达科为与细胞治疗
SuperCulture
深圳市达科为生物工程有限公司地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703518122SuperCulture ®MSC 专用基础培养基说明书产品描述SuperCulture ®MSC 专用基础培养基（Mesenchymal Stem Cell Basal Medium ，MSCBM ）是专用于培养人间充质干细胞（hMSCs ）的GMP 级别基础培养基，需要添加血清或者血清替代物混合成完全培养基后使用，推荐使用EliteCell 的EliteGro ™作为血清替代物添加。
产品信息产品名称货号型号规格Mesenchymal Stem Cell Basal Medium6114011A 型500mL 6114021B 型500mL*A 型表示有酚红，B 型表示无酚红。
产品参数产品名称Mesenchymal Stem Cell Basal MediumGlucose Low Glucose Supplements Need supplement Glutamine Glutamine Phenol Red Phenol Red AntibioticNo Antibiotic Sodium Bicarbonate BufferSodium BicarbonateHEPES BufferNo HEPES pH 7.0-7.6Osmolality 280~340mOsmol/kgEndotoxin<0.3EU/ml储存条件及有效期：MSC 专用基础培养基2℃~8℃避光储存，有效期为1年。
使用方法以配制500mL 完全培养基为例（注意以下均为无菌操作）：1.准备475mL 的MSCBM ，恢复到室温。
2.准备25mL 的EliteGro ™，37℃水浴解冻；3400xg 离心3~5min ，取上清部分，或者用40μm 的细胞筛网直接过滤。
3.将离心或过滤后的25mL EliteGro™加入475mL MSCBM，即可得到5%浓度的完全培养基（普通版本的EliteGro™还需要添加肝素钠，Advanced版本的EliteGro™不需要添加肝素钠）。
达科为IL-2 ELISA试剂盒说明书
6. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 7. 使用前检查试剂盒内各种试剂；试剂稀释、加样和中止反应
充分混匀或者摇匀对实验结果尤为重要，最好使用低速频 率振荡器或者反应过程中每 15 分钟手工摇匀一次。 8. 实验板孔加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔的孵育 时间一致。 9. 使用洁净的塑料容器盛装洗涤液。
即用型
即用型
*：96/48 Tests
4、 需要实验者自行准备的试剂与仪器：
1． 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2． 微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P1000 3． 蒸馏水或去离子水 4． 全新滤纸 5． 旋涡振荡器和磁力搅拌器 6． 37℃温箱
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5、 注意事项：
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10. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，滤 纸上看不到水印。勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。
11. TMB 对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免金属接触影 响结果。有毒，避免用手接触！准备使用的 TMB 若变为蓝 色，表明 TMB 已经污染，请丢弃。请在终止反应后 10 分 钟内读取 OD 值。
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8、结果分析：
1. 有两种设定空白对照的方案： 1) 将 TMB 空白显色孔设为对照。所有的标准品和样品的 吸光值减去空白孔的吸光值后，在坐标纸上画出曲线，以吸 光值作为纵坐标，以浓度作为横坐标。 2) 将零孔设为对照。得到的数据可以直接在坐标纸上画出 曲线。
2. 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使 用各种应用软件来计算。若样品 OD 值高于标准曲线上限，应 适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
ELISPOT技术原理及其应用
修饰的HRP/银 银 修饰的 染系统
DAKEWE BIOTECH COMPANY Ltd.
厚度： 厚度：120-150um 最大蛋白吸附量： 最大蛋白吸附量： 80-100 ug ELISPOT所需量：1 ug 所需量： 所需量 包被抗体集中于膜表面1um 包被抗体集中于膜表面 (透明板容纳量为：30-40 ug) 透明板容纳量为： 透明板容纳量为
DAKEWE BIOTECRP/AEC
DAKEWE BIOTECH COMPANY Ltd.
PVDF板 透明板的典型斑点图像 PVDF板、透明板的典型斑点图像
达科为生物
IFN-γ γ
IFN-γ γ
IL-5
IL-10
PMA/ionomycin 2.5x104 hu-PBMC huindirect
ICE Peptide Pool 2x105 hu-PBMC huindirect
ELISPOT 流式荧光染色 ELISA
X坐标：各检测方法的检测结果 坐标：
Y坐标：每百万APC中实际IFN-γ+T细胞数量 坐标：每百万APC中实际IFNAPC中实际IFN
DAKEWE BIOTECH COMPANY Ltd.
