对《单克隆抗体的制备》教学的几点建议
单克隆抗体(McAb)制备注意事项
单克隆抗体(McAb)制备注意事项(一) 免疫动物的选择用于免疫的动物，应选择与亲本骨髓瘤细胞同一品系的动物，因为免疫动物品系和骨髓瘤细胞种系越远，融合的杂交瘤细胞越易发生免疫排斥反应，越不稳定。
目前使用的瘤细胞系，仍限于小鼠和大鼠的骨髓瘤细胞系，其中多来源于纯系BALB/c小鼠，所以要选择该系小鼠用作免疫动物，一般认为，为了减少盲目性，融合前，应测定免疫小鼠的抗体反应性，如果呈阳性，可供融合用，那些对特定抗原不产生血清抗体的小鼠，得不到特异的杂交瘤细胞。
一般选择8～12周龄，重约20g，健康无病的纯系小鼠，雌雄均可应用。
(二) 免疫方案1 抗原免疫用的抗原尽量设法提高其纯度，并保存其活性。
同样浓度的抗原，若含有较多的杂质，会明显影响抗体的产生，并为杂交瘤细胞分泌抗体的筛选带来麻烦，获得所需的分泌特异抗体的杂交瘤细胞的机率也低。
2 免疫小鼠一次免疫务必同时免疫几只小鼠，以免小鼠中途死亡。
每次注入抗原后，次日，小鼠会出现全身反应，体温升高、盗汗、耸毛等，此时对室温和饲养均需注意，以防小鼠死亡。
在融合前末次静注或腹腔注射时，谨防速发型过敏反应发生，而导致小鼠死亡。
3 不同抗原的免疫方法可溶性抗原，在初次免疫用明矾沉淀抗原100μg与2×109灭活百日咳杆菌混合皮下注射，间隔4～6周，用盐水抗原100～200μg 加强免疫，3天后取脾作融合；细胞抗原免疫，用2×107个细胞注入小鼠腹腔，间隔2～3周，再重复一次，3周后用同样数量细胞注入小鼠腹腔，3天后取脾作融合。
除上述常规免疫方法外，近年来还建立了脾内免疫法及体外细胞免疫法。
脾内免疫是将抗原直接注入小鼠的脾脏，具有抗原用量小及免疫周期短的优点；体外细胞免疫，是将抗原加入于体外培养的淋巴细胞中，使之形成免疫细胞。
(三) 融合剂PEG对细胞有毒性，一般采用分析纯规格。
浓度越高，对细胞的毒性越大。
以40%～50%的浓度为宜，pH值以80～82促融率最高。
单克隆抗体的制备 教学设计
【教学过程】
教学内容
教师活动
学生活动
设计ห้องสมุดไป่ตู้图
（一）
导入
播放视频：众志成城，抗击非典
SARS，这种不人所了解的病毒，在短时间内迅速蔓延，包括医务人员在内的多名患者死亡，引起社会恐慌。
大家为什么这么害怕SARS，普通感冒为什么不那么害怕？
深刻理解克隆的意义
培养学生创造性的思维能力
课上砸实，
加深印象
2.从什么器官分离浆细胞？
大家一起来回顾一下人体有哪些免疫器官？来我们一起说一遍
这么多免疫器官我们从哪里选呢？
3.分离出得浆细胞是一种吗?
