病毒载体与基因治疗
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是指将目的基因直接导入体内有关的组织器官， 使其进入相应的细胞并进行表达。 2. 间接体内疗法（ex vivo） 是指在体外将目的基因导入靶细胞，经过筛选 和增殖后将细胞回输给患者，使该基因在体内 有效地表达相应产物，以达到治疗的目的。
根据基因导入的靶细胞分为两种：
1.生殖细胞基因治疗
生殖生物学问题复杂 伦理学问题 禁止应用人体
2. 设计和制备方便 体外转录获得
3. 能直接作用于一些RNA病毒
RNA干扰技术
概念：短的双链RNA (dsRNA) 导入细胞，可以使同源mRNA 发生特异性的降解，从而阻断 相应基因的表达。
❖ 高度的序列专一性 ❖ 高效性 ❖ 易操作性
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 特异性细胞杀伤
受体介导的反义RNA转移
❖ 脱唾液酸糖蛋白（ASGP）受体介导的转移，通过化学 物质作为中间连接物，将ASGP与多聚赖氨酸（PL）共 价结合，得到ASGP-PL复合物，这种复合物可以携带 RNA，再专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别， 并被吞噬到肝细胞内发挥作用。
反义RNA应用前景
1. 安全性高 不改变基因结构，最终在细胞内被降解。
筛选等。
逆转录病毒载体的特点
1. env编码的糖蛋白结合细胞膜上的特异性受 体，基因转移效率更高；
2. 结构基因gag、env、pol的缺失不影响其他 部分的活性；
3. 整合到靶细胞基因组，可长期表达； 4. 包装好的假病毒颗粒分泌至包装细胞的培养
上清中，易于分离制备。
问题
1. 靶细胞DNA合成必须很活跃，因为病毒感 染和整合作用均依赖靶细胞DNA的复制；
3. 基因增强（gene augmentation）
成熟的策略
是指不去除异常基因，将有功能的正常 基因导入病变细胞或其它细胞后发生非 定点整合，表达正常产物以补偿缺陷基 因的功能，或使原有的功能得以加强。
4. 基因干预（gene interference）
是采用特定的方法，导入外源基因选择性地 阻断、干扰、抑制和封闭有害基因在DNA、 RNA和蛋白质水平的表达及其生物合成。
2. 安全性问题 随机整合：诱发插入突变，激活癌基因 缺陷型逆转录病毒通过重组获得复制能力
腺病毒载体
1. 基因组：双链无包膜DNA病毒，36kb 2. 通过受体介导内吞作用进入细胞，基因导入效率高。 3. 不整合宿主基因组，安全。 4. 宿主细胞范围广泛。 5. 可口服、喷雾吸入或气管内滴注。 6. 载体容量大。 7. 体外容易培养制备，病毒滴度较高。
常用的病毒载体及其基因转移的特点
逆转录病毒 腺病毒 腺相关病毒 单纯疱疹病毒
基因组
正链RNA 线性dsDNA
线性ssDNA dsDNA
8～11 kb
36 kb
4.7 kb
152 kb
外源基因容量 < 8 kb
2～7 kb
< 3.5 kb
30 kb
重组病毒滴度
中
高
较低
高
靶细胞状态 分裂细胞，表面 分裂细胞或 分裂细胞或 分裂细胞或
导入抑癌基因 RNA干扰（RNA interference)
抑癌基因疗法
❖ 抑癌基因：是正常细胞内正常存在 的，能抑制细胞转化和肿瘤发生的 一类基因群。
Rb基因，p53基因，MTS基因， nm23基因
反义RNA技术
反义RNA（antisense RNA）：与mRNA互 补的RNA，抑制mRNA的加工与翻译。
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 特异性细胞杀伤
2.分子化疗
(1) 自杀基因疗法： TK基因、CD基因 (2) 化疗保护性基因治疗： MDR基因 (3) 药物增敏基因治疗： 钙调素基因
(1) 自杀基因疗法
自杀基因（suicide gene)，前体药物酶转化基因 该基因表达产生的酶可催化无毒性的药物前体转变为
如将多药抗性（multiple drug resistance, MDR） 基因MDR-1导入骨髓造血干细胞，减少骨髓受 抑制的程度，以加大化疗剂量，提高化疗效果。
(3) 药物增敏基因治疗
