葡萄球菌β—内酰胺酶检测及耐药性分析

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金黄色葡萄球菌的致病和耐药机制研究进展分析

金黄色葡萄球菌的致病和耐药机制研究进展分析摘要：金黄色葡萄球菌又称为SA，为临床中感染率较高的致病菌，其具有较强的致病性，具有高发病率，且传播迅速，促使治疗的难度升高。

SA 可以产生生物膜、凝集因子、肠毒素各种外毒素等多种致病因子，可诱导生成修饰酶，通过将药物的作用靶点进行改正，从而促使细胞壁通透性下降，导致各类结构不同的抗生素产生程度各异的耐药性。

本研究就对于金黄色葡萄球菌的耐药机制及致病因素、机制进行综述，具体综述如下：关键词：SA；耐药机制；致病机制；进展金黄色葡萄球菌又称SA，为机体脓性感染的常见致病菌体，为导致细菌性肺炎、中毒、脑膜炎等全身感染的菌体[1]。

随着临床中抗生素药物的广泛应用，近年来革兰氏阳性、阴性菌的感染率显著提高，且以SA的耐药性最强，如在临床中，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌普遍分布，且获得了临床中医师、药师的高度关注[2]。

本研究就对于金黄色葡萄球菌的耐药机制及致病因素、机制进行综述，具体综述如下：1、SA的耐药机制大量研究表明，当抗生素使用途径或方法不当可导致金黄色葡萄球菌的耐药菌株增加，还可导致多重耐药细菌的产生，危及患者生命安全。

1.1大环内酯类抗生素药物金黄色葡萄球菌可在大环内酯类药物的作用下生成耐药性，其染色体及质粒上的基因为导致耐药性的主要因素，尤其为ermA、ermB、ermC。

有研究表明，大环内酯类药物可对菌核糖体进行作用[3]，从而将蛋白质的合成过程进行抑制、阻断，从而发挥强效的抗菌效果。

然而该类药物的耐药性可于23S rRNA甲基化而导致，促使RNA及大环内酯类药物的亲和力降低，从而导致耐药性[4]。

不仅如此，由于核糖体出现突变，其23S的rRNA碱基出现突变，导致大环内酯类的药物出现较大的耐药性。

1.2 β-内酰胺类的耐药机制由于SA的耐药基因为mecA，其β-内酰胺酶作用于SA，SA可产生耐药性，其mecA发挥显著的作用[5]。

PBPs，又称细菌菌体表面合成青霉素结合蛋白，其在促进细菌生长方面发挥关键的作用[6]。

临床金黄色葡萄球菌感染的分布及耐药性分析

临床金黄色葡萄球菌感染的分布及耐药性分析发表时间：2014-03-06T16:37:57.467Z 来源：《医药前沿》2013年第35期供稿作者：甘连乐[导读] 金黄色葡萄球菌可产生多种外毒素及侵袭性酶，是医院及社区获得性感染的主要致病菌之一，可引起各系统严重的感染。

甘连乐（广西宁明县人民医院检验科广西宁明 532500）【摘要】目的：了解本院近5年临床金黄色葡萄球菌感染的分布和耐药性情况,为临床合理选用抗菌药物提供依据。

方法：采用常规方法进行微生物鉴定及K-B法和Etest法进行药物敏感性试验。

药敏结果使用WHONET5.6软件进行统计分析。

结果：近5年共收集到316株金黄色葡萄球菌，住院患者占287株（88.6%），来自门诊患者占29株（11.4%）。

其中MRSA占192株（60.8%）。

住院分离菌株主要来源科室为ICU占32.3%（102/316），其次是神经外科、骨外科和呼吸内科，分别占26.9%（85/316）、18.4%（58/316）和10.1%（32/316）。

主要标本来源为呼吸道标本（痰、灌洗液）占48.1%（152/316），伤口、脓液等各类分泌物占36.7%（116/316）。

MRSA多重耐药性严重，对多数所测药物的耐药率高于70%，MSSA对多数药物的耐药率低于40%。

本次调未发现利奈唑胺耐药和万古霉素不敏感金黄色葡萄球菌。

结论：利奈唑胺和万古霉素对金黄色葡萄球菌具有很强的抗菌活性；应重视微生物标本的送检和MRSA的主动监测，临床应加强抗菌药物使用管理。

【关键词】金黄色葡萄球菌抗菌药物分布耐药性【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）35-0222-02金黄色葡萄球菌可产生多种外毒素及侵袭性酶，是医院及社区获得性感染的主要致病菌之一，可引起各系统严重的感染。