有了浆细胞，还需要骨髓瘤细胞，动物细胞培养就好了，那么下一步就是融合了，融合得方法是什么呢？
4.融合之后得细胞是单一种类吗？有哪些类型呢？
8.检测之后发现我们的细胞还在，可是大家混在一块，你怎么知道哪个是我们想要的呢？请大家想个办法吧。
到此为止，就是单抗制备的第二步，就筛选，一筛筛出杂交瘤细胞，二筛筛出我们想要的产生特定抗体的杂交瘤细胞
得到了我们想要的细胞了，下一步就是生产，有几种方法？分别从哪里提取抗体？
此为第三步，生产，体外生产和体内生产。
先融合，等细胞数目足够多时，再筛选。
那么我们应该选择哪种生物的癌细胞呢？众多癌细胞里选择谁最合适呢？为什么？
启发学生思考，深刻理解生物学关于亲缘关系越近，越容易进行相关操作的思想
我们把浆细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交细胞，那么这个细胞就同时具有了双亲的性状，既可无限增殖又可产生特异性抗体
帮助学生理解
（2）单克隆抗体制备过程
2.2.2单克隆抗体的制备
单克隆抗体制备流程
单克隆抗体制备流程单克隆抗体是一种由单一克隆的B细胞产生，具有针对特定抗原的高度特异性和亲和力的抗体。
制备单克隆抗体的过程主要包括以下几个步骤：免疫原制备、小鼠免疫、混合细胞瘤制备、细胞筛选与分克隆。
首先，制备免疫原。
根据需要制备一种抗原，可以是纯化的蛋白质、多肽或合成的多肽。
这个抗原通常具有特异性，可用于激发B细胞产生特异性抗体。
其次，选择小鼠免疫。
通常选择小鼠作为免疫动物，因为小鼠的免疫系统较为适合。
给小鼠注射免疫原，激发其免疫反应。
为了增强免疫效果，通常在小鼠体内使用佐剂，如完全弗氏佐剂。
然后，制备混合细胞瘤。
在小鼠接种一段时间后，从其脾脏或骨髓中取出淋巴细胞。
然后通过融合淋巴细胞和骨髓瘤细胞，如骨髓瘤SP2/0，获得混合细胞瘤。
接下来，细胞筛选与分克隆。
将混合细胞瘤悬浮液均匀地滴于含有选择性培养基的平板上，通过稀释法，保证每个细胞得到充分的空间生长。
经过适当的培养时间后，细胞形成单个克隆。
最后，对每个克隆细胞进行培养与鉴定。
收集克隆细胞，经过一段时间的培养，获得充足的抗体。
而后，对培养液中的抗体进行鉴定，采用ELISA和免疫组化方法来确认是否产生了特定抗原的单克隆抗体。
在单克隆抗体制备的过程中，需要注意以下几点：首先，免疫原的制备应保证其纯度和有效性；其次，小鼠对免疫原的免疫应注意适当的剂量和接种时机；再者，混合细胞瘤的制备要控制好融合细胞的比例，避免细胞瘤的过度生长；最后，细胞的培养与鉴定是确保获得高质量单克隆抗体的关键环节，要进行仔细的监测和筛选。
总之，单克隆抗体的制备过程是一个复杂而精细的过程，需要在实验操作中严格控制各个步骤，以确保获得高质量、高特异性的单克隆抗体。
这些单克隆抗体不仅可以应用于科学研究领域，还可以用于临床诊断和治疗。
单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项单克隆抗体（Monoclonal antibody，mAb）是指由单一B细胞克隆分离得到的抗体，其具有高特异性和高亲和力。
制备单克隆抗体的方法主要有杂交瘤技术和重组DNA技术。
以下是单克隆抗体制备的步骤及注意事项。
步骤一：抗原免疫1.选择合适的抗原：根据需要检测的分子或细胞表面标志物，选择合适的抗原。
2.免疫动物：常用的动物有小鼠、兔子等。
选择适合的动物后，根据抗原的种类和免疫动物对该抗原的敏感性，设计免疫方案。
3.免疫计划：免疫计划包括免疫剂量、免疫途径和免疫次数等。
通常先进行原位免疫，然后再以单体或混合抗原进行体内免疫。
步骤二：细胞融合1.收集脾细胞：在最佳时期，解剖免疫动物，取出脾脏。
2.细胞培养：将收集的脾细胞在无菌条件下分散成单个细胞，并在培养基中培养，以供细胞融合使用。
3.准备骨髓瘤细胞：选择合适的骨髓瘤细胞，例如NS0或SP2/0等。
将其培养至对数生长期。
4.细胞融合：在抗原刺激下，将脾细胞与骨髓瘤细胞以一定比例混合，用聚乙烯醇或其他化合物促进细胞融合。
