鸡大肠杆菌病防治中药敏试验方法简介

鸡大肠杆菌病的分离鉴定及药敏试验

２．１临床观察
观察发病鸡群ｌ临床症状．同时对病死鸡进行剖检，观察其病理变化，详
实记录。２－２病料涂片染色镜检将病料进行触片，进行革兰氏染色，镜检。２．３细菌的分离培养无菌采集病死鸡的气囊、心血、肝
牧兽医，２００９（３６）：Ｉ５７
因素均可促发或加重大肠杆菌病。现
将一例鸡大肠杆菌病的分离与鉴定情况报告如下：２０１３年４月１１日．大连市某鸡场海兰蛋鸡２８００只，从１９０１３龄开始陆续
９２－９４
将接种斜面培养１８～２４ｈ的各菌株菌液，移种于三糖铁和葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵培养基，并接种于蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、
【２】田树飞，李子平．鸭疫里默氏杆茵病原与防治研究进展．安徽农业科学，２００７（２ｏ）：
１６０－ｌ６１．
病混合或并发感染而使死亡率升高。
有研究表明，辽宁地区以５月份到９月
【３】罗映霞，余双祥．鸭疫里默氏杆菌病的发
ＴＥ／卡那霉素ＫＡＮ均耐药，提示这些药
物不能用于该病的防治。在大范围发病时可以先用头孢类药物进行治疗。

鸡大肠杆菌对12种抗菌药的药敏试验

鸡大肠杆菌对12种抗菌药的药敏试验杨立姚小青陈海婷/常州市金坛区金城兽医站鸡大肠杆菌病一年四季均可发生，但以冬春寒冷和气温多变季节多发。

在自然条件下，本病可发生于各种年龄的鸡，但多发生于雏鸡，特别是3～6周龄内的雏鸡最为易感。

发病率一般在30%～69%之间，死亡率42%～75%，致死率可高达100%。

随粪便污染蛋壳的E.coli可感染鸡胚，造成鸡胚在孵化期死亡。

或者被感染的鸡胚虽可孵出雏鸡，但在第1周内即死于脐炎或以卵黄感染而引起生长缓慢。

一般情况下，养殖场的大肠杆菌病可通过呼吸道感染而引起。

本病常与某些细菌及病毒同时感染。

传染源主要是被上述血清型的致病病性E.coli所污染的卵、病鸡及其分泌物、排泄物，被污染的饲料、饮水、垫草和尘土等。

感染途径为消化道和呼吸道，鼠和臭虫是该病病原体的携带者。

一、临床症状病禽精神不振，不爱活动，常呆立于禽舍一隅，羽毛松乱，两翅下垂，食欲减少等一般性病状。

由于大肠杆菌病的临诊病型不同，可以出现肠炎、败血症、呼吸道炎、输卵管炎、眼炎、关节炎、神经症状、肿头综合征等为主的相应的症状。

如鸡发生气囊炎时，则见病鸡呼吸困难，咳嗽，有罗音，羽毛松乱，精神差，食欲减少，肉仔鸡则增重缓慢。

肠炎型病鸡除见一般病状外，主要是拉稀，消瘦，最后衰竭死亡。

关节炎时，则见关节肿大，跛行。

眼炎时，则见流泪，结膜潮红，角膜混浊，有脓性分泌物，瞳孔缩小，重者眼前房破溃，失明。

神经型（脑型）病鸡。

1986年广东省首次报道了大肠杆菌引起的脑炎（现国内已有多次报道），除一般病状外，主要症状是昏睡及神经紊乱，歪头、斜颈，转圈，共济失调，抽搐等神经症状，以及下痢。

除以上原发性感染时的病型外，如有继发或并发病时，则有其相应的病状。

二、药敏试验本文就金坛地区3个鸡场5周龄鸡发生本发生的以精神不振，采食减少、拉稀等为病症，部分死亡，剖检有疑似大肠杆菌病的病例进行病原分离鉴定，从分离出的菌株中挑选9株进行药敏试验，旨在为鸡大肠杆菌病的诊断和治疗提供参考。

