青蒿琥酯下调人喉癌细胞所致 T 细胞免疫抑制的体外实验研究
青蒿琥酯对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制
青蒿琥酯对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制刘亮;刘江惠;陈乐彤;巨英超;王静;周荣秒;黄茜;霍向然;田芸婕【摘要】目的探讨青蒿琥酯(ART)对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制.方法以不同浓度青蒿琥酯作用肝癌SMMC-7721细胞24h,采用MTT法检测细胞生长抑制率(IC50)值.根据IC50值选取3个青蒿琥酯浓度(30、60、120μg/ml)进行后续实验.以不同浓度青蒿琥酯(0、30、60、120μg/ml)作用SMMC-7721细胞24h,0μg/ml青蒿琥酯以生理盐水代替青蒿琥酯作为对照组,分别命名为对照组、30μg/ml ART组、60μg/ml ART组、120μg/ml ART组.倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测各组细胞周期、细胞凋亡、细胞线粒体膜电位及Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果 MTT结果显示,青蒿琥酯对肝癌SMMC-7721细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,IC50=60.27±1.51μg/ml.倒置显微镜下观察,青蒿琥酯作用24h后,SMMC-7721细胞中呈现不同程度的死亡细胞,且随着青蒿琥酯浓度增加,死亡破碎细胞也增加.30、60、120μg/ml ART组细胞凋亡率(分别为4.44％±0.32％、6.54％±0.84％、12.92％±1.22％)与对照组(2.15％±0.10％)相比明显增高(P<0.01).30、60、120μg/ml A RT组细胞周期G0/1期细胞数(分别为74.91％±0.69％、77.14％±1.39％、78.62％±0.55％)与对照组(70.60％±0.60％)相比明显增高(P<0.01),而30、60、120μg/ml ART组细胞增殖指数(PI)(分别为25.09％±0.69％、22.86％±1.39％、21.38％±0.55％)与对照组(29.40％±0.60％)相比明显降低(P<0.01).30、60、120μg/ml ART组细胞线粒体膜电位(分别为244.36±3.27、229.51±4.74、173.17±6.93)与对照组(277.82±5.68)相比明显降低(P<0.01).30、60、120μg/ml ART组细胞中Bcl-2蛋白表达(分别为220.86±7.76、195.64±9.23、148.32±8.19)与对照组(256.86±7.78)相比明显降低(P<0.01),而Bax蛋白表达(分别为214.22±2.01、231.54±6.16、260.96±11.38)与对照组(186.21±8.82)相比明显增高(P<0.01).结论青蒿琥酯可抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,其作用机制与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2018(043)007【总页数】6页(P594-599)【关键词】肝癌;青蒿琥酯;细胞周期;细胞凋亡;线粒体膜电位【作者】刘亮;刘江惠;陈乐彤;巨英超;王静;周荣秒;黄茜;霍向然;田芸婕【作者单位】050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院实验动物中心;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所;050011 石家庄河北医科大学第四医院肿瘤研究所【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝癌是较常见的消化道恶性肿瘤，发病率和病死率高，预后较差，尽管肝癌的治疗方法包括手术、介入治疗及放化疗等综合治疗，但5年生存率仍然很低[1-2]。
青蒿琥酯通过下调TRAF6抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的实验研究
青蒿琥酯通过下调TRAF6抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的实验研究翟晓芳,秦国庆,梁晓清摘要目的:探讨青蒿琥酯对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及可能机制㊂方法:体外培养H9c2细胞,用不同剂量(0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯孵育H9c2细胞24h,应用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,观察青蒿琥酯对H9c2细胞活性的影响㊂另将不同剂量(0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯孵育H9c2细胞24h后,用LPS进行诱导,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)㊁肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达,蛋白质印迹法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白表达㊂转染TRAF6过表达载体至H9c2细胞,经青蒿琥酯和/或LPS干预后,上述相同方法检测细胞凋亡㊁IL-1β㊁IL-6和TNF-α表达及TRAF6蛋白表达㊂结果:与0mmol/L青蒿琥酯组比较,不同剂量(0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯组H9c2细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05);不同剂量(0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯提高LPS诱导的H9c2细胞存活率,而降低细胞凋亡率和炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达,同时降低细胞中TRAF6蛋白表达(P<0.05)㊂上调TRAF6,降低LPS诱导的H9c2细胞存活率,而增加细胞凋亡率和IL-1β㊁IL-6㊁TNF-α的表达㊂上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞凋亡㊁IL-1β㊁IL-6㊁TNF-α及TRAF6蛋白表达具有影响㊂结论:青蒿琥酯可能通过下调TRAF6抑制LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达和细胞凋亡㊂关键词青蒿琥酯;心肌细胞;炎症;凋亡;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.18.009Experimental Study of Artesunate Inhibiting LPS-induced Cardiomyocyte Inflammatory Response and Apoptosis by Down-regulating TRAF6ZHAI Xiaofang,QIN Guoqing,LIANG XiaoqingShijiazhuang Ping'an Hospital,Shijiazhuang050000,Hebei,China,E-mail:**************Abstract Objective:To investigate the effect of artesunate on lipopolysaccharide(LPS)-induced inflammatory response and apoptosis in cardiomyocytes H9c2.Methods:H9c2cells were cultured in vitro and incubated with different doses(0,0.1,0.2,0.4mmol/L)of artesunate for24h.The Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit(CCK-8)was used to detect cell viability in order to observe the effect of artesunate on the activity of H9c2cells.In addition,H9c2cells were incubated with different doses(0,0.1,0.2,0.4mmol/L)of artesunate for24h,then induced with LPS K-8method was used to detect the cell viability;flow cytometry was used to detect apoptosis;enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to detect the expressions of interleukin-1β(IL-1β),interleukin-6 (IL-6),and tumor necrosis factor-α(TNF-α);Western Blot was used to detect the expression of turmour necrosis factor receptor-associated factor6 (TRAF6)protein.TRAF6overexpression vector transfected into H9c2cells after artesunate and/or LPS intervention;the same method as above was used to detect