步骤三：细胞筛选与扩展1. HT增重培养：用含有hprt缺陷的培养基筛选融合细胞，以选择杂交瘤细胞。
2. Limited Dilution扩展：以一细胞一孔的方式将杂交瘤细胞进行有限稀释，使其实现单克隆化。
3.细胞培养：将单克隆细胞株移植到培养瓶中，进行培养和扩增。
步骤四：单克隆抗体鉴定1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：用ELISA方法筛选单克隆细胞株，检测其抗原特异性。
2.免疫组织化学检测：将单克隆抗体应用于细胞和组织切片，检测其在特定细胞或组织中的反应。
3.流式细胞术：通过流式细胞仪检测单克隆抗体与特定细胞表面标志物的结合情况。
步骤五：单克隆抗体生产与纯化1.细胞培养：将单克隆细胞株培养扩增至一定程度。
2.抗体收集：将培养上清液进行抗体收集。
3.纯化与浓缩：利用亲和层析、离子交换、凝胶过滤等技术，对抗体进行纯化和浓缩。
单克隆抗体的制备及特点
单克隆抗体的制备及特点第一篇：单克隆抗体的制备及特点单克隆抗体一、单克性抗体的制备1、免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生效应B淋巴细胞的过程。
2、将准备好的骨髓瘤细胞与效应B淋巴细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇或灭活的病毒。
在聚乙二醇或灭活的病毒作用下，各种效应B淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。
3、选择性培养选择性培养的目的是筛杂交瘤细胞。
在选择性培养基上未融合的骨髓瘤细胞、未融合的淋巴细胞，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只有融合的杂交瘤细胞才能在选择性培养基存活，杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌特异性抗体4、杂交瘤细胞的克隆化培养和抗体阳性检测。
选择性培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。
5、单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内培养法和体外培养法。
(1)体内培养法；用注射器抽取腹水，从中可获得大量单克隆抗体。
(2)体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。
从培养液中获取所需要的单克隆抗体。
二、单克性抗体的特点特异性强、灵敏度高、能大量制备三、杂交瘤细胞的特点杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌特异性抗体四、单克隆抗体制备过程中有三个筛选过程1、从脾脏中筛选出多种效应B细胞。
2、在特定的培养基中筛选杂交瘤细胞3、进行克隆化培养和抗体阳性检测，筛选出能产生特定抗体并能无限增殖的杂交瘤细胞。
五、单克隆抗体应用的基本原理是：抗原——抗体的的特异性结合。
六、单克隆抗体的主要应用1、作为诊断试剂：单克隆抗体最广泛的应用就是作为诊断试剂。
由于单克隆抗体纯度高、特异强，能准确地识别抗原物质的细微差别，并能与一定抗原特异性结合。
2、用于治疗疾病和运载药物。
把抗癌细胞的单克隆抗体放射性同位素、化学药物或细胞毒素结合制成生物导弹。
利用抗原——抗体的的特异性结合，借助单克隆抗体的导向作用，能将药物定向带到癌细胞所在部位，在原位杀死癌细胞，不损伤正常细胞、药剂量少、疗效高、毒副作用小。
单克隆抗体教学设计特等奖
单克隆抗体教学设计特等奖导言：单克隆抗体是一种高度特异性和有效性的生物药物，已经在医学和生命科学研究中得到了广泛应用。
随着单克隆抗体的研究和应用逐渐深入，对其教学设计的需求也日益增长。
本文将介绍一个获得特等奖的单克隆抗体教学设计方案，通过这个方案的实施，学生可以深入了解单克隆抗体的原理、制备方法和应用领域，提高其综合实验技能和科学素养。