鸡大肠杆菌病及其病原体药敏试验

２０１４年
３０卷
第８期
临床兽医
鸡大肠杆菌病及其病原体药敏试验
高永贵于延玲邓艳红’ 李淑艳
（１．吉林省桦甸市金沙镇畜牧兽医站，吉林桦甸１３２４１４；２．吉林省桦甸市桦郊乡畜牧兽医站，吉林桦甸１３２４００）
病率和死亡率。大肠杆菌对多种抗菌药物都敏感，但极易产生耐ＣＦＵ／ｍｌ，均匀涂布在０．１ｍｌ稀释后菌液的营养琼脂平板上，中间７℃培养１６ｈ，测定抑菌环直径，确定高敏药药性。目前大肠杆菌的耐药性迅速增长，多重耐药的菌株不断出铺放好药敏纸片。３现。加上滥用抗菌药物造成耐药菌株不断产生，致使该病时有发物。生，往往与其他病原混合感染，再加上大肠杆菌的血清型众多，４结果目前，已成为危害养鸡业的重要细菌性传染病之一，给养鸡业造４．１革兰氏染色结果取伊红美蓝琼脂平板上紫黑色带金属光泽的单个菌落涂成了严重的经济损失。片，革兰氏染色后镜检，可见到革兰氏阴性，两端钝圆，长约１流行特点禽大肠杆菌引起的疾病在临床上病变多样化，表现多器官、１．５～３．０ｍ的短小杆菌，多单在，偶有２～３个菌体相连，无芽多样化病变。大肠杆菌易与其他病混合感染，如鸡群中存在鸡毒孢。支原体感染、传染性支气管炎、新城疫等。不良环境也易引起大４．２生化试验结果本株细菌分离物能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗肠杆菌病，如，通风不良、密度过大、应激、环境卫生较差、饲糖；能产生吲哚，不产生硫化氢，Ｍ・Ｒ试验呈阳性，Ｖ — Ｐ试验料营养不全及某些疫苗免疫接种等都促使本病发生。呈阴性，不能利用枸橼酸盐，不分解尿素，不液化明胶。细菌分２临床症状及病理变化ｓ，不产气。大肠杆菌引起的疾病因时间、地点的不同，在临床上病变表离物在三糖铁培养基上斜面和底层产酸、不产生Ｈ４．３大肠杆菌增菌结果现多样化，以下介绍其中几种：接菌的２支试管明显的比对照组浑浊，说明大肠杆菌在恒温培２．１急性败血症养摇床中培养后达到要求的菌浓度。将达到菌浓度要求的菌液接主要发生雏鸡和４月龄以下的青年鸡。病鸡表现为精神不振，种到５００ｍｌ的锥形瓶中经震荡培养后，得到大量标准菌浓度的菌采食减少，衰弱和死亡。病鸡腹部膨满，排出黄绿色的稀便。液。通过细菌平板计数得到细菌的浓度达到１ｏ０亿，ｍｌ。２．２卵黄性腹膜炎及输卵管炎腹膜炎可由气囊炎发展而来，也可由慢性输卵管炎引起。发４．４试管凝集验证试验结果验证试验结果：（１）抗原自凝没有出现。（２）稀释４倍的血生输卵管炎时，输卵管变薄，管内充满恶臭干酪样物，阻塞输卵清反应效果较为明显。（３）阴性对照没有发生凝集沉淀。（４）管使排出的卵落到腹腔而引起腹膜炎。

鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验

鸡大肠杆菌病病原的分离鉴定及药敏试验作者：荆丽珍来源：《农家致富顾问·下半月》2019年第08期摘要本试验目的是采用6种常用抗菌药物进行药敏试验，再筛选出敏感药物，为预防和治疗大肠杆菌病提供理论依据并指导临床用药。

方法是对送检的病死鸡和濒死鸡进行了剖检、病理学诊断和病原检测，无菌采取的病死鸡组织进行细菌的分离鉴定，并通过药敏纸片法对其纯化培养物进行药敏试验。

关键词大肠杆菌；分离与鉴定；药敏试验鸡大肠杆菌病是由某些致病性血清型大肠埃希菌引起的鸡的不同类型疾病的总称。

大肠杆菌致病性菌株的致病因子是由侵袭力、感染力和致病性这三个主要特征决定。

大肠杆菌主要有菌体抗原、荚膜抗原、鞭毛抗原三个病原类型，这三种抗原形成了众多的血清型。

该菌对外界抵抗力比较弱，一般高压蒸汽灭菌锅121℃30min便可将其杀死，对一般消毒药的抵抗力也很弱，常用的消毒药水均能将其杀死。

本实验对海阳六合鸡场送检的濒临死亡的鸡只和病死鸡进行了解剖检查，并且进行了病理学诊断和病原检测，确诊该海阳鸡场发生了大肠杆菌病。

通过做药敏试验，选择出几种药物，而这些药物通常是对此致病菌比较敏感的，然后進行药物治疗，以此达到控制疫情效果。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 病料及实验动物所有病料来自海阳六合养殖场送检的疑似大肠杆菌病的病鸡、濒临死亡鸡40只，已经死亡鸡只的死亡时间不超过18h。

实验动物为：20只健康小白鼠和20只7日龄健康雏鸡。

1.1.2 仪器与设备恒温箱，光学显微镜，全自动高压灭菌器，超净工作台，美国微量移液器、剪刀、试管等。

1.1.3 培养基与试剂伊红美兰琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、普通肉汤培养基、营养琼脂培养基。

