章抗原抗体反应
绪论思考题
思考题绪论1. 免疫应答主要分为哪几个阶段?2.中枢免疫器官对免疫细胞的发育起什么作用?3.外周免疫器官主要由哪些组织与器官组成?在免疫应答中发挥什么作用?淋巴细胞、B淋巴细胞与NK细胞的主要功能分别是什么?5.补体系统的主要激活途径有何不同6.免疫辅助细胞在特异性免疫应答中发挥什么作用?7.7.临床免疫学主要的研究方向是什么?8.8.免疫学检验可分为几个部分?9.9.临床免疫学及免疫检验在移植免疫、肿瘤免疫中的意义。
10.10.现代免疫学技术包括了哪些方法?第二章抗原抗体反应1.什么是抗原抗体反应?抗原抗体反应的原理是什么?2.抗原抗体的结合力有哪些?3.抗原抗体反应有哪些特点?4.如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应?5.什么是抗原抗体反应的可逆性?有何应用?6.如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力?7.抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例?8.抗原抗体反应有哪些影响因素?9.基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些?10.什么是标记免疫技术?标记免疫技术有哪些类型?第三章免疫原和抗血清的制备1.什么是免疫原?2.如何制备可溶性抗原?3.常用的细胞破碎方法有哪些?4.连接半抗原的载体有哪些?制备半抗原性免疫原的方法有哪些?5.纯化抗原的鉴定包括有哪些内容?6.什么是免疫佐剂?免疫佐剂有哪些种类?免疫佐剂的作用机制有哪些?7.什么是抗血清?什么是多克隆抗体?8.如何制备抗血清?9.动物采血有哪些方法?10.抗血清的鉴定包括哪些内容?第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备1.杂交瘤技术是如何问世的?其基本原理是什么?2.什么是单克隆抗体?其特性和局限性如何?与多克隆抗体有何异同?3.杂交瘤细胞的克隆方法有哪些?4.细胞株冻融的原则是什么?5.大量制备单克隆抗体的方法有哪些,各有哪些优缺点?6.单克隆抗体的性质鉴定的方法有哪些?7.叙述单克隆抗体的制备流程和应用。
8.叙述基因工程抗体的概念和优点。
临床免疫学抗原抗体反应
第二章抗原抗体反应本章考点1概.述2抗.原抗体反应原理3抗.原抗体反应的特点4抗.原抗体反应的影响因素5抗.原抗体反应的类型第一节抗原抗体反应原理抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性。
这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。
除两者分子构型高度互补外,抗原表位和抗体超变区必须密切接触,才有足够的结合力。
抗原抗体反应可分为两个阶段:第一阶段为抗原与抗体发生特异性结合的阶段,此阶段反应快,仅需几秒至几分钟,但不出现可见反应;第二阶段为可见反应阶段,这一阶段抗原抗体复合物在适当温度、电解质和补体影响下,出现沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合介导的肉眼可见的反应,此阶段反应慢,往往需要数分钟至数小时。
在血清学反应中,以上两阶段往往不能严格分开,往往受反应条件(如温度、电解质、抗原抗体比例等)的影响。
(一)抗原抗体结合力抗原抗体是一种非共价的结合,不形成共价键,需要四种分子间引力参与。
1静.电引力:又称库伦引力。
是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力,这种吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。
两个电荷距离越近,静电引力越大;2范.德华引力:这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力,是抗原、抗体两个大分子外层轨道上电子相互作用时,两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。
这种引力的能量小于静电引力;3氢.键结合力:是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。
其结合力较强于范德华引力;4疏.水作用力:水溶液中两个疏水基团相互接触,由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。
当抗原表位和抗体超变区靠近时,相互间正负极性消失,周围亲水层也立即失去,从而排斥两者间的水分子,使抗原抗体进一步吸引和结合。
疏水作用力是这些结合力中最强的,因而对维系抗原抗体结合作用最大。
图10抗原与抗体的结合力(二)抗原抗体的亲和性和亲和力亲和性指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在的引力,它是抗原抗体间固有的结合力。
抗原抗体反应
第二节 抗原抗体反应的特点
1.特异性 2.比例性 3.可逆性 4.阶段性
一、 特异性(specificity)
1、概念:一种抗原分子通常只能与其刺激机体后
产生的抗体结合,这种抗原与抗体结合 反应的专一性称为特异性。
特 异 性 示 意 图
2、决定因素: 由抗原决定簇和抗体分子超变区之间
空间结构的互补性决定的。
Avidity
• The overall strength of binding between an Ag with many determinants and multivalent Abs
Keq =
104
Affinity
106 Avidity
1010 Avidity
二、抗原抗体的结合力
不形成牢固的共价键,通过非共价键结合 这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力
3、根据所形成的沉淀物及抗原抗体比例 关系绘制反应曲线。
看书上76表7-1
5、一组概念
最适比(optimal ratio):是指形成沉淀物最多, 上清液清晰,几乎无游离抗原或抗体的抗原抗体 浓度比。 等价带(equivalencezone):形成沉淀物最多的 抗原与抗体分子比例合适的范围。 带现象:在等价带前后,由于抗体和抗原过量, 形成的沉淀物少,上清液中可测出游离的抗体或 抗原的现象。 带现象包括 前带(prozone)抗体过量时称为。
1、概念:是指抗原与相应抗体结合成复合物后,在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特 性称为抗原抗体结合的可逆性。
2、原因:抗原抗体的结合是分子表面的非共价键 结合,因此形成的复合物不牢固。
3、抗原抗体反应动态平衡式如下:
4、决定抗原抗体解离的因素
第三章抗原
交叉反应可用于临床感染的诊断 ,如立克次氏体感染时, 可用变形杆菌抗原代替立克次氏体抗原检测体内相应的抗体。
第五节 抗原的类型