一、教学目标通过本教学设计方案，学生将能够：1. 理解单克隆抗体的定义、结构和特点；2. 掌握单克隆抗体的制备方法，包括免疫筛选、细胞融合和筛选等步骤；3. 了解单克隆抗体在医学和生命科学研究中的应用，并了解其优势和局限性；4. 能够进行基本的单克隆抗体制备实验，并分析实验结果。
二、教学内容本教学设计方案包括以下内容：1. 单克隆抗体的定义和结构介绍；2. 单克隆抗体的制备方法，包括免疫筛选、细胞融合和筛选等步骤的详细说明；3. 单克隆抗体的应用领域，包括医学诊断、治疗和生命科学研究等方面的案例介绍；4. 单克隆抗体制备实验的设计和操作步骤；5. 单克隆抗体实验结果的分析和讨论。
三、教学方法本教学设计方案采用多种教学方法，包括讲授、案例分析和实验操作等。
通过多种教学方法的结合，可以提高学生的学习兴趣和教学效果。
1. 讲授在讲授环节，教师将对单克隆抗体的定义、结构和制备方法进行详细的讲解。
在讲解过程中，可以使用多媒体辅助教学，展示相关的图片和视频素材，以便学生更好地理解和记忆。
2. 案例分析通过案例分析，教师可以引导学生深入了解单克隆抗体在医学和生命科学研究中的应用。
教师可以选择一些经典的案例，如抗体药物的研发和临床应用，以及单克隆抗体在癌症治疗中的应用等，通过分析这些案例，学生可以更好地理解单克隆抗体的应用价值和作用机制。
3. 实验操作为了提高学生的实验技能和实践能力，本教学设计方案还包括单克隆抗体制备实验的设计和操作。
在实验操作环节，学生将亲自进行单克隆抗体的制备实验，包括免疫筛选、细胞融合和筛选等步骤。
单克隆抗体制备步骤及注意事项
单克隆抗体制备步骤及注意事项制备步骤如下：1.免疫原选择：选择具有免疫原性的抗原作为单克隆抗体制备的靶点。
免疫原可以是蛋白质、多肽、糖类等。
2.动物模型选择：根据免疫原的性质选择适合的动物模型，如小鼠、兔子等。
应考虑动物模型对免疫原的免疫响应情况以及制备成功的单克隆抗体的应用价值。
3.免疫原注射：将免疫原注射到动物模型体内，通常通过多次注射来诱导免疫反应。
在注射前，可以选择适当的佐剂来增强免疫原的免疫原性，如完全弗氏佐剂或委氏佐剂。
4.混合细胞瘤的制备：在免疫原注射后，等待免疫反应充分发生。
细胞瘤可用于细胞融合，产生融合细胞并筛选单克隆抗体。
常用的细胞瘤包括SP2/0和NS-15.细胞融合：将免疫小鼠脾细胞和癌细胞融合成杂交瘤细胞。
融合的常见方法有聚乙二醇融合法和电融合法。
6.肿瘤细胞筛选：将融合细胞播种在含有选择剂的培养基上，通过选择剂来杀死未融合细胞和不产生抗体的融合细胞，留下产生单克隆抗体的细胞。
7.单克隆抗体筛选：对产生的单克隆细胞进行筛选，常用的方法有ELISA和细胞免疫荧光检测。
8.单克隆抗体培养：将筛选出的单克隆细胞进行扩增培养，获得大量的细胞。
9.单克隆抗体纯化：将培养得到的细胞培养上清进行蛋白A/G亲和层析柱纯化，获得纯化的单克隆抗体。
10. 单克隆抗体鉴定：通过Western blot、免疫组化或其它适当的方法对单克隆抗体进行鉴定，确定其特异性和亲和力。
注意事项如下：1.免疫原的选择应根据具体实验要求合理选择，确保其免疫原性和制备成功的单克隆抗体的应用价值。
2.在注射免疫原前，应充分考虑动物模型对所选择免疫原的免疫响应情况，并进行充分的预备实验和试验。
3.免疫小鼠注射免疫原时，需要严格控制免疫原注射的剂量和频率，以避免过度免疫导致不良反应。
4.细胞融合时，应根据实验要求选择合适的融合方法，并注意细胞融合的时间和条件，以获得高效的细胞融合率。
5.单克隆抗体筛选和鉴定时，应使用多种合适的方法进行综合评估，确保获得特异性和亲和力较高的单克隆抗体。
单克隆抗体制备常见问题分析
单克隆抗体制备常见问题分析一、前言1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。
这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。