达科为生物
第二部分： 第二部分：技术特点
1.技术操作流程 1.技术操作流程 2.ELISPOT技术要点 2.ELISPOT技术要点 ELISPOT 3.塑料板与膜板 3.塑料板与膜板 4.膜结构与抗体包被 4.膜结构与抗体包被 5.细胞处理 5.细胞处理 6.有血清与无血清 6.有血清与无血清 7.刺激物选择 7.刺激物选择 8.建立阳性对照 8.建立阳性对照 9.调整适当的细胞浓度 9.调整适当的细胞浓度 10.预培养法与直接法 10.预培养法与直接法 11.各种染色系统 11.各种染色系统
达科为生物技术 人淋巴细胞分离管说明书
1/32/33/3表一：产品基本参数使用方法1.检查。
如图一（A ）所示。
取出分离管，观察半固体材料之上是否有游离的分离液。
如果有，请用离心机2000g ，20℃，离心1min 。
2.倒入血液。
血液样品必须为抗凝全血，无需稀释。
分离液呈半固体形态，不会与血液混合。
每支分离管可以分血分离管组成密度介质医用级别半固体组织分离液密度 1.077±0.001g/mL (20ºC)渗透压290±15mOsm 内毒素含量≤0.25EU/mL 保存条件室温避光保存保质期12个月图一：淋巴细胞分离管分离血液的过程注意事项：�分离管室温避光保存。
�最佳分离温度在18-25℃，超出该温度范围分离效果将受一定影响。
�血液在室温采集、在抗凝容器中室温存放（保存时间不要超过4hr ）、室温分离，勿放到4℃冰箱。
�全血无需稀释，可直接分离。
但稀释后不影响分离效果。
�如果全血不足3mL ，建议不要使用分离管，稀释到3mL 对分离效果没有改善。
因为不论稀释与否，红细胞的数量是恒定的，置换出的游离分离液也是恒定的，经离心后细胞聚集带仍然距离半固体组织很近，吸取操作会有一定难度。
�取走血浆的血细胞可以用生理盐水稀释一倍之后倒入分离管，以分离PBMC 。
但前提是有足够数量的红细胞（至少有相当于3mL 全血所含的红细胞）。
1046-10496.刘义,等.[J]生殖与避孕,2007,27(11):691-6947.张慧,等.[J]江苏大学学报医学版,2007,13(2):97-1018.王晓莲,等.[J]实用老年医学,2007,21(4):240-2429.丁隆,等.[J]第三军医大学学报,2007,29(11):1072-107510.夏婷,等.[J]中国实验血液学杂志,2006,14(4):745-74811.陈华华,等.[J]微循环学杂志,2005,15(4):6-812.陈敏,重庆医科大学博士学位论文2007制造商：深圳市达科为生物技术有限公司地址：深圳市南山区南油登良路天安工业区5栋3B (518054)Toll free ：800-8304366Tel ：+8675586235352Fax ：+8675526869149E-mail ：*************http ：//（100413）。
达科为 - 重组人源化 CD3 单抗说明书
深圳市达科为生物工程有限公司 地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703 518122重组人源化CD3单抗说明书Recombinant anti-CD3 humanized antibodyCat#：6151011/6151012/6151013基本信息：名 称：重组人源化CD3单抗 克 隆 号：OKT3H特 异 性：TCR-CD3复合物ε链 反应种属：Human 同 型：Human IgG1 性能参数：内 毒 素：＜1EU/μg （LAL ） 纯 度：＞95% by SDS-PAGE配 制：0.22μm 过滤，溶于PBS 溶液中，pH 7.2，不含防腐剂 纯 化：通过亲和层析法纯化应用范围：FCM 、Elisa 、功能分析、T 细胞活化 产品描述：CD3/T 细胞受体(TCR)复合物，它由两个CD3ε，一个CD3γ，一个CD3δ，一个CD3δ(CD247)和T 细胞受体(α/β和γ/δ)异质二聚体组成。
CD3ε是CD3 / TCR 复合物的一条20 kD 链。
CD3在所有成熟的T 淋巴细胞，自然杀伤样T 淋巴细胞和部分胸腺细胞中表达。
CD3，也称为T3，是免疫球蛋白超家族中的一员，在抗原识别、信号转导和T 细胞活化过程中发挥重要作用。
重组人源化CD3抗体是达科为生物工程公司和美国团队合作开发的人源化CD3抗体。
该人源化抗体，保留鼠源抗体的CDR 区，其他序列完全人源化，人源化序列达到92%，即保持了鼠源抗体的高亲和力，又消除了鼠源抗体的免疫原性。
该人源化抗体序列经过优化，亲和力高，性质稳定，不易形成多聚体，在体外具有很好的活化T 细胞的功能。
产品采用基因工程表达，无血清培养基体系，在符合GMP 规范的车间生产。
该人源化抗体激活T 细胞不依赖于抗原，抗体Fab 段特异性识别TCR-CD3复合物的ε链，激活T 细胞活化信号通路，刺激T 细胞的增殖和活化。
深圳市达科为生物工程有限公司 地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703 518122 Tel************** Fax************** E-mail:*************测试数据：SDS-PAGE 生物活性使用方法：活化T 细胞应用：直接将抗体加入PBMCs 或T 细胞悬液中，推荐抗体终浓度为50ng/ml ，可根据细胞活化状态选择抗体浓度为20ng-100ng/ml 。
达科为全自动染封一体机在常规病理染色中的应用
达科为全自动染封一体机在常规病理染色中的应用摘要：常规病理染色是病理技术中最常用方法，尽管现代病理技术蓬勃发展，但该技术仍是诊断的基础。
传统的手工方法，因步骤繁琐，容易出现质量不稳定的情况，在经济条件允许的情况下，用自动化的仪器取代手工操作是必然的趋势。
我科2020年引进达科为染封一体机，进行常规HE染色及封片工作，使用一年来染色封片效果良好。