随着临床各类抗生素的广泛应用，多重耐药菌株特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出率越来越高，是临床抗感染治疗需面临最为棘手的问题之一。

检验科微生物室多重耐药菌的检测及分析

检验科微生物室多重耐药菌的检测及分析1. 引言1.1 背景介绍微生物室是医院中重要的检验科室之一，负责对各类致病菌进行检测及分析。

随着抗生素的广泛使用，耐药菌的检测问题也日益凸显。

多重耐药菌是指对多种不同类别的抗生素呈现耐药性的细菌，其对人类健康产生的威胁不容忽视。

对微生物室中的多重耐药菌进行检测及分析，对于及时发现并控制这些耐药菌的传播至关重要。

在医院感染控制中，多重耐药菌已成为一项严重的公共卫生问题。

很多医院出现了多重耐药菌暴发，给患者的治疗带来了很大的困难。

对微生物室中的多重耐药菌进行检测及分析，可以及时采取相应的预防和治疗措施，减少医院感染的发生率，有效维护患者的健康。

通过检测及分析多重耐药菌的方法，可以为医院感染管理提供重要的参考依据。

对多重耐药菌的研究也有助于深入了解细菌的耐药机制，推动抗生素的合理使用。

【请继续阅读正文部分】。

1.2 研究目的本研究的目的是为了探究检验科微生物室中多重耐药菌的检测及分析方法，从而提高对多重耐药菌的监测和控制能力。

具体研究目的包括：1. 建立一套可靠的样本采集和处理流程，以确保样本的质量和准确性；2. 探索多种耐药菌的检测方法，包括传统培养法、分子生物学方法和质谱技术等，从而提高检测的准确性和快速性；3. 研究多重耐药菌的分析方法，包括对耐药菌的药敏试验、耐药基因检测和流行病学分析等，为临床治疗提供参考依据；4. 分析实验结果，探讨多重耐药菌的流行病学特征和影响因素，为预防和控制多重耐药菌提供科学依据。

通过本研究，将为多重耐药菌的检测和防治提供新的思路和方法，为保障公共卫生安全做出贡献。

1.3 研究意义微生物室多重耐药菌的检测及分析在临床医学中具有重要的意义。

多重耐药菌的检测可以帮助医生及时选择有效的抗菌药物，避免对患者造成不必要的伤害和延误治疗的风险。

多重耐药菌的分析可以揭示耐药菌的分布规律和流行趋势，为制定更科学合理的感染控制措施提供重要依据。

对多重耐药菌的深入研究也有助于加强对抗菌耐药性的监测和管理，推动抗菌药物的合理使用，防止抗药菌株的进一步传播和扩散。

超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析莫志航;宁炎【摘要】目的了解临床产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)的发生率、耐药性,以便于对ESBLs进行监测和治疗.方法对102株E.coli和78株K.pneumoniae采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)规定的ESBLs表型筛选和确证试验确定ESBLs的发生率,并检测产ESBLs的E.coli 和K.pneumoniae的耐药性.结果 13.7％ (14/102)的大肠埃希菌和26.9％ (21/78)的肺炎克雷伯菌产ESBLs;产ESBLs菌株对亚胺培南耐药率为0％,除对阿米卡星、头孢西丁、替卡西林/克拉维酸联合酶抑制剂耐药率较低外,对三代头孢菌素、磺胺类和喹诺酮类药物均出现较高耐药.结论对产ESBLs菌株引起的感染,亚胺培南为首选.%Objective To investigate the prevalence of strains producing extended spectrum beta-lactamases (ESBLs) among Escherichia coil and Klebsiella pneumoniae, and to determine the drug resistance of the strans for better control and treatment of ESBLs. Methods One hundred and two strains of E. coli and 78 strains of K. pneumoniae were investigated for production of ESBLs by phenotypic screening and confirmatory test provided by the NCCLS. The drug resistance of ESBLs-producing strains was also investigated. Results 13.7% (14/102) of E. coli and 26.9% (21/78) of K. pneumoniae investigated were found to produce ESBLs. All ESBLs-producing strains were found to be susceptible to imipenem, relatively lowly resistant to of amikacin, cefoxitin, cefoperazone/β-lactamase inhibitor com-binations, and highly resistant to third generation cephalosporins, sulfonamides and quinolones. Conclusion Imipen-em isthe premium antibiotics for the treatment.of infection caused by ESBLs-producing strains.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2012(023)018【总页数】2页(P78-79)【关键词】超广谱β-内酰胺酶;大肠埃希菌;肺炎克雷伯菌;耐药性【作者】莫志航;宁炎【作者单位】增城市新塘医院检验科,广东增城511340;增城市新塘医院检验科,广东增城511340【正文语种】中文【中图分类】R446超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生，能水解青霉素类、头孢菌素类和单酰胺类抗生素，从而使之失效[1]。