将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
如将钙调素基因转入癌细胞，其表达产物作为 细胞内信号转导系统的重要物质，明显增强肿 瘤细胞对化疗药物的吸收量而相应减少了排出 量，使癌细胞对化疗药物的敏感性明显提高。
基因克隆 人工合成 PCR扩增
外源基因的选择原则
1. 体内少量表达就可显著改善症状； 2. 过高表达不会对机体造成危害； 3. 在抗病毒和病原体的基因治疗中，所选择的靶基因
应在病毒和病原体的生活史中起重要的作用，并且 该序列是特异的； 4. 肿瘤病人多有免疫缺陷，可选用免疫因子基因转入 人体；可采用反义技术封闭细胞内活化的癌基因或 向细胞内转入野生型抑癌基因，抑制肿瘤生长，所 针对的癌基因或抑癌基因应与该肿瘤的发生和发展 有明确的相关性。
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
抗性筛选方法： 重组载体上插入有标记基因Neo，导入受体细
胞后可使其产生对G418（Geneticin）药物的 抗性。在加入G418的培养基中进行选择性培养 时，转染NeoR基因的细胞能够存活，而未转染 的细胞则死亡；
应用标记基因作为探针进行分子杂交法筛选。
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
须有特殊受体 非分裂细胞 非分裂细胞 非分裂细胞
基因转移效率 高
高高Biblioteka 高基因整合随机整合
不整合
定点整合于 不整合
染色体19q
外源基因表达状况 短暂/稳定表达 短暂表达 稳定表达 短暂/稳定表达
安全性及其它 相对较安全 可引起炎症 无病原性 可能出现毒性反应
宿主范围广 和免疫反应
(三) 靶细胞的选择
生殖细胞: 禁止
传统治疗方法
1. 药物治疗 2. 手术治疗 3. 放射治疗 4. 理疗
新的生物治疗： 基因治疗 (gene therapy)：以重组DNA技术和
基因转移技术为基础的生物高新技术。
基因治疗
一、概念 二、种类和策略 三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
Gene therapy is a medical intervention based on modification of genetic materials in living cells.
1. 基因修正（gene correction） 指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留正 常部分。
2. 基因替代（gene replacement） 指通过同源重组（基因打靶）技术，将正常基 因定点整合到靶细胞基因组内，以原位替换致 病基因。
❖ 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进 行精确的原位修复，是最理想的治疗方式。
（二）载体的选择与构建
病毒载体：
非病毒载体：
逆转录病毒（RV)
• 脂质体法
腺病毒（AV)
• 直接注射法
腺相关病毒（AAV) • 受体介导基因转移
单纯疱疹病毒（HSV) • DNA-磷酸钙共沉淀
痘苗病毒（VV)
• 电穿孔
逆转录病毒
逆转录病毒的基因组结构
5’LTR gag pol env 3’LTR
1.免疫基因治疗
(1) 细胞因子基因治疗 IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、 INF-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF
(2) 免疫增强基因疗法 MHC I类抗原、共刺激分子
(3) 肿瘤DNA疫苗疗法 癌胚抗原（CEA）制备的肿瘤DNA疫苗
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础 的医学治疗。
概念的发展
经典概念：将具有正常功能的基因置换或增补 患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾病的目 的。
广义概念：将某种遗传物质转移至患者细胞内， 使其在体内有效表达，最终达到治疗疾病目的 的方法，均称之为基因治疗。
二、基因治疗的种类
