大鼠鞘内虎耳草素抗神经病理性疼痛效果

神经病理性疼痛是由于外周或中枢神经损伤或功能紊乱引起的慢性疼痛，主要表现为痛觉超敏（allodynia ）、痛觉过敏（hy -peralgesia ）和自发性疼痛（spontaneous pain ）。

神经受损后导致受损部位释放大量的细胞因子如肿瘤坏死因子α（TNF -α）、白细胞介素（IL ）-1β，IL -6等，这些细胞因子作用于痛觉受体，进而产生神经病理性疼痛[1]。

目前，神经病理性疼痛在临床上尚无特效的治疗药物和治疗方法。

虎耳草素是一种4-甲氧基五倍子酸的糖化合物，它可以通过抑制细胞因子TNF α和IL -1β的产生，作用于炎症性疼痛[2]。

然而，虎耳草素在神经病理性疼痛中的作用效果，目前尚未见报道。

本研究采用经典的第5腰椎脊神经结扎（lumbar 5spinal nerve li g -ation ，SNL ）神经病理性疼痛模型，应用鞘内置管注药法，观察鞘内注射虎耳草素对神经病理性疼痛的镇痛作用。

1材料与方法1.1实验动物及分组SD 大鼠（体质量250~300g ）由广东省实验动物中心提供，将20只制备成功的SNL 模型大鼠随机分成4组（n =5），对照组：鞘内注射用生理盐水配制的2%二甲基亚砜（DMSO ）溶液；虎耳草素组：鞘内注射虎耳草素（bergenin ），剂量分别为15、50、100mg/kg 。

1.2鞘内置管参照Zeng 等[3]的方法。

1.3神经病理性疼痛模型的制备鞘内置管后7d ，参照Kim 等[4]的方法制备大鼠L 5脊神经结扎并切断的神经病理性疼痛模型（SNL ）。

1.4实验药物虎耳草素购于Sigma 公司，溶于用生理盐水配制的2%DMSO 溶液中。

1.5行为学测试1.5.1机械性缩足反射阈值（mechanical paw withdrawal threshold ，MWT ）使用Von -Frey 纤维丝采用up -and -down 的方法测定实验大鼠术前，术后3、7、14、21d 的术侧后趾对机械刺激的50%缩爪阈值（MWT ）：设定机械测痛仪的参数为最大强度40g ，最长时间10s 。

将大鼠放在机械测痛仪的铁丝网架上，用有机玻璃观察框（20cm ×20cm ×20cm ）罩住，待鼠自由活动5~15min 直至安静，将测痛仪的探针对准大鼠后足掌心，启动开始键，探针以4g/s 的力刺激大鼠后足掌心，到达阈值后大鼠抬足，测痛仪自动记录机械痛阈值。

测量5次，每次间隔10min ，取均值，该值即为MWT 。

1.5.2热缩足潜伏期（thermal withdrawal latency ，TWL ）使用BME2410A 型辐射热测痛仪以热辐射法测定实验大鼠术前，术后3、7、14、21d 的术侧后趾对热刺激的缩爪持续时间（TWL ）：设定辐射光热测痛仪的参数，红外光源强度为50，实际照度为180mW 。

将大鼠放在有机玻璃观察框（20cm ×20cm ×20cm ）中自由活动5~15min 直至安静，将辐射光源准星对准大鼠术侧后足掌心，启动开始键，光源开始照射足底部，仪器自动记录照射开始到抬足时间，该时间即为热痛阈值。

测量5次，每次间隔10min ，取均值，该值即为TWL 。

1.6统计学方法使用SPSS 13.10统计软件进行分析，采用单因素方差分析。

2结果2.1鞘内注射虎耳草素对机械性痛觉超敏的抑制作用与对照组相比，鞘内注射15mg/kg 虎耳草素时，可以抑制由于脊神经结扎手术引起的MWT 下降，但效果不显著；当剂量为50mg/kg 时，抑制效应明显增强；剂量为100mg/kg 时抑制效应特别显著。

见图1。

·论著·基金项目：广东省卫生厅医学科研基金资助项目（B2010234）；广东省教育厅育苗工程科研项目（LYM10084）；广东医学院博士启动项目（XB1021）。

大鼠鞘内虎耳草素抗神经病理性疼痛效果分析胡传银，丁银润（广东医学院生物教研室，广东湛江524023）【摘要】目的探讨大鼠鞘内注射虎耳草素抗神经病理性疼痛的效果。

方法利用第5腰椎脊神经结扎（SNL ）神经病理性疼痛模型，鞘内注射不同剂量的虎耳草素，通过行为学实验观察虎耳草素对SNL 大鼠机械性缩足反射阈值（MWT ）和热缩足潜伏期（TWL ）的影响。