细菌耐药性检测方法

细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得.也可通过以下方法进行检测:（1)耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。

(2）折点敏感试验:仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC)，而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。

（3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。

若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同）,说明测试菌产生超广谱β—内酰胺酶（4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek—2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值.2．β—内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法(iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）.临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性.如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素(包括氨基、羧基和脲基青霉素)耐药。

3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有:葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA基因,大肠埃希菌与β—内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。

检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR—RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA测序4．特殊耐药菌检测(1）耐甲氧西林葡萄球菌检测:对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜,或其MIC≥4цg/ml的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥0.5цg/ml 的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。

产超广谱β—内酰胺酶的检测及耐药性观察

波异常与死亡率的关系的结论难以确定。由于病例资料所限，
＾选心电图的Ｐ波异常未与Ａ前心电图较，即Ｐ渡异常ＭＩＬ不垒是由ＡＭＩ引起。研究发现：ＡＭＩ新出现的Ｐ波异常所的程度与心肌梗死的严重程度及冠状动脉病变的血管数有很强的相关性，它影响到心肌损伤的程度及左心室的功能与相应的临床心功能状态。预示Ｐ渡异常可能为影响ＡＭＩ预后的重要因素，它通过影响左心房功能的异常起作用。３８ＱＴ．ｃ间期延长的意义：近年来报道ＡＭＩＱＴ时ｃ间期延长可诱发严重室性心律失常，是造成猝死的危险因素。本组Ｑｌ间期延长患者发生室速、ｒｃ室颤机率达５％。ＱＴ问期代表０心室肌复极的时间，ＭＩＡ时由于梗死部位低温、膜动作电位跨
３６心力衰竭与预后：．奉组台并心衰者４３例（２７．中８．％）其急性左心衰２例（３８，８５％）为心肌梗死后心脏收缩力显著减弱所致。急性左心衰时，交感神经活性增加，血液中儿茶酚胺浓度增高，可致心功能进行性恶化，而儿茶酚胺叉可降低颤周值．
２３中华老年心脑血管病杂志，００８２：２０．（）
心电图Ｐ渡异常对老年急性心肌梗急性前壁和下壁肌梗死患者早期梗
生。因此，ＡＭＩ对早期ＱＴｃ间期延长者应高度警惕，防止恶性
心律失常的发生。３９梗死部位远隔导联ｓ．Ｔ段压低的意义：Ａ后．以往认ＭＩ为梗死部位对应导联ｓＴ段压低是心肌损伤的镜像反应，自但冠脉造影应用以来，为合并其他部位导联Ｓ认Ｔ段压低，表示这一区域的心肌也有心肌缺血，是多支冠状动脉病变的一种情况。本组非梗死部位导联ＳＴ段压低者达８％。６５据报道，急性前壁或下壁心肌梗死非梗死部位导联，尤其是对应导联ＳＴ段压低提示梗死范围大，冠脉病变尤其前降支病变严重或多支病变．严重并发症发生率高．后不良因此．预应注意Ａ早期ＭＩ