制备单克隆抗体包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞的克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产，要经过几个月的一系列实验步骤。
虽然单抗技术已经非常成熟，但是由于其经济价值，仍然有很多人在从事这项研究，而且其中也会遇到很多这样那样大问题。
我本人就是其中一个，由于是第一次做单抗，所以过程中遇到了很多困难，终于在前几天得到了几株阳性克隆。
鉴于此，我将单克隆抗体制备的整个过程贴出来，同时搜索了园子里面一些战友的求助帖以及一些经典的应助帖，希望能对将要或是正在从事这项研究的战友们有些帮助。
二、动物的免疫选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。
一般要在融合前两个月左右确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
1. 颗粒性抗原免疫性较强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。
下面以细胞性抗原为例的免疫方案:初次免疫1×10,,0.5ml ip (腹腔内注射)? 2,3周后第二次免疫1×10,,0.5ml ip? 3周后加强免疫(融合前三天) 1×10,,0.5ml ip或iv(静脉内注射)?取脾融合2. 可溶性抗原免疫原性弱，一般要加佐剂，常用佐剂:福氏完全佐剂，福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起，研磨成油包水的乳糜状，放一滴在水面上不易马上扩散呈小滴状表明已达到油包水的状态。
商品化福氏完全佐剂在使用前须振摇，使沉淀的分枝杆菌充分混匀。
初次免疫Ag 1,50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射? (一般0.8,1ml 0.2ml,点)?3周后第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip? (ip剂量不宜超过0.5ml)?3周后第三次免疫剂量同上，不加佐剂，ip? (5,7天后采血测其效价，检测免疫效果)?2,3周后加强免疫，剂量50,500μg为宜，ip或iv?3天后取脾融合目前，用于可溶性抗原(特别是一些弱抗原)的免疫方案也不断有所更新，如?将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。
单克隆抗体制备操作方法及注意事项JEN
无菌室清洁要求：1、进入无菌间，须更换白大褂，口罩、鞋套必须戴上，最好戴上帽子、手套；2、进去后用酒精棉球擦洗手；3、生物安全柜常用酒精棉球擦洗，擦后棉球不显黑；柜内垃圾当日及时清理；柜内所有实验操作应在酒精灯前进行；经常紫外杀菌；4、无菌间物件传递，经窗口紫外照射方可；5、有关试剂使用后及时用封口膜封住；6、细胞培养盖子旋松，以便二氧化碳气体进入；拿瓶、加液体均需注意瓶口，避免污染瓶盖；7、出门后需要用钥匙锁上；8、整个无菌间两周清洁一次；免疫动物：选择与瘤细胞同一品系的动物做为免疫对象，现在常用的是Balbc/c小鼠，6-8周龄，一种抗原一次性注射2-3只小鼠，小鼠不宜过大，雌性相对较好；首次注射抗原100微克与等体积弗氏完全佐剂混匀，在背部两侧皮下与腹腔分别注射，形成几个小泡；间隔两周左右时间（14天）二次免疫注射抗原50微克与等体积弗氏不完全佐剂混匀，在背部皮下及腹腔分别注射，通常上次背部小泡仍然存在；间隔两周左右时间（14天）三免小鼠注射抗原50微克与等体积弗氏不完全佐剂混匀，在背部皮下及腹腔分别注射，通常上次背部小泡仍然存在；间隔7-10天左右时间尾部采血测定抗体效价：方法一：手拇指和食指从背部抓住小鼠颈部皮肤，将小鼠头朝下，小鼠保定后将其尾巴置于50°热水中浸泡数分钟，使尾部血管充盈。
擦干尾部，再用剪刀或刀片剪去尾尖1～2mm，用试管接流出的血液，同时自尾根部向尾尖按摩。