一、根据抗原颗粒大小和溶解性分类
1、颗粒性抗原
包括细菌、支原体、立克次氏体、衣原体、红 细胞等,它们相对颗粒较大,在水溶液中很难形成亲 水胶体,当与相应抗体发生特异性结合后可出现凝集 反应(如红细胞凝集试验)。
3、超抗原
一般的多肽抗原,正常时最多仅能激活1 万个细胞中的一个T细胞,而超抗原能同时激 活大量的T细胞,可使5个T细胞中的1个激活, 因此称这种能与多数T细胞结合并使之活化的 抗原为超抗原,以表示其作用强大。是由细菌 外毒素和逆转录病毒蛋白构成的抗原性物质。
超抗原与普通抗原的不同是:
(1)超抗原不需抗原递呈细 胞加工处理。 (2)可直接与抗原递呈细胞 的MHC-Ⅱ类分子结合,结合 部位不在抗原的结合槽沟中, 而是在MHC-Ⅱ类分子的非多 态区外侧,故无MHC限制性。
抗原结合价是指抗原分子表面能与抗体结合的 决定簇总数。
三、抗原决定簇的类型
第四节 抗原的交叉性
一、交叉抗原
不同抗原物质之间除了具有本身的特异性抗原 决定簇之外,还可能存在着共同的抗原决定簇。如果 两种不同的抗原之间存在相同的抗原决定簇,则将带 有相同抗原决定簇的抗原称为交叉抗原或共同抗原。
二、交叉反应
孕妇(Rh-)
胎儿(Rh+)
抗Rh抗体 + 新生儿 (Rh+)
溶血反应
3、自身组织
正常情况下,自身组织对机体无免疫原性,但若 自身组织的结构发生改变,或胚胎期淋巴细胞从未接 触过的正常自身组织,出生后淋巴细胞一旦与之接触, 也视为“非己”,而具有免疫原性。
第二章抗原抗体反应
检测荧光现象
放射免疫技术
检测放射性
酶标免疫技术
检测酶底物显色
发光免疫技术 测定发光强度
生物素-亲合素技术 结合其它标记技术
金标免疫技术
检测金颗粒沉淀
表
敏感度
+,++++ + ++ + ++ +++ +++ +++
++ +++ + ++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
思考题
二、环境条件: *电解质:0.85%NaCl *酸碱度:pH6~9 *温度:15~40℃
*酸凝集:当pH为3 左右时,接近细菌 Ag的等电点,可出 现非特异性凝集。
抗原-抗体反应受多种因素影响
• 1. 电解质:抗原-抗体反应通常应用 0.85%的氯化钠作为 稀 释液 ,以供给适 应浓度的电解质。
• 2 .温度:一般反应在22 ℃室温, 37℃水 浴 或孵育箱中进行,4 ℃过夜。
* 亲合力(avidity) 是指反应系统中复杂抗 原与相应抗体之间的总体结合能力。
• 亲合力与亲和力、抗体的结合价和抗原的有 效决定簇数目相关。
亲和常数
抗体与抗原结合是可逆的反应,在平衡时其
亲和常数K= 抗原抗体复合物浓度 游离抗原浓度游离抗体浓度
• K值大的抗体与抗原牢固结合,不易 解离,说明该抗体有高亲和力。
抗原核抗体反应产生的变化
抗原核抗体反应产生的变化
抗原核抗体(ANA)是一种自身免疫性疾病的标志物,它们通常
与系统性红斑狼疮(SLE)和其他结缔组织疾病相关联。
抗原核抗体
反应的变化可以在多个方面进行讨论,包括在疾病发展的不同阶段、治疗过程中以及与其他因素的关联等。
首先,在疾病发展的不同阶段,抗原核抗体反应可能会发生变化。
在SLE等自身免疫性疾病的早期阶段,抗原核抗体可能会逐渐
增加,反映了免疫系统对自身抗原的异常应答。
随着疾病的进展,
抗原核抗体水平可能会波动或持续升高,这可能与炎症活动、器官
损害程度以及治疗效果等因素有关。
其次,在治疗过程中,抗原核抗体反应也可能会发生变化。
一
些药物治疗可能会影响抗原核抗体的水平,例如氢氯喹和糖皮质激
素可能会减少抗原核抗体水平,而其他药物可能会导致抗原核抗体
水平升高。
因此,在治疗过程中监测抗原核抗体的变化对评估治疗
效果和疾病活动至关重要。
此外,抗原核抗体反应的变化还可能与其他因素相关联,例如
遗传因素、环境因素和个体免疫状态等。
一些研究表明,特定基因
型可能与抗原核抗体阳性相关,而环境因素如吸烟、感染和药物暴露也可能影响抗原核抗体的产生。
总之,抗原核抗体反应的变化是一个复杂的过程,受多种因素影响。
了解这些变化对于理解自身免疫性疾病的发病机制、制定个性化治疗方案以及预后评估都具有重要意义。
因此,对抗原核抗体反应的变化进行全面而深入的研究具有重要的临床意义。
人卫临床免疫学检验技术
第二章抗原抗体反应作业1.抗原抗体结合力中作用最大的是A.静电引力B.范德华引力C. 氢键结合力D.疏水作用力E. 分子间结合力【答案】:D2.用已知抗原或抗体来检测相对应的抗体或抗原,是由于抗原抗体反应具有A. 特异性B.比例性C.C .可逆性D. 亲和性E.带现象【答案】:A3.由于抗体过量导致抗原抗体结合物减少的现象为A. 前带B. 后带C. 带现象D. 等价带E. 等电点【答案】:A4.一般抗原抗体反应的最适温度为A. 4℃B. 25℃C.C .37℃D. 56℃E. 45℃【答案】:C5.抗原的特异性取决于A. 抗原的化学组成B. 抗原结构的复杂性C. 抗原表位的数量D. 抗原决定簇的性质及空间构型E. 抗原分子量的大小【答案】:D第三章抗原的制备作业1.以下抗原中哪一种属于颗粒性抗原A. 各种蛋白质B. 各种细胞C. 细菌毒素D.核酸E.免疫球蛋白片段【答案】:B2.根据抗原分子大小进行纯化分离的方法为A. 盐析沉淀法B. 有机溶剂沉淀法C. 凝胶过滤D. 离子交换层析E. 亲和层析【答案】:C3.根据抗原分子所带电荷不同进行纯化分离的方法为A.盐析沉淀法B.有机溶剂沉淀法C.凝胶过滤D.离子交换层析E. 亲和层析【答案】:D4.颗粒性抗原中细胞抗原一般情况经如何处理即可使用A.100℃加温2-2.5小时B.用0.3%-0.5%甲醛处理C.经生理盐水或其他溶液洗净配置成一定浓度D.使用表面活性剂进行处理E.灭菌后加0.5%-1.0%L氯化钙溶液【答案】:C5.制备鞭毛抗原选择A.100℃加温2-2.5小时B.用0.3%-0.5%甲醛处理C. 56℃加热30minD.-20℃反复冻融E. 灭菌后加0.5%-1.0%L氯化钙溶液【答案】:B6.实验室中抗血清制备后,抗体特异性鉴定最常采用的方法是A.单向免疫扩散B.双向免疫扩散C.亲和层析D.免疫吸附法E.免疫电泳【答案】:B第四章抗体的制备作业1.单克隆抗体是指A.单个骨髓瘤细胞增殖产生抗体B.单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体C.单个浆细胞产生的抗体D.单个抗体通过克隆化产生大量抗体【答案】:B2.下面哪些是天然佐剂A.弗氏完全佐剂B.弗氏不完全佐剂C.多聚核苷酸D.百日咳鲍特菌E.外毒素【答案】:D3.单克隆抗体和血清抗体相比,其优越性在于A.单克隆抗体能制成“生物导弹”B.单克隆抗体能够在体外制备C.单克隆抗体比血清抗体的特异性强,免疫活性高D.单克隆抗体制备过程简单【答案】:C4.抗血清保存3-5年选择A.4℃B.半量甘油C.加叠氮钠D.-20-40℃E.真空冷冻干燥【答案】:D5.制备抗血清时,若免疫原不容易获得,可选择下列何种免疫途径A.腹腔注射B.静脉注射C.肌肉注射D.淋巴结内微量注射法E.皮下注射【答案】:D6.单克隆抗体纯化法目前最有效的方法是A.盐析法B.凝胶过滤法C.离子交换法D.辛酸提取法E.亲和纯化法【答案】:E7.单克隆抗体与多克隆抗体主要的区别之一是A.只与相应的一个抗原决定簇结合B.与抗原结合牢固C.生物活性多样D.对热稳定E.可用固相放射免疫测定含量【答案】:A8.液氮保存和复苏细胞的基本原则A.快冻快溶B.慢冻快溶C.慢冻慢溶D.快冻慢溶E.自然溶冻【答案】:B9.佐剂的功能不包括A.作用于T细胞抗原受体B.激活抗原提呈细胞C.延长抗原的体内滞留时间D.改变免疫应答的类型E.增强免疫应答【答案】:A第五章免疫凝集试验作业1.颗粒性抗原在适当电解质参与下与相应抗体结合出现凝集称为()。