临床常见分离细菌的耐药性及药物选择

肠杆菌对于即产AMPC酶又产ESBL酶的细菌称其为SSBL细菌，治疗该类感染的首选药物是碳青酶烯类
6.产碳青酶烯酶的细菌选药
近年报道，有阴沟产KPC-2型碳青酶烯酶，对青霉素类，氨曲南和碳青酶烯类抗菌药物耐药，但对亚胺培南的水解能力高于美罗培南。对该类细菌感染，必须在初始治疗后根据疗效及时转换为目标用药。可以选用复合青霉素类如替卡/克拉维酸或哌拉西林/他唑巴坦
1986年被首次发现，欧洲一直十分少见英国有2-3%肠球菌为VRE，其中屎肠球菌中有17-20%；美国有8-10%的菌株表现耐药，中国有报道，但我院还未分离出。
VRE(主要是屎肠球菌）通常对青霉素和庆大耐药。
VRE的耐药机制：与一种改变的肽聚糖前体有关，其末端D-丙氨酸-D-丙氨酸被D-丙氨酸D-乳酸代替，该结构与糖肽类亲和力很小或无亲和力。
2.葡萄球菌对β-内酰胺类药物耐药机制
其对β-内酰胺耐药机制主要为①产生β-内酰胺酶②青霉素结合蛋白PBP 改变对氨基糖苷类耐药是由于获得氨基糖苷灭活酶
葡萄球菌的耐药性与药物选择
3.苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA) 如何选择治疗药物
首选：苯唑西林或氯唑西林单用或联合利福平，庆大替代：头孢唑啉或头孢呋辛，克林霉素，复方新诺明和氟喹诺酮类
肠球菌的耐药性与药物选择
2.对青霉素，氨苄西林，哌拉西林耐药的肠球菌
.耐药机制：由低亲和力PBPS和产β-内酰胺酶（少数）引起。
在粪肠球菌中罕见，但在屎肠球菌中常见，这种情况与PBP-5的过多产生有关，该机制导致菌株对所有青霉素类交叉耐药。
肠球菌的耐药性与药物选择
3.对糖肽类获得性耐药的肠球菌VRE
肠杆菌科的耐药性与药物选择

β-内酰胺酶的检测方法

外源性β-内酰胺酶是我国不允许在食品中使用的化学物质。

违法使用的目的，是为了掩盖违规使用大环内脂类等抗生素治疗奶牛疾病的行为。

但是，内源性β-内酰胺酶的产生机理也是科学研究基本确认的事实。

近几十年来，国际国内畜牧业养殖奶牛过程中无限制使用大环内脂类抗生素治疗动物、家禽等食用动物各种炎症、败血症、水肿病等病症，造成革兰氏阳性细菌对抗生素耐药，细菌对β-内酰胺类抗生素产生耐药性一般通过4种途径。

（1）产生β-内酰胺酶使β-内酰胺类抗生素开环失活，这是产生耐药的主要原因。

目前发现的β-内酰胺酶已超过300种，它通过与β-内酰胺环上的羰基共价结合，水解酰胺键从而使β-内酰胺类抗生素开环而失活。

（2）改变抗生素与青霉素结合蛋白（penicillin binding proteins，PBPs）的亲和力。

当β-内酰胺类抗生素与PBP结合后，PBP就会失去酶活性，使细菌细胞壁的形成部位破损而引起溶菌，反之，则成为耐药菌。

PBP基因的变异，使β-内酰胺类抗生素无法与之结合或结合能力降低，这是形成耐药的根本原因。

（3）细胞膜和细胞壁的结构发生改变，使药物难以进入细菌内。

如生物膜的形成。

（4）细菌体内的能力依赖性主动转运机制，将已进入细菌内的抗生素泵出体外，也可导致耐药性。

由于细菌耐药产生的内源性β-内酰胺酶有300多种，同外源性β-内酰胺酶的分别鉴定检测技术尚未见报道。

而目前各检测机构正在研究的乳制品中β-内酰胺酶的检测方法无论是化学仪器分析高效液相色谱法还是微生物法，其检测原理都是：测出的β-内酰胺酶无法判定是人为添加的或是耐药细菌产生的。