根据基因导入的方式分为两种： 1. 直接体内疗法（in vivo）
结构基因
gag (group antigen) ：编码核心蛋白和属特异性抗原 pol (polymerase) ：编码逆转录酶 env (envelop) ：编码病毒外壳蛋白和包膜蛋白
LTR 调控序列
含增强子、启动子、转录所需起始和终止信号
逆转录病毒的生活史
逆转录病毒
宿主细胞
病毒RNA
cDNA
整合
（一）外源基因的选择与制备 （二）载体的选择与构建 （三）靶细胞的选择 （四）基因转移 （五）基因转染细胞的筛选与鉴定 （六）回输体内
（一）外源基因的选择与制备
外源基因 目的基因：
与致病基因相对应的有功能的正常基因 与致病基因无关、有治疗作用的基因
标记基因:
新霉素磷酸转移酶（Neo）基因
外源基因的获得
外源基因表达的鉴定：
采用Northern印迹杂交：检测mRNA的表达 测定其表达产物即蛋白质的含量等方法。
(六) 回输体内
方式： 静脉注射、肌注、皮下注射、滴鼻等
体外合成反义RNA，直接导入；
将特异的反义基因通过特定的表达载体（质粒、 病毒）导入细胞，转录出反义RNA发挥作用， 避免了在给药途径中易被RNase降解的缺点。
关键性问题
1. 专一性转移 如何专一的作用于病变细胞，而不影响其他正常细胞。
2. 反义RNA进入靶细胞前的降解问题
解决： 特定受体介导的反义RNA转移
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 特异性细胞杀伤
3.特异性细胞杀伤
指利用重组DNA技术将生物来源的细胞毒素基 因与一些特异受体的配体基因融合，构建融合 基因，导入高度表达该受体的肿瘤细胞，以特 异性杀伤该肿瘤细胞。
三、基因治疗的基本流程
细胞毒性物质，从而杀死肿瘤细胞； 同时通过“旁观者效应”（bystander effect）杀死邻近
未导入该基因的分裂细胞而显著扩大杀伤效应。 由于携带该基因的受体细胞本身也被杀死，所以这类
基因被称为“自杀基因”。
自杀基因
单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因
编 码 胸 苷 激 酶 （ TK ） 催 化 丙 氧 鸟 苷 （ganciclovir, GCV）成为磷酸化的核苷酸类似 物，阻断DNA的合成而使细胞死亡。 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因
2.体细胞基因治疗： 研究重点
体细胞治疗的概念
指应用人的自体、同种异体或异种（非人体） 的体细胞；
经体外操作后。 回输（或植入）人体的治疗方法。
基因治疗的策略
(一) 直接策略：
针对致病基因
(二) 间接策略：
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因修正（gene correction） 2. 基因替代（gene replacement） 3. 基因增强（gene augmentation） 4. 基因干预（gene interference）
前病毒
病毒RNA
感染其他细胞 子代病毒 出芽分泌
包装成完整的 病毒颗粒
包装蛋白
病毒载体构建
（1）去除病毒致病性结构的基因序列如逆转录病毒的 gag、pol、env基因，从结构上保证病毒的安全性。同 时产生的空白区以目的基因取而代之；
（2）保留其基因的调控序列及包装序列等； （3）插入标记基因如Neo基因以对基因转染细胞的抗性
病毒法： 主要通过携带有外源基因的病毒载体感染靶细
胞来实现基因的转移。
非病毒法： 物理方法——显微注射、电穿孔、微粒轰击及
DNA直接注射、基因枪技术等； 化学方法——磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法、
脂质体融合法等。 受体介导的内吞作用
脂质体 liposomes
脂质体介导的基因转移示意图
将 5’- 氟 胞 嘧 啶 （ 5’-FC ） 转 化 为 5’- 氟 尿 嘧 啶 （5’-FU）而发挥细胞毒性作用。
自杀基因 + 病毒载体
转染
药物前体 无毒
重组载体 Gene→酶→ ↓
药物复合物 有毒
细胞死亡
(2) 化疗保护性基因治疗