现将使用情况进行分析，并将保养体会进行总结。
关键词达科为染封一体机使用评价质量控制常规病理染色是病理技术中最常用的方法，尽管现代病理技术蓬勃发展，但该技术仍是诊断的基础。
传统的手工方法，因步骤繁琐，容易出现质量不稳定的情况，在经济条件允许的情况下，用自动化的仪器取代手工操作是必然的趋势。
我科2020年引进达科为染封一体机，进行常规HE染色及封片工作，使用一年来染色、封片效果良好。
我科的常规染色方法从纯手工染色过度到自动化的机器染色，先后引进了赛默飞全自动染色机和达科为染封一体机，在自动化仪器使用方面积累了一定的经验，现将手工法与2种自动化仪器的使用情况进行分析，并将保养体会总结如下：一、材料与方法1.1仪器设备赛默飞全自动染色机（Gemini AS），达科为全自动智能染封一体机（DP360染色机/CS500封片机，显微镜（OLYMPUS BX41）1.2试剂苏木素、伊红、3%盐酸乙醇、返蓝液、80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯1.3 常规HE手工染色及机器染色流程组织经固定、脱水、透明、包埋后切片，然后分别进行手工染色、赛默飞及达科为机器染色，染色程序如表1表2表3。
染色完成后，赛默飞全自动染色机染色完成的片子需进行手工封片，达科为全自动智能染封一体机染色完成的片子会自动完成封片。
表1 手工染色程序步骤试剂时间沥液时间1二甲苯5min5 2二甲苯5min5 3二甲苯5min5 4二甲苯5min5 5二甲苯5min10 6无水乙醇5min5 795%乙醇5min5880%乙醇5min59水洗2min51苏木精8min10 01水洗2min5 113%盐酸乙醇2s10 21水洗1min5 31返蓝液30s10 41水洗1min5 5伊红20s10 161780%乙醇25s51895%乙醇30s519无水乙醇1min52无水乙醇1min521二甲苯1min522二甲苯1min5表2 赛默飞全自动染色机染色程序步骤试剂时间沥液时间抖缸次数1二甲苯5min332二甲苯5min333二甲苯5min334二甲苯5min335二甲苯5min336无水乙醇1min33795%乙醇1min50880%乙醇1min309水洗3min301 0苏木精8min1031 1水洗2min301 23%盐酸乙醇2s001 3水洗1min301 4返蓝液30S301 5水洗1min301 6伊红20s1031 780%乙醇25s331 895%乙醇30s331 9无水乙醇1min332 0无水乙醇1min532 1二甲苯1min002 2二甲苯1min00表3 达科为全自动智能染封一体机染色程序步骤试剂时间沥液时间抖缸次数1二甲苯5min332二甲苯5min333二甲苯5min1534无水乙醇1min335无水乙醇1min33695%乙醇1min50780%乙醇1min308水洗3min309苏木精8min1031 0水洗2min301 13%盐酸乙醇2s001 2水洗1min301 3返蓝液30s331 4水洗1min301 580%乙醇30s331 6伊红20s1031 780%乙醇25s331 895%乙醇30s331 9无水乙醇1min332 0无水乙醇1min532 1烤箱1min60℃2 2中转站点0001.4 方法对比对同一组织（乳腺标本）蜡块取连续切片30张，捞片获得切片30张，10张切片为一批次分别用手工、赛默飞、达科为三种方法进行染色封片，记录使用时间并评价方法学的一致性（重复性），及染色封片效果。
达科为 红细胞沉降液说明书
深圳市达科为生物工程有限公司地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703邮编：518122Tel**************Fax**************Web:E-mail:*************红细胞沉降液Cat#6072011产品描述：本产品用于从人抗凝血中沉淀红细胞，从而达到有核细胞与红细胞分离的效果，再与分离液联用可以得到高纯度的单个核细胞。
本产品主要成分为改性多糖和无机盐。
高分子量的改性多糖可以促进红细胞的凝集，从而使红细胞快速下沉。
包装规格：货号名称规格6072011红细胞沉降液100mL使用方法：1.取新鲜抗凝血，与红细胞沉降液按照4:1混匀，室温静止30分钟，沉降红细胞。
2.取一定体积的分离液于离心管中，将上清平铺到分离液液面上方，800g 离心20分钟后得到高纯度的单个核细胞层。
分离液与原全血的体积比为1:1~1:2。
分离实验的具体步骤参考分离液说明书。
3.用PBS 或者生理盐水洗涤两遍后，得到高纯度的单个核细胞。
保存方法：常温保存，保质期一年。
相关产品：货号名称规格6813521NK 细胞诱导培养试剂盒Natural Killer Cells Induction Culture Kit 3L 体系68135222L 体系68135231L 体系6113511自然杀伤（NK ）细胞扩增培养试剂盒（因子）Natural Killer Cells Culture Kit Plus （NKP-KIT ）3L 体系61135121L 体系6141011细胞因子套装（CIK 专用）1kit 6111021SuperCulture ®L500淋巴细胞无血清培养基1000mL/瓶6122012SUPERGROW ®细胞培养添加物25mL/瓶7912011样本密度分离液250mL/瓶190218。
达科为 细胞因子套装（CIK专用）说明书
深圳市达科为生物工程有限公司 地址：深圳市南山区桃源街道光前工业区20栋4C 邮编：518055 Tel: 0755-******** Fax: 0755-******** Web: 细胞因子套装（CIK 专用）说明书CIK Activated Agent （CIK-CYT ）DKW35-CYT-CIK001产品描述：细胞因子套装（CIK 专用）是本公司在对CIK 和T 淋巴细胞培养进行大量摸索和实验的基础上，根据优选出的细胞培养所需要的刺激因子的种类及剂量配制而成，主要作为人CIK 细胞培养的诱导活化剂。
