction;polymor phism,r eaction fragment length血样中DNA的提取在基因工程和分子生物学的研究中占有主要地位。

DNA提取的几种方法

DNA提取的几种方法DNA提取的几种方法(1).浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来.也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA的分离。

在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.(2).阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.(3).苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。

此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。

此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.(4).水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%&#1632；80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。

牛血凝块基因组DNA提取方法的建立

营养丰富、脂肪少、低胆固醇、鲜嫩多汁、易消化等特点。羔羊生长发育快 ,饲料报酬高 ,生产成本低 ,产品销售价格高。因此 ,我们结合“干旱半干旱区肉羊引进杂交配套技术研究与示范”项目 ,引进国内外专用肉羊绵羊品种 ,利用小尾寒羊具有繁殖率高等特点 ,开展杂交改良及其配套技术研究 ,旨在探讨陶赛特羊 × 小尾寒羊、特克塞尔羊 ×小尾寒羊、波德代羊 ×小尾寒羊及萨福克羊 ×小尾寒羊等不同杂交组合肉羊的增重、产肉性能和经济
收稿日期 :2007 - 03 - 08 基金项目 :国家 863 项目 (2006AA1021D9) 、山东省农业科学院青年
科研基金项目 (2005 YQ048) 和山东省良种产业化项目 (200323009) 作者简介 :曹岩峰 (19822) ,男 ,硕士。通迅作者 :仲跻峰。文章编号 :1007 - 9726 (2007) 06 - 0039 - 02 (中图分类号 :S823)
[ 3 ]张宁. DNA 提取方法进展[J ] . 中国海洋药物 ,2004 (2) :40241. [ 4 ]臧荣鑫. 天祝白牦牛基因组 DNA 提取方法的试验研究[J ] . 中兽医医
药杂志 ,2005 (1) :17220. [ 5 ]李西平. 外周血细胞 DNA 、RNA 及血红蛋白同时提取法 [J ] . 第一军
关键词 :陶寒 F1 ;特寒 F1 ;波寒 F1 ;萨寒 F1 ;小尾寒羊 ;杂交优势
目前 ,养羊业发达的国家都在利用早熟肉羊品种 ,通过经济杂交发展规模化养殖及专业化肥羔生产。羔羊肉具有瘦肉多、
收稿日期 :2007 - 03 - 15 基金项目 :定西市高科技产业及科技发展计划项目 (200424210) 作者简介 :王俊贤 ,大学本科 ,高级畜牧师。文章编号 :1007 - 9726 (2007) 06 - 0040 - 02 (中图分类号 :S8261 2)

浅谈从血凝块中制备基因组 DNA

广东食品药品职业学院毕业论文浅谈从血液凝块中制备基因组DNA朱凤琴11052010204810生物制药技术2班生物制药技术生物技术学院李脉2013、04、01浅谈从血液凝块中制备基因组DNA生物技术学院，10生物制药技术2班，朱凤琴【摘要】目的从人血液凝块中提取基因组DNA。

方法室温自然解冻，机械磨碎，高盐、高EDTA提取液处理，消化液消化，酚氯仿抽提。

结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA，提取的DNA浓度为：(32±10)mg/L，且光吸收比值A260/A280>1.6。

结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高，提取效率高，PCR扩增效果好，可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。

【关键词】血样保存；血凝块；DNA制备；PCR扩增；琼脂糖电泳；聚合酶链式反应血样采集通常都会使用抗凝剂，但是在实操中总会遇到血凝块的情况。

从而影响我们的DNA制备工作开展。

常用EDTA的钠盐或钾盐作为抗凝剂，能与血液中的钙离子结合成螯合物，而是钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固[1]。

血液凝块是指血液中红细胞在化学试剂、有毒物质、生物物质、温度等作用聚合成为块状物的现象。

凝血后血液由溶胶状态变成为凝胶状态的血凝块。

如在纤维蛋白的网状作用下将红细胞收在一起形成了血液凝块。

1.材料与方法1.1材料血样为中华骨髓库所提供，一共抽做12份样品，加抗凝剂的血液于4℃保存1.2方法1.2.1基因组DNA制备样品于室温解冻后，从血液中吸取凝块约1000ul置于15ml离心管，加入3ml 生理盐水浸泡15min。

6000r/min离心8min，弃上清。

将沉淀磨碎于胶状（勿过度）加入1000ul提取液（10mmol/lTris-Hcl、100mmol/lNacl、10mmol/lEDTA、2%SDS)，浸泡30min，其中每10min颠倒数次。