cell apoptosis,IL-1β,IL-6,TNF-αexpression,and TRAF6protein expression.Results:Compared with the0 mmol/L artesunate group,there was no significant difference in the survival rate of H9c2cells in different doses(0.1,0.2,0.4mmol/L) artesunate groups(P>0.05);different doses(0.1,0.2,0.4mmol/L)of artesunate increased the survival rate of H9c2cells induced by LPS,decreased the apoptosis rate and the expression of inflammatory factors IL-1β,IL-6,and TNF-α,and decreased the TRAF6protein in cells expression(P<0.05).Up-regulation of TRAF6could reduce the survival rate of H9c2cells induced by LPS,but increase the apoptosis rate and the expressions of IL-1β,IL-6,and TNF-α.Up-regulation of TRAF6could reverse the effects of artesunate on LPS-induced H9c2cell apoptosis,IL-1β,IL-6,TNF-α,and TRAF6protein expression.Conclusion:Artesunate may inhibit LPS-induced expression of inflammatory factors and apoptosis in H9c2cells by down-regulating TRAF6.Keywords artesunate;cardiomyocytes;inflammation;apoptosis;experimental study心肌炎是临床常见心肌疾病,其症状主要有心律失常㊁急性心功能不全等㊂研究认为,心肌损伤如心肌细胞过度炎症反应及心肌细胞凋亡等与心肌炎的发生发展密切相关[1],抑制心肌损伤对心肌炎的治疗尤为重要㊂青蒿琥酯是青蒿素的一种半合成衍生物,具有抗炎㊁免疫调节等作用[2]㊂研究显示,青蒿琥酯可通过抑制肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)/p65信号通路减轻脂多糖(LPS)诱导的人结肠上皮细胞炎性损基金项目河北省科技计划项目(No.20151590)作者单位石家庄平安医院(石家庄050000),E-mail:**************引用信息翟晓芳,秦国庆,梁晓清.青蒿琥酯通过下调TRAF6抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应和细胞凋亡的实验研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(18):3342-3346.伤,并促进细胞增殖,有望成为治疗结肠炎的药物[3];青蒿琥酯可通过激活黏附斑激酶/磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(FAK/PI3K/AKT)信号通路对缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡发挥抑制作用,其是治疗心肌缺血再灌注的替代药物[4]㊂但是,还鲜见青蒿琥酯影响脓毒症诱导的心肌损伤的相关报道㊂TRAF6是肿瘤坏死因子受体超家族和白细胞介素-1(IL-1)受体信号转导的关键衔接分子,其可通过激活核转录因子(NF)-κB信号通路参与调控细胞凋亡㊁氧化应激及炎症反应等过程[5]㊂既往研究显示,TRAF6参与心肌损伤的发展进程,过表达miR-506-3p可通过下调TRAF6抑制心肌组织炎症反应及心肌细胞凋亡,减轻心肌炎性损伤[6]㊂本研究建立LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤模型,观察青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞炎症反应和细胞凋亡的影响及其能否通过调控TRAF6发挥作用,以期为脓毒症诱导的心肌损伤治疗提供新途径㊂1材料与方法1.1细胞与试剂H9c2细胞,上海通派生物科技有限公司;胎牛血清,浙江天杭生物科技股份有限公司;青蒿琥酯,纯度> 98%,陕西藤迈生物科技有限责任公司;DMEM培养液㊁Lipofectamine TM2000试剂盒㊁二喹啉甲酸法(BCA)蛋白检测试剂盒和V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)凋亡试剂盒,北京索莱宝科技有限公司;蛋白质印迹实验所需抗体,中国Abcam公司;白细胞介素-1β(IL-1β)㊁白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)试剂盒,南京建成生物工程研究所有限公司;TRAF6过表达载体(pcDNA-TRAF6)和空载体(pcDNA),上海生工生物工程股份有限公司㊂1.2方法1.2.1细胞培养用完全培养液(含10%胎牛血清的DMEM培养液)置于二氧化碳培养箱中培养H9c2细胞㊂1.2.2细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率于96孔板中接种0.2mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h㊂1)分别用含0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L青蒿琥酯的培养液孵育24h[3];2)加含1μg/mL LPS[7]的培养液诱导细胞2h,并依次记为LPS组㊁LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组,同时设置对照组(Con组)常规培养,既不用青蒿琥酯孵育,也不用LPS诱导㊂各组培养结束后,向每孔中加10μL CCK-8,孵育2h,用酶标仪测定各孔在450nm处的吸光度(A)值㊂存活率(%)= A实验组/A对照组ˑ100%㊂1.2.3流式细胞术检测细胞凋亡于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h后,按照上述1.2.2中的2)分组处理㊂各组培养结束后,收集细胞,用PBS清洗㊂加500μL结合缓冲液,重悬细胞㊂加10μL Annexin V-FITC,避光孵育15min㊂再加5μL PI,避光孵育5min,利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡㊂1.2.4酶联免疫吸附法检测IL-1β㊁IL-6㊁TNF-α于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h后,按照上述1.2.2中的2)进行分组处理㊂各组培养结束后,收集细胞上清液,3500r/min离心10min㊂取上清,分别利用IL-1β㊁IL-6和TNF-α试剂盒采用酶联免疫吸附法检测其水平㊂1.2.5蛋白质印迹法检测TRAF6蛋白表达于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养4h后,按照上述1.2.2中的2)进行分组处理㊂各组培养结束后,将细胞中总蛋白用RIPA试剂提取出来,并检测蛋白浓度(BCA法)㊂用SDS-PAGE实验对总蛋白进行分离,并转至聚偏二氟乙烯膜(PVDF),用5%脱脂奶粉封闭2h㊂于4ħ冰箱中分别用稀释的TRAF6和GAPDH(内参)一抗孵育过夜,稀释度均为1ʒ1000㊂洗膜,用山羊抗兔二抗(1ʒ2000)在室温下孵育1h㊂加显影液显影,曝光拍照,Image J软件分析蛋白条带灰度值㊂1.2.6细胞转染于6孔板中接种2.5mL H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),培养24h后,利用LipofectamineTM2000试剂盒分别转染pcDNA㊁pcDNA-TRAF6,转染时间为12h,蛋白质印迹法检测TRAF6蛋白表达验证转染效果㊂于6孔板中接种2.5mL转染pcDNA㊁pcDNA-TRAF6的H9c2细胞(5.0ˑ104个/mL),按照LPS组处理,记为LPS+pcDNA组㊁LPS+pcDNA-TRAF6组;按照LPS+高青蒿琥酯剂量组处理,记为LPS+青蒿琥酯+pcDNA 组㊁LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组㊂各组细胞处理后,按照上述1.2.3至1.2.5中方法检测细胞凋亡㊁炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α表达及TRAF6蛋白表达㊂1.3统计学处理应用SPSS22.0软件进行统计分析㊂符合正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较先用单因素方差进行分析,再使用LSD-t检验进行组间两两比较,以P< 0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1青蒿琥酯对心肌细胞H9c2增殖活性的影响不同剂量(0㊁0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯组H9c2细胞存活率分别为(100.00ʃ0.00)%㊁(99.02ʃ1.64)%㊁(98.78ʃ1.12)%㊁(99.67ʃ0.33)%,4组间比较差异无统计学意义(F=2.835,P=0.054)㊂与0mmol/L青蒿琥酯组比较,不同剂量(0.1㊁0.2㊁0.4mmol/L)青蒿琥酯组H9c2细胞存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05),说明此浓度范围内的青蒿琥酯对H9c2细胞无毒性㊂2.2青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2增殖活性的影响Con组㊁LPS组㊁LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞存活率分别为(100.00ʃ0.00)%㊁(62.14ʃ1.70)%㊁(71.75ʃ2.96)%㊁(80.13ʃ1.69)%㊁(89.34ʃ2.14)%,组间存活率比较差异有统计学意义(F=519.352,P< 