本产品批间质量稳定，可搭配各种无血清或有血清培养基用于诱导活化CIK 细胞，使用时按照1:100的比例加入培养基。
包装规格：使用方法：培养细胞时，将组分I （CIK Activated Agent I ）和组分II （CIK Activated Agent II ）分别按照1:100的比例加入总体系中使用。
培养基总体积组分I组分II 10 mL 100 μL 100 μL 20 mL 200 μL 200 μL 50 mL500 μL500 μL具体培养方法：1. 采血并分离PBMCs 。
2. 使用完全培养基将分离获得的PBMCs 按2-2.5×106个/ml 的浓度接种于T75或T175细胞培养瓶中，按照1:100的比例加入CIK Activated Agent I ，37℃，5%CO 2培养箱中培养。
3. 24hr 后，即第1天按照1:100的比例加入CIK Activated Agent II ，刺激货号名称组分规格 DKW35-CYT-CIK001细胞因子套装（CIK 专用） CIK Activated Agent KitCIK Activated Agent I 500μL CIK Activated Agent II500μL深圳市达科为生物工程有限公司 地址：深圳市南山区桃源街道光前工业区20栋4C 邮编：518055 Tel: 0755-******** Fax: 0755-******** Web: E-mail:*************CIK 细胞的生长和增殖。
深圳市达科为生物工程有限公司小鼠淋巴细胞分离液说明书
深圳市达科为生物工程有限公司生产地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703518122小鼠淋巴细胞分离液说明书Cat#7211011/7211012本品为深圳市达科为生物工程有限公司研发的新一代密度梯度分离液。
主要成份为Iodixanol ，分子量为1550。
它是完全化学惰性、无生物毒性的碘化物，不会结合任何已知的生物功能蛋白，不会干扰任何细胞表面膜蛋白，不会抑制酶活性，不会干扰抗原抗体反应。
本产品分离的淋巴细胞纯度高、状态好、得率高；分离方法简单易学，对操作者的经验要求不高。
本公司的研究表明，小鼠脾脏淋巴细胞在该分离液中暴露1小时，离心分离后，淋巴细胞的数量和质量没有明显变化，随后的ELISPOT 检测结果同对照组完全一致。
【产品信息】【使用方法】自备材料：35mm 培养皿、10mL 玻璃注射器内活塞、70μm 细胞筛网或200目尼龙网——裁成90mm ×90mm 正方形（以上材料均为无菌要求）、离心管、移液管、加样枪、水平转子离心机等。
【实验步骤】1.断颈处死小鼠，浸泡于75%的乙醇中。
2.在超净台中取出小鼠脾脏。
注意无菌操作。
3.在35mm 培养皿中放入4mL-5mL 小鼠淋巴细胞分离液（取用前恢复至室温并摇匀）。
研磨（研磨操作请参考图二）。
4.把悬有脾脏细胞的分离液立即转移到15mL 离心管中，如图一（A ），覆盖500μL-1000μL 的RPMI 1640培养基（保持液面分界明显），如图一（B ）。
5.室温，水平转子800g 离心30min 。
设置较慢的升降速（如果共有十档且第十档为最高档，升降速应该调整到第三档）。
离心结束后细胞分层如图一（C ）所示。
6.吸出淋巴细胞层，再加入10mL RPMI 1640培养基，颠倒洗涤。
室温，250g 离心10min 收集细胞。
7.倾倒上清液，用培养液重悬细胞，计数。
商品名Mouse 1×Lymphocyte Separation Medium 小鼠淋巴细胞分离液货号规格7211011:100mL/瓶7211012:250mL/瓶主要成分Iodixanol ，化学惰性，无生物毒性内毒素含量<0.5EU/mL 密度(1.081±0.001)g/mL (20℃)渗透压(280±15)mOsmol/kg保存条件常温密封避光保存，保质期2年。
细胞治疗技术在重大疾病治疗中的应用前景
细胞治疗技术在重大疾病治疗中的应用前景随着科学技术的不断进步，细胞治疗技术成为重大疾病治疗领域的一颗新星。
细胞治疗技术以其独特的优势，逐渐在癌症、心脏病、糖尿病等重大疾病的治疗中崭露头角。
本文将探讨细胞治疗技术在重大疾病治疗中的应用前景，并展望未来的发展趋势。
一、细胞治疗技术在癌症治疗中的应用前景细胞治疗技术在癌症治疗中表现出了巨大的潜力。
一方面，干细胞的应用能够促进肿瘤组织的自我修复，提高治愈率。
另一方面，免疫细胞治疗可通过改变患者的免疫应答机制，增强免疫系统对肿瘤的攻击能力。
目前，CAR-T细胞疗法已经成为一种颇具前景的肿瘤治疗方法，取得了显著的疗效。
二、细胞治疗技术在心脏病治疗中的应用前景细胞治疗技术在心脏病治疗中也展现出了广阔的前景。
研究显示，通过将干细胞注入患者的心脏组织中，可以有效修复因缺血而受损的心肌。
这种方法既可以增加新生心肌细胞的数量，又可以改善心脏的功能和心肌的结构。
未来，细胞治疗技术有望成为心脏病治疗的重要手段。
三、细胞治疗技术在糖尿病治疗中的应用前景细胞治疗技术对于糖尿病的治疗也具有良好的前景。
通过将胰岛细胞植入患者体内，可以恢复胰岛素的正常分泌，从而有效控制血糖水平。
此外，干细胞的应用也可以促进胰岛功能的恢复，提高胰岛细胞的存活率和功能。
随着细胞治疗技术的不断发展，糖尿病患者将有望摆脱胰岛素依赖的困扰。
四、细胞治疗技术的发展趋势细胞治疗技术在重大疾病治疗中的应用前景不断扩大，但仍面临一些挑战。
如细胞质等资源的要求，细胞存储和细胞质量的控制等问题。
未来，细胞治疗技术发展的重要方向包括提高细胞质的稳定性和长期效果，发现更多的适应症并完善治疗方案。