卡那霉素、新霉素、庆大霉素、青霉素、链霉素和四环素等药敏片，硝酸盐还原剂、氧化酶试剂、微量生化试验管。

1.2 方法1.2.1 外部观察和病理剖检根据大肠杆菌病的流行病学特点，表现出来临床症状，以及对送检的40只病死鸡和濒临死亡的鸡只进行的病理临床剖检及相关病理症状观察，根据表现出来的相关剖检特征，可以对大肠杆菌病作出初步诊断。

大肠杆菌药敏试验简易方法

大肠杆菌药敏试验简易方法近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养鸡业（特别是肉鸡）最为重要的疾病之一，为细菌病之首。

因此，广大养鸡户谈之色变，没有比感染病毒病又继发大肠杆菌病更糟糕的了。

正因为如此，抗生素得到了大量广泛的应用，又由于大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，所以大肠杆菌的耐药性问题日益突出。

如何解决这个问题将是畜牧兽医工作者今后工作的重点。

而就目前来说，通过抗菌药物敏感性试验（药敏试验）选择敏感药物对鸡群进行预防和治疗是降低大肠杆菌病发病率和死亡率的有效手段。

标准的药敏试验（纸片扩散法）比较繁琐，要先进行细菌培养，再进行药敏试验，试验设备要求高，基层兽医诊疗机构很难做到，现介绍一种简易药敏试验方法（纸片扩散法［1］）。

1试验方法和步骤1.1试验设备恒温培养箱1台、干燥灭菌箱1台、酒精灯1个、接种棒（带接种环）1个（接种环可用回形针自制）、手术剪1把、镊子1个、普通营养琼脂1瓶、玻璃平皿（直径90mm）数个、烧杯（500ml）1个、玻璃棒1个、普通电炉1台、定性滤纸1盒、蒸馏水适量、生理盐水适量、小玻璃瓶（如链霉素瓶）数个（洗净晾干）、钢笔1支、细针头数个、高压蒸汽灭菌锅（可选）1个、普通天平1台、药勺1个、尺子1个。

1.2普通营养琼脂平皿制备1.2.1平皿消毒将玻璃平皿洗净，晾干。

用干燥灭菌箱120℃灭菌1小时；也可用酒精灯火焰消毒，将玻璃平皿内壁靠近火焰，同时慢慢转动平皿使之均匀受热，待平皿内壁上水珠烤干并发烫为止。

1.2.2琼脂消毒营养琼脂与蒸馏水（或生理盐水）以3g：100ml的比例加入烧杯（先加蒸馏水，后加营养琼脂），用电炉加热同时用玻璃棒搅拌，使营养琼脂溶化均匀。

如有高压蒸汽灭菌锅可将溶化的琼脂液装入生理盐水瓶中（不超过其容量的2/3），瓶口留一通气孔（一般用16号针头刺入瓶盖），将瓶站立放入锅内，加热至121℃保持15分钟即可；如无高压锅可直接用电炉加热至沸腾后立即将烧杯从炉上拿下来，待泡沫消了，再放到炉上，如此煮约20分钟（煮时不断搅拌）。

鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验

鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验随着养鸡业集约化、产业化的不断发展，疾病越来越多，细菌对抗生素的耐药性越来越强，在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗，达到有效控制疾病的目的。

为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。

关键词：大肠杆茵；分离鉴定；药敏1 材料1.1病料来源采自鸡场150～200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等。

1.2 培养基普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基：固体：胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g，、琼脂粉1.5g使其充分溶解，高压灭菌20min，铺板并保存于4℃”。

液体：胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl，然后定容至100ml，高压灭菌20min，4℃保存]麦康凯琼脂培养基水解酪蛋白（MH）培养基三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，NaCL5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml，分装4-5ml灭菌，制成底层较深的斜面）胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，NaCL 1.25g，蒸馏水250ml，PH调至7.6，分装灭菌）葡萄糖蛋白胨水溶液（100mlpH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g，溶解后分装1ml 每管，灭菌）1.3 仪器与器材超净工作台，天平、接种环，平皿，试管，灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计、旋涡混合振荡器96孔板、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等生化发酵管（葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等）1.4 药物与试剂琼脂，肉汤，麦康凯琼脂，95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂M-R试剂（用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红，定容100ml）V-P试剂（甲：5%α萘酚酒精溶液；乙：40%氢氧化钾水溶液，装于棕色瓶，4℃保存）草酸铵结晶紫染液（A液：结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解；B液：草酸铵1g溶于100ml蒸馏水，两液混合）革兰氏碘液（2g碘化钾溶解于少量水中，加入1g碘片使之完全溶解，定容300ml）复红染液（2.5ml复红加100ml酒精，取混合液10ml加80ml蒸馏水）2. 大肠杆菌的分离鉴定2.1大肠杆菌的分离培养无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤，37℃培养18～24h，挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上，37℃培养18～24 h；再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线，37℃培养18～24h。

鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

分离菌纯培养物的菌种接入后封口，置于３＂７Ｃ培养箱中培养１～４，观察结果。８２ｈ－１２致病性试验将分离到的大肠杆菌接种普通肉汤．．４培养物，３ ℃培养２ｈ。经测定每毫升肉汤培养物约含７４ｌｌ９Ｆ。按每株菌３５ｘ０ＣＵ只（日龄健康非免疫雏鸡），颈部
关键词鸡大肠杆菌分离鉴定药敏试验文献标识码：Ａ文章编号：１０．７３０１７０１．０７１３（１）．５０２００２
器、无菌实验台、微量移液器等。
１方法．２
中图分类号：￥５．＋８２１４６
鸡大肠杆菌病是由致病性血清型的埃希氏大肠杆菌
１．试验动物各日龄健康鸡（自山东济南ＳＦ．３１购Ｐ种鸡场）。．
２结果
２１大肠杆菌麦康凯琼脂上形成红色、圆形隆起、光．
滑湿润、边缘整齐、直径为１～．．２５５ｍｍ的小菌落；在伊红
１１．＿仪器及设备光学显微镜、恒温箱、高压灭菌４
１．培养基与试剂麦康凯琼脂（Ａ、伊红美兰琼．２１Ｎ）
脂、普通肉汤、营养琼脂（Ａ）Ｎ（均购自上海伯奥生物科技有限公）；硝酸盐还原剂、氧化酶试剂、微量生化试验管、药敏纸片购自（购自杭州天和微生物试剂有限公均
１５
山东畜牧兽医
美蓝琼脂上形成紫黑色、具有金属光泽的小菌落；在普
通琼脂斜面上的菌落为灰白色；在普通肉汤中呈均匀浑浊，管底有灰白色沉淀，并有粪臭味。

鸡病原性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

2018年第2期鸡大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的表现多种临床症状及病理变化的一类疾病，该病在养鸡业中很常见，给养鸡业造成一定的经济损失。

现在养鸡形式多以集约化饲养为主，养殖密度的增大加剧了该病的发生及流行，另外抗菌药物使用不当时有发生，使耐药性的产生更趋严重，给大肠杆菌病的防治带来诸多困难。

笔者分别从不同养鸡厂的病死鸡中分离出9株大肠杆菌，对分离出的9株大肠杆菌进行培养、染色、形态与生化特性及药敏试验，以期为临床防治鸡大肠杆菌病提供一定的参考依据。

1材料及方法采取自天津蓟县周边不同肉养鸡厂具有典型病变病死鸡的心血及脏器。

普通琼脂平板，营养肉汤，麦康凯平板，微量发酵管，M-R 试剂，V-P 试剂。

1日龄健康雏鸡。

（1）氧氟沙星；（2）盐酸环丙沙星；（3）乳酸环丙沙星；（4）沙拉沙星；（5）恩诺沙星；（6）洛美沙星；（7）培氟沙星；（8）双氟沙星。

均为原粉，市购，含量均达到90%以上，按试验要求配制成所需浓度，4℃保存备用。

采取症状典型病死鸡的心血、肝脏和脾脏，接种于麦康凯琼脂平板，37℃培养24h 。

挑取麦康凯琼脂平板上的粉红色菌落，按常规方法进行涂片、革兰氏染色、镜检。

1.6.1生化试验挑取麦康凯琼脂平板上的粉红色菌落，接种于肉汤37℃培养18h 。

然后将肉汤培养物接种于微量发酵管进行发酵试验，并进行生化反应试验。

1.6.2致病性试验选取10只10日龄健康雏鸡并分成2组，每组5只，第1组按照0.5mL/只的剂量腹腔接种肉汤培养物，第2组按照0.5mL/只的剂量腹腔注射生理盐水，观察各组发病情况。

判定标准：抑菌圈直径平均值小于10mm 为抗菌；10mm 轻度敏感；11~15mm 中度敏感；16~20mm 高度敏感。

2结果分离培养及纯培养结果表明其培养特性具有共同的特点，在普通琼脂平板上为灰白色、半透明、圆形光滑的中等大小菌落；在普通肉汤中可使肉汤均匀浑浊有腥臭味，试管底有沉淀物呈灰白色，轻摇后呈云雾状散开；在麦康凯平板上为砖红色、圆形微凸、边缘整齐、光滑湿润的小菌落。