第一章抗原抗体反应讲解学习
三、亲水胶体转化为疏水胶体
抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的 血清学反应条件下均带有负电荷,使极化 的水分子在其周围形成水化层,成为亲水 胶体,因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。 当Ag与Ab结合后,表面电荷减少,水化层 变薄;而且由于Ag-Ab复合物形成后,与水 接触的表面积减少,由亲水胶体转化为疏 水胶体。此时在电解质(如NaCl)的作用下, 使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀,形 成可见的Ag-Ab复合物。
抗原抗体结合力示意图
l. 静电引力
➢ 抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧 基基团之间相互的引力,称为静电引力, 又称库伦引力。
➢例如,抗体分子上带电荷的碱性氨基酸的 游离氨基(-NH3+)和酸性氨基酸的游离羧基 (-COO-)可与抗原分子上带相反电荷的对应 基团相互吸引。这种引力的大小与两个相 互作用基团间的距离平方成反比。
2.范德华引力
➢ 抗原和抗体相互接近时,由于分子的极 化作用而出现的引力,称范德华引力。
➢结合力的大小与两个相互作用基团的极化 程度的乘积成正比、与它们之间距离的 7 次方成反比,键能约为4.2-12.5kJ/moL。 这种引力的能量小于静电引力。
3.氢键结合力
➢ 供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引 力。在抗原抗体反应中,羧基、氨基和 羟基是主要供氢体,而羧基氧、羧基碳 和肽键氧等原子是主要受氢体。
➢氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离 的6次方成反比,键能约20.9kJ/mol。
4.疏水作用力
➢ 两个疏水基团在水溶液中相互接触时,由 于对水分子排斥而趋向聚集的力称为疏水 作用力,或称为疏水键。
➢当抗原抗体反应时,抗原决定簇与抗体上 的结合点靠近,互相间正、负极性消失, 由静电作用形成的亲水层立即失去,从而 促进抗原与抗体的相互吸引而结合。疏水 作用力在抗原抗体反应中的结合是很重要 的。提供的作用力最大,约占总结合力的 50%。
第2章抗体与抗原
三、抗原决定簇
1. 概念 抗原分子并非所有的基团都作用一致,决定其免疫活性 的只是其中的一小部分抗原区域。抗原分子表面具有特殊立体 构 型 和 免 疫 活 性 的 化 学 基 团 称 为 抗 原 决 定 簇 (antigenic determinant)或抗原决定基。由于抗原决定簇通常位于抗原分子 表面,因而又称为抗原表位(epitope) 。抗原决定簇决定抗原的 特异性。
免疫原性(immunogenicity) (抗原作用)指能刺激机体 产生抗体和致敏淋巴细胞的特性。
反应原性(reactinogenicity) (抗原反应)指抗原与相应 的抗体或致敏淋巴细胞发生反应的特性,此特性又称 为免疫反应性(immunoreactivity)。
2. 完全抗原与半抗原
抗原又分为完全抗原与不完全抗原。 既具有免疫原性又有反应原性的物质称为完全抗原
自身抗原 动物自身的组织通常情况下不具有免疫原性。
2. 大分子 抗原的免疫原性与其分子大小有直接关系。免疫原性良好的物质分 子量一般都在10000以上 ,在一定条件下,分子量越大,免疫原性越强。分 子量小于5000其免疫原性较弱。分子量在l 000以下的物质为半抗原,没有免 疫原性。但与蛋白质载体结合后可获得免疫原性。
3. 分子结构 相同大小的分子如果化学组成、分子结构和空间构象不同,其免 疫原性也有一定的差异。一般讲,分子结构和空间构型越复杂,免疫原性越 好。芳香环结构比直链结构强。
4. 物理性 颗粒性抗原的免疫原性通常比可溶性抗原强。可溶性抗原分子聚 合后或吸附在颗粒表面可增强其免疫原性。例如将甲状腺蛋白与聚丙烯酰 胺颗粒结合后免疫家兔可使IgM的效价提高20倍。免疫原性弱的蛋白质如 果吸附在氢氧化铝胶、脂质体等大分子颗粒上可增强其免疫原性。 5. 完整性 所以抗原物质通常要通过非消化道途径以完整分子状态进入体 内,才能保持抗原性。
临床免疫学检验技术考试题库及答案(三)
临床免疫学检验技术考试题库及答案1. 免疫监视功能低下时易发生()。
A.自身免疫病B.超敏反应C.肿瘤D.免疫缺陷病E.移植排斥反应答案C解析免疫系统的功能之一是对自身偶尔产生的有癌变倾向的细胞进行清除,此即免疫监视功能,免疫监视功能低下时易发生肿瘤。
2. 免疫自稳功能异常可发生()。
A.病毒持续感染B.肿瘤C.超敏反应D.自身免疫病E.免疫缺陷病答案D解析免疫系统的功能之一是对自身衰老的组织细胞进行清除,此即免疫自稳功能,免疫自稳功能异常可发生自身免疫病。
3. 既具有抗原加工提呈作用又具有杀菌作用的细胞是()。
A.树突状细胞B.巨噬细胞C.中性粒细胞D. B细胞E. T细胞答案B解析树突状细胞、巨噬细胞和B细胞都有抗原加工提呈作用,但只有巨噬细胞兼有吞噬杀菌作用。
4. 免疫应答过程不包括()。
A. T细胞在胸腺内分化成熟B. B细胞对抗原的特异性识别C.巨噬细胞对抗原的处理和提呈D. T细胞和B细胞的活化、增殖和分化E.效应细胞和效应分子的产生和作用答案A解析免疫应答过程指免疫系统针对抗原的反应过程,不包括免疫细胞的发育过程。
5. 关于外周免疫器官的叙述,不正确的是()。
A.包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织B.发生发育的时间晚于中枢免疫器官C.是免疫应答发生的场所D.是免疫细胞发生和成熟的场所E.是所有淋巴细胞定居的场所答案D解析免疫细胞发生和成熟的场所在中枢免疫器官,故D项不正确。
5. 在正常血清中,含量最高的补体成分是()。
A. C1B. C3C. C4D. C5E. C4Bp答案B解析在正常血清中含量最高的补体成分是C3。
7. 细胞因子不包括()。
A.单核因子B.淋巴因子C.生长因子D.抗体E.集落刺激因子答案D解析细胞因子是生物活性的小分子多肽,抗体不是。
8. 体内抗病毒、抗毒素、抗细菌最重要的抗体为()。
A. IgMB. IgAC. IgGD. IgEE. IgD答案C解析IgG是体内抗感染的最主要的抗体。
(整理)myxjylx0201.