此外，建立严格的标准和规范，加强监管和安全性评估也是必要的。
细胞治疗技术的应用前景令人振奋，但我们也应保持理性的态度。
在推动细胞治疗技术的发展过程中，我们需要更多的科学研究和大规模临床试验来验证其安全性和有效性。
只有经过充分验证和严格监管，细胞治疗技术才能真正成为重大疾病治疗中的重要手段。
达科为生物工程有限公司 Human IFN-γ预包被elispot试剂盒使用说明书 C1
Human IFN-γPrecoated ELISPOT KitCat#:2110003/2110004产品描述：深圳市达科为生物工程有限公司生产的达优®系列ELISPOT预包被试剂盒采用原装进口高亲和力高效价抗体对，经预包被PVDF板、低温干燥、真空密封包装等工艺流程制备。
成品PVDF板上预包被的抗体分布均匀、效价稳定，2-8ºC可存放12个月。
达优®系列预包被ELISPOT试剂盒使实验检测时间从3天缩短为2天，大幅度减少无菌操作的实验步骤，减轻实验者的劳动强度和减少污染的几率。
使得实验者能够轻松、高效地完成复杂的ELISPOT检测实验。
试剂盒提供的试剂、规格：名称21100032110004规格×数量规格×数量Biotinylated Antibody100μL×5支100μL×5支Streptavidin-HRP500μL×1支500μL×1支Dilution Buffer R(10×)18mL×1瓶18mL×1瓶Washing Buffer(50×)75mL×1瓶75mL×1瓶AEC Dilution50mL×1瓶50mL×1瓶AEC SolutionⅠ(20×)3mL×1瓶3mL×1瓶AEC SolutionⅡ(20×)3mL×1瓶3mL×1瓶AEC SolutionⅢ(200×)500μL×1支500μL×1支阳性刺激物/50T×5瓶预包被PVDF板5块5块实验者自备的试剂与仪器：1.RPMI-1640基础培养基（需要添加双抗）2.无血清培养基（完全培养基，即用型），推荐使用达优®ELISPOT无血清培养基。
达科为 Human IL-8 Precoated ELISA Kit 说明书
Human IL-8Precoated ELISA KitCatalog#：1110803产品描述：达优®Human IL-8Precoated ELISA Kit 是通过酶联免疫吸附技术体外定量检测人血清、血浆、缓冲液或细胞培养液中的人IL-8。
本试剂盒专用于科研，而非用于诊断。
使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分，若有任何疑问请与深圳市达科为生物工程有限公司联系。
E-mail ：检测范围：2000-62pg/mL 灵敏度：25pg/mL重复性：板内变异系数<10%，板间变异系数<15％。
试剂盒提供的试剂：试剂规格×数量配制Cytokine Standard 10瓶干粉状，按瓶上说明稀释Biotinylated Antibody 50µL×10支1∶50用1×Dilution Buffer R 工作液稀释Streptavidin-HRP 500µL×1支1∶100用1×Dilution Buffer R 工作液稀释Dilution Buffer R （10×）18mL×1瓶1∶9用1×PBS 稀释Washing Buffer （50×）75mL×1瓶1∶50用蒸馏水稀释TMB 50mL×1瓶即用型Stop Solution 50mL×1瓶即用型Precoated ELISA Plate5块即用型封板膜20张即用型说明书1份自备物品：1．酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）2．微量加液器及吸头：P10，P50，P100，P200，P10003．蒸馏水或去离子水，全新滤纸4．旋涡振荡器和磁力搅拌器注意事项：1.试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡20-30分钟。
实验前室温平衡对Washing Buffer （50×）、DilutionBuffer R （10×）、Precoated ELISA Plate 和TMB 有重要意义。
达科为生物技术 EZ-Sep Monkey 9X 说明书
EZ-Sep™ Monkey 9X使用说明书（070521）前言：达科为公司长期致力于在中国推广ELISPOT技术。
我们不仅仅关注于ELISPOT检测本身，也同样关注广大客户在完成整个ELISPOT免疫学检测期间遇到的各种问题，包括实验样品的制备、样品细胞的冻存与复苏、无血清ELISPOT检测、ELISPOT检测标准化、ELISPOT 检测质量控制、实验数据的读取与处理，等等。
目前的ELISPOT检测样品主要有两类来源：一类是血液来源，比如人血或者猴血的PBMC细胞；另一类是脾脏来源，主要是取自小鼠或者大鼠的脾脏淋巴细胞。
达科为公司为了解决这几类淋巴细胞的分离问题，研发出了EZ-Sep™（中文商标：）系列淋巴细胞分离液。
和传统的基于Ficoll的分离液不同，EZ-Sep™系列淋巴细胞分离液采用了新一代、无毒、低渗的碘化物，所以带来了淋巴细胞分离的革命性变化。
本方案将介绍如何使用EZ-Sep™ Monkey 9X来分离血液中的PBMC。
该方法的特点是：全血与分离液直接混合，无需稀释，没有Overlay的操作。
因而操作简单、易学，对实验者的经验要求不高，能大幅度减轻实验中的劳动时间与强度；分得的淋巴细胞的纯度高、状态好、得率高；尤其适合大体积血液的分离。