结果鞘内注射100mg/kg 虎耳草素时可以明显地抑制由于脊神经损伤引起的MWT 下降以及TWL 的延长，且这种抑制效应与虎耳草素的剂量相关，呈剂量依赖关系。

结论鞘内注射虎耳草素具有明显的抗神经病理性疼痛作用。

【关键词】虎耳草；神经痛；髓鞘；大鼠文章编号：1009-5519（2012）12-1766-02中图法分类号：R741文献标识码：AIntrathecal analgesic effects of bergenin in rats with neuropathic pain Hu Chuanyin ，Ding Yinrun （Department of Biology ，Guangdong Medical College ，Zhanjiang ，Guangdong 524023，China ）【Abstract 】Objective To investigate the analgesic effects of bergenin administered into subarachnoid space in rats with neuropathic pain.Methods By behavioral test ，mechanical withdrawal threshold （MWT ）and thermal withdrawal latency （TWL ）were tested before and after intrathecal administration different doses of bergenin on SNL neuropathic pain rat models.Results Bergenin at 100mg/kg inhibited significantly the decline of MWT and the elongation of TWL by peripheral nerve injury.Further -more ，the inhibitory effect was depended on the doses of bergenin.Conclusion Intrathecal administration of bergenin producessignificant anti -neuropathic pain effects.【Key words 】Saxifraga stolonifera ；Neuralgia ；Myelin sheath ；Rats病患者肿瘤坏死因子水平变化与胰岛素抵抗的关系[J].中华实用医学，2003，5（18）：108-109.[5]郑芳.TNF -α结构与功能的关系[J].国外医学：免疫学分册，2003，26（2）：60-62.[6]Takeshita M ，Ina K ，Kitamura H ，et al.Ultrastructural study of capillaryand myocytic changes in the masseter and heart of KK -Ay mice[J].J Elec -tron Microsc （Tokyo ），1997，46（5）：413-423.[7]Miyazaki Y ，Pipek R ，Mandarino LJ ，et al.Tumor necrosis factor alphaand insulin resistance in obese type 2diabetic patients [J].Int J Obese Rent Metab Disord ，2003，27（1）：88-94.[8]刘静，王青.糖尿病患者血清一些细胞因子，C 肽和胰岛素变化[J].第四军医大学学报，2000，21（6）：S119-S121.[9]尤巧英，李成江，李红，等.炎症因子与胰岛素抵抗和2型糖尿病大血管病变的相关性研究[J].中华流行病学杂志，2005，26（10）：804-807.[10]Grigsby RJ ，Dobrowsky RT ．Inhibition of ceramide production reversesTNF -induced insulin resistance [J].Biochem Biophs Res Commun ，2001，287（5）：1121-1124．[11]Mitch WE ，Bailey JL ，Wang X ，et al.Evaluation of signals activating ubiquitin -proteasome proteolysis in a model of muscle wasting [J].Am J Physiol ，1999，276（5Pt1）：C1132-C1138.[12]Andersen H.Muscular endurance in long -term IDDM patients [J].Dia -betes Care ，1998，21（4）：604-609.（收稿日期：2012-04-12）注：与对照组相比，a P <0.01。

图1鞘内注射不同剂量虎耳草素对SNL 大鼠机械刺激的50%缩爪阈值（MWT ）的影响2.2鞘内注射虎耳草素对辐射热痛觉过敏的抑制作用当进行鞘内注射15mg/kg 虎耳草素时，可以抑制由于脊神经结扎手术引起的TWL 延长，但是这种抑制效应不显著；当剂量为50mg/kg 时，抑制效应明显增强；当剂量为100mg/kg 时抑制效应特别显著。

见图2。

注：与对照组相比，a P <0.01。

图2鞘内注射不同剂量虎耳草素对SNL 大鼠热刺激的缩爪持续时间（TWL ）的影响3讨论造成神经病理性疼痛的机制非常复杂，神经受损后导致受损部位的神经生长因子（NGF ）表达量升高，NGF 直接激活痛觉受体TrkA ，在NGF 和TrkA 的相互作用下激活下游的信号通路，包括PLC -MAPK -PI3K ，进而作用于位于外周的痛觉受体TRPV1，使其对痛觉刺激发生异常反应[5]，而且神经受损后可以激活一些兴奋性神经递质，如谷氨酸、N 甲基双氨基天冬氨酸或下调抑制性神经递质，如γ-氨基丁酸、甘氨酸等，导致背根神经节（DRG ）中的痛觉受体和脊髓后角中的痛觉神经元之间的突触联系发生改变，造成痛觉过敏[6-7]。