6000r/min离心5min,吸出上清，加入500ul消化液（10mmon/lTris-Hcl、1mmol/lEDTA、20g/lSDS、300ug/ml 蛋白酶K），56℃漩涡振荡温浴1小时，然后于37℃温浴过夜。

用碱性裂解法提取人血凝块中基因组DNA

第28卷第5期2007年10月西安交通大学学报(医学版)Jour nal of Xi p an Jiaotong University(Medical Scie nce s)Vol.28No.5Oct.2007r 技术方法r用碱性裂解法提取人血凝块中基因组DNA王小卫1,张克洲2,熊咏民1(1.西安交通大学教育部环境与疾病相关基因重点实验室;环境与地方病研究室,陕西西安710061;2.西安阎良630风湿病医院,陕西西安 710089)摘要:目的建立一种新的从人血凝块中提取基因组DNA 的方法。

方法血凝块于室温自然解冻,匀浆,碱消化,酚氯仿抽提,电泳检测。

结果用碱性裂解法从人血凝块中成功提取到基因组DNA,提取的DNA 质量浓度平均为0.46g/L,且吸光度比值A 260/A 280>1.8,选取人Gpx 21基因作P CR 获得满意的目的片段。

结论用碱性裂解法提取的基因组DNA 的总量较高,提取效率高,PCR 扩增效果好,可很好的应用于血凝块基因组DNA 的提取。

关键词:血凝块;DNA 提取;碱性裂解法中图分类号:Q71 文献标识码:A 文章编号:167128259(2007)0520592203An alkaline lysis method for extracting genomicDNA from human blood clotWang Xiaowei 1,Zhang Kezhou 2,Xiong Yongmin 1(1.Key Laboratory of Environment and Genes Related to Diseases of Ministry of Education,Medical School of Xi p an Jiaotong University,Xi p an 710061;2.Xi p an Yanliang 630Rheumatosis H ospital,Xi p an 710089,China)ABSTRACT:Objective To explore a new me thod to isolate genomic DNA f rom human blood clot.M e thodsBlood clot was thawe d naturally in r oom tem pe ra tur e a nd hom ogenized,then digested with alkaline and extra cted by phenol and chlor oform,ele ctrophor esis de tection.Results The genomic DNA was successf ully extr acte d byalka line lysis method.The aver age quantity of the e xtr acted DNA was 0.46g/L,while A 260/A 280>1.8.PCR was per f or med using the hum an Gpx 21gene,and we obta ined the needed tar get gene f ra gments.Conclusion Thealka line lysis extr action me thod is re liable f or obta ining high quantities of DNA fr om blood clot suited for P CR am 2plif icat ion.KEY WORDS:blood clot;DNA extr action;a lkaline lysis me thod 收稿日期:2007203209 修回日期:2007205223基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30671820);陕西省科学技术发展项目(No.2004K122G12)通讯作者:熊咏民,教授.E 2m ail:xiongym @m 作者简介:王小卫(19742),男(汉族),在读硕士.研究方向:主要从事地方病生物化学与分子生物学研究.E 2mail:xiaoweiwang520@DNA 的提取与纯化是分子生物学研究的基本方法,抗凝外周血是常用的DNA 提取材料。

血液中DNA的提取

1、基因组提取的主要试剂配制1M Tris•Cl：121.14g Tris碱溶于800ml双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至1L，高压灭菌。

高压灭菌条件为1.034×105Pa，20min。

0.5M EDTA：EDTA 186.1g溶于800ml双蒸水中，用NaOH调pH值至8.0，定容至1L，高压灭菌。

10%SDS：SDS 100g溶于900ml双蒸水中，加热至68℃助溶，用HCl调pH值至7.2，定容至1000ml。

TE缓冲液：量取1ml 1M Tris•Cl（pH8.0），加上0.2ml 0.5M EDTA（pH8.0），定容至100ml，高压灭菌（终浓度10mM Tris•Cl（pH8.0），1mM EDTA（pH8.0））。

20×SET缓冲液：17.532gNaCl，12.114gTris碱，0.7444gEDTA，溶于50ml双蒸水中，用盐酸调pH值至8.0，定容至100ml，高压灭菌。

（终浓度3M NaCl，1M Tris•Cl（pH 8.0），20mM EDTA（pH 8.0））。

蛋白酶K贮存液：10mg蛋白酶K溶于1ml的灭菌水中，于-20℃冰箱中贮存。

酚/氯仿/异戊醇：将其按24：23：1的比例混合放入棕色瓶中，于4℃贮存。

氯仿/异戊醇：将氯仿和异戊醇按规定的23：1混合，在棕色瓶中室温下贮存。

2、样品的采集及血液DNA提取（1）样品的采集将10ml的玻璃瓶及塑胶盖洗净灭菌，翅静脉抽取鹌鹑血液放入小瓶中（小瓶内事先加入肝素钠抗凝），注意在采集鹌鹑血的时候要尽量减少污染，动作应迅速。