鸡大肠杆菌的药敏试验

一
药敏试纸片共１５种：氟苯尼考、安普霉素、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、环丙沙星、恩诺沙星、乳酸诺氟沙星、复方新诺明左氟沙星、黏菌素、阿莫西林、头孢噻肟钠、头孢
氨苄。以上药敏试纸片均为５ｇ／片，由杭州天和微生物有限公司生产制造。
并由金属光泽。
大肠杆菌对干燥的抵抗力很强，在鸡舍、粪便、尘埃、垫
参考。现将实验方法和结果报告如下：
４．１试验材料
４．１．１标准菌株
药品监察所。
料、孵化器内的绒毛、破壳蛋等环境中可存活数周或数月之久，成为环境中的常在菌。兽医上常用的消毒药可以杀灭大
性红溶液３～４ｍＬ，１％结晶紫０．１ｍＬ，ｐｔｔ７．４，高压蒸汽灭菌。
随粪便污染蛋壳的Ｅ．ｃｏｌｉ可感染鸡胚，造成鸡胚在孵化期死
亡。或者被感染的鸡胚虽可孵出雏鸡，但在第１周内即死于
脐炎或以卵黄感染而引起生长缓慢。
般情况下，养殖场的大肠杆菌病可通过呼吸道感染而
引起。本病常与某些细菌及病毒同时感染。Ｒａｎｄａｌ１．Ｃ（１９８４）
曾从大肠杆菌病死雏病理材料中同时分离到变形杆菌、葡萄
球菌和假单胞菌、呼肠孤病毒和腺病毒。本病的传染源主要是被上述血清型的致病病性Ｅ．ｃｏｌｉ所污染的卵、病鸡及其分泌物、排泄物，被污染的饲料、饮水、垫草和尘土等。感染途径为消化道和呼吸道，鼠和臭虫是该病病原体的携带者。

鸡大肠杆菌病的快速药敏试验方法

鸡大肠杆菌病的快速药敏试验方法发布日期：2008年11月12日来源：甘肃省张掖市动物疫病预防控制中心作者：何彦春随着养鸡业集约化程度的不断提高，各种条件性发生的疫病成为严重制约养鸡业发展的主要因素。

尤其是鸡大肠杆菌病的频繁发生，给养鸡业造成很大损失。

由于长期使用抗生素防制，使耐药菌株越来越多，抗生素防治的难度越来越大。

为了及时有效控制该病，须对致病菌进行药敏试验，以便选用高敏感药物，避免盲目滥用抗生素。

为了尽快取得药敏试验结果，使疫病得到早期控制，经多年来反复实践，总结出如下快速药敏试验方法。

1 药敏纸片的准备可以使用生化用品厂家提供的药敏纸片，也可以按有关资料介绍的方法进行自制。

2 所用培养基的制备按使用说明用普通营养琼脂粉制作普通营养琼脂平板。

3 试验方法对病死鸡进行剖检，发现有肝周炎、心包炎、气囊炎等符合大肠杆菌病典型病变特征的病例，即可无菌采取肝、脾、心等置灭菌容器内备用。

采集病料时要注意采取多份典型病料。

用灭菌接种环多次取病料内部组织，反复划线接种于营养琼脂平板。

如病料较多时，每一个平板可重复接种2～3份病料。

划线时要纵横交错划满整个平皿，并特别注意不要划破培养基。

接种完后用灭菌镊子夹取药敏试纸小心帖附在培养基上，各纸片应相距15mm左右。

置37℃恒温箱培养24小时后观察结果。

4 结果判定药敏纸片周围20mm如无细菌生长，说明试验菌株对该抗生素极敏，15～20mm为高敏，10～15mm为中敏，小于10mm为低敏，无抑菌圈为不敏感。

如一个平皿接种多份病料，长出的细菌可能不止一种细菌、一种菌株，对药物的敏感性可能不一致，如有的纸片周围抑菌圈内有较稀疏的菌落生长，说明该抗生素对某些菌株不敏感。

药敏试验结果出来后，可选用对各菌株普遍敏感的抗生素对发病鸡群进行及时治疗，以便尽快控制病情。

如需做进一步研究，可继续对分离出的细菌进行详细实验室诊断，以便确定是何种细菌，细菌菌型、致病性等。

5 小结发生疫病时，广大养殖户最关心的是如何快速控制病情，减少损失。

毕业论文：鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验

毕业论文：鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验河南科技学院2013届本科毕业论文（设计）鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验学生姓名：时科所在院（系）：动物科学学院所学专业：动物医学导师姓名：常新耀完成时间：2013年5月鸡大肠杆菌病病原的分离与鉴定及药敏试验摘要鸡大肠杆菌感染是危害养鸡业的主要细菌性传染病，无菌采取南阳市唐河县某鸡场中疑似大肠杆菌病死雏鸡肝、脾、肺等脏器病料，通过结合综合流行病学、临床学、病理学、生物化学和传染病学，进行分离与鉴定，最终确诊为鸡大肠杆菌病。