取血后用棉球压迫止血并用6%液体火棉胶涂在伤口处止血。
每次采血量0.1ml。
方法二：固定小鼠，一人捏住小鼠耳朵固定小鼠，同时抓住尾梢协助取血，另一个人左手捏住小鼠尾巴根部，右手用酒精棉球擦洗，使尾部血管充盈，食指抵住尾巴，用一次性1ml注射器穿刺血管，用10微升移液枪及时吸取全血2.5微升，加在盛有97.5微升的PBS缓冲液中稀释10倍，再稀释一百倍，之后做倍比稀释测定效价，读数到阴性血清值的2.1倍，合理效价应高于12.8万倍。
有关“单克隆抗体制备”的几点释疑
不断增殖并不稀奇 。 ２ 杂交瘤 细胞 的抗 体检 测及 克隆化 培 养过 程解 ． ２
析。 杂交瘤细胞克隆化培养就是 ： 在融合后的细胞经过 选择性培养后 ，那些能够存 活下来的细胞就是 杂交瘤 有 来 外 增殖 ；但是骨髓瘤细胞却可 以在外 界限定条件下被 ‘ 细胞 。然后用“ 限稀释法 ” 选择 出这些杂交 瘤细胞 无 限地增殖 ， 更为可怕 的是它是 癌细胞 ， 还好没有产 生 是否是能分泌 出所需抗 体 的类型 。接下来就是 培养过 先将杂交瘤细胞稀 释 ， 严格限制每空 细胞不 能超过 抗 体的能力 。所以大胆试验 ， 把二者合为一体进行细胞 程 ， 融合 ， 产生新细胞 ， 这种 细胞兼具双特性——在特定条 件下 ， 以产生大量某种特异抗 体 ， 可 却不会 出现 增殖现
中图分类号 ： ６ ３９ Ｇ ３． １ 文献标 志码 ： Ａ
，
文章编号 ：６４ ９ ２ （０ ２ ０ — ２４ ０ ， １７ — ３４ ２ １ ）９ ０ ０ — ２
“ 克 隆抗 体 的制备 ” 单 是高 中生物人教 版选修 ３ 专
题２ 第二节“ 动物细胞工程 ” 一节的重点和难 点。内容相 对 复杂 、 抽象 ， 加上 教材对部 分环节 处理得很 简练 ， 学 生理解起来难度很大 ， 难免产生这样或那样的疑问。笔 者通过 对教材的研 究及教学 的反思 ，将教学 过程 中学 生提 出 的问题及 课 本 中应挖 掘 和拓 展 的知识 总结 如
单克隆抗体制备注意事项
单克隆抗体(McAb)制备技术1975年Khler和Milstein首次利用杂交瘤技术生产单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)获得成功，开创了免疫学和分子生物学研究的新纪元，被人们誉为“免疫学中的一场革命”，该项技术具有巨大生命力和发展前景，目前已被成功地用于分子生物学、免疫学、细菌学、病毒学、生物化学、遗传学、药物学等许多领域的研究。
下面以抗空肠弯曲菌共同抗原McAb的制备为例，介绍McAb的制备技术。
一、材料和方法(一) 材料1 PRMI1640培养液 PRMI1640培养基粉104g，双蒸馏水1000ml，抽滤或高压蒸气灭菌，每瓶80ml分装。
2 完全PRMI1640培养液 PRMI1640培养液80ml,1mol/L Hepes2ml,0.2mol/L谷氨酰胺1ml，青、链霉素溶液(1000u/ml)1ml，灭活小牛血清20ml。
3 次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷(HT母液×100)次黄嘌呤1361mg，胸腺嘧核苷387mg，蒸馏水加至100ml。
在45～50℃水浴中溶解，过滤除菌，分装小试管，每支5ml，置-20℃中保存。
4 氨基喋呤(A母液×100)氨基喋呤176mg，蒸馏水90ml，1mol/L NaOH 0.5ml，加蒸馏水至100ml，再加0.5ml 1mol/L HCl中和，过滤除菌，分装小试管，每支5ml，置-20℃中保存。
5 HAT选择性培养基完全PRMI1640培养液100ml,100×HT母液1ml，100×A母液1ml。
用5%NaHCO3调整pH值至7.4左右。
6 HT培养液完全RPMI1640培养液100ml，100×HT母液1ml。
用5%NaHCO3调整pH值至7.4左右。
7 50%聚乙二醇(PEG)溶液将PEG(MW4000)放在试管内加盖，121.3℃高压蒸气灭菌20min。