（2）血液DNA提取步骤⑴用灭菌的1ml枪头从小瓶中吸取500μl血样，放入1.5ml的EP管里。

⑵向管内加445μl 1×SET、25μl蛋白酶K（10mg/ml）、25μlSDS（10%），混匀。

⑶55℃空气浴振荡过夜。

⑷加500μl Tris饱合酚，上下颠倒10min。

从人血凝块中提取基因组DNA

凝块基因组ＤＮＡ的提取。
关键词：血凝块；ＤＮＡ提取；聚合酶链式反应；多态性，限制性片段长度
中图分类号：ＤＦ９．７５２文献标识码：Ａ
ＡｅｈｄｆｒＤＮＡｘｔａｔｏｆｏｈｕａｌｏｃｏｓｍｔｏｏｅｒｃｉｎｒｍｍｎｂｏｄｌｔ
ｍｅｈｓｒｌｂｅｆｒｏｔｉｉｇｈｇｕｎｉｅｆｔｏｗａｅｉｌｏｂａｎｎｉｈｑａｔｔｏｄａｉｓＤＮＡｒｍｋｘｌｔｕｔｏＣＲａｐｉｃｔｎｆｏｂｘｔｃｉｆｒＰｏｓｅｄｍｌｉａｉ．ｆｏＫｅｒｓｙｗｏｄ：ｂｘｌｔＤＮＡｘｒｃｉｎ；ｐｌｍｅａｅｃａｎｒａｔｎ；ｐｌｍｏｐｉｍ．ｅｃｉｎｆａｍｅｔｌｎｔｋ￣ｃｏ；ｄｅｔａｔｏｏｙｒｓｈｉｅｃｉｏｏｙｒｈｓｒａｔｒｇｎｇｈｏｅ
ＳＡＮａｌＩｕ，ＣＥｉ—ａｇｅａＤｐｆＢｏｈｍｉｒｎｌｕａｉｏｙ，Ｓａ．ｄｃｌＵｉｅｉＨＧＹ — ，ＸＥＪｎＨＮＧＮｕｌｎ，ｔｌ（ｅｔｉｉｏｉｅｓｙａｄＭｏｃｌｒＢｏｇｃｔｅｌｈｎ．Ｍｅｉｎｖｒｔｒｉａｓｙ，Ｔｉｕｎ０００，Ｃｉａａａ３０１ｈｎ）ｙ
血样中ＤＮ的提取在基因工程和分子生物学Ａ
ｍｉ，上清ｌ。沉淀中加消化液５０ｌ（０ｎ弃卜０１

血块提取DNA步骤

一、血块中提取DNA步骤当天下午：1.取15ml的研磨器，加入5ml血块，加4~5ml溶血试剂（约血块体积的1/3），研磨约10-15min，至无血块存在（抗凝血样本最好研磨10分钟以上）。

移至50ml (15 ml) 离心管中，3000rpm, 10min。

2.去上清，再加10ml溶血试剂洗一遍，滴管吹打均匀，3000r, 10min，到无明显红色。

3.去上清，加1ml溶血试剂，移液器吹打均匀，移至2 mlEP管中，6000r, 10min。

4．去上清，加1ml细胞裂解液（注意将沉淀物打散）,分别加10-15μl（据沉淀物的量决定）的蛋白酶K (20mg/ml )，37℃水浴过夜或56℃3小时，水浴过程中提取负责人要上下颠倒3-4次。

次日上午：5．在通风柜内每管加1ml（等体积）平衡酚，上下颠倒混匀100次，6000rpm,10min。

离心完毕后吸取上清（水相含DNA，白色絮状沉淀为蛋白质）于另一个2mlEP管中，上下颠倒，6．重复步骤47．再加等体积氯仿/异戊醇（24：1），上下颠倒混匀100次，6000rpm,10min。

8．吸取上清于另一1.5mlEP管中，加100μl 3M NaAc (约1/10)，轻轻混匀，上下颠倒10-15次，再加等体积4℃预冷的异丙醇，上下颠倒混匀250次，混匀时动作要轻，可见白色絮状物，10000rpm，5min。