从部分养鸡场分离出的细菌进行药敏试验，通过药敏试验筛选出敏感药物，为治疗与预防提供理论依据和实际应用参数。

关键词：大肠杆菌，分离，鉴定，药敏试验The Separation,Identification And Antimicrobial SusceptibilityTest Of Chicken ColibacillosisAbstractChicken colibacillosis infection is the major infectious diseases in poultry industry. Sterilely resorting to visceral organs, such as livers ,spleens, lungs of illness, chicklings that are suspected colibacillosis of each large chicken places in Shanxian,by the means of combing with epidemiology,clinical, pathology, biochemistry and epidemiology,we can separate and identificate to diagnose whether it is colibacillosis or not. By the means of form dyeing and Biochemical tests and then antimicrobial susceptibility test on bacterium that is separated from part chicken places,we can screen some Sensitive drugs and find more effective proprietary to Provide theoretical basis and practical parameters of treatment and prevention.Key words: Colibacillosis，Separation，Identification，Antimicrobial Susceptibility Test目录前言 01 材料与方法 01.1 材料 0病料来源 0仪器及设备 0培养基与试剂 0试验动物 (1)1.2试验方法1病理剖检 (1)大肠杆菌的分离鉴定 (1)病料采集 (1)分离培养 (1)镜检 (2)生化鉴定 (2)致病性试验 (2)药敏试验 (2)2结果与分析 (2)2.1病理剖检 (2)2.2大肠杆菌的分离培养 (3)2.3形态学观察 (3)2.4生化鉴定 (4)2.5致病性试验 (5)2.6药敏试验 (5)3讨论 (6)3.1注意种蛋卫生 (7)3.2加强卫生管理 (7)3.3适当添加维生素和微生态制剂，增强机体抵抗力 (7)3.4免疫预防接种 (7)4结论 (8)参考文献 (8)致谢 (10)前言鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli，E.coli)某些血清型菌株引起的一类疾病的总称[1]。

鸡大肠杆菌病的诊断与防治试验

禽大肠杆菌病又称禽大肠杆菌传染（Ａｖｉａｎｃｏｌｉｆｏｒｍ
ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ）。它是由某些血清型的致病性大肠埃希氏菌（Ｅｓｃ — ｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，简称Ｅ．ｃｏｌｉ或大肠杆菌）引起的禽类非肠道传染性疾病的总称【】－５］。
实验室诊断：从具有典型病变的肝脏、卵巢及气囊进行
１．２．４培养。用灭菌的接种环刺人病鸡的新鲜肝脏。划线接
种麦康凯培养基，置３７℃培养２４ｈ，观察结果。
以上，产蛋
１．２．５药物敏感试验。将病鸡的新鲜肝脏一边缘修剪整齐，
注： “ ＋＋ ” 表示敏感； “ ＋ ” 表示中等敏感； “ 一” 表示不敏感；空白对照组没有抑菌圈。下同。
２．１．２亚急性浆膜炎型。发病情况与症状：Ｂ鸡场饲养的
５０００羽白鸡，发病时整个鸡群精神状态良好，有个别鸡精神沉郁，每天鸡只死亡２Ｏ～３０羽，采食量９０炎及卵巢炎等。
采用４区划线法，将培养皿放入３７℃恒温箱内培养２４ｈ。用
接种棒挑取１～２个纯培养的大肠杆菌菌落，置于１ｍＬ灭菌
率上升缓慢，对ｌ０羽鸡剖检均有不同程度的气囊炎、肝周

鸡致病性大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

ＩｏａｉｎＩｅｔｆｃｔｏａｅｃｎｅＳｅｉｉｉｙＴｅｔｏｓｌｔｏｎａｄｄｎｉａｉｎｎｄＭｄｉｉｎｓｔｖｔｓｎｉＰｏｌｒｔｏｎｉｃｒｃａｃｌａｔＧａｎｉｔｗｎｕｔｙＰａｈｇｅｃＥｓｈｅｉｈｉｏｉｈａｏ
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（ｉｌｓａｄｙＢｒａｆｆＹａｙａｉｈａ６５０，ｉａＡｎｍａｂｎｒｕｅｕｏｏｎｕｎＳｃｕｎ，１７０Ｃｈｎ）Ｈｕ
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鸡大肠杆菌血清型鉴定和药敏试验

鸡大肠杆菌血清型鉴定与药敏试验（新科学院生物工程系生物技术091班）绪论鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E．coli，APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病。

本病目前呈世界性分布，国内各地的鸡群普遍存在感染并常有发病。

该病的特征是病型多，包括急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、眼炎、关节炎、脐炎、肉芽肿以及肺炎等，最常见的为气囊炎、输卵管炎[1,2]。

在临床上往往不单独发病，一般继发于一些病毒性感染如新城疫、马立克氏病、传染性支气管炎等。

现有的研究表明，APEC抗原性复杂、血清型多样，不同类型之间和不同地区之间致病菌的血清型差别很大[3]。

鸡大肠杆菌病一年四季均可发生，各品种和各年龄的鸡均可感染，若不及时采取有效的防治措施，便会导致大量死亡。

大肠杆菌易产生耐药性，用药物控制该病不但费用高、效果不佳，且会造成药物残留和降低产品品质，为此，有效防治该病就显得尤为重要。

本研究对新乡地区某鸡群发生的疑似鸡大肠杆菌病进行了初步诊断，并采集典型病料进行病原菌的血清型鉴定和药敏试验，取得了理想效果，为该病的确切诊断和有效防治提供了可靠依据。