0.05)㊂LPS组H9c2细胞存活率低于Con组(P<0.05); LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞存活率均高于LPS组(P<0.05),且LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞存活率两两比较差异有统计学意义(P<0.05)㊂2.3青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2凋亡及炎性因子的影响LPS组H9c2细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均高于Con组(P<0.05);LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均低于LPS组(P<0.05),且LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组各检测指标两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)㊂详见图1㊁表1㊂图1青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响(A为Con组;B为LPS组;C为LPS+低青蒿琥酯剂量组;D为LPS+中青蒿琥酯剂量组;E为LPS+高青蒿琥酯剂量组)表1青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞凋亡及炎性因子表达的影响(xʃs)组别样本量凋亡率(%)IL-1β(pg/mL)IL-6(pg/mL)TNF-α(pg/mL) Con组9 6.34ʃ0.2060.48ʃ6.9741.84ʃ6.7787.58ʃ8.80 LPS组922.16ʃ1.06①399.22ʃ15.00①254.45ʃ20.66①432.84ʃ31.16①LPS+低青蒿琥酯剂量组919.73ʃ0.64②328.23ʃ18.94②203.29ʃ8.28②341.67ʃ21.32②LPS+中青蒿琥酯剂量组915.14ʃ0.39②③240.59ʃ13.28②③142.81ʃ10.46②③233.41ʃ14.74②③LPS+高青蒿琥酯剂量组911.42ʃ0.58②③④138.89ʃ15.04②③④73.87ʃ7.21②③④157.63ʃ19.15②③④F值881.040819.391497.444415.191P<0.05<0.05<0.05<0.05注:LPS组与Con组比较,①P<0.05;与LPS组比较,②P<0.05;与LPS+低青蒿琥酯剂量组比较,③P<0.05;与LPS+中青蒿琥酯剂量组比较,④P<0.05㊂2.4青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2中TRAF6蛋白表达的影响Con组㊁LPS组㊁LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量分别为0.12ʃ0.01㊁0.74ʃ0.06㊁0.54ʃ0.04㊁0.34ʃ0.03㊁0.24ʃ0.02,5组间TRAF6蛋白表达量比较差异有统计学意义(F=413.727, P<0.05)㊂LPS组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量高于Con组(P<0.05);LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量均低于LPS组(P< 0.05),且LPS+低青蒿琥酯剂量组㊁LPS+中青蒿琥酯剂量组和LPS+高青蒿琥酯剂量组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达量两两比较差异有统计学意义(P<0.05)㊂详见图2㊂图2青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞中TRAF6蛋白表达的影响2.5TRAF6转染效率TRAF6蛋白在转染pcDNA-TRAF6的H9c2细胞中的表达量为0.56ʃ0.05,较转染pcDNA的H9c2细胞中的表达量0.14ʃ0.02升高(t=-23.398,P< 0.05),说明转染pcDNA-TRAF6的H9c2细胞中TRAF6较转染pcDNA的细胞上调㊂详见图3㊂图3TRAF6蛋白表达的检测2.6上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导的心肌细胞H9c2凋亡及炎性因子表达的影响LPS+pcDNA-TRAF6组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达㊁细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均高于LPS+pcDNA组(P<0.05)㊂LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组H9c2细胞中TRAF6蛋白表达㊁细胞凋亡率及炎性因子IL-1β㊁IL-6和TNF-α的表达均高于LPS+青蒿琥酯+pcDNA组(P<0.05)㊂详见图4㊁图5及表2㊂图4上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞凋亡的影响(A为LPS+pcDNA组;B为LPS+pcDNA-TRAF6组;C为LPS+青蒿琥酯+pcDNA组;D为LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组)图5上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导蛋白表达的影响表2上调TRAF6逆转青蒿琥酯对LPS诱导H9c2细胞凋亡及炎性因子表达的影响比较(xʃs)组别样本量TRAF6凋亡率(%)IL-1β(pg/mL)IL-6(pg/mL)TNF-α(pg/mL) LPS+pcDNA组90.72ʃ0.0622.12ʃ1.10406.53ʃ18.46252.51ʃ25.62434.35ʃ19.84 LPS+pcDNA-TRAF6组9 1.72ʃ0.09①29.30ʃ2.04①645.13ʃ33.41①419.47ʃ30.50①628.13ʃ42.69①LPS+青蒿琥酯+pcDNA组90.23ʃ0.0211.70ʃ0.77134.98ʃ14.0277.11ʃ6.77163.67ʃ14.30 LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组90.60ʃ0.04②21.02ʃ1.00②336.58ʃ17.22②235.70ʃ23.99②384.97ʃ15.64②F值1065.526269.877817.903319.371491.993P<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05注:LPS+pcDNA-TRAF6组与LPS+pcDNA组比较,①P<0.05;LPS+青蒿琥酯+pcDNA-TRAF6组与LPS+青蒿琥酯+ pcDNA组比较,②P<0.05㊂3讨论心肌炎发生发展与感染㊁自身免疫性疾病㊁物理化学刺激等多种因素有关㊂LPS又被称为内毒素,是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,其可诱导心肌细胞分泌TNF-α㊁IL-1β和IL-6等炎性因子,产生过度的炎症反应,进一步诱导心肌细胞坏死或凋亡,引发心肌炎[8]㊂本研究结果显示,大鼠心肌细胞H9c2经LPS诱导后, TNF-α㊁IL-1β和IL-6的分泌量明显增加,且凋亡率升高,说明LPS诱导H9c2细胞产生了炎症反应及细胞凋亡,模型建立成功㊂青蒿琥酯具有多种药理活性㊂研究显示,青蒿琥酯对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞炎性因子释放具有显著抑制作用,这与其抑制细胞中Toll样受体4 (TLR4)通路的活化有关[9];青蒿琥酯通过激活AKT/血红素氧合酶(HO-1)信号通路抑制过氧化氢(H2O2)诱导的晶状体上皮细胞氧化应激和细胞凋亡,提示其具有减轻白内障的作用[10];青蒿琥酯可抑制肾缺血再灌注引起的炎性因子释放及细胞焦亡,减轻肾缺血再灌注损伤[11];青蒿琥酯可抑制氧糖剥夺/复氧诱导的心肌细胞炎症㊁铁蓄积和脂质过氧化,减轻心肌细胞铁死亡,并增强细胞活力,缓解细胞损伤,提示青蒿琥酯具有心肌保护作用[12]㊂本实验首先观察到一定浓度范围的青蒿琥酯对心肌细胞H9c2无毒性,且青蒿琥酯可提高LPS诱导的H9c2细胞增殖活性,抑制细胞分泌IL-1β㊁IL-6和TNF-α炎性因子,同时减少细胞凋亡,这一结果与洪莉莉等[12]研究结果基本一致,说明青蒿琥酯可抑制LPS诱导的H9c2细胞炎症反应及细胞凋亡,提示其具有减轻或治疗脓毒症心肌损伤的作用,对心肌损伤具有保护作用㊂有研究证实,TRAF6与心肌炎的发生发展密切相关[13]㊂下调TRAF6可通过抑制NF-κB通路诱导M2巨噬细胞极化,从而减轻病毒性心肌炎[14];miR-146a 可通过靶向抑制TRAF6并阻碍NF-κB信号通路的激活改善心肌炎[15]㊂本研究显示,心肌细胞H9c2经LPS诱导后,细胞中TRAF6蛋白表达增加,而过表达TRAF6促进LPS诱导的心肌细胞分泌IL-1β㊁IL-6和TNF-α炎性因子,促进细胞凋亡,这提示TRAF6对心肌炎发生发展起促进作用㊂为了探究青蒿琥酯能否通过调控TRAF6影响LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达和细胞凋亡,本研究检测了其对LPS诱导的H9c2细胞中TRAF6蛋白表达的影响,结果显示,青蒿琥酯呈剂量依赖性抑制LPS诱导的H9c2细胞中TRAF6蛋白表达;同时恢复实验结果显示,过表达TRAF6逆转了青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞炎性因子及细胞凋亡的抑制作用,这提示青蒿琥酯通过下调TRAF6来抑制LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达及细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用㊂综上所述,一定剂量的青蒿琥酯对LPS诱导的H9c2细胞炎性因子表达及细胞凋亡具有抑制作用,这可能与其下调了细胞中TRAF6蛋白表达有关,具有治疗心肌炎的潜在价值㊂参考文献:[1]WANG L,ZHANG Y Y,ZHU G F,et al.miR-16exhibits protectivefunction in LPS-treated cardiomyocytes by targeting DOCK2torepress cell apoptosis and exert anti-inflammatory effect[J].CellBiol Int,2020,44(8):1760-1768.