奶制品中检出的β-内酰胺酶有可能是非法添加的，也有可能是细菌产生的。

耐药性产生的机理很复杂，细菌耐药基因的转移、共生菌协同以及基因交叉耐受，等影响都要考虑。

另外，根据现有的国际食源性抗生素耐药微生物的风险管理原则，建议加强畜牧业奶业生产全过程，而终产品的β-内酰胺酶检测始终是一个辅助手段，凭检测结果很难处理。

细菌耐药表型检测

细菌耐药表型检测细菌耐药表型的检测细菌耐药机制：1.产生药物灭活酶：细菌通过耐药因子可产生破坏抗生素或使之失去抗菌活性的酶，使药物在作用于菌体前即被破坏或失效。

水解酶：主要是β内酰胺酶，包括广谱酶、超广谱酶、金属酶、AmpC酶。

钝化酶：氨基糖苷类钝化酶，使氨基糖苷类抗生素分子结构发生改变，使药物不易进入细菌体内。

修饰酶：2．抗菌药物作用靶位的改变：细菌通过改变药物作用靶位的结构来降低药物和细胞靶位的亲和力，引起对抗菌药物的耐药性。

如细菌可改变青霉素结合蛋白（PBP S）的结构，降低与β—内酰胺类抗生素的亲合力，减少细菌与β—内酰胺类抗生素的结合，从而对β—内酰胺类抗菌药物耐药。

3.细菌细胞膜通透性改变：抗菌药物不易进入由于细菌细胞壁或细胞膜通透性的改变，致使抗菌药物无法进入细胞内而发挥抗菌作用。

细菌可改变细胞壁的孔蛋白通道，使青霉素类、头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素不能进入菌体；4.细菌将抗菌药物泵出细菌细胞外（外排泵）：细菌还可合成新的蛋白插入细胞膜即产生新的膜转运系统，对抗菌药物产生外排作用，近年来发现了许多临床常见致病菌具有与其多重耐药相关的主动外排系统或外排泵，如绿脓杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、肠球菌、淋球菌等，促使抗菌药物快速从菌体排出，从而导致细菌的耐药性。

总之,细菌耐药性机制是一个相当复杂的问题，其中，细菌产生灭活酶或钝化酶引起的耐药性在临床上具有重要意义。

多重耐药菌往往综合上述几种耐药机制，使之对许多抗微生物药物产生耐药。

细菌耐药性的发生和发展是抗微生物药物的广泛应用，特别是无指征滥用的后果。

一、β-内酰胺酶检测使用范围：葡萄球菌、肠球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡它莫拉菌。

方法：头孢硝基噻吩显色法（Nitrocefin）：制配纸片→灭菌水湿润→涂测试菌（G+菌可直接挑待测菌；G-菌提取细菌裂解液）于纸片上，10min观察纸片颜色，显红色为阳性（葡萄球菌应放置1h内观察）。

临床意义：若β-内酰胺酶阳性，则提示:流感、淋病、卡它对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药葡萄、肠球对青霉素、氨基、羧基、脲基青霉素耐药对产该酶的菌株禁止应用青霉素类、广谱青霉素类抗菌药物，应根据药敏试验结果应用含酶抑制剂药物或头孢菌素联合氨基糖苷类或氟喹诺酮类，根据情况可选用糖肽类及碳青霉烯类抗菌药物。

重症监护病房中耐甲氧西林葡萄球菌感染的调查分析

表1 542株葡萄球菌中MRS的分布
Hale Waihona Puke 细菌株数 MRS % 凝固酶阳性葡萄球菌 230 152 66.1
金黄色葡萄球菌 221 147 66.5
中间型葡萄球菌 9 5 55.6
凝固酶阴性葡萄球菌 312 222 71.2
表皮葡萄球菌 225 165 73.3
我们从ICU分离到542株葡萄球菌，MRS 374株，占69.0%，其中MRSA、MRCNS各占39.3%和59.4%，MRCNS分离率明显高于MRSA，因此应予以高度重视。
目前万古霉素是治疗MRS感染的最有效抗生素，但随着万古霉素使用频率的增加，已有对万古霉素敏感性降低菌株的报道。利福平对MRS具有较强的抗菌活性，但单独使用时短期内即可有耐药菌株出现，因此可与其他药物联合使用来治疗MRS的感染。
(三) β-内酰胺酶试验采用产色头孢菌素法。Nitrocefin纸片由英国Oxoid公司生产，阳性显红色。
(四) 药敏试验 MH琼脂由杭州微生物试剂厂生产，药敏纸片购自北京天坛药品检定所，采用Kirby-Baucer纸片扩散法，按NCCLS1993标准判断结果。药敏质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC25923。
重症监护病房中耐甲氧西林葡萄球菌感染的调查分析
2011-07-19 史伟峰陈菊茂姜庆波周克勤
80年代后，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)与耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)已成为医院感染的重要病原菌［1］。为了解我院重症监护病房(ICU)中葡萄球菌的分布、感染状况及耐药特点，1996年1月～1997年12月，我们从ICU患者、工作环境和医护人员的标本中分别分离到349、151和42株葡萄球菌，对所有葡萄球菌进行了耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)筛选试验，检测了MRS的β-内酰胺酶，并用13种抗生素测定了533株葡萄球菌的耐药性，现报告如下。