产品说明：英文：EZ-Sep™ Monkey 9X商品名中文：易得猴淋巴细胞分离液用途猴子分离猴血中的PBMC细胞规格 100mL/瓶，9倍浓缩液，可分离800mL全血ºC)密度 1.316±0.001g/mL(20渗透压 280±15mOsm主要成份 Iodixanol内毒素含量 0.5EU/ml保存条件室温、避光保存EZ-Sep™ Monkey 9X猴淋巴细胞分离液的主要成份为Iodixanol，化学学名为：5,5-[(2-hydroxy-1,3-propanediyl)-bis(acetylimino)]bis-[N,N bis(2,3dihydroxypropyl)-2,4,6-triiodo-benzenedicarboxamide]，分子量为1550。
细胞病理文件学习考核
您的部门：[填空题] *_________________________________您的姓名：[填空题] *_________________________________1. 细胞病理阳性涂片档案保存期限保证不低于[单选题]A 、2 年B 、10 年C 、15 年(正确答案)D 、30 年2. 细胞病理阴性涂片档案保存期限保证不低于[单选题]A 、2 年(正确答案)B 、10 年C 、15 年D 、30 年3. 细胞病理已制片的标本需要至少保存[单选题]A 、7 天B 、10 天C 、14 天(正确答案)D 、30 天4. 病理室的新进耗材最终需要经过( )的审核后才干使用。
[单选题]A、病理主管B、实验室经理C、子公司经理D、病理主任(正确答案)5. 病理学标本在交接时需要按照要求子细核对申请单和标本数量，并在( )表格上登记。
[单选题]A、《病理标本交接记录本》B、《细胞标本交接记录本》C、《标本交接记录本》(正确答案)D、《标本异常登记表》6. 《细胞病理制片质量分级评分表》规定每月需要抽取( )张玻片进行制片质量分级评估[单选题]A 、10 张B 、50 张C 、100 张(正确答案)D 、200 张7. 常规妇科液基细胞学检测项目的不满意率应当控制在( )以内[单选题]A 、0.5%B 、1%C 、2%D 、5%(正确答案)8. 封片机喷枪阀停放位置下面的玻璃瓶中应始终保持有( )的二甲苯以防止喷胶阀中树胶凝固。
[单选题]A 、1/4B 、1/3C 、1/2D 、3/4(正确答案)9. 用以制作细胞蜡块的蛋清溶液浓度为[单选题]A 、5%B 、8%(正确答案)C 、10%D 、15%E 、20%10. 金圻睿的制片夹需要提前加入( ) ml 的清洗液。
[单选题]A 、1B 、2(正确答案)C 、3D 、4E 、511. 科室现在使用的每台全自动染色机内有( )缸试剂缸装填的液体是95%酒精。
DMEM低糖培养基说明书
深圳市达科为生物工程有限公司地址：深圳市坪山区坑梓街道金辉路14号深圳市生物医药创新产业园区1号楼702、703邮编：518122Tel**************Web:E-mail:*************DMEM低糖培养基说明书Cat#：6016111产品描述：Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium (DMEM)是一种改进的Eagle基础细胞培养基(BME)，含有四倍浓度的氨基酸和维生素。
本品为低糖型（1000mg/L），支持多种哺乳动物细胞的培养，包括原代成纤维细胞、神经元、胶质细胞、HUVECs和平滑肌细胞，以及HeLa、293、Cos-7和PC-12等细胞系。
本产品是GMP级别的培养基，不含动物成分，培养细胞时需额外添加胎牛血清等培养添加物。
包装规格：货号名称规格6016111DMEM低糖培养基含酚红，碳酸氢钠，L-谷氨酰胺和丙酮酸钠500mL产品信息：预期用途：采用无菌工艺生产该培养基，可用于进一步的制造用途。
本产品不适用于人体、诊断或治疗用途。
保存方法：2℃~8℃，避光保存，保质期12个月。
注意：本品避免反复冻融，使用时注意无菌操作。
产品配方：完整成分清单mg/L氨基酸Glycine30L-Arginine•HCl 84L-Cystine•2HCl 63L-Glutamine584L-Histidine•HCl•H 2O 42L-Isoleucine 105L-Leucine 105L-Lysine•HCl 146L-Methionine 30L-Phenylalanine 66L-Serine 42L-Threonine 95L-Tryptophan16L-Tyrosine•2Na•2H 2O 104L-Valine 94维生素Choline chloride 4Folic Acid 4myo-Inositol 7.2Niacinamide4D-Pantothenic Acid•1/2Ca 4Pyridoxal•HCl 4Riboflavin 0.4Thiamine•HCl 4无机盐CaCl2200Fe(NO 3)3•9H 2O 0.1MgSO 497.67KCl400NaHCO 33700NaCl6400NaH 2PO 4109其它D-Glucose1000Phenol Red•Na 15Sodium Pyruvate110相关产品：货号名称规格6016011RPMI-1640培养基500mL 6016211α-MEM培养基500mL 6016311IMDM培养基500mL 6021021胎牛血清（南美）500mL 6021031胎牛血清（新西兰）500mLREV:C/2。
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2. DC治疗(疫苗)
DC是“Dendritic Cells”的缩 写，中文全称为“树突状细胞”
产品规格
1x250 ml 4x250 ml 20x250 ml 6x500ml 12x500 ml
Ficoll-Paque® PLUS/PREMIUM
According to cGMP
过滤
< 0.13 EU/ml
Glass bottle with metal tear-off cap
6x100 ml 6x500 ml
Histopaque®
过滤
Endotoxin tested. No values given.