[2]LIU Y,DANG W,ZHANG S Y,et al.Artesunate attenuatesinflammatory injury and inhibits the NF-κB pathway in a mousemodel of cerebral ischemia[J].J Int Med Res,2021,49(11):3000605211053549.[3]蒋师,张兴强.青蒿琥酯对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症反应影响的分子机制研究[J].实用药物与临床,2017,20(11):1256-1259.[4]FAN S Y,ZHANG D Y,LIU F Y,et al.Artesunate alleviatesmyocardial ischemia/reperfusion-induced myocardial necrosis inrats and hypoxia/reoxygenation-induced apoptosis in H9c2cellsvia regulating the FAK/PI3K/Akt pathway[J].Ann Transl Med,2020,8(20):1291.[5]ZHU L J,YANG T C,WU Q,et al.Tumor necrosis factor receptor-associated factor(TRAF)6inhibition mitigates the pro-inflammatoryroles and proliferation of rheumatoid arthritis fibroblast-likesynoviocytes[J].Cytokine,2017,93:26-33.[6]阳慧,苏雨江,钟江华,等.miR-506-3p靶向TRAF6抑制心肌炎的炎性反应和心肌细胞凋亡[J].中国老年学杂志,2019,39(19):4813-4817.[7]朱志扬,葛然,杨露露.人参皂苷Rb1通过抑制PI3K/AKT信号通路保护脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应[J].中国循证心血管医学杂志,2018,10(7):823-826.[8]ZHU Z,ZHANG G X,LI D H,et al.Silencing of specificity protein1protects H9c2cells against lipopolysaccharide-induced injury viabinding to the promoter of chemokine CXC receptor4andsuppressing NF-κB signaling[J].Bioengineered,2022,13(2):3395-3409.[9]匡梅,岑彦艳,覃容欣,等.青蒿琥酯对小鼠巨噬细胞RAW264.7中TLR4介导的炎症通路的抑制作用[J].免疫学杂志,2018,34(5):401-406.[10]覃晖,赖莉.青蒿琥酯通过Akt/HO-1信号通路抑制诱导H2O2的晶状体上皮细胞氧化应激和凋亡[J].中国中医眼科杂志,2021,31(9):621-627.[11]袁强,申开文,张瑞波,等.青蒿琥酯通过NLRP3炎症小体抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤[J].器官移植,2021,12(6):733-740.[12]洪莉莉,吴玲娟,何海刚.青蒿琥酯调节PERK/ATF4/CHOP信号通路对OGD/R诱导的心肌细胞铁死亡的影响[J].微循环学杂志,2023,33(1):24-32.[13]杨婷.miR-942-5p靶向TRAF6对病毒性心肌炎细胞损伤的影响[J].中华细胞与干细胞杂志:电子版,2021,11(4):215-221. [14]XUE Y L,ZHANG S X,ZHENG C F,et al.Long non-coding RNAMEG3inhibits M2macrophage polarization by activating TRAF6via microRNA-223down-regulation in viral myocarditis[J].J CellMol Med,2020,24(21):12341-12354.[15]赵思嘉,许蔚起,刘娜,等.miR-146a通过抑制TRAF6减轻自身免疫性心肌炎大鼠心脏炎症并改善其心功能[J].中国分子心脏病学杂志,2015,15(1):1202-1205.(收稿日期:2022-03-28)(本文编辑王雅洁)。
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青蒿琥酯对肝癌HEPG
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青蒿琥酯对肝癌HEPG
【摘要】目的研究青蒿琥酯(artesunate,Art)对肿瘤细胞增殖的影响和机制。
方法MTT法测定青蒿琥酯对HEPG-2细胞增殖的影响，ELISA方法研究Caspase-3的活性，DNA电泳观察细胞DNA的变化，免疫组化研究凋亡相关蛋白p53,bcl-2,bax的表达。
结果青蒿琥酯作用细胞48 h后可明显诱导HEPG-2细胞凋亡，并影响Caspase-3,p53,bcl-2蛋白的表达。
结论青蒿琥酯可明显抑制HEPG-2细胞的增殖，促进HEPG-2细胞的凋亡，其机制可能是通过激活Caspase-3的活性，以及调节p53，bcl-2蛋白的表达而实现的。
【关键词】青蒿琥酯; Casepase-3; P53
1。
青蒿琥酯逆转L929肿瘤细胞的免疫抑制作用
青蒿琥酯抑制人成纤维细胞增殖的实验研究
青蒿琥酯抑制人成纤维细胞增殖的实验研究冀航;王肃生;张志华;梁刚【摘要】Objective Investigate the effects of artesunate(Art) inhibit fibroblast(Fb) proliferation effect and mechanism. Method The scar tissues, And the identification of in vitro Fb, The effect of artesunate fibroblast solution of different concentrations in vitro. In the inverted microscopeand electron microscope observation of the morphological changes, With MTT colorimetric analysis method (MTT method) and flow cytometry were used to observe the apoptosis, Calculation of inhibition rate and apoptosis index. Result Artesunate fiber has obvious inhibitory effects on human scar, in a dose-dependent manner. Concentration of 240, 120 mg/L of artesunate apoptosis rate and necrosis rate than the control group(P<0.01). Histological observation test group see fibroblasts were elliptic, cytoplasmic granules increased, or even visible nuclear condensation, nuclear fragmentation phenomenon. Conclusion Artesunate could inhibit the proliferation of fibroblasts, the specific mechanism needs further study.%目的：探讨青蒿琥酯（Art）抑制人成纤维细胞（Fb）增殖的作用及机制。
青蒿琥酯对T细胞淋巴瘤细胞株凋亡诱导作用的实验研究
１ ． ３ ． ３ Ｊ ｕ ｒ ｋ ａ ｔ 细胞 Ｄ Ｎ Ａ片段 化检测
取对数生 长期 细胞 ，
诱导作 用并探讨其可能 的作用机制 ， 为其进 一步应用于淋 巴 瘤 的临床治疗提供理论依 据。
１ 材 料 和 方 法 １ ． １ 药 品 和 主 要 试 剂
调整浓度 为 １ Ｘ １ ０ ・ ｍ ｌ ～， 加 入青 蒿琥酯 ８ 、 １ ６ 、 ３ ２ ￣ ｇ ／ ｍ ｌ 共
１ ． ３ ． ５ Ｊ ｕ ｒ ｋ ａ ｔ 细胞 Ｂ ｃ ｌ 一 ２ 、 Ｂ ａ ｘ 、 Ｉ Ｃ Ａ Ｄ蛋白表达及 Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ一