第二章抗原抗体反应一、A11、传染性单核细胞增多症患者用嗜异性凝集来鉴别吸收试验结果正确的是()。
A.血清中绵羊红细胞凝集素不被(或不完全被)Forssman抗原吸收可被牛红细胞吸收B.血清中绵羊红细胞凝集素不被(或不完全被)Forssman抗原吸收,可被马红细胞吸收C.血清中绵羊红细胞凝集可被Forssman抗原吸收,也可被牛红细胞吸收D.血清中绵羊红细胞凝集素可被Forssman抗原吸收,不被牛红细胞吸收E.血清中绵羊红细胞凝集素被(或不完全被)Forssman抗原吸收,亦可被马红细胞吸收2、抗原抗体比例不适合出现的沉淀现象称为()。
A.等价带B.带现象C.前带D.后带E.中带3、甲、乙两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应,这两种抗原相互称为()。
A.半抗原B.完全抗原C.TD-AgD.TI-AgE.共同抗原4、凡具有强免疫原性的物质,一般的分子量应是()。
A.≥10000B.<1000C.<5000D.1000000E.1000005、容易引起免疫耐受性的抗原注射途径为()。
A.静脉>皮下>肌内>腹腔B.静脉>腹腔>皮下>肌内C.腹腔>静脉>皮下>肌内D.皮下>肌内>腹腔>静脉E.腹腔>皮下>肌内>静脉6、抗原的反应原性是指()。
A.抗原对机体的反应性的特性B.抗原与机体发生特异性反应的特性C.抗原与相应的应答产物发生特异性反应的特性D.抗原与载体发生特异性反应的特性E.抗原引起自身反应淋巴细胞活化的特性7、下列不是凝集反应试验的是()。
A.直接凝集试验B.间接凝集试验C.凝集抑制试验D.协同凝集试验E.毒素中和试验8、对人类而言属于异嗜性抗原的物质是()。
A.人抗白喉外毒素血清B.BSAC.破伤风抗毒素D.ABO血型抗原E.大肠杆菌O149、决定免疫反应特异性的物质基础是()。
A.载体B.佐剂C.抗原决定簇D.TI-AgE.TD-Ag10、下列物质中抗原性最强的是()。
A.核酸B.蛋白质C.多糖D.半抗原E.类脂11、不同抗原与抗体结合发生交叉反应的原因是()。
免疫学及免疫学检验学题库答案
一、名词解释第1章概论1.免疫学:2.免疫分子:3.补体:4.临床免疫学:第2章抗原抗体反应5.抗原抗体反应:6.抗原抗体反应特异性7.可逆性8.比例性9.抗原抗体反应的等价带zoneofequivalence10.最适比optimalratio11.带现象zonephenomenon第3章免疫原和抗血清的制备12.免疫原immunogen13.半抗原14.免疫佐剂15.多克隆抗体polyclonal antibody, pcAb第5章凝集反应16.凝集反应17.直接凝集反应18.间接凝集反应19.明胶凝集试验第6章沉淀反应20.沉淀反应21.絮状沉淀试验22.免疫浊度测定23.凝胶内沉淀试验24.单项扩散试验25.双向扩散试验26.免疫电泳技术27.对流免疫电泳28.火箭免疫电泳29.免疫电泳30.免疫固定电泳第19章补体检测及应用31.补体32.免疫溶血法33.补体结合试验第22章感染性疾病与感染免疫检测34.感染第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应36.Ⅰ型超敏反应37.Ⅱ型超敏反应38.Ⅲ型超敏反应39.Ⅳ型超敏反应第24章自身免疫性疾病及其免疫检测40.自身耐受41.自身免疫42.自身免疫病43.自身抗体44.抗核抗体第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测45.免疫增殖性疾病46.免疫球蛋白增殖病47.本周蛋白48.血清区带电泳49.免疫电泳50.免疫固定电泳第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病52.获得性免疫缺陷综合征第27章肿瘤免疫与免疫学检验53.肿瘤免疫学54.肿瘤抗原55.肿瘤标志物第28章移植免疫及其免疫检测56.移植57.主要组织相容性复合体58.移植排斥反应59.移植物抗宿主反应GVHR60.血清学分型法二、填空题;第1章概论1.推动现代生命科学前进的三架战车:分子生物学、免疫学、细胞生物学;2.免疫学的发展历史可分为三个时期:经验时期、免疫学科形成时期、现代免疫学时期;3.为保持机体内环境稳定,免疫系统的三大生理功能分别是:免疫防御、免疫自稳、免疫监视;4.免疫应答的过程主要分为:识别阶段、活化阶段、效应阶段5.免疫系统的组成包括三部分,分别是:免疫器官、免疫细胞、免疫分子;6.补体的三条激活途径分别是:经典途径、甘露糖结合凝集素途径、旁路途径;第2章抗原抗体反应7.在抗原抗体反应中,主要的结合力有:静电引力、范德华力、氢键、疏水作用力;8.在抗原抗体反应中,主要的特点有:特异性、可逆性、比例性、阶段性;第3章免疫原和抗血清的制备9.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备过程中,常用的方法有:反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法任写出二种均可得分;10.在免疫原和抗血清的制备过程中,可溶性抗原的纯化方法:超速离心法、选择性沉淀法、凝胶过滤法、离子交换层析法、亲和层析法等任写出二种均可得分;11.在免疫原和抗血清的制备过程中,纯化抗原的鉴定的内容主要有:蛋白含量测定、分子量测定、纯度鉴定、免疫活性鉴定;12.在免疫原和抗血清的制备过程中,抗血清的鉴定内容有:抗体特异性的鉴定、抗体效价的鉴定、抗体纯度的鉴定、抗体亲合力的鉴定;第5章凝集反应13.在凝集反应中,间接凝集反应的类型主要有:正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应;14.抗球蛋白试验,又称Coombs试验,是检测抗红细胞不完全抗体的一种方法;第6章沉淀反应15.免疫电泳技术类型主要包括:对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳;第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.在外周血单个核细胞分离实验中,对分离介质的基本要求有:对细胞无毒、基本等渗、不溶于血浆或分离物质、有一定密度;17.在淋巴细胞分离过程中,其中的单核细胞去除方法有:贴壁黏附法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法、Percoll分层液法; 第15章免疫细胞功能检测技术18.在免疫细胞功能检测技术方面,针对T细胞功能检测方法有:T细胞增殖试验、 T细胞分泌功能测定、T细胞介导的细胞毒试验、体内试验;第19章补体检测及应用第22章感染性疾病与感染免疫检测19.目前公认的肝炎病毒至少有5种:甲型肝炎病毒HAV、乙型肝炎病毒HBV、丙型肝炎病毒HCV、丁型肝炎病毒HDV、戊型肝炎病毒HEV;20.在乙肝病毒检测的过程中,主要检测的五项指标有:HBsAg、抗HBs、抗HBc、HBeAg、抗HBe;21.在先天性感染中,临床上将以上4种病原菌称为“TORCH”,为产前检查的重点项目,分别是:弓形体、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒;第23章超敏反应性疾病及其免疫检测22.根据免疫反应的速度和组织损伤的机制不同,将超敏反应分为四种类型,分别是:第 I 型速发型超敏反应、第II 型细胞毒或溶细胞型超敏反应、第III型免疫复合物型超敏反应、第IV 型延缓型或迟发型超敏反应;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测23.在抗核抗体ANA检测方法中,常见的ANA荧光图形有:周边型核膜性、均质性、斑点性、核仁型、着丝点型;第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测24.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有:多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病、轻链病、良性单克隆免疫球蛋白病;25.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有:血清区带电泳、免疫电泳、免疫固定电泳、血清免疫球蛋白定量、本周蛋白的检测;第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验26.