Nalgene plastic bottle with screw cap
1x100 ml 6x100 ml 1x500 ml
细胞培养 干细胞相关
Poietics™ 干细胞&培养液
人脂肪源干细胞培养液 人间充质干细胞培养液 人神经祖/干细胞培养液 人造血祖/干细胞培养液
成熟DC
①不再有吞噬能力 ②表达共刺激分子(B71,B7-2) ③高表达MDC的主要特征标志为 CD1a+，CD83+，CD86 + ， HLA DR + ， MHC II，CD40 + ，CD11a + ， CD14 +
2. DC治疗(疫苗)
DC-CIK细胞治疗流程
人异基因骨髓来源间充质干细胞 GvHD和Crohn病 自体间质前体细胞产品 自体骨髓间充质干细胞 骨修复 急性心梗
脐带血造血祖细胞用于异基因造 遗传性或获得性造血 血干细胞移植 系统疾病 退行性关节炎和膝关 脐带血来源间充质干细胞 节软骨损伤 复杂性克隆氏病并发 自体脂肪来源间充质干细胞 肛瘘 儿童急性移植抗宿主 骨髓干细胞 疾病（GvHD）
CD34
CD45 CD3 CD4 CD14 …
造血干细胞 (HSC)
Gal-C+
神经干细胞 (NSC)
NSE+
Neural Stem Cell
GFAP+
iPS(Induced Pluripotent Stem cells,诱导多能干细胞)
胚胎干细胞 优点
体外无限扩增/保持未分化状态 发育全能性 具有种系传递能力 易于基因改造
细胞技术的临床应用
实例1
外周动脉病患者 下肢动脉粥样性闭塞
静脉剥离：静脉作为自体血管细胞的来源
局麻后从患 者手臂处剥 离一块静脉
实例1
细胞分离 MultiGeneAngio 培养
回输
实例2
Brainstorm-Cell 技术
BrainStorm Cell Therapeutics (OTC-OB: BCLI) 是致力于开发新型成体干细胞治疗技术的生物 科技公司，专注于神经退行性疾病，如肌萎缩 侧索硬化(ALS)、多发性硬化(MS)和帕金森病 (PD)等的治疗。 该公司独有的间充质干细胞(MSC)扩增和诱 导向神经营养因子(NTF)分泌细胞分化的技术， 以及在损伤部位或邻近部位的移植技术，使得 修复退化组织和治疗病理损伤成为可能，而不 仅仅是缓解疾病的症状。
Jurkat 人T细胞 99%
稳定转染
胚胎干细胞、ips细胞、成体干细胞的比较
胚胎干细胞 (ES) 诱导多能干细胞 (ips细胞) 成体干细胞 （eg.间充质干细胞）
来源
细胞的预先 处理
胚胎32-64个 细胞团
培养、扩增
成体细胞
诱导反祖，培养 扩增
骨髓、脐带、脂肪
分离、纯化
技术普及的 困扰
争议核心
成功细胞治疗的关键
临床医生： 合适的治疗方案
实验室： 成功的细胞培养方案和严格的质量控制
病毒 细菌 内毒素 支原体 衣原体
细胞治疗在中国的发展
细胞治疗在中国的发展
目前国内细胞治疗相关的公司估计至少有200家，主要分布在北京、 上海、广州、深圳等国内一线城市及省会城市。 •2009年细胞移植治疗技术被划归第三类医疗技术管理，细胞治疗处 于一个爆发式的增长阶段。 •2010年干细胞研究领域被列入国家“十二五规划”，这催生了一系 列新型生物技术，带动医药产业的发展，引领生物治疗经济的发展。 •2011年，十二五规划第一年，随着国家政策的逐渐明朗，一些医院 或公司陆续开展细胞治疗相关的业务。 • 2012年1月，国家出台《关于开展干细胞临床研究和应用自查自纠 工作的通知》，有关部门将依据现行法律规范，抓紧研究并提出制度 性文件草案和相关技术标准、规范，并结合自查自纠工作实际，探索 建立适合我国的干细胞临床研究和应用监管模式和长效机制。 • 2013年4月，为进一步规范干细胞临床试验研究活动，加强干细胞 临床试验研究管理，国家出台了《干细胞临床试验研究管理办法（试 行）》、《干细胞临床试验研究基地管理办法（试行）》和《干细胞 制剂质量控制和临床前研究指导原则（试行）》征求意见稿。
达科为与细胞治疗
细胞治疗专员：刘彬
目录
细胞移植（治疗）的范畴 • 干细胞治疗 • 免疫细胞治疗 细胞移植（治疗）技术在中国的发展 • 细胞移植（治疗）技术与国家政策 • 细胞移植（治疗）技术的临床应用 达科为与细胞治疗