注射用青蒿琥酯 ： 桂 林南 药股份 有 限公 司产 品 ， ５ ％碳 酸氢钠 １ ｍｌ 溶解 后 ， 用 Ｒ Ｐ ＭＩ １ ６ ４ ０配制所 需浓 度 。四 甲基 偶氮 唑蓝 （ Ｍ， Ｉ Ｔ ｒ ） 及 Ｐ Ｉ 试剂盒： 购 自Ｓ ｉ ｇ ｍ ａ公 司 ； 细胞 凋 亡 Ｄ Ｎ Ａ Ｌ Ａ Ｄ Ｄ Ｅ Ｒ提取试 剂盒 ： 北京博 大泰 克生 物基 因技 术 有 限公司 ； Ｂ ｃ ｌ 一２ 、 Ｂ ａ ｘ 、 Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ一８ 、 辣根 过氧化 物酶 连接 的抗
同培养 ４ ８ 小时， 收集各组细胞 ， 用Ｐ Ｂ Ｓ洗 ２次 ， 裂解细胞 ， 提
取细胞 Ｄ Ｎ Ａ， 将其 溶于 ２ Ｏ Ｔ Ｅ缓冲液中， 取５ ｌ 加入含 Ｅ Ｂ
的１ ％的琼脂糖凝胶 ， 于５ Ｏ Ｖ恒压 下电泳约 １ 小时 ， 凝胶 自 动成像系统拍照 。 １ ． ３ ． ４ Ｊ ｕ ｒ ｋ ａ ｔ 细胞 凋亡率检测 ８剪切激 活 的测 定 流式细胞 仪检测 。
鼠Ｉ ｓ Ｇ、 辣根 过 氧化 物 酶 连 接 的抗兔 Ｉ ｇ Ｇ： 均购 自美 国 Ｃ ｅ Ｕ Ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ 公司； ａ ｃ ｔ ｉ ｎ和 Ｉ Ｃ Ａ Ｄ单克 隆抗体 ： 美国 Ｓ ａ ｎ ｔ ａ Ｃ ｒ ｕ ｚ 公司
青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞株凋亡、周期的体外作用
青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞株凋亡、周期的体外作用杨斌;陈永顺;李静;陈氏红【期刊名称】《华西药学杂志》【年(卷),期】2008(0)4【摘要】目的研究青蒿琥酯(Art)对肿瘤细胞凋亡、周期的影响。
方法采用MTT 法测定Art与5-FU联用对人肝癌细胞系HEPG-2的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布。
结果Art能明显抑制HEPG-2细胞的生长,并呈明显的时间-剂量效应。
24、48、72 h的IC50分别为103.1±8.6、75.3±4.1、65.7±6.0μg.ml-1。
当10、20μg.ml-1Art与2.5、5.0μg.ml-15-Fu联合使用时,表现出明显的协同作用,并可诱导细胞凋亡,影响细胞周期的分布。
结论Art对人肝癌细胞系HEPG-2的增殖有显著抑制作用。
与5-FU联合使用有协同作用,其机制可能是诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期。
【总页数】3页(P435-437)【关键词】青蒿琥酯;凋亡;细胞周期;人肝癌细胞HEPG-2【作者】杨斌;陈永顺;李静;陈氏红【作者单位】广西医科大学药学院药理教研室【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.中药博癌丸对人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及相关调控基因的影响 [J], 晏雪生;李瀚旻;彭亚琴2.虎杖白藜芦醇对人肝癌HepG-2细胞株增殖和生长周期的影响 [J], 顾生玖;李美波;许有瑞;朱开梅3.Livin mRNA反义寡核苷酸对人肝癌细胞株HepG-2体外增殖及凋亡的影响 [J], 王春霞;杨林西;韩亚萍;路艳;刘玲玲4.葆盛口服液对人肝癌HepG-2细胞株生长和凋亡的影响 [J], 肖义森;江振友;陈琛;岳磊;邹林;肖京中5.青蒿琥酯对人肝癌HEPG-2细胞增殖作用的研究 [J], 李静;杨斌;陈永顺因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青蒿琥酯诱导GH3细胞凋亡及抑制激素分泌相关机制的体外研究的开题报告
青蒿琥酯诱导GH3细胞凋亡及抑制激素分泌相关机制的体外研究的开题报告一、研究背景和意义：青蒿素是从中草药青蒿中提取出来的一种抗疟药物，已被广泛应用于疟疾的防治。
而青蒿琥酯是青蒿素的一种衍生物，具有更高的生物利用度和更好的稳定性。
近年来，研究发现青蒿琥酯除了具有抗疟作用外，还具有抗癌和免疫调节等作用。
GH3细胞是一种垂体前叶腺瘤细胞，在研究垂体前叶腺瘤发生机制，以及激素分泌调节等方面具有广泛应用。
本研究旨在探讨青蒿琥酯对GH3细胞凋亡和激素分泌抑制的相关机制，为进一步研究其抗肿瘤和免疫调节作用提供基础研究支持。
二、研究内容和方法：1.建立GH3细胞株的细胞凋亡模型：通过给药干扰法选取适宜的浓度和处理时间，将GH3细胞分为青蒿琥酯处理组和对照组，通过流式细胞术检测细胞凋亡率。
2.检测青蒿琥酯对GH3细胞激素分泌的影响：选取GH3细胞常见的垂体激素包括生长激素（GH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）等，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同处理条件下GH3细胞的激素分泌水平。
3.探究青蒿琥酯对GH3细胞凋亡和激素分泌的分子机制：通过Western blotting技术检测进入细胞周期的关键调控分子和凋亡相关分子的表达以及下游信号通路的活性，为分子机制的研究提供支持和参考。
三、研究预期结果和意义：1.通过建立GH3细胞株的细胞凋亡模型，研究青蒿琥酯的诱导凋亡作用，并初步探究其相关的分子机制。
2.通过检测GH3细胞激素分泌水平，评价青蒿琥酯对GH3细胞激素分泌的抑制作用，并初步研究其潜在的分子机制。
3.为进一步研究青蒿琥酯的抗肿瘤和免疫调节作用提供基础研究支持，为药物研发提供参考和指导。
青蒿琥酯联合常用化疗药物体外抗肿瘤作用的实验研究的开题报告
青蒿琥酯联合常用化疗药物体外抗肿瘤作用的实验研究的开题报告一、背景和意义癌症是目前全世界面临的共同挑战之一，据统计，每年因癌症导致的死亡人数已经超过了800万。
然而，传统化疗药物存在许多不足，如副作用大、耐药性易产生等问题，限制了其应用范围。
因此，寻找具有高效低毒、不易产生耐药性的新型抗癌药物是重要的研究方向。
青蒿素是一种从青蒿（Artemisia annua L.）提取出来的天然产物，已被广泛用于疟疾的治疗。
近年来，青蒿素及其衍生物在肿瘤治疗领域也受到了广泛关注。
青蒿琥酯作为一种青蒿素衍生物，具有较强的抗肿瘤活性，而且也可以通过调节肿瘤细胞的信号途径、诱导细胞凋亡等途径实现其抗肿瘤效果。
因此，探究青蒿琥酯在肿瘤治疗领域的应用前景，对于开发新型抗癌药物具有重要的意义。
二、研究目的和内容本研究旨在探究青蒿琥酯联合常用化疗药物（如环磷酰胺、顺铂等）体外抗肿瘤作用以及其对肿瘤细胞凋亡、周期等细胞生物学特征的影响，旨在为开发新型抗癌药物提供理论和实验基础。
具体研究内容如下：1. 建立多种肿瘤细胞体外模型，如肺癌细胞、乳腺癌细胞、结直肠癌细胞等。
2. 利用MTT法、流式细胞术、Western blot等方法，评估青蒿琥酯联合常用化疗药物的抗肿瘤效果以及对细胞周期、凋亡等指标的影响。
3. 制备动物模型，观察药物治疗对于肿瘤生长、转移等生物学特征的影响。
三、研究意义和贡献本研究探究青蒿琥酯在肿瘤治疗领域的应用前景，并进一步明确了其联合化疗药物的实验基础，为开发新型抗癌药物提供了理论和实验基础。
此外，该研究成果对于临床癌症治疗具有一定的指导意义，可为肿瘤治疗提供新思路和方法。
青蒿琥酯纳米脂质体抗人肝癌HepG2细胞作用研究
青蒿琥酯纳米脂质体抗人肝癌HepG2细胞作用研究金美华;沈雪松;赵春霞【期刊名称】《华夏医学》【年(卷),期】2011(24)6【摘要】目的:将青蒿琥酯纳米脂质体与青蒿琥酯原料药对比,研究其体外抗肝癌作用.方法:应用青蒿琥酯纳米脂质体和原料药作用HepG2细胞,MTT法检测对细胞的增殖抑制作用；用hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变.应用RT-PCR检测细胞凋亡因子caspas-3表达.结果:青蒿琥酯纳米脂质体及原料药抗肝癌作用呈浓度、时间依赖性；青蒿琥酯纳米脂质体组caspase-3 mRNA表达高于原料药组.结论:青蒿琥酯纳米脂质体可抑制肝癌细胞增殖,诱导其凋亡,青蒿琥酯纳米脂质体体外抗肝癌作用效果比青蒿琥酯原料药好.【总页数】5页(P638-642)【作者】金美华;沈雪松;赵春霞【作者单位】桂林医学院,广西桂林541004;桂林医学院,广西桂林541004;桂林医学院,广西桂林541004【正文语种】中文【中图分类】R965.1;R735.7【相关文献】1.青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及联合化疗药物的抗肝癌效应[J], 刘志龙;曹明溶;李强;高明;蒋建伟2.苦参碱抗人肝癌细胞株HepG2的作用及其机制研究 [J], 司维柯;李鹏;王源;姚婕3.青蒿琥酯对人肝癌细胞HepG2增殖迁移及细胞凋亡的影响 [J], 贺莉;师如意;胡晓玲;杨斌;魏志刚;秦楠;董静逊4.抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用 [J], 张军;马远方;刘广超;李淑莲5.青蒿琥酯纳米脂质体抗肝癌作用及其与肝脏中药物含量关系研究 [J], 金美华;沈雪松;赵春霞;唐柳;秦雪莲;刘汉甫;黄丽芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青蒿琥酯抗肿瘤作用机制与临床应用的研究进展
青蒿琥酯抗肿瘤作用机制与临床应用的研究进展
李异兴;李曦雯;农晓琳
【期刊名称】《天然产物研究与开发》
【年(卷),期】2016(028)006
【摘要】青蒿素的可溶性衍生物青蒿琥酯(Artesunate,ART)具有潜在的抗肿瘤作用,能够抑制乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、宫颈癌以及白血病等多种人类常见肿瘤.其作用机制是多方面的,包括抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞分化和凋亡、调控细胞信号转导、抑制肿瘤血管新生、抑制肿瘤侵袭转移、增敏抗肿瘤化疗药物等.近年来有新的研究表明,ART亦可逆转肿瘤细胞的多药耐药作用,且抗氧化可能也是其抗肿瘤的机制之一.本文对近年来ART抗肿瘤作用机制的实验研究作了全面的归纳分析,并对ART抗肿瘤作用机制及其临床应用进行了综述.