指将编码抗细胞毒性药物蛋白的基因导入人体 细胞，以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
体细胞： 淋巴细胞、造血细胞、 内皮细胞、肌肉细胞、 肝细胞、成纤维细胞 肿瘤细胞等
靶细胞的选择
可根据疾病的特点、目的基因及其转移的 方式等因素来确定。
选择的原则：
(1)便于从体内取出和回输； (2)便于在体外培养与增殖； (3)便于基因的高效转移； (4)能够持续表达目的基因。
(四) 基因转移
根据基因导入的靶细胞分为两种：
1.生殖细胞基因治疗
生殖生物学问题复杂 伦理学问题 禁止应用人体
2. 设计和制备方便 体外转录获得
3. 能直接作用于一些RNA病毒
RNA干扰技术
概念：短的双链RNA (dsRNA) 导入细胞，可以使同源mRNA 发生特异性的降解，从而阻断 相应基因的表达。
❖ 高度的序列专一性 ❖ 高效性 ❖ 易操作性
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 特异性细胞杀伤
受体介导的反义RNA转移
❖ 脱唾液酸糖蛋白（ASGP）受体介导的转移，通过化学 物质作为中间连接物，将ASGP与多聚赖氨酸（PL）共 价结合，得到ASGP-PL复合物，这种复合物可以携带 RNA，再专一性地被肝细胞表面的ASGP受体所识别， 并被吞噬到肝细胞内发挥作用。
反义RNA应用前景
1. 安全性高 不改变基因结构，最终在细胞内被降解。
筛选等。
逆转录病毒载体的特点
1. env编码的糖蛋白结合细胞膜上的特异性受 体，基因转移效率更高；
2. 结构基因gag、env、pol的缺失不影响其他 部分的活性；
3. 整合到靶细胞基因组，可长期表达； 4. 包装好的假病毒颗粒分泌至包装细胞的培养
上清中，易于分离制备。
问题
1. 靶细胞DNA合成必须很活跃，因为病毒感 染和整合作用均依赖靶细胞DNA的复制；
3. 基因增强（gene augmentation）
成熟的策略
是指不去除异常基因，将有功能的正常 基因导入病变细胞或其它细胞后发生非 定点整合，表达正常产物以补偿缺陷基 因的功能，或使原有的功能得以加强。
4. 基因干预（gene interference）
是采用特定的方法，导入外源基因选择性地 阻断、干扰、抑制和封闭有害基因在DNA、 RNA和蛋白质水平的表达及其生物合成。
2. 安全性问题 随机整合：诱发插入突变，激活癌基因 缺陷型逆转录病毒通过重组获得复制能力
腺病毒载体
1. 基因组：双链无包膜DNA病毒，36kb 2. 通过受体介导内吞作用进入细胞，基因导入效率高。 3. 不整合宿主基因组，安全。 4. 宿主细胞范围广泛。 5. 可口服、喷雾吸入或气管内滴注。 6. 载体容量大。 7. 体外容易培养制备，病毒滴度较高。
常用的病毒载体及其基因转移的特点
逆转录病毒 腺病毒 腺相关病毒 单纯疱疹病毒
基因组
正链RNA 线性dsDNA
线性ssDNA dsDNA
8～11 kb
36 kb
4.7 kb
152 kb
外源基因容量 < 8 kb
2～7 kb
< 3.5 kb
30 kb
重组病毒滴度
中
高
较低
高
靶细胞状态 分裂细胞，表面 分裂细胞或 分裂细胞或 分裂细胞或
导入抑癌基因 RNA干扰（RNA interference)
抑癌基因疗法
❖ 抑癌基因：是正常细胞内正常存在 的，能抑制细胞转化和肿瘤发生的 一类基因群。
Rb基因，p53基因，MTS基因， nm23基因
反义RNA技术
反义RNA（antisense RNA）：与mRNA互 补的RNA，抑制mRNA的加工与翻译。
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 特异性细胞杀伤
2.分子化疗
(1) 自杀基因疗法： TK基因、CD基因 (2) 化疗保护性基因治疗： MDR基因 (3) 药物增敏基因治疗： 钙调素基因
(1) 自杀基因疗法
自杀基因（suicide gene)，前体药物酶转化基因 该基因表达产生的酶可催化无毒性的药物前体转变为
如将多药抗性（multiple drug resistance, MDR） 基因MDR-1导入骨髓造血干细胞，减少骨髓受 抑制的程度，以加大化疗剂量，提高化疗效果。
(3) 药物增敏基因治疗