在免疫缺陷性疾病中,常见的免疫缺陷病一般特征包括:反复感染、恶性肿瘤、伴发自身免疫病、遗传倾向、多系统病变;27.在免疫缺陷性疾病中,原发性免疫缺陷性疾病主要有:原发性B细胞缺陷病、原发性T细胞缺陷病、原发性联合免疫缺陷病、原发性吞噬细胞缺陷病、原发性补体系统缺陷病;28.在免疫缺陷性疾病中,继发性免疫缺陷性疾病主要有:继发性T细胞功能缺陷、继发性低丙球蛋白血症、继发性吞噬细胞功能缺陷、继发性补体缺陷;第27章肿瘤免疫与免疫学检验29.在常见肿瘤标志物中,胚胎抗原类肿瘤标志物主要有:甲胎蛋白、癌胚抗原;30.在常见肿瘤标志物中,酶类肿瘤标志物主要有:前列腺特异性抗原PSA 、神经元特异性烯醇化酶NSE、α-L-岩藻糖苷酶测定AFU;31.在常见肿瘤标志物中,激素类肿瘤标志物主要有:人绒毛膜促性腺激素 hCG、降钙素calcitonin, CT;32.在常见肿瘤标志物中,蛋白质类肿瘤标志物主要有:β2-微球蛋白β2M 、铁蛋白;第28章移植免疫及其免疫检测33.在移植免疫实验中,排斥反应类型主要包括四种,分别是:超急性排斥反应、急性排斥反应、慢性排斥反应、移植物抗宿主反应GVHR;34.常见的组织或器官移植有:肾脏移植、肝脏移植、心脏移植与心肺联合移植、骨髓与其他来源的干细胞移植;三、单项选择题1.免疫应答是一个复杂的连续过程,依次分为哪几个阶段AA. 识别阶段、活化阶段、效应阶段B. 效应阶段、识别阶段、活化阶段C. 活化阶段、效应阶段、识别阶段D. 活化阶段、识别阶段、效应阶段2.抗原抗体反应形成明显沉淀物的最佳条件为CA. 抗体略多于抗原B. 抗原略多于抗体C. 抗原抗体比例合适D. 抗体显着多于抗原3.用已知抗原或抗体检测相应的抗体或抗原,是根据抗原抗体反应的AA. 特异性B. 比例性C. 可逆性D. 阶段性4.弗氏不完全佐剂的组成包括 BA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗5.沉淀反应中的钩状效应是因为BA. 抗体过量B. 抗原过量C. pH浓度过高D. pH浓度过低6.细胞活力测定常用的简便方法是BA. 伊红染色B. 台盼蓝染色C. HE染色D. 美蓝染色7.正常人外周血T淋巴细胞转化率为CA. <40%B. 40%~50%C. 60%~80%D. 80%8.在CH50试验中,溶血程度和补体含量之间的关系为 BA. 直线B. S形曲线C. 抛物线D. 正态分布曲线9.正常血清中,补体含量最高的是CA. C1B. C2C. C3D. C410.发生III型超敏反应性疾病的始动环节是 BA. 大分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜B. 中等大小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜C. 小分子免疫复合物沉积在毛细血管基底膜D. 补体激活11.用免疫荧光法检测ANA有多种核型,不正确的是DA. 周边型B. 均质型C. 斑点型或颗粒型D. 原生质型12.血清中检测到M蛋白不提示下列疾病DA. 多发性骨髓瘤B. 巨球蛋白血症C. 重链病或轻链病D. 肾病13.本-周蛋白的本质是BA. 尿中微球蛋白B. 尿中游离的免疫球蛋白轻链C. 尿中游离的白蛋白D. 尿中游离的管型物14.多发性骨髓瘤属于哪种细胞异常CA. T细胞B. B细胞C. 浆细胞D. 单核细胞15.血清中免疫球蛋白含量缺乏,一般应考虑何种病 CA. 轻链病B. 重链病C. 免疫缺陷病D. 免疫增殖病16.切除胸腺的新生动物的淋巴结中缺乏何种细胞 BA. B淋巴细胞B. T淋巴细胞C. 粒细胞D. 巨噬细胞17.沉淀反应中抗体过量的现象称为AA. 前带B. 后带C. 等价带D. 带现象18.弗氏完全佐剂的组成包括AA. 液状石蜡、羊毛脂、卡介苗B. 液状石蜡、羊毛脂C. 液状石蜡、卡介苗D. 羊毛脂、卡介苗19.直接Coombs试验检测的抗体是AA. 结合在红细胞表面的IgGB. 游离的IgGC. 结合在红细胞表面的IgMD. 游离的IgM20.单项扩散试验出现双环的沉淀线是因为DA. 两种抗原B. 两种抗体C. 抗体为多克隆抗体D. 抗原为性质相同的两个组分扩散率不同21.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下依次为CA. 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞B. 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞C. 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D. 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞22.淋巴细胞转化为淋巴母细胞后,其形态学特征为BA. 细胞大小由大变小B. 出现核仁1~4个C. 胞浆内空泡逐渐消失D. 细胞伪足消失23.溶血空斑试验用于检测下列何种细胞的功能BA. T细胞B. B细胞C. NK细胞D. 吞噬细胞24.Boyden小室常用于测定 BA. 白细胞吞噬功能B. 中性粒细胞趋化功能C. 白细胞杀伤功能D. 淋巴细胞抑制功能25.在溶血反应中检测试剂中,加入少量钙、镁离子的目的是CA. 使反应液保持等渗B. 抑制补体的活性C. 有助于补体激活D. 维持反应液的pH值26.乙型肝炎感染后最早出现的病毒标志物是AA. HBsAgB. HBeAgC. HBcAgD. 抗-HBs27.新生儿溶血症发生的条件是CA. 母亲Rh+、胎儿Rh+B. 母亲Rh+、胎儿Rh-C. 母亲Rh-、胎儿Rh+D. 母亲Rh-、胎儿Rh-28.造成系统性红斑狼疮病人免疫损伤的主要机制是 CA. I超敏反应B. II超敏反应C. III超敏反应D. IV超敏反应29.人类MHC位于第几对染色体上 CA. 第12对染色体短臂B. 第12对染色体长臂C. 第6对染色体短臂D. 第6对染色体长臂30.HLA交叉配型的目的是 BA. 检测供者血清有无抗受者HLA抗体B. 检测受者血清有无抗供者HLA抗体C. 检测供者淋巴细胞表面的HLA抗原D. 检测受者淋巴细胞表面的HLA抗原四、简答题第1章概论1.T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的主要功能分别是什么2.在临床免疫学与免疫检验中,现代免疫学检验技术包括哪些方法第2章抗原抗体反应3.抗原抗体反应有哪些影响因素4.什么是标记免疫技术标记免疫技术按检测现象可分为哪些类型第3章免疫原和抗血清的制备5.常用的细胞破碎方法有哪些6.连接半抗原的载体有哪些制备半抗原性免疫原的方法有哪些7.免疫佐剂有哪些种类其作用机制是什么8.动物采血有哪些方法9.抗血清的鉴定包括哪些内容第5章凝集反应10.什么叫直接凝集反应什么叫间接凝集反应它们之间有何不同11.叙述抗球蛋白试验的类型、特点以及临床应用第6章沉淀反应12.单向扩散试验的概念和应用13.平板法双向免疫扩散试验的概念和应用14.免疫固定电泳的概念及临床应用15.抗原性质分析出现哪三种结果现象结果解释第14章免疫细胞的分离及其表面标志检测技术16.外周血单个核细胞分离,其分离介质的基本要求是什么17.外周血单个核细胞悬液富含淋巴细胞,但又混杂有单核细胞、红细胞和血小板,请问去除单核细胞的方法有哪些第15章免疫细胞功能检测技术18.T细胞功能检测内容有哪些19.B细胞功能检测内容有哪些20.NK细胞活性测定方法有哪些21.在检测T细胞的功能时,可选择T细胞增殖试验,请回答其基本原理第19章补体检测及应用22.在补体总活性测定中,一般采用CH50测定法,请说明其基本原理;23.在单个补体成分的测定中,一般采用免疫溶血法,请简述其概念及原理;24.请简述补体结合试验的概念、实验原理及结果解释第22章感染性疾病与感染免疫检测25.请列出目前公认的肝炎病毒种类26.乙型肝炎的诊断标志物主要检测指标有哪些27.在临床中,乙肝病毒检测常见的指标俗称:两对半有哪些28.什么叫先天性感染常见的病原菌“TORCH”只要只的是哪些病毒第23章超敏反应性疾病及其免疫检测29.试比较Ⅰ~Ⅳ型超敏反应特点30.