【总页数】4页(P986-989)
【作者】李异兴;李曦雯;农晓琳
【作者单位】广西医科大学口腔医学院口腔颌面外科,南宁 530021;广西医科大学口腔医学院口腔颌面外科,南宁 530021;广西医科大学口腔医学院口腔颌面外科,南宁 530021
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.藏药红景天抗肿瘤作用机制及临床应用研究进展 [J], 姜建伟;章红燕;芦柏震
2.中药蜈蚣抗肿瘤作用机制及临床应用研究进展 [J], 姜建伟;何福根;章红燕
3.沙立度胺抗肿瘤作用机制与临床应用研究进展 [J], 施有琴;王荣;谢华;贾正平;郭志强;郭立方
4.全蝎抗肿瘤作用机制及临床应用研究进展 [J], 章红燕;何福根;王奇
5.多糖抗肿瘤作用机制及临床应用研究进展 [J], 袁会成;齐玉秀;赵良存
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青蒿琥酯诱导人原代白血病细胞凋亡及相关基因表达的研究的开题报告
青蒿琥酯诱导人原代白血病细胞凋亡及相关基因表达的研究的开题报告题目：青蒿琥酯诱导人原代白血病细胞凋亡及相关基因表达的研究研究背景：白血病是一种致命的恶性肿瘤，目前治疗方法主要包括化疗、放疗和造血干细胞移植等，但仍然存在很大的治疗难度和治疗失败率。
因此，寻找新的治疗手段是十分必要的。
青蒿琥酯作为一种中药成分，已经证明具有独特的抗肿瘤作用，对于白血病的治疗具有很高的潜力。
研究内容：本研究将使用青蒿琥酯对人原代白血病细胞进行处理，通过形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡率来评价青蒿琥酯对白血病细胞凋亡的作用。
同时，使用基因芯片进行差异基因筛选，并使用实时荧光定量PCR技术进行相关基因的验证，进一步研究青蒿琥酯对白血病细胞凋亡的分子机制。
研究意义：本研究的结果有望为白血病的治疗提供新的思路和依据，同时也可以进一步明确青蒿琥酯对肿瘤的作用机制，为该成分的临床应用提供更好的理论支持。
研究方法：1. 提取人原代白血病细胞，并将其分为青蒿琥酯处理组和对照组；2. 对不同处理组进行形态学观察，检测细胞凋亡率；3. 使用基因芯片进行差异基因筛选，选择与凋亡相关的基因进行进一步研究；4. 利用实时荧光定量PCR技术验证差异表达基因；5. 对差异表达基因的功能和分子机制进行进一步研究。
预期结果：1. 青蒿琥酯具有显著的诱导人原代白血病细胞凋亡的作用；2. 青蒿琥酯可影响多种与白血病细胞凋亡有关的基因的表达；3. 探究青蒿琥酯对白血病细胞凋亡的分子机制。
研究进度：1. 提取人原代白血病细胞并分组，完成形态学观察和流式细胞术检测细胞凋亡率，目前进行中；2. 基因芯片筛选和验证的实验正在进行中；3. 对差异表达基因的进一步研究将在未来继续进行。
参考文献：1. 张琳, 李娜, 王玲, 等. 青蒿琥酯类化合物诱导人口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞凋亡的分子机制初步研究[J]. 临床口腔医学杂志, 2016,32(10): 624-627.2. 段锋锐, 尚占斌, 吕秀, 等. 青蒿素及其衍生物诱导人肝癌细胞凋亡的作用及机制探讨[J]. 中国医药科学, 2004, 29(4): 28-30.。
青蒿琥酯下调人喉癌细胞所致 T 细胞免疫抑制的体外实验研究
青蒿琥酯下调人喉癌细胞所致 T 细胞免疫抑制的体外实验研究杨彦忠;崔澂;马有祥;唐坚;段乃超;任秀敏【摘要】目的：体外实验研究青蒿琥酯（ ART）对人喉癌细胞所致T细胞免疫抑制的影响。
方法制备经ART预处理的人喉癌Hep-2细胞培养上清（ART-S），收集连续2次再培养的上清（分别称为ART-S1、ART-S2），以不经ART作用的Hep-2及其上清作对照；分析对人外周血单个核细胞经光镜观察、噻唑蓝（MTT）法测定的植物血凝素（ PHA）诱导淋巴细胞转化增殖反应，以及流式细胞计数（FCM）法检测的T淋巴细胞表面CD3ε＋、CD3ε＋ζ＋、IL-2Rα＋表达的影响。
结果 Hep-2对5项免疫指标的抑制率分别为（52？．58±6．13）％、（50．34±7．26）％、（45．28±5．38）％、（39．74±5．27）％、（64．25±9．37）％。
ART作用后，可显著下调Hep-2所致T细胞免疫抑制（ P ＜0．01）；第1次再培养后，对淋巴细胞转化、诱导增殖、IL-2Rα表达抑制的逆转均明显降低，与ART-S比较差异有统计学意义（ P ＜0．01），对CD3ε＋及CD3ε＋ζ＋表达抑制的逆转持续增强，与ART-S比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）；第2次再培养后，对淋巴细胞转化、诱导增殖、IL-2Rα表达抑制的逆转继续保持，与ART-S1比较差异无统计学意义（ P＞0．05），对CD3ε＋、CD3ε＋ζ＋表达抑制的逆转明显下降回复至 ART-S水平，差异无统计学意义（ P ＞0．05）。
结论人喉癌Hep-2细胞可产生T细胞免疫抑制作用，ART可对其产生稳定的逆转作用。
下调肿瘤免疫抑制是ART的重要抗瘤机制之一。
%Objective To investigate the effects of Artesunate ( ART ) on T lymphocytes ’ immunosuppression in human laryngocarcinoma cells in vitro .Met hods The supernatants from Hep-2 ( human laryngocarcinomacell line ) were pretreated with ART ( ART-S) ,then the supernatants cultured for the first time and the second time were collected ( ART-S1 and ART-S2,respectively),and the corresponding supernatants and Hep-2 without ART treatment were served as control group.The effects of different supernatants on immune parameters in human peripheral blood mononuclear cells were analyzed , including the lymphocytes proliferation induced by phytohemagglutinin (PHA),which was detected by MTT and microscope observation,and expressions of CD3ε+,CD3ε+ζ+and IL-2Rα+were measured by flow cytometry (FCM).Results The inhibitory rates of five immune parameters caused by Hep -2 cellswere52.58%±6.13%,50.34%±7.26%,45.28%±5.38%,39.74%±5.27%,64.25%±9.37%,respectively.After pretreated with ART,the inhibition effects caused by Hep-2 were significantly decreased ( P <0.01 ).After the first culture, the reversing effect on the inhibition of lymphocytes transformation,induced proliferation and the expression of IL-2Rα+were significantly decreased in ART-S1 group, as compared with those in ART-S group ( P <0.01),and the reversing effects on the inhibition of CD3ε+and CD3ε+ζ+expressions were obviously kept,as compared with those in ART-S group ( P <0.05).After the second culture,there were no