什么是细胞治疗？
细胞治疗是移植人或动物的细胞，更换或修复受损的组织 细胞种类 干细胞 免疫细胞 成体细胞 iPS细胞
细胞来源
异体 自体
干细胞的分类
干细胞 (Stem Cell)
胚胎干细胞 (embryonic stem cell, ES)
间充质干细胞 (MSC) 造血干细胞 (HSC) 神经干细胞 (NSC) 肝脏干细胞 肌肉卫星干细胞
分 类 ( 来 源 )
成体/组织干细胞 (somatic stem cell)
皮肤表皮干细胞
肠上皮干细胞 视网膜干细胞 胰脏干细胞
胚胎干细胞 (ES)
Embryonic Stem Cell
外胚层
生殖细胞
中胚层
内胚层
乌克兰：拥有联合国卫生组织唯一许可可以做胚胎干细胞 研究和应用的国家
乌克兰胚胎干细胞移植治疗中心——世界唯一 胚胎干细胞治疗中心
1994年，EmCell 公司成立，并于同年与乌克兰国立医学大学及 基辅市政府设立世界唯一一所具大学水平专注胚胎干细胞移殖治疗 的诊所 1998 年获得美国 FDA 批出首个利用胚胎干细胞移殖治疗艾滋病 的专利 1999年，EmCell 在第 4 届国际细胞移殖年会成为唯一发表胚胎 干细胞移殖临床报告的医疗机构 目前，EmCell 已成为累积最多临床干细胞移殖病例的医院，亦 是拥有最多冷藏胚胎干细胞样本的医院
CIK培养过程中需要的因子： IL-1、IL-2、IFN-γ 、CD3mAb
CIK的制备
0d 1d 血细胞分离机分离患者外周血PBMC 加入IFN-g (1,000 U/mL) 加入CD3激发型单抗(50ng/mL) 和 IL-2 (300 U/mL), (也可加入IL-1a 100 U/mL)
BioWhittaker® 特殊&无血清培养液
TheraPEAK™ MSCGM-CD™间充质干细胞培养基，限 定化学成分 （货号： 00190632）
免疫细胞相关- X-VIVO™ 10, 15, and 20 X-vivoTM系列产品的优点 • 无血清 • 无动物来源 • 限定化学成分 • 临床治疗级
14d
每3d换液，扩瓶
收获CIK细胞
CIK的优势
1. 增殖活性高 在 培 养 的 第 15 天 数 量 就 可 以 达 到 70 多 倍 ， 其 效 应 细 胞 CD3+CD56+的比例和数量更是明显增加 ,可以达到1000多倍。
CIK的优势
2. 杀瘤活性高，而且杀瘤活性的维持不需要外源大量的IL-2的 输入来维持
缺点
取材困难 伦理问题 致瘤性
重编程
iPS(Induced Pluripotent Stem cells,诱导多能干细胞) 2006年Yamanaka 2007年
Nanog, Lin-28
Induced Pluripotent Stem Cells（iPS）
*From Dr. Junying Yu’s data ( Wisconsin, USA)
来源
自体软骨细胞
适应症
膝关节软骨缺损
国家/年份
欧洲EMA/2009.10. 美国FDA/2009.12. 澳洲TGA生产许可 /2010.07. 韩国FDA/2011.07. 美国FDA生物制品 许可/2011.11. 韩国FDA/2012.01. 韩国FDA/2012.01. 加拿大/2012.05.
只能掌握在少数 科学家手里
伦理问题
只能掌握在少数 科学家手里
癌变问题
容易掌握，易普及
安全性
肿瘤综合治疗方式
手术
放疗
肿瘤 治疗
免疫 治疗
化疗
免疫治疗与诺贝尔奖
免疫治疗
非特异性免疫治疗 – CIK细胞疗法:细胞因子介导的杀伤细胞( cytokine induced killer，CIK) – NK细胞疗法:自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）
实例2
Brainstorm-Cell 技术
1. 2. 3. 4.
采集患者的骨髓 分离间充质细胞(MSC) 扩增、诱导分化为MSC-NTF细胞 回植入损伤部位(ALS的肌肉或脊髓， PD的脑)
达科为与细胞治疗
细胞 分离