细菌超广谱β-内酰胺酶与耐药性讲解

4、分子生物学检测
聚合酶链式反应(PCR) 参照 GenBank 已发表的 TEM、SHV、CTX-M
和 OXA 各亚型的基因序列，分别设计特异性引物
5、总结ESBLs的检测方法
表型初筛试验
初步判断
表型确证试验
三相水解试验 E-test 法
确认菌株是否只产ESBLs
分子生物学检测
最终确认
（四）ESBLs 的防治
（二）、β-内酰胺酶是细菌耐药的机理
丝氨酸的结构式
β-内酰胺环上的羰基碳在结合β内酰胺酶活性部位的丝氨酸时发生了不可逆的反应，结果使其成为开环物。
（三）β-内酰胺酶分类方法
一、Bush-M-J分类法（功能分类法）根据β-内酰胺酶的功能相似性（底物和抑制物的轮廓）
分为1 ，2 ，3 ，4 四组，其中2组和3组又分为很多亚组。二、Ambler分类法（分子分类法）根据酶的氨基酸序列的保守性和相似性将β-内酰胺酶分为 A，B，C，D四组。
(三)合理使用抗生素
• 有报道显示抗生素尤其是第三代头孢菌素的应用与 ESBLs 的感染流行有关。
• 敏感菌因抗生素的选择性压力而被大量杀灭后，耐药菌得以大量繁殖而成为优势菌，同时抗生素的选择性压力也加快了细菌突变的速度。
• 因此合理使用抗生素并采取有效的消毒隔离措施，才是预防ESBLs 产生的最好方法。
联合产 ESBLs 和 AmpC 菌株
3、E-test 法
E-test，为AB BIODISK公司开发的测试ESBLs的试剂条。应用表型确证试验的原理，将头孢他啶（或头孢噻肟）和复方制剂头孢他啶/克拉维酸（或头孢噻肟/克拉维酸）分别置于试条两端，将试条贴于接种了待测细菌的平板上，刻度面朝上， 35℃培养18-24小时后，读取试条两端的MIC值。当头孢他啶与头孢他啶/克拉维酸（或头孢噻肟与头孢噻肟/克拉维酸）的比值≥8时，即可判定为产ESBLs，否则为阴性。

产超广谱β-内酰胺酶细菌耐药性监测分析

别为４．％和４．％，逐年升高趋势。２０８３５５呈０８年产ＥＢｓ大ＳＬ
生物分析仪，少数采用ＫＢ法检测，．药敏纸片为北京天坛生
物技术有限公司产品。ＥＢｓＳＬ检测及结果判断按ＮＣＳ推荐ＣＬ的ＥＢｓＳＬ表型筛选和确证实验方法进行。１３统计学方法．
１１菌株来源．
２００６年１一０８年１月２０２月我院临床标本分
离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯
菌标准菌株为ＡＣ２９２和ＡＣ２８３产ＥＢｓ大肠埃希ＴＣ５５ＴＣ７５，ＳＬ菌和肺炎克雷伯菌标准菌株为ＡＣ２９２和ＡＣ７００，ＴＣ５２ＴＣ０６３标
【摘
据。方法
结果结论
要】目的掌握临床常见产超广谱Ｂ内酰胺酶（ＳＬ）一ＥＢｓ细菌耐药性现状及变迁，临床合理用药提供依为药物敏感性试验多数采用分析仪检测，少数采用ＫＢ法， — 对产超广谱Ｂ内酰胺酶细菌耐药性进行分析。一
３年间，ＥＢｓ产ＳＬ大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总检出率分别为４．％和４．％，８３５５呈逐年增长趋势；其对氨基糖应加强产ＥＢｓＳＬ细菌耐药性监测，及时掌握耐药性的变迁，合理应用抗菌药物，控制细菌耐药性的进一步产生
的医院感染防控：，高医院感染报告的正确性和准确率，毒识提减少漏报发生率。有计划有目的地采取干预措施，能有效的才