9．去上清，加300-500μl无水乙醇，轻轻振洗，10000rpm，5min（若离心过程中有沉淀未沉下来可适当加大转速），倒去酒精后，通风橱内风干（大约2小时）。

10．加TE50μl，4℃保存约10天后测定浓度、纯度，稀释分装后-20℃冰箱保存。

二、DNA浓度测定及稀释1．37℃水浴溶解DNA，1μl原液＋99μl双蒸水到0.5mlEP管中，比色测定DNA浓度。

2．稀释成0.1μｇ/μl 时，取10μl原液＋10*C(测)—10 μlTE液试剂配方1.细胞裂解液（消毒）终浓度1M NaCl 15ml 150mM0.1M EDTA （PH 8.0）10ml 10mM0.1M Tris-HCl（PH 8.0）10ml 10mM10% SDS 5ml 0.5%ddH2O 60mltotal 100ml2.TE 终浓度0.1M Tris-HCl（PH 8.0）10ml 10mM0.1M EDTA （PH 8.0）10ml 10mMddH2O 80mltotal 100ml注：EDTA在配制时必须调PH，否则EDTA不溶3. 3M NaA C M=82.03无水NaAC 24.6gddH2O 60-70ml冰乙酸调pH=5.0total 100ml4.氯仿/异戊醇5. 平衡酚6. 溶血试剂（低渗，破红细胞、消毒）终浓度x 1蔗糖109.536g 54.768g 0.32M 16ml 0.1M Tris 10ml 5ml 10mMMgCl2 1.0165 0.5082 5.0mMTritonX-100 10ml 5ml 1%ddH2O至1000ml 500mlTritin-100:聚乙二醇辛基醚（曲拉通X100）7．蛋白酶K二、各种试剂名称及作用：三、实验注意事项1．有机溶剂要在通风橱内加2．吸上清原则为“宁少勿多”，切勿吸到下层液体。

凝固全血基因组DNA提取系统操作方法及步骤说明书

试剂盒组成、储存、稳定性：本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。

储存事项:1. 环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

2. 为避免降低活性、方便运输，提供蛋白酶K 为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.5 或1ml 灭菌水溶解，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次适合使用量分装冻存，－20℃保存。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本试剂盒根据凝固全血特点独家研制的细胞核裂解液配合蛋白酶K 裂解凝固血块释放出基因组DNA, 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA 在Sigma 的分子生物学级Glycogen 的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。

产品特点： 1.不需要使用有毒的苯酚等试剂。

2.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。

3. 结果稳定，配合|Sigma 的分子生物学级Glycogen 帮助沉淀微量DNA ，产量高，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb ，可直接用于构建文试剂盒组成保存320次×50μl （DN3102）细胞核裂解液室温 180 ml 蛋白沉淀液室温70 ml Glycogen -20℃0.7 ml 蛋白酶K 粉（可选）20mg/ml -20℃ 20mg库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml离心管转头的传统台式离心机（小量提取，用小离心机即可）。

2.用户需自备异丙醇和70％乙醇和TE缓冲液。

3.典型的凝固血产量1ml全血可提取出10-30µg基因组DNA（不同凝固程度的样品产量的个体差异可能非常大）。

血液标本抽提DNA

血液标本抽提DNA第一篇：血液标本抽提DNA抗凝全血中提取DNA准备：配制80%异丙醇和70%乙醇各1ml备用。

选择2ml的离心管。

血液的体积为2ml。

先向2ml的离心管中加入1ml的血液。

后加入1ml的buffer MG-A，剧烈摇晃20次；10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。

再加入1ml的血液，再加入1ml的buffer MG-A，剧烈摇晃20次；10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。

注意：使用底部带有棱角的离心管，以防倒上清时，沉淀滑出离心管。

如果血液体积超过1/2离心管的体积，可分两次进行处理。

目的：buffer MG-A的作用是快速裂解细胞，并且促使DNA形成容易沉淀的凝聚物。

加入1ml的buffer MG-A。

Vortex充分震荡，10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。

加入1ml的buffer MGS, Vortex充分震荡，10000xg 离心30s，缓慢倒掉上清。

将离心管倒扣在吸水上2min；或者简短离心，仔细吸除残留的上清。

目的：洗涤去除DNA凝聚物中的蛋白。

加入1ml buffer MGL和10ul Proteinase K，Vortex震荡悬浮沉淀。

6 65℃水浴30min（或者更长时间，可过夜），间断摇晃混合。

目的：降解蛋白，释放DNA 10000xg 离心 30s，将上清缓慢倒入一个干净的2ml的离心管，加入800ul 80%异丙醇；缓慢翻转离心管20次（出现丝状或簇装DNA凝聚物）,再剧烈摇晃20次使DNA凝聚物变得更紧密。