significant differences in , reversing effects on the inhibition of lymphocytes transformation , induced proliferation and the expression of IL-2Rα+between ART-S2 group and ART-S1 group ( P >0.05),nor were the reversing effects on the inhibition of CD3ε+and CD3ε+ζ+expressions between ART-S2 group and ART-S1 group ( P >0.05).Conclusion Humanlaryngocarcinoma Hep-2 cells have T lymphocytes immunosuppression effects .However Artesunate can steadily reversethe immunosuppression effects.Down-regulating tumor immunosuppression effect may be one of important anti -tumor actionmechanisms of Artesunate.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2015(000)007【总页数】5页(P972-976)【关键词】青蒿琥酯;喉癌;Hep-2细胞;T淋巴细胞;免疫抑制;逆转【作者】杨彦忠;崔澂;马有祥;唐坚;段乃超;任秀敏【作者单位】050000 石家庄市，河北医科大学第二医院耳鼻喉科;中国人民解放军白求恩医务士官学校医学技术系;首都医科大学附属北京友谊医院耳鼻咽喉头颈外科;中国人民解放军白求恩医务士官学校医学技术系;050000 石家庄市，河北医科大学第二医院耳鼻喉科;050000 石家庄市，河北医科大学第二医院耳鼻喉科【正文语种】中文【中图分类】R285.5E-mail:*********************喉癌是喉部最常见的恶性肿瘤，近年来发病率有明显增长的趋势［1］。
青蒿琥酯影响L 929和Colon 26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究
青蒿琥酯影响L 929和Colon 26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究崔澄;胡建军;张拥军;李保红;王润田;刘景东;佟慧【期刊名称】《白求恩军医学院学报》【年(卷),期】2006(004)003【摘要】目的研究青蒿琥酯对L 929和Colon 26肿瘤细胞培养上清免疫抑制作用的影响.方法制备体外经青蒿琥酯作用后,彻底洗去青蒿琥酯,再以新鲜培养液培养L 929及Colon 26,收取再培养上清,同时以不经青蒿琥酯作用的L 929及Colon 26同步处理的相应上清作对照.实验研究这些上清对小鼠脾细胞MTT法测定的NK杀伤和Con A诱导转化,以及流式细胞计数分析的CD 4+及CD 8+表达的影响.结果与对照组上清相比,青蒿琥酯作用L 929和Colon 26后,其第一次(A-L 1、A-C 1)及第二次48 h再培养上清(A-L 2、A-C 2)对Con A诱导小鼠脾细胞转化的抑制率均明显降低(分别为37.50%±6.58%,P＜0.01;27.83%±5.50%,P＜0.05;48.71%±3.52%,P＜0.01;5.48%±1.22%,P＜0.01);CD 4+CD 8-细胞表达百分率均明显升高(分别为15.30%±3.51%,P＜0.01;27.68%±2.78%,P＜0.05;10.69%±3.42%,P＜0.01;28.02%±1.08%,P＜0.01);A-L 1、A-L 2及A-C 1上清作用后,NK杀伤活性均明显升高(杀伤率分别为67.58%±4.83%,P＜0.01;66.14%±4.10%,P＜0.01;57.21%±3.38%,P＜0.05),A-C 2对NK杀伤未产生明显改变(杀伤率为45.42%±8.98%,P＞0.05).结论青蒿琥酯可下调L 929及Colon 26肿瘤细胞培养上清的免疫抑制,下调肿瘤免疫抑制可能是青蒿琥酯的抗肿瘤新机制之一.【总页数】3页(P129-131)【作者】崔澄;胡建军;张拥军;李保红;王润田;刘景东;佟慧【作者单位】050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050081,石家庄,白求恩军医学院;050017,石家庄,河北医科大学基础所免疫室;050081,石家庄,白求恩军医学院;050017,石家庄,河北医科大学基础所免疫室【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.氧化苦参碱对L929肿瘤细胞免疫抑制作用的影响 [J], 刘欣燕;王润田;崔潋;王智华;佟慧;邓郁青;张征峥2.川芎嗪下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究 [J], 崔澂;王润田;张宇辉;支国成;王智华;邓郁青;张征峥3.青蒿琥酯逆转L929肿瘤细胞的免疫抑制作用 [J], 刘欣燕;王润田;崔澂;王智华;佟慧;邓郁青;张征峥4.氧化苦参碱下调小鼠Colon26肿瘤细胞免疫抑制作用的体外实验 [J], 崔澂;王润田;佟慧;王智华;邓郁青5.青蒿琥酯、苦参素对Colon26肿瘤细胞免疫抑制的影响 [J], 崔澂;王润田;佟慧;王智华;丁军颖;张征峥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青蒿琥酯的抗肿瘤作用研究
青蒿琥酯的抗肿瘤作用研究周从明;王小渝;吴康玉;张西【期刊名称】《肿瘤预防与治疗》【年(卷),期】2006(019)002【摘要】目的:研究青蒿琥酯的抗肿瘤作用.方法:用青蒿琥酯或全铁转铁蛋白联合青蒿琥酯进行体外抗肿瘤实验,用MTT法检测青蒿琥酯对体外培养人结肠癌HCT-8细胞、人红白血病K562细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的杀伤作用.结果:体外实验表明青蒿琥酯对上述3种人肿瘤细胞均有杀伤作用,对HCT-8、K562、MCF-7的IC50值为1.99μg/ml、1.62μg/ml、10.54μg/ml;加用1mg/ml全铁转铁蛋白处理3小时后再给予青蒿琥酯,其IC50值分别为3.54μg/ml、4.14μg/ml、11.95μg/ml.结论:青蒿琥酯钠在体外对HCT-8、K562、MCF-7等细胞有明显的杀伤作用,加用全铁转铁蛋白未明显增强对肿瘤细胞的杀伤作用.【总页数】4页(P89-91,94)【作者】周从明;王小渝;吴康玉;张西【作者单位】成都市第三人民医院血液肿瘤科,四川,成都,610031;成都市第三人民医院血液肿瘤科,四川,成都,610031;成都市第三人民医院血液肿瘤科,四川,成都,610031;成都市第三人民医院血液肿瘤科,四川,成都,610031【正文语种】中文【中图分类】R73-35+4【相关文献】1.青蒿琥酯抗肿瘤作用实验研究 [J], 冯德宏2.青蒿琥酯抗肿瘤作用研究进展 [J], 王国栋;高福莲3.青蒿琥酯抗肿瘤作用机制与临床应用的研究进展 [J], 李异兴;李曦雯;农晓琳4.青蒿琥酯配伍丝裂霉素抗肿瘤作用的实验研究 [J], 曹洋;张玉萌5.细胞穿膜肽PFV修饰紫杉醇/青蒿琥酯共载靶向胶束的制备及体外抗肿瘤作用研究 [J], 王为;李学涛;孔亮;姜爽;罗一夫;王晓波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
青蒿琥酯抗肿瘤实验研究进展
青蒿琥酯抗肿瘤实验研究进展
盛庆寿
【期刊名称】《广州中医药大学学报》
【年(卷),期】2007(24)5
【摘要】综述近年来国内外青蒿琥酯抗肿瘤的体内外实验研究,探讨其抗肿瘤作用机理.认为青蒿琥酯抗肿瘤机理与其对肿瘤细胞株有直接杀伤作用,或与诱导细胞凋亡有关,还可能与其抑制肿瘤组织血管生成等有关.诱导肿瘤组织细胞凋亡的分子机制是通过p53非依赖性途径,与调节bcl-2基因下调、影响拓扑异构酶活性等有关.另外,青蒿琥酯与5-氟尿嘧啶(5-Fu)有协同抗肿瘤作用,铁剂可能对青蒿琥酯有明显的协同抑瘤作用.目前对青蒿琥酯抗肿瘤的研究尚处在肿瘤细胞和动物实验水平,研究得出的结果也不完全一致,青蒿琥酯的剂量、疗程等不统一,今后有必要进一步合理开展基础和临床研究,从而开发出抗癌新品.