使用青霉素可能引起哪些类型超敏反应简述其发病机制; 答:青霉素临床应用时有可能引起的超敏反应类型有:I、II、III、IV型;1I 型超敏反应:指青霉素过敏性休克,其发病机制是青霉素本身并无免疫原性,其降解产物为半抗原,与体内蛋白质结合而产生免疫原性,刺激机体产生特异性IgE,使机体处于致敏状态;当机体再次使用青霉素时,可发生过敏性休克;2II 型超敏反应:指青霉素过敏性血细胞减少症,其发病机制是青霉素降解产物能与血细胞膜蛋白或血浆蛋白结合获得免疫原性,从而刺激机体产生抗体;这种抗体与和药物结合的红细胞、粒细胞和血小板作用,引起药物性溶血性贫血、粒细胞减少症和血小板减少性紫癜;3III型超敏反应:指使用大剂量青霉素等药物可引起类似血清病样的反应,其发病机制是因为患者体内已产生特异性抗体,而大剂量药物尚未完全排除,两者结合形成中等大小免疫复合物所致;4IV型超敏反应:指青霉素引起的接触性皮炎,其发病机制是青霉素小分子半抗原与体内蛋白质结合成完全抗原,使T细胞致敏;当机体再次接触青霉素时,可发生接触性皮炎;31.血清病与血清过敏性休克分属哪型超敏反应比较发病机制;第24章自身免疫性疾病及其免疫检测32.自身免疫病都具有哪些共同特性33.什么叫自身抗体,其主要特点有哪些第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测34.在免疫增殖性疾病中,常见的单克隆免疫球蛋白病有哪些35.在免疫增殖性疾病中,免疫球蛋白异常增生常用的免疫检测方法有哪些第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验36.请列出免疫缺陷病的一般特征37.原发性免疫缺陷性疾病有哪些38.继发性免疫缺陷病有哪些39.什么叫获得性免疫缺陷综合征其临床特点及典型特征是什么第27章肿瘤免疫与免疫学检验40.什么叫肿瘤抗原,其产生的可能机制有哪些41.什么叫肿瘤标志物,理想的肿瘤标志物具有哪些特性第28章移植免疫及其免疫检测42.什么叫移植排斥反应,根据排斥反应发生的时间、免疫损伤机制和组织病理改变,如何进行分类43.常见的组织或器官移植有哪些44.排斥反应的免疫监测包括哪些方面。
抗原抗体反应及应用
第七章抗原抗体反应及应用不论天然的还是人工合成的分子,只要能被机体的免疫系统识别的都可以诱导机体的免疫应答,产生相应的抗体。
大多数抗体和抗原本身是既有免疫原性(诱发产生特异抗体),又有反应原性(与特异的抗体相结合)。
抗原与抗体的特异性反应不仅可以在体内进行,而且可以在体外进行。
一切利用血清学技术方法所进行的各种测试都是基于这一根本的特性。
抗体反应技术的应用之广泛已经远远超出了免疫学、医学、甚至生命科学的范围,成为—类微量,灵敏,快速的检测分析方法。
本章着重介绍抗体制备,抗体抗原反应原理及技术方法的应用。
第一节抗体的制备环境中的大部分生物(包括病原生物)及其产物分子和一些化合物对哺乳动物的免疫系统而言是外源抗原,这些抗原能通过侵染或其他的途径刺激免疫系统,产生以抗体为主的体液免疫应答。
同样用抗原人工免疫实验动物,可以获得含有特异性抗体的血清,称为抗血清(antiserum),因血清中抗体是多个抗原决定簇刺激不同B细胞克隆而产生的抗体,所以称多克隆抗体(polyclonal antibody)。
一个B细胞克隆所分泌的抗体即为单克隆抗体。
用免疫动物的B细胞与骨髓瘤细胞融合,在体外可以分离出许多单个B细胞克隆,以此方法可制备单克隆抗体(monoclonal antibody)。
随着分子生物学技术的发展,已经可以用抗体基因文库(antibody combinatorial library)筛选制备单克隆抗体。
应用基因工程技术,根据需要对抗体进行改造,获得基因工程抗体(engineering antibody),以及催化性抗体(catalytic antibody 或abozyme)等的全新的抗体。
一、抗血清的制备1.免疫动物(1)抗原:免疫动物是制备抗血清的第—步。
免疫所用的抗原可用病毒、细菌或者其他蛋白质抗原,如果使用半抗原如小分子激素等,必须与大分子载体连接,连接剂见表7—1。
抗原的用量视抗原种类及动物而异,—次注射小鼠可以少至几个微克,免、羊甚至更大的动物每次注射的量就相应增加,从几百μg/次至几mg/次。
抗原抗体反应
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第一节 抗原抗体反应原理
抗原抗体结合反应是抗原决定簇和抗体分子 超变区之间的相互作用,是一种分子表面的特 异的可逆的弱结合力。这些弱结合力只能在极 短距离内才能发生效应。因此抗原抗体结合反 应的最重要的先决条件是抗原与抗体间的特定 部位的空间结构必须相互吻合,具有互补性;其 次,抗原决定簇与抗体超变区必须紧密接触, 才能有足够的结合力,使抗原抗体分子结合在 一起。
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概述
本章叙述的抗原抗体反应,主要是指抗原 和抗体在体外结合所表现的反应。由于抗体主 要存在于血清中,并且临床上多用血清做试验, 所以体外实验中的抗原抗体反应曾称作血清学 反应( serological reaction) 。但是随着免 疫学的发展,血清学的含义已不能概括目前的 研究内容,现在多以抗原抗体反应代替血清学 反应一词。
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2.范德华引力
抗原和抗体相互接近时,由于分子的极化作 用而出现的引力,称范德华引力。结合力的大 小与两个相互作用基团的极化程度的乘积成正 比、与它们之间距离的 7 次方成反比,键能 约为4.2---12·5kJ/mol。这种引力的能量小 于静电引力。
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3.氢键结合力
供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力。 在抗原抗体反应中,羧基、氨基和羟基是主要 供氢体,而羧基氧、羧基碳和肽键氧等原子是 主要受氢体,能的大小取决于方向即氢键具有 高度的方向性,因此范德华力更具有特异性。 氢键结合力与供氢体和受氢体之间距离的6次 方成反比,键能约20·9kJ/m的特异性结合反应称为抗 原抗体反应(antigen-antibody reaction)。 抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的 效应机制自然发生,也可在体外作为免疫学实 验的结果出现。在体内,可表现为溶菌、杀菌、 促进吞噬或中和毒素等作用,有时亦可引起免 疫病理损伤,在体外,依相应抗原物理性状 (颗粒状或可溶性)以及反应的条件 (电解质、 补体等)不同,可出现凝集、沉淀、细胞溶解 和补体结合等反应。
[医学]第七章抗原抗体反应
检(待)测系统 补体系统
指示系统
溶血
补体结合阴性反应 (-),无待测物
不溶血
补体结合阳性反应 (+),含待测物
二、 常见免疫分析方法
1、免疫分析的定义: 利用抗原抗体的特异性反应的特性对抗原或抗体进行量和 质的测定分析。
2、特点: • 特异性强 • 灵敏度高 • 反应速度快
一)免疫沉淀
1、环状沉淀反应 应用:抗原抗体的定性及定量分析。 方法:试管法,玻片法
鉴别抗原与抗体反应间的特异性如何:根据相邻孔中 不同抗原与同一抗血清反应形成的沉淀线形状的变化 判断抗原间是否存在共同的AD。 ② 定量分析: 测定抗血清效价及抗原的最佳浓度。
两孔抗原
完全融合
互不干扰 的交叉线
同一血清与不同抗原反应
向共同Ag 方向突出
定性分析
双向免疫扩散定量分析:测定抗血清效价及抗原的最佳浓度
应用: 定性与定量分析,常用于测定血清中IgG、IgM、 IgA及补体的含量。
2)双向扩散法(Ouchterlony法): 在琼脂糖凝胶平板内打两排孔,孔中分别加入抗原、抗 体,抗原、抗体分别呈辐射状向含胶内扩散,当抗原与 抗体在胶内相遇,且二者的量达一定比例时则形成可见 的沉淀线。
应用: ① 定性分析:
3)补体结合反应 : 在补体参与下,并以绵羊红细胞和溶血素(抗绵羊红细胞 的抗体)为指示系统的抗原抗体反应。
3、补体结合反应系统: ① 检(待)测系统: 待测的抗原+ 抗血清(抗体、补体) ② 指示系统: 绵羊红细胞(抗原)+ 溶血素(抗体) ③ 补体系统 豚鼠的新鲜血清
4、反应过程
红细胞+溶血素 抗原 + 抗血清 + 豚鼠新鲜血清
常用已知抗体来 检测未知抗原。 定量实验时,由 于抗原分子小, 反应面积大,且 为保证Ag与Ab 的适宜比例,有 足够的抗体参与 反应,操作上通 常是稀释抗原 (上层),而不 稀释抗体(下层) 与图示相反
常见抗原抗体反应种类
常见抗原抗体反应种类引言:抗原抗体反应是生物学研究中的重要领域,它涉及到免疫系统的功能与调节机制。
在这篇文章中,我们将介绍一些常见的抗原抗体反应种类,包括沉淀反应、凝集反应、中和反应、荧光反应和免疫组化。