10000xg 30s，缓慢倒掉上清。

注意：在出现丝状或簇状DNA凝聚物后，需剧烈摇晃去除可能包裹在DNA凝胶中的溶液，不然最后DNA溶解困难，或DNA中有盐残留。

在出现DNA凝聚物之前，DNA为溶解状态，需要缓慢翻转离心管。

目的：异丙醇能够沉淀DNA 加入1000ul 70% 乙醇，剧烈摇晃20次；10000xg 离心 30s，缓慢倒掉上清。

血液基因组DNA的快速提取方法_申社林

生物技术通报ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ・研究报告・２００７年第４期收稿日期：２００７－０５－３０作者简介：申社林（１９６５－），男，副教授，研究方向：医学分子生物学；Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｂｉｎｇｙａｎｇ２００８＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ随着分子生物学技术的深入发展，在基因水平上对疾病进行诊断已经成为临床诊断技术的一项基本技术手段。

尤其是法医学中的个体识别、亲子鉴定等，对提取基因组ＤＮＡ的完整性及纯度要求更高［１］。

由于血液取材方便可靠，因此以上研究通常是从血液中提取完整的基因组ＤＮＡ。

目前，常用的血液基因组提取方法主要是有机溶剂提取法，费时、费力，且残留的有机溶剂如酚／氯仿等会对后续的分子生物学操作造成影响。

本实验提供了一种快速、安全、有效的血液基因组提取方法，不会有任何有机溶剂的残留，适用于ＰＣＲ、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）等分析。

１材料和方法１．１材料琼脂糖（Ｓｉｇｍａ公司），Ｄ３０００ｐｌｕｓＤＮＡＬａｄｄｅｒ、Ｇｏｌｄｖｉｅｗ购自ｓｏｌａｒｂｉｏ公司，ＤＮＡＭａｒｋｅｒ（λ－ＨｉｎｄⅢ）、ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰ均购自ＴａＫａＲａ公司，其它试剂均为国产分析纯。

新鲜抗凝血：静脉抽取健康体检者血样，以抗凝剂（柠檬酸０．４８％，柠檬酸钠１．３２％，葡萄糖１．４７％）抗凝。

１．２ＤＮＡ提取方法１．２．１取０．５ｍｌ抗凝全血放入一支１．５ｍｌ离心管中，加入二倍体积的红细胞裂解液（０．１５５ｍｏｌ／ＬＮＨ４Ｃｌ，血液基因组ＤＮＡ的快速提取方法申社林李兵（邢台医学高等专科学校基础部，邢台０５４０００）摘要：目的：研究血液中基因组ＤＮＡ的简便快速提取方法。

方法：取新鲜抗凝血，以红细胞裂解液除去红细胞，再破碎白细胞，除去杂蛋白，获得基因组ＤＮＡ。

结果：所得基因组ＤＮＡ完整、无断裂，含量和纯度均较高。

以所提基因组ＤＮＡ作为模板能很好的扩增出ｐ２１因子启动子序列，因此该法所提取的ＤＮＡ是完整可靠的。

提取dna的实验操作方法

提取dna的实验操作方法
提取DNA的实验操作方法主要包括以下步骤：
1. 样本收集：收集所要提取DNA的生物样本。

常见的样本来源包括血液、唾液、细胞培养物、植物组织等。

2. 细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA释放出来。

常用的方法有物理破碎（如超声波破碎、酶解）和化学破碎（如细胞裂解液、洗涤液）等。

3. DNA溶解：将破碎后的细胞样本转移至含有盐和缓冲液的试管中，使DNA 溶解。

4. 蛋白质沉淀：加入蛋白酶K等蛋白质沉淀剂，将样品中的蛋白质去除。

5. DNA沉淀：加入过冷酒精或异丙醇等沉淀剂，使DNA凝结成白色絮状物，然后通过离心将DNA沉淀下来。

6. 洗涤：将沉淀下来的DNA进行洗涤，以去除杂质和残留的沉淀剂。

常用的洗涤缓冲液包括70%乙醇等。

7. 干燥和溶解：将清洗后的DNA样本用空气或真空干燥，然后用缓冲液或去离子水使其溶解。

8. 测定DNA浓度和纯度：使用分光光度计或其他的测定方法，测定提取到的DNA的浓度和纯度。

以上是提取DNA的基本实验操作方法，实际操作中可能会根据具体的实验目的和样本类型进行适当的调整和改进。