现将有关情况报告如下：1材料与方法1.1 病料来源对来自新乡市一养鸡厂疑似鸡大肠杆菌病的病例进行临床初步诊断[4]，病鸡表现为精神委顿，羽毛松乱，食欲废绝，拉黄白稀粪。

用灭菌棉接触采集病鸡粪便作为病料。

（材料由动科学院提供）1.2 主要试剂草酸铵结晶紫（天津市博迪化工有限公司）碘液、氯化钠（北京中联化工试剂厂）牛肉浸粉、蛋白胨（北京奥博星生物技术有限公司）95%酒精（天津市天力化学试剂有限公司）番红（天津市瑞金特化学品有限公司）葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖等微量发酵管（杭州天河微生物试剂有限公司）葡萄糖、乳糖、猪胆盐、中性红（郑州派尼化工试剂厂）营养琼脂（上海光星生物技术有限公司）甲基红试剂、吲哚试剂、VP指示剂（天津市瑞金特化学品有限公司）磷酸氢二钾、生理盐水、伊红、美兰、石碳酸、乙醚（广西汕头市西龙化工厂）标准麦氏比浊管（北京红娃数字机电技术有限公司）1.3 培养基营养肉汤培养基麦康凯培养基伊红美兰培养基蛋白胨水营养琼脂培养基1.3.1 培养基的制备[5]营养肉汤培养基蛋白胨10g ，牛肉浸粉3g ，氯化钠5g，蒸馏水1000ml称取蛋白胨5g，量取蒸馏水1000ml，将牛肉浸粉倒入，边加热边搅拌，沸腾后停止加热，调pH至7.0-7.4，分装到试管中，加塞后在压力为0.11Mpa，温度为121℃条件下灭菌15分钟。

家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验

家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验方法鸡大肠杆菌病主要依靠药物防治，但药物的大量使用带来了大肠杆菌多重耐药性和药物残留等诸多问题。

目前世界许多地方开展了调查研究试验材料1.病料来源。

养殖户送检样本有典型大肠杆菌和沙门氏菌病变的病死鸡，孵化后期死亡鸡胚（没有出壳鸡苗）作病料。

毛蛋没有出壳小鸡小鸡卵黄囊青年鸡病料2.细菌分离用的培养基：麦康凯培养基、普通培养基、SS培养基、亚硫酸铋培养基等二、试验方法1.大肠杆菌的分离培养。

无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊（没有出壳鸡苗）在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，在麦康凯培养基上生长出边缘整齐稍凸起、表面光滑湿润、直径1～2毫米的红色圆形菌落，革兰氏阴性，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出粉红菌落。

亚硫酸铋琼脂大肠杆菌不生长。

2.沙门氏菌分离培养。

无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊在在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，然后挑取麦康凯琼脂平板上淡黄色半透明单个菌落，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出黄色半透明或黑色菌落。

亚硫酸铋琼脂沙门氏菌生长绿色单个菌落。

如图：SS培养基沙门氏亚硫酸铋琼脂沙门氏菌麦康凯培养基大肠杆菌SS培养基大肠杆菌和沙门氏菌普通培养基大肠杆菌和沙门氏菌三．药敏试验分离到的大肠杆菌和沙门氏菌混合在一起，涂匀营养培养基，选用的药敏片做好标号，平整贴在培养基上37℃培养12~24小时，观察细菌抑菌圈大小，选抑菌圈越大药物敏感度越高，使用疗效越好。

同时考虑某些药物肠道不吸收问题。

四．药敏分析及预防：该地区的大肠杆菌和沙门氏菌对粘杆菌素、痢菌净、氟苯尼考、硫酸阿米卡星、头孢噻呋、硫酸新霉素较敏感。

合理搭配抗生素使用减少细菌耐药性的产生，临床上长期大量使用不规范抗菌药物，致使大肠杆菌沙门氏菌耐药菌株不断产生，敏感的药物越来越少，也可以据本场的大肠杆菌和沙门氏菌血清型做疫苗预防。

这提示我们每隔一定时间要对本地区的大肠杆菌耐药性进行检测，以便更好地选择敏感有效的药物，以控制该病的流行。

大肠杆菌药敏试验简易方法材料

大肠杆菌药敏试验简易方法近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养鸡业（特别是肉鸡）最为重要的疾病之一，为细菌病之首。

因此，广大养鸡户谈之色变，没有比感染病毒病又继发大肠杆菌病更糟糕的了。

正因为如此，抗生素得到了大量广泛的应用，又由于大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，所以大肠杆菌的耐药性问题日益突出。