将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
如将钙调素基因转入癌细胞，其表达产物作为 细胞内信号转导系统的重要物质，明显增强肿 瘤细胞对化疗药物的吸收量而相应减少了排出 量，使癌细胞对化疗药物的敏感性明显提高。
基因克隆 人工合成 PCR扩增
外源基因的选择原则
1. 体内少量表达就可显著改善症状； 2. 过高表达不会对机体造成危害； 3. 在抗病毒和病原体的基因治疗中，所选择的靶基因
应在病毒和病原体的生活史中起重要的作用，并且 该序列是特异的； 4. 肿瘤病人多有免疫缺陷，可选用免疫因子基因转入 人体；可采用反义技术封闭细胞内活化的癌基因或 向细胞内转入野生型抑癌基因，抑制肿瘤生长，所 针对的癌基因或抑癌基因应与该肿瘤的发生和发展 有明确的相关性。
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
抗性筛选方法： 重组载体上插入有标记基因Neo，导入受体细
胞后可使其产生对G418（Geneticin）药物的 抗性。在加入G418的培养基中进行选择性培养 时，转染NeoR基因的细胞能够存活，而未转染 的细胞则死亡；
应用标记基因作为探针进行分子杂交法筛选。
(五) 基因转染细胞的筛选与鉴定
须有特殊受体 非分裂细胞 非分裂细胞 非分裂细胞
基因转移效率 高
高高Biblioteka 高基因整合随机整合
不整合
定点整合于 不整合
染色体19q
外源基因表达状况 短暂/稳定表达 短暂表达 稳定表达 短暂/稳定表达
安全性及其它 相对较安全 可引起炎症 无病原性 可能出现毒性反应
宿主范围广 和免疫反应
(三) 靶细胞的选择
生殖细胞: 禁止
传统治疗方法
1. 药物治疗 2. 手术治疗 3. 放射治疗 4. 理疗
新的生物治疗： 基因治疗 (gene therapy)：以重组DNA技术和
基因转移技术为基础的生物高新技术。
基因治疗
一、概念 二、种类和策略 三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
Gene therapy is a medical intervention based on modification of genetic materials in living cells.
1. 基因修正（gene correction） 指将致病基因的突变碱基加以纠正，而保留正 常部分。
2. 基因替代（gene replacement） 指通过同源重组（基因打靶）技术，将正常基 因定点整合到靶细胞基因组内，以原位替换致 病基因。
❖ 不涉及基因组整体改变的情况下对缺陷基因进 行精确的原位修复，是最理想的治疗方式。
（二）载体的选择与构建
病毒载体：
非病毒载体：
逆转录病毒（RV)
• 脂质体法
腺病毒（AV)
• 直接注射法
腺相关病毒（AAV) • 受体介导基因转移
单纯疱疹病毒（HSV) • DNA-磷酸钙共沉淀
痘苗病毒（VV)
• 电穿孔
逆转录病毒
逆转录病毒的基因组结构
5’LTR gag pol env 3’LTR
1.免疫基因治疗
(1) 细胞因子基因治疗 IL-2、IL-4、IL-1、IL-6、IL-7、IL-12、 INF-γ、TNF-α、G-CSF、GM-CSF
(2) 免疫增强基因疗法 MHC I类抗原、共刺激分子
(3) 肿瘤DNA疫苗疗法 癌胚抗原（CEA）制备的肿瘤DNA疫苗
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础 的医学治疗。
概念的发展
经典概念：将具有正常功能的基因置换或增补 患者体内的缺陷基因，从而达到治疗疾病的目 的。
广义概念：将某种遗传物质转移至患者细胞内， 使其在体内有效表达，最终达到治疗疾病目的 的方法，均称之为基因治疗。
二、基因治疗的种类
根据基因导入的方式分为两种： 1. 直接体内疗法（in vivo）
结构基因
gag (group antigen) ：编码核心蛋白和属特异性抗原 pol (polymerase) ：编码逆转录酶 env (envelop) ：编码病毒外壳蛋白和包膜蛋白
LTR 调控序列
含增强子、启动子、转录所需起始和终止信号
逆转录病毒的生活史
逆转录病毒
宿主细胞
病毒RNA
cDNA
整合