一、沉淀反应沉淀反应是指当抗原与抗体结合后,形成可见的沉淀物。
这种反应通常发生在溶液中,例如在免疫沉淀试验中。
通过加入沉淀剂,如聚乙二醇,可以促使抗原和抗体结合形成沉淀物。
沉淀反应的结果可以通过肉眼观察或显微镜观察来确定。
二、凝集反应凝集反应是指抗原与抗体结合后,形成可见的凝集物。
这种反应通常发生在液体中,如血清凝集试验中。
当抗原与抗体结合后,它们会形成凝集物,这些凝集物可以通过肉眼观察或显微镜观察来确定。
凝集反应在临床诊断中具有重要的应用价值,可以用于检测特定疾病的诊断和监测。
三、中和反应中和反应是指抗体与抗原结合后,阻止抗原的活性或入侵机体。
这种反应通常发生在体内,例如针对病毒或细菌的中和抗体。
当中和抗体与病原体结合后,它们可以阻止病原体进入或感染宿主细胞。
中和反应是免疫系统中重要的防御机制,对于预防病毒感染和细菌感染具有重要意义。
四、荧光反应荧光反应是指通过使用荧光标记的抗体来检测特定抗原。
在荧光免疫分析中,荧光染料被标记在抗体上,当这些荧光标记的抗体与目标抗原结合时,可以通过荧光显微镜观察到荧光信号。
荧光反应在生物医学研究中具有广泛的应用,可以用于检测抗原的存在和定位。
五、免疫组化免疫组化是指通过使用特异性抗体来检测组织中的特定分子。
在免疫组化实验中,组织样本被固定和切片,然后与特异性抗体结合。
通过使用染色剂或荧光标记的二抗来检测抗原-抗体结合,可以观察到抗原在组织中的位置和表达水平。
免疫组化广泛应用于疾病诊断和医学研究领域。
结论:抗原抗体反应是免疫系统中重要的功能机制,涉及到多种反应类型。
沉淀反应、凝集反应、中和反应、荧光反应和免疫组化是常见的抗原抗体反应种类。
这些反应不仅在基础科学研究中有重要应用,也在临床诊断和医学研究中具有广泛的应用前景。
临床上常见的抗原抗体反应检测项目
《临床上常见的抗原抗体反应检测项目》一、引言在临床诊断和治疗中,抗原抗体反应检测项目是非常重要的一项内容。
它可以帮助医生诊断疾病、评估治疗效果并预测疾病进展。
本文将就临床上常见的抗原抗体反应检测项目进行全面评估并进行深入讨论,以帮助读者更加深入地了解这一重要领域。
二、临床常见的抗原抗体反应检测项目1. C-反应蛋白(CRP)检测C-反应蛋白是一种急性期蛋白,是细菌和病毒感染、组织损伤、恶性肿瘤和风湿性疾病等炎症反应的敏感指标。
CRP检测可以帮助医生判断炎症程度和指导疾病治疗。
2. 乙肝表面抗原(HBsAg)检测乙肝表面抗原检测是乙肝病毒感染的首选筛查方法。
阳性结果提示可能感染乙肝病毒,需要进一步检测确认是否患病,以及制定相应的治疗方案。
3. 艾滋病毒抗体检测艾滋病毒抗体检测是用于筛查艾滋病毒感染的一项重要检测项目。
及时发现艾滋病毒感染者,并进行隔离和治疗,可以有效控制艾滋病毒的传播。
4. 甲型流感病毒抗体检测甲型流感病毒抗体检测是用来判断病毒感染的一种检测方法。
在流感季节,可以帮助医生及时诊断患者是否感染流感病毒,以便进行针对性治疗。
5. 类风湿因子(RF)检测类风湿因子检测是风湿性疾病的重要辅助诊断指标。
对于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断具有重要价值。
三、总结与展望通过对临床上常见的抗原抗体反应检测项目的全面评估与深入探讨,我们可以更好地认识到这些检测项目的重要性和必要性。
随着医疗技术的不断进步,我们相信在未来,会有更多、更准确的抗原抗体反应检测项目出现,为临床诊断和治疗带来更大的便利和帮助。
个人观点:抗原抗体反应检测项目在临床医学中扮演着非常重要的角色,它可以帮助医生及时发现并诊断疾病,指导治疗方案的制定,对于提高患者的生存率和生活质量有着重要的意义。
我们应该更加重视这些检测项目的应用,并鼓励科研人员加大力度,不断创新和完善相关的检测技术和方法。
在本文中,我们全面介绍了临床上常见的抗原抗体反应检测项目,并进行了深度探讨,希望读者能够从中获益良多,对这一领域有更深入的了解。
免疫学课件第16章 基于抗原-抗体反应的免疫学试验技术
抗原与相应抗体的特异性结合反应称为 抗原抗体反应。
抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫 应答的效应机制自然发生;
也可在体外作为免疫学实验结果的出现。
在体内,可表现为溶菌、杀菌、促进吞 噬或中和毒素等作用,有时亦可引起免 疫病理损伤;
在体外,依相应抗原物理性状(颗粒状 或可溶性)以及反应的条件(电解质、 补体等)不同,可出现凝集、沉淀、细 胞溶解和补体结合等反应。
在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光 素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受激发光的 照射而发出明亮的荧光(黄绿色或桔红色),可以 看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体 的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。
免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶 的高效催化作用有机结合的一种方法。
它以酶作为标记物,与抗体或抗原联结,相 应的抗原或抗体作用后,此时加入酶作用的 底物,通过酶的催化作用,使无色的底物水 解、氧化或还原反应,形成有色的可见物质, 表面酶存在,进一步证明了相应抗原和抗体 的反应。
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理,先 将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物, 再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细 胞或组织内的相应抗原(或抗体)。
① 单向免疫扩散; ② 双向免疫扩散; ③ 火箭免疫电泳; ④ 对流免疫电泳; ⑤ 免疫电泳;
1、直接补体结合试验; 2、间接补体试验;
四、中和反应 1、病毒中和试验; 2、毒素中和试验;
用荧光素、放射性核素或酶等示踪物质标记 的抗体(或抗原)进行抗原-抗体反应,标记
物与抗体(或抗原)的化学联结不会改变抗 体(或抗原)的免疫学特性,同时标记物的 特性依然存在,使检测灵敏度大大提高,可 以对微量物质进行定性、定量或定位检测。
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1894 1896 1896 J. Bordet H. Durham, M. von Gruber G. Widal, A. Sicad
学者
特异凝集反应 肥达试验
贡献
补体与溶菌活性
1897
1900 1900 1906
R. Kraus
J. Bordet, O. Gengou K. Landsteiner A. Wassermann
(一)电解质
作用:中和胶体表面电荷,破坏水化层, 使Ag-Ab聚集。 常用:8.5g/L NaCl溶液,缓冲液、Ca2+、 Mg2+等。 注意:盐析(salting)即电解质浓度过高 引起的非特异性蛋白质沉淀。
(二)酸碱度
• Ag、Ab多为蛋白质,具两性电离特性,有其故有 的PI , pH过高或过低均可影响Ag、Ab反应。
比例合适
可见反应
抗原抗体结合力
1.静电引力(electrostatic forces)
或库仑引力(Cou-lombic forces)
指带电离子基团(如:—NH3+和 —COO-)
之间的引力,距离越近引力越大。
2.范德华引力(Van der Waals forces)
分子间(或原子间)相互接近,分子极化 产生引力,其作用取决于分子空间构型,如: 凹槽与凸起互补,抗原与抗体,酶与底物。能 量小于静电引力。
胞
•四个标记:酶标记技术、放射免疫标记 技术、荧光素标记技术与化学发光标记 技术。
第二章抗原抗体反应 (antigen-antibody reaction)
目的 掌握: 1.抗原抗体反应原理及特点。 2.带现象、前带、后带、亲合力、 亲和力概念。 熟悉: 影响抗原抗体反应的因素。
了解:
免疫学检测的类型。
网格 学说
二者比例合适:
网格学说(图)
抗体的两个Fab段分别 结合两个Ag分子,相互 交叉结合连接成巨大的 网格状立体聚合物, (可见)。
Ab/Ag过剩 过剩方的结合价得不到饱和,大多数游离存在,只 形成小分子复合物(不可见)。
网格学说(图)
切记!!!!