【总页数】3页(P438-440)
【作者】盛庆寿
【作者单位】广州中医药大学,广州,510405
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
【相关文献】
1.青蒿琥酯抗肿瘤作用实验研究 [J], 冯德宏
2.青蒿琥酯抗肿瘤作用研究进展 [J], 张燕丽
3.青蒿琥酯抗肿瘤作用研究进展 [J], 王国栋;高福莲
4.青蒿琥酯抗肿瘤作用机制与临床应用的研究进展 [J], 李异兴;李曦雯;农晓琳
5.青蒿琥酯抗肿瘤多耐药的作用及其研究进展 [J], 向敏; 林芳
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青蒿琥酯免疫调节作用的研究进展
青蒿琥酯免疫调节作用的研究进展
胡俊平;李燕
【期刊名称】《河南中医》
【年(卷),期】2007(27)11
【总页数】2页(P85-86)
【关键词】青蒿琥酯;免疫调节;免疫细胞;细胞因子;免疫球蛋白;补体;酶
【作者】胡俊平;李燕
【作者单位】成都中医药大学
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.青蒿琥酯抗病原微生物及免疫学研究进展 [J], 杜志峰;李振彬
2.青蒿琥酯对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫调节作用 [J], 张新欣;李晓丽;庄珊;刘深;李秀华;李衍滨
3.青蒿琥酯对迟发型超敏反应小鼠脾脏T淋巴细胞的免疫调节作用 [J], 李覃;陈虹;白淑芳;韦娜;张实
4.青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒感染中国恒河猴模型T淋巴细胞活化的调节作用 [J], 陈剑涛;熊思艺;林子峰;李钱锋;唐琴;符林春
5.青蒿琥酯对狼疮性肾炎患者免疫功能调节作用的临床研究 [J], 黄雪霞
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青蒿琥酯影响Hela细胞免疫抑制物质分泌的研究的开题报告
青蒿琥酯影响Hela细胞免疫抑制物质分泌的研究的开题报告题目：青蒿琥酯影响Hela细胞免疫抑制物质分泌的研究一、选题的背景和意义Hela细胞是常用的肿瘤细胞模型，被广泛用于肿瘤遗传学、细胞生物学、分子生物学等领域的研究。
然而，Hela细胞会产生免疫抑制物质，对肿瘤免疫治疗产生不利影响。
青蒿琥酯作为一种天然药物，具有杀虫、杀菌、抗疟等多种功效。
此外，近些年研究表明青蒿琥酯还具有免疫调节作用。
因此，探究青蒿琥酯对Hela细胞免疫抑制物质的影响，有助于了解其免疫调节机制，为肿瘤免疫治疗提供新的思路和方法。
二、研究的内容和目的本研究旨在探究青蒿琥酯对Hela细胞免疫抑制物质分泌的影响及其机制。
具体内容包括以下几个方面：1. Hela细胞培养：选择Hela细胞，进行细胞培养和扩增，获得实验所需的大量细胞。
2. 青蒿琥酯处理：将Hela细胞分为实验组和对照组，用不同浓度的青蒿琥酯处理实验组细胞，对照组细胞只加入培养基，探究青蒿琥酯对Hela细胞免疫抑制物质分泌的影响。
3. 免疫抑制物质检测：采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测Hela细胞培养上清液中的免疫抑制物质含量，分析青蒿琥酯处理后对免疫抑制物质分泌的影响。
4. RNA测序：对青蒿琥酯作用后的Hela细胞进行RNA测序，分析基因表达谱变化。
结合以上实验结果，探究青蒿琥酯对Hela细胞免疫抑制物质分泌的调节机制。
三、研究的预期结果1. 证明青蒿琥酯可以通过某种机制调节Hela细胞分泌免疫抑制物质。
2. 确定青蒿琥酯作用后对Hela细胞的基因表达谱变化，进一步探究青蒿琥酯的免疫调节机制。
四、研究的方法和流程1. Hela细胞培养：选择Hela细胞，进行细胞培养和扩增。
2. 青蒿琥酯处理：将Hela细胞分为实验组和对照组，用不同浓度的青蒿琥酯处理实验组细胞，对照组细胞只加入培养基。
3. 免疫抑制物质检测：采用ELISA方法检测Hela细胞培养上清液中的免疫抑制物质含量。
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细胞 可 产生 Ｔ细 胞 免 疫抑 制 作 用 ， Ａ Ｒ Ｔ可 对其 产 生稳 定 的逆 转 作 用 。下 调 肿 瘤 免疫 抑 制 是 Ａ Ｒ； 喉癌 ； Ｈ ｅ ｐ ２细胞 ； Ｔ淋巴细胞 ； 免疫抑制 ； 逆转 【 中图分类号 】 Ｒ ２ ８ ５ ． ５ 【 文献标 识码 】 Ａ 【 文章编 号】 １ ０ ０ ２— ７ ３ ８ ６ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７ — ０ ９ ７ ２— ０ ５
９ ７ ２
河北 医 药 ２ ０ １ ５年 ４月 第 ３ ７卷 第 ７期
Ｈ ｅ ｂ ｅ ｉ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ １ ． ２ ０ １ ５ ， Ｖ ｏ ｌ ３ ７ Ａ ｐ ｒ Ｎ ｏ ． ７
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论 著 ・
青 蒿 琥 酯 下 调 人 喉 癌 细 胞 所致 Ｔ细 胞 免疫 抑 制 的 体 外 实 验 研 究
杨彦 忠 崔 激 马有祥 唐坚 段 乃超 任 秀敏
【 摘要 】 目的 体 外实验研 究青蒿琥酯（ Ａ Ｒ Ｔ） 对人喉 癌细胞 所致 Ｔ细胞免疫抑 制的影 响。方法 制备 经 Ａ Ｒ Ｔ 预处理 的人喉癌 Ｈ ｅ ｐ 一 ２细胞培养上 清（ Ａ Ｒ Ｔ — ｓ ） ， 收集连续 ２次再培养的上清 （ 分别称 为 Ａ Ｒ Ｔ — ｓ １ 、 Ａ Ｒ Ｔ ． ｓ ２ ） ， 以不经 Ａ Ｒ Ｔ 作 用的 Ｈ ｅ ｐ 一 ２及 其上 清作 对照 ； 分析对人外周血单 个核 细胞 经光镜观 察、 噻 唑蓝 （ ＭＴ Ｔ ） 法测定的植 物血凝 素 （ Ｐ ＨＡ）