使用前加入等量的pH值8.2无血清培养液，置56℃混合，直至完全溶解，移置37℃备用。
单克隆抗体制备教学设计
单克隆抗体制备教学设计LT不足。
在认知冲突后猜想问题解决。
学生基于植物体细胞杂交迁移的基础上猜想动物细胞融合的实现，并猜想融合后的效果。
即融合细胞有产生抗体和无限增殖的双重特点。
因此在设计这堂课时，安排学生课前预习，阅读本节课的相关内容，以问题的形式找出本节的核心知识点，训练学生的自主探究能力及分析解决问题的能力。
在课堂教学过程中，首先安排5分钟时间，让学生交流在预习课文的过程中已经掌握的知识以及自己还不能解决的问题。
这些核心问题可以是小组已经解决的问题，也可以是还未能找到答案的问题。
通过小组内的各成员之间交流预习的成果，实现生—生互动，把一些简单的问题，通过小组内的讨论加以解决。
然后安排20-25分钟时间，进行小组间核心问题的交流，通过这一过程训练学生的思辨能力及语言表达能力。
在这个环节中，教师是课堂的“主持人”，组织学生完成交流和表达，并时刻关注学生，使学生的关注点放到主干知识上，适时引导、帮助学生解决难度较大的问题。
最后，安排10分钟左右时间当堂练习，及时巩固、检测学习效果。
【创设情境】现在的环境污染及食品质量等问题导致癌症的发病率逐年升高。
癌症治疗常用的治疗方法是放疗或化疗。
在临床放射治疗过程中，放射线对人体正常组织必然会产生一定的影响，从而造成一定的放射反应与损伤会出现一些不良反应。
如何能使药物不伤害人体正常组织而只定向作用于癌细胞呢？【探究学习】1、单克隆抗体的概念：（1）抗体由何种细胞产生？（2）一种抗原上面含有几种抗原决定簇？能刺激几种B细胞增殖分化？（3）抗体与抗原的作用方式及数量对应关系？（4）抗体主要分布在哪里？教师补充用传统获得抗体的方法并引导学生总结出多克隆抗体的缺点。
如何克服传统多克隆抗体的缺点呢？由此引出单克隆抗体的优点及概念。
概念：由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。
2、探究单克隆抗体的生产过程：结合课本32页的图，逐步思考：（1）产生特定抗体的B 淋巴细胞，我们怎样才能得到呢？（2）在体外培养的条件下，一个B 淋巴细胞有没有可能无限增殖？ （3）我们学过的什么细胞具有这样的能力？ （4）有什么办法让B 淋巴细胞也具有这样的能力？ （5）（只考虑两两融合）融合细胞有几种？ （6）制备过程中的两次筛选的结果是什么？（7）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？原理是什么？ 3、总结制备过程：通过细胞融合技术生产的单克隆抗体有什么样的优点呢？请同学们结合课本比较单克隆抗体和常规抗体的不同点 4、单克隆抗体和常规抗体的比较 单克隆抗体 常规抗体 分泌 杂交瘤细胞各B 淋巴细胞 特点 特异性强，灵敏度高 特异性差，灵敏度低 生产产量高，易分离产量低,分离困难5、单克隆抗体的应用体外培养杂交小鼠体内培养灭活的病毒给小鼠注射特定的抗原蛋白质从 脾中分离出B 淋巴细胞培养的骨未融合的 细胞融合的具有 同核 细胞融合的杂种 细胞选择培养基克隆化培养专一抗体检验阳性能产生抗体的杂交瘤细胞单克隆抗（１）可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点（２）可用于疾病治疗（３）可用于运载药物 “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物6、小结：（1）动物细胞融合过程 （2）单克隆抗体制备过程①细胞融合（原理及方法）②两次筛选（目的及方法） ③细胞培养（体内或体外）④分离提纯单克隆抗体 （3）单克隆抗体的应用 巩固练习：1、 关于灭活病毒的表述中正确的是 （A ） A. 保留抗原性，可诱导细胞融合 B. 不能感染细胞，免疫系统不能再识别 C. 可用DNA 探针检测病毒是否被灭活 D. 因不再具备完整的基因结构，不能再复制2、用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的是 （ B ） A ．