超广谱β内酰胺酶的检测及耐药性

３６株ＦＢ￣菌株中，３株ＡｒＣＯ、Ｔ．ＩＳ有Ｚ、ＲＣＸ均无出现协同现
象，ｃＰ或Ｃ而ＦＡＺ出现了协同现象。
３纸片扩散韧筛法：照２０．按Ｏ０年ＮＣ（国临床实验Ｃ￣Ｓ美室标准化委员会）￣－１ｉｌｓ推荐的纸片扩散初筛法指南进行，００
性，对指导临床用药方面具有重要的意义。我们重点比较了３ＥＢ￣的检测方法，种ＳＩ分析了３产ＥＢ￣细菌的耐药７株ＳＩ
性，报告如下。
一
襄１３种方法检出ＥＢ￣的百分率（ＳＩ％）
、
材料和方法
１菌株：２Ｏ．系００年１一２０年６月，门诊和住院患月１１１从者的尿、、痰脓等标本中分离。太肠埃希菌２２株；炎克雷３肺伯菌５，酸克雷伯菌３株；８株产８阴淘肠杆菌２株，１产气肠杆菌１株．２板崎肠杆菌和聚团肠杆菌各１。质控菌株：株太肠埃希菌ＡＣ２９２阴性对照）肺炎克雷伯菌Ｇ２０（ＴＣ５２（，Ｙ０Ｄ阳性对照）均由杭州天和微生物试剂有限公司提供。，２抗菌药物：．氨苄西林、羧苄西林等１７种抗生素均购自北京天坛药物生物技术开发公司：头孢西丁、亚胺培南等４种抗生素以及ＥＢ￣确认试验中药片均购自杭州天和微生ＳＩ
３］％１。双纸片协同法与ＮＣＳ推荐的确认试验符合率达０ＣＬ
５标准纸片扩散确认法：２Ｏ接００年ＮＣＳ文件推荐的ＣＬ方法测定Ｅ阻吕ｓ。将纸片扩散初筛法筛选出的菌株做纸片扩散确认。将ＣＺ和ＣＴＡ、ＴＡ．ＪＣＣＸ和ＣＸＣ２药敏纸片ＡＴ／Ａ组分别贴在同一个ＭＨ琼脂平扳上，５－３ ℃培养Ｉ —２，８４ｈ若任何一组含克拉维酸的纸片与相应不含克拉维酸的纸片抑菌

金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策

金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策孙宏莉徐英春单位：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院摘要：金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起院内感染的多重耐药菌。

目前MRSA已逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。

目前在许多国家仍在增长，MRSA几乎对所有?-内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。

本文对金黄色葡萄球菌的耐药现状、耐药机制以及金黄色葡萄球菌感染的危险因素和治疗对策进行了简要介绍。

关键词：金黄色葡萄球菌耐药现状耐药机制危险因素治疗对策答1. 甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。

是吗？A.是B.不是2. 根据 NCCLS 判定标准，对于金黄色葡萄球菌，万古霉素的MIC≤4ug/ml 时为敏感。

对吗？A.不对B.对金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。

在第一个耐青霉素酶的β－内酰胺类抗生素甲氧西林用于临床治疗葡萄球菌感染不久， 1961 年在英国发现了世界首例 MRSA 。

从此， MRSA 逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。

目前在许多国家仍在增长， MRSA 几乎对所有β- 内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。

1996年在日本首次发现了MRSA对万古霉素敏感性下降的菌株，即万古霉素中介的金黄色葡萄球菌（VISA）。

VISA的出现预示着万古霉素治疗葡萄球菌感染的临床疗效下降，随之万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA）临床株是否会分离到，成为人们监测和关注的热点。

如果葡萄球菌一旦对万古霉素耐药，临床将如何治疗？所以连续监测金黄色葡萄球菌的耐药现状，了解葡萄球菌的耐药机制，感染的危险因素及其治疗对策具有重要的临床意义。

金黄色葡萄球菌的耐药现状：我院细菌室从 1988～2003 年连续监测金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药性变迁，结果见表 1 。