如何解决这个问题将是畜牧兽医工作者今后工作的重点。

而就目前来说，通过抗菌药物敏感性试验（药敏试验）选择敏感药物对鸡群进行预防和治疗是降低大肠杆菌病发病率和死亡率的有效手段。

标准的药敏试验（纸片扩散法）比较繁琐，要先进行细菌培养，再进行药敏试验，试验设备要求高，基层兽医诊疗机构很难做到，现介绍一种简易药敏试验方法（纸片扩散法［1］）。

1试验方法和步骤1.1试验设备恒温培养箱1台、干燥灭菌箱1台、酒精灯1个、接种棒（带接种环）1个（接种环可用回形针自制）、手术剪1把、镊子1个、普通营养琼脂1瓶、玻璃平皿（直径90mm）数个、烧杯（500ml）1个、玻璃棒1个、普通电炉1台、定性滤纸1盒、蒸馏水适量、生理盐水适量、小玻璃瓶（如链霉素瓶）数个（洗净晾干）、钢笔1支、细针头数个、高压蒸汽灭菌锅（可选）1个、普通天平1台、药勺1个、尺子1个。

1.2普通营养琼脂平皿制备1.2.1平皿消毒将玻璃平皿洗净，晾干。

用干燥灭菌箱120℃灭菌1小时；也可用酒精灯火焰消毒，将玻璃平皿内壁靠近火焰，同时慢慢转动平皿使之均匀受热，待平皿内壁上水珠烤干并发烫为止。

1.2.2琼脂消毒营养琼脂与蒸馏水（或生理盐水）以3g：100ml的比例加入烧杯（先加蒸馏水，后加营养琼脂），用电炉加热同时用玻璃棒搅拌，使营养琼脂溶化均匀。

如有高压蒸汽灭菌锅可将溶化的琼脂液装入生理盐水瓶中（不超过其容量的2/3），瓶口留一通气孔（一般用16号针头刺入瓶盖），将瓶站立放入锅内，加热至121℃保持15分钟即可；如无高压锅可直接用电炉加热至沸腾后立即将烧杯从炉上拿下来，待泡沫消了，再放到炉上，如此煮约20分钟（煮时不断搅拌）。

抗菌药物对鸡大肠杆菌敏感性的对比试验

抗菌药物对鸡大肠杆菌敏感性的对比试验随着养禽业的发展，鸡大肠杆菌病的流行日益严重，本试验对天津市周边的四个养殖场进行了采样，并进行了细菌分离鉴定及药敏试验，旨在为寻找治疗大肠杆菌的敏感药物奠定试验及理论依据。

一、材料与方法（一）试验材料药敏试纸：由杭州天合试剂有限公司按照美国NCCLs（National Committee for ClinicalLaboratory Standards）最新药敏试验法制备，采用标准厚纸片冰冻干燥法生产，直径6.35毫米，纸片含药量符合标准。

本试验测定了分离珠对10种抗菌药物的敏感性。

受试药物：红霉素、青霉素、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星、新霉素、左旋氧氟沙星、多粘霉素、恩诺沙星可溶性粉[兽药字（2009）020182118，规格：2.5%，天津汉普森药业有限公司]。

试剂：营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂，购于哈尔滨万泰试剂公司；各种糖发酵管生化试剂，购自杭州天合微生物试剂有限公司；绵羊琼脂培养基、革兰氏染色液按标准自行配置。

试验仪器：真空干燥箱（DZF-2），北京市永光明医疗仪器厂；台式PH计（PHS－25），上海理达仪器厂；立式压力蒸汽消毒器（628B），铁岭市医疗器械总厂；万分之一电子天平（FA2204B），上海精密科学仪器有限公司。

试验动物：病鸡采自天津市周边的4个养殖场。

（二）试验方法对试验动物的临床症状观察试验鸡群表现为精神沉郁，食欲废绝，羽毛松乱，离群呆立，粪便呈黄绿色、灰白色水样，气管啰音。

肝肿大、出血，表面有一层纤维素性渗出物，气囊炎、心包炎，肠道广泛性出血，气管环轻微出血，脾、肾肿大，出血。

病料的采集样品来自天津市周边的4个肉鸡养殖场，对临床症状比较明显的25只大肠杆菌病死鸡，无菌采取心、肝、脾、气管等病料，以备试验。

细菌的分离培养与鉴定将所采取的25只病死鸡的病料涂于绵羊血琼脂培养基上，并对其进行划线，37℃培养24小时。

挑取单个菌落，37℃培养24小时后染色、镜检，对其镜检形态进行观察，并进行相应生化试验，其中大肠杆菌生化试验通过伊红美蓝琼脂、麦康凯琼脂接菌以及三糖铁发酵试验、明胶水解试验、V-P试验、吲哚试验、甲基红试验、枸橼酸盐利用试验等生化试验进行鉴定。