确定 Ag/Ab 的浓度非常重要,即在实验
亲合力 (avidity) 指整个抗体分子与抗原表位之间结合的
强度
“all points-------all points”
与抗体的结合 价直接相关。 亲合力高, 与抗原结合 牢固不易解离。
Avidity
• The overall strength of binding between an Ag with many determinants and multivalent Abs
Keq =
104 Affinity
106 Avidity
1010 Avidity
第二节 抗原抗体反应的特点
一、特异性(specificity)
概念:一种抗原只能与其相应的抗体结合起反应(eg.)
分子基础:Ag-AD
HVR-Ab 空间结构高度互补
VH和VL各具三个HVR与AD互补
免检中常用已知Ag 意义
中需对Ag/Ab进行适当的 稀释 ,调整二
者的比例,产生可见反应。
一般原则:固定 低 含量( Ag/Ab )的浓 度,稀释 高 含量的 (Ab / Ag)。 一般可溶性Ag稀释 Ag 释 Ab 。 ,颗粒性Ag,稀
三、可逆性(reversibility)或表面性
1. Ag + Ab
一定条件 解离
(动态平衡) Ag —Ab
AD的种类与数目:单价Ag
(二)Ab
R型Ab :等价带宽, 易出现可见反应。 来源 H型Ab :等价带窄,易出现前带或后带现象 McAb:不宜用于凝集和沉淀反应。
浓度:相对Ag而言,比例要和适,故实验前
需滴定,以求最适Ag与Ab比例。 特异性与亲合力:关键因素,选择特异性
与亲合力高的Ab。
二、环境因素
• 只有两分子表面密切接触时,才能
产生足够的力使其结合
• 抗原与抗体之间高度的空间互补结 构恰好为这些结合力的发挥提供了 条件
结合力的大小
表示
亲和力 (affinity)
亲合力 (avidity)
亲和力(affinity):
一个抗体结合点与一个抗原表位间的结合强度。 “(single point--- single point )” 亲和力用平衡常数表示:K=K1 / K2 即:结合常数/解离常数 K值越大,亲和力越高, 与抗原的结合越牢固
• 一般:pH6~8为宜,补体参与时pH7.2~7.4。 • 注意:自凝现象------即pH达到或接近颗粒性抗
原的PI时,引起的抗原非特异性自身凝集现象。
(三)温度—影响反应速度
一般:15~40 ℃为宜,
最适温度:37℃,
过高(>56): Ag-Ab解离, Ag、Ab变性,
补体失活。
冷凝集实验:4 ℃凝集,>20解离。 (四)其他 振荡、搅拌等可加速反应
免疫检验技术发展进程的主要阶段
自然的肉眼观察的抗原抗体反应(沉淀反应、凝集反应) 加速的肉眼观察的抗原抗体反应(电泳技术、分离技术) 标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合,加快了反应过程 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合
免疫学技术的发展史
查
未知Ab ,反之亦然。
相对性:当抗原之间有相同或相似结构的AD时 (共同抗原) 干扰结果 实验诊断 交叉反应(cross reaction) 如何解决? 如何利用?
交叉反应(cross reactions)
两种不同 的抗原分 子具有相 同或类似 结构的抗 原表位, 可与彼此 相应的抗 血清发生 反应
动态平衡公式:
[Ag] + [Ab]
K1 K2
[Ag-Ab]
K1:结合常数;K2:解离常数
四、阶段性
两个阶段
特异性结合 数秒~数分钟, 肉眼不可见
可见反应阶段 数分~数小时 肉眼可见
第三节 影响抗原抗体反应的因素
一、Ag/Ab自身因素 (一)Ag 理化性状:颗粒性Ag、可溶性Ag、 R型细菌Ag等出现不 同的Ag-Ab reaction.
抗原抗体交叉反应示意图
二、比例性 (proportionality)
指抗原抗体的量比关系,即只有当抗原抗 体的浓度比例适当时,才出现可见反应。
以沉淀反应为例(Ab量固定,Ag量递增)
图
Question: 等价带 前带 后带
Why?
抗原抗体反应比例性示意图
抗原多价,抗体双价
二者比例合适 Ag/Ab过剩
概念:抗原抗体反应是指抗原抗体的 特异性结合反应
杀菌、溶菌、调理、中和毒素
体内
免疫病理损伤—超敏反应、免疫性疾病等
体外:凝集、沉淀、溶细胞、中和毒素、补体结合等 曾称:serological reaction
本章内容:
§1 抗原抗体反应的原理 §2
抗原抗体反应的特点
§3 影响抗原抗体反应的因素
§4 免疫学检测的类型
第一节 抗原抗体反应的原理
基本原理:
特异性(AD----HVR)
结合力(4种)
可见性(凝集、沉淀、溶血等)
抗原 抗体
高度互补(AD-HVR) 紧密接触
异性相吸
产生
结合力
带电离子 分子极化
静电引力 范德华引力
作用最小
形成氢键 最具特异性 氢键引力
形成疏水基团 作用最大 疏水作用力
抗 原 抗 体 结 合
表
敏感度 +,++++ + ++ + ++ +++ +++ +++ ++ +++ + ++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
小结
概念:抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所 发生的特异性结合反应。 原理:抗原抗体特异性结合,紧密接触,产生四 种结合力:静电引力、范德华引力、氢键和疏水作用 力。 特点:特异性、可逆性、比例性和阶段性。 影响因素:包括反应物的自身因素和环境因素。 免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应,免疫学 技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和 反应和标记免疫反应五种类型。 重要名词:亲和力、亲合力、等价带、前带、后 带等。
临床免疫学检验
( Clinical Immunoassay)
昆明医科大学附属甘美医院检验医学教研室 田 敏
(Min Tian)
学好临床免疫检验,必须掌握“一个
核心,三个要素与四个标记”。
一个核心: 抗原抗体反应 (Antigen-antibody interaction)
•三个要素:抗原、抗体和免疫细
沉淀试验
补体结合反应 人类ABO血型及其抗体 梅毒补体结合反应
1935
1941 1946 1948
M. Heidelberger, F. Kendall
A. Coons J. Oudin O. Ouchterlony, S. Elek
纯化抗体,定量沉淀反应
免疫荧光标记 凝胶内沉淀反应 双扩散沉淀反应
1953
1960 1966 1975
P. Grabar, C. Williams
R. Yallow, S. Berson S. Avrames, J. Uriel, et al G. Kohler, C. Milstein