（一）外源基因的选择与制备 （二）载体的选择与构建 （三）靶细胞的选择 （四）基因转移 （五）基因转染细胞的筛选与鉴定 （六）回输体内
（一）外源基因的选择与制备
外源基因 目的基因：
与致病基因相对应的有功能的正常基因 与致病基因无关、有治疗作用的基因
标记基因:
新霉素磷酸转移酶（Neo）基因
外源基因的获得
外源基因表达的鉴定：
采用Northern印迹杂交：检测mRNA的表达 测定其表达产物即蛋白质的含量等方法。
(六) 回输体内
方式： 静脉注射、肌注、皮下注射、滴鼻等
体外合成反义RNA，直接导入；
将特异的反义基因通过特定的表达载体（质粒、 病毒）导入细胞，转录出反义RNA发挥作用， 避免了在给药途径中易被RNase降解的缺点。
关键性问题
1. 专一性转移 如何专一的作用于病变细胞，而不影响其他正常细胞。
2. 反义RNA进入靶细胞前的降解问题
解决： 特定受体介导的反义RNA转移
(二) 间接策略
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
1. 免疫基因治疗 2. 分子化疗 3. 特异性细胞杀伤
3.特异性细胞杀伤
指利用重组DNA技术将生物来源的细胞毒素基 因与一些特异受体的配体基因融合，构建融合 基因，导入高度表达该受体的肿瘤细胞，以特 异性杀伤该肿瘤细胞。
三、基因治疗的基本流程
细胞毒性物质，从而杀死肿瘤细胞； 同时通过“旁观者效应”（bystander effect）杀死邻近
未导入该基因的分裂细胞而显著扩大杀伤效应。 由于携带该基因的受体细胞本身也被杀死，所以这类
基因被称为“自杀基因”。
自杀基因
单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）基因
编 码 胸 苷 激 酶 （ TK ） 催 化 丙 氧 鸟 苷 （ganciclovir, GCV）成为磷酸化的核苷酸类似 物，阻断DNA的合成而使细胞死亡。 大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）基因
2.体细胞基因治疗： 研究重点
体细胞治疗的概念
指应用人的自体、同种异体或异种（非人体） 的体细胞；
经体外操作后。 回输（或植入）人体的治疗方法。
基因治疗的策略
(一) 直接策略：
针对致病基因
(二) 间接策略：
导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因修正（gene correction） 2. 基因替代（gene replacement） 3. 基因增强（gene augmentation） 4. 基因干预（gene interference）
前病毒
病毒RNA
感染其他细胞 子代病毒 出芽分泌
包装成完整的 病毒颗粒
包装蛋白
病毒载体构建
（1）去除病毒致病性结构的基因序列如逆转录病毒的 gag、pol、env基因，从结构上保证病毒的安全性。同 时产生的空白区以目的基因取而代之；
（2）保留其基因的调控序列及包装序列等； （3）插入标记基因如Neo基因以对基因转染细胞的抗性
病毒法： 主要通过携带有外源基因的病毒载体感染靶细
胞来实现基因的转移。
非病毒法： 物理方法——显微注射、电穿孔、微粒轰击及
DNA直接注射、基因枪技术等； 化学方法——磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法、
脂质体融合法等。 受体介导的内吞作用
脂质体 liposomes
脂质体介导的基因转移示意图
将 5’- 氟 胞 嘧 啶 （ 5’-FC ） 转 化 为 5’- 氟 尿 嘧 啶 （5’-FU）而发挥细胞毒性作用。
自杀基因 + 病毒载体
转染
药物前体 无毒
重组载体 Gene→酶→ ↓
药物复合物 有毒
细胞死亡
(2) 化疗保护性基因治疗
指将编码抗细胞毒性药物蛋白的基因导入人体 细胞，以提高机体耐受肿瘤化疗药物的能力。
体细胞： 淋巴细胞、造血细胞、 内皮细胞、肌肉细胞、 肝细胞、成纤维细胞 肿瘤细胞等
靶细胞的选择
可根据疾病的特点、目的基因及其转移的 方式等因素来确定。
选择的原则：
(1)便于从体内取出和回输； (2)便于在体外培养与增殖； (3)便于基因的高效转移； (4)能够持续表达目的基因。
(四) 基因转移