葡萄球菌的耐药问题

删除！
（四）万古霉素MIC“漂移”问题
100
79.9
80 60
MIC ≤0.5
80.9
MIC = 1
MIC ≥2
70.4 64.6
60.1
40
20
20
39.7 35.1
28.8
18.9
0
2000 (n=945)
0.2
0.2
2001 (n=1026)
0.3
2002 (n=1317)
0.2
氨苄西林
√
庆大霉素(120)
B CU √
抗菌药物 A
BCU
万古霉素
√
替考拉宁
√
利奈唑胺
√
环丙沙星
√
VRE 氯霉素* 磷霉素*
呋喃妥因
√
利福平*
√
√ 四环素*
√ √√
*已从C组删去；但如果遇到VRE菌株，可以测试上述抗菌药物
二、葡萄球菌的耐药问题
青霉素耐药、blaZ与诱导性β-内酰胺酶 MRSA的问题万古霉素的药敏试验和报告 VISA和hVISA
（一）诱导性β-内酰胺酶
（二） MRSA Worldwide Public Awareness
耐药率（％）
万古霉素替考拉宁利奈唑胺苯唑西林头孢唑啉头孢呋辛氨苄西林/舒巴坦
ZAAPS监测项目简介
时间
入选情况
2006年
16个国家的50所医学研究中心
2007年
23个国家的64所医学研究中心
G+菌株
共分离到4216株G+菌共分离到5591株G+菌
近6年ZAAPS监测共分离到G+菌34170株

葡萄球菌对8种抗菌药物耐药性分析

葡萄球菌对8种抗菌药物耐药性分析熊亚莉;范昕建;吕晓菊;冯萍;俞汝佳;康梅【期刊名称】《寄生虫病与感染性疾病》【年(卷),期】2004(2)4【摘要】目的了解本院临床分离的葡萄球菌对 8种常用抗菌药物的耐药性和不同耐药水平的甲氧西林耐药株产β-内酰胺酶情况 ,为临床治疗 MRS感染提供实验依据。

方法用 NCCLS推荐的对倍琼脂稀释法测定分离鉴定的 1 3 5株葡萄球菌对于苯唑西林、万古霉素、去甲万古霉素、替考拉宁、克林霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、利福平 8种抗菌药物的耐药性 ;用 Nitrocephin纸片法测定各菌株产酶情况 ,统计对苯唑西林不同耐药水平的葡萄球菌产酶率并分析其耐药水平与产酶率的相关性。

结果 1 3 5株葡萄球菌包括 83株金黄色葡萄球菌及5 2株凝固酶阴性的葡萄球菌 ,对苯唑西林耐药率分别为 68.67%、5 7.69% ,对阿米卡星、左氧氟沙星、利福平、克林霉素耐药率介于 1 .48%到 65 .93 %之间 ,对糖肽类抗生素敏感性为 1 0 0 .0 0 %。

MRSA产酶率为 43 .86% ,其中高耐菌株 94.73 % ,产酶率为3 9.62 % ,低耐菌株产酶率为 75 .0 0 % (3 /4) ,MSSA产酶率为 76.92 % ,MRC-NS产酶率为 43 .3 3 % ,MSCNS产酶率为 61 .1 1 %。

结论葡萄球菌对临床常用的几种药物表现出多重耐药 ,甲氧西林敏感株对几种抗菌药物的敏感性高于MRS。

苯唑西林敏感株和高水平耐药株之间产β-内酰胺酶有明显差别 ,但苯唑西林敏感株和低水平耐药株之间以及苯唑西?【总页数】4页(P145-148)【关键词】葡萄球菌;β-内酰胺酶;MIC;耐药水平【作者】熊亚莉;范昕建;吕晓菊;冯萍;俞汝佳;康梅【作者单位】四川大学华西医院感染性疾病中心;四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R515【相关文献】1.葡萄球菌临床分布特征及对利奈唑胺等新型抗菌药物的耐药性分析 [J], 林少华;骆丰2.葡萄球菌对利奈唑胺等抗菌药物的耐药性分析 [J], 严子禾;万佳蔚;胡锡池;胡仁静3.某院耐甲氧西林葡萄球菌耐药性及抗菌药物应用分析 [J], 裴保方;李燕;陶兴茹;曹松山;陈海燕4.金黄色葡萄球菌医院感染的临床特点及其对于抗菌药物的耐药性分析 [J], 许晓银;杨静娟;5.妇幼感染中金黄色葡萄球菌的耐药性与抗菌药物相关性分析 [J], 屠银芳; 付燕; 朱燕; 袁勇; 王卫华; 李心怡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。