将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的B 淋巴细胞 B ．用纤维素酶处理B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞C ．用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的B 淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合D ．筛选杂交瘤细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体3、下面是单克隆抗体的制备示意图，请分析回答： 小白鼠细胞A+瘤细胞B 杂交瘤细胞 单克隆抗体（1）细胞融合在生物工程中属于 动物细胞 工程的范围，用这种方法所得的杂交瘤细胞具有的主要特征是① 能产生特定的抗体 ；② 能无限增殖 。
有关“单克隆抗体制备”的几点释疑
有关“单克隆抗体制备”的几点释疑作者：李颖来源：《教育教学论坛·上旬》2012年第09期摘要：“单克隆抗体的制备”是高中生物选修三的一个难点。
笔者通过深挖教材，对教材中没有解释清楚的几个疑点做了阐释，同时构建了逻辑更为合理的单克隆抗体流程图供大家参考。
关键词：单克隆抗体；杂交瘤细胞；选择性培养基中图分类号：G633.91 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2012）09-0204-02“单克隆抗体的制备”是高中生物人教版选修3专题2第二节“动物细胞工程”一节的重点和难点。
内容相对复杂、抽象，加上教材对部分环节处理得很简练，学生理解起来难度很大，难免产生这样或那样的疑问。
笔者通过对教材的研究及教学的反思，将教学过程中学生提出的问题及课本中应挖掘和拓展的知识总结如下：1 教材中需要挖掘和总结的知识1.1什么是单克隆抗体和多克隆抗体。
单克隆抗体（monoclonal antibody）：是指利用一个B淋巴细胞进行无性增殖，产生大量的同一种类的B淋巴细胞群，再由这个细胞群产生出化学性质单一、特异性强的抗体。
多克隆抗体（polyclonal antibody）：当肌体受到抗原刺激后，可产生新的抗体。
抗原分子的决定簇直接决定了抗体的特异性的存在，同时也内含着大量的原决定簇。
所以，经过他免疫所缠身的抗血清实就是多种抗体的混合物，我们习惯性地把这个称为克隆抗体。
1.2单克隆抗体制备的原理是什么。
动物在免疫反应的过程中，各种B淋巴细胞都可以分泌出特有的特异性抗体，为了大量地获得，就必须最大限度地增加增殖这些单一抗体。
而且众所周知，B淋巴细胞可以产生一种能力，叫做单一抗体，但是他的局限是不能够完成体外增殖；但是骨髓瘤细胞却可以在外界限定条件下被无限地增殖，更为可怕的是它是癌细胞，还好没有产生抗体的能力。
所以大胆试验，把二者合为一体进行细胞融合，产生新细胞，这种细胞兼具双特性——在特定条件下，可以产生大量某种特异抗体，却不会出现增殖现象。
讨论制备单克隆抗体的方法与思路
特异性强，灵敏度高
三、讨论更多制备单克隆抗体方法与思路
方法一：基因工程 方法二：利用基因突变原理诱变育“系”
讨论制备单克隆抗体 的方法与思路
张平
一、单克隆抗体的概念与特点
概念： 由单个B淋巴细胞经过无性
繁殖，形成基因型相同的细胞群，这 一细胞群所产生的化学性质单一、特 异性强的抗体，称为单克隆抗体。
二、单克隆抗体制备的方法与思路
• B淋巴细胞具产生抗体的功能 • 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 • 利用细胞融合的技术将两种细胞融
合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞 特性的杂交瘤细胞
• 利用动物细胞培养技术大量培养杂 交瘤细胞
注射细胞 融合
培养骨髓瘤细胞
多种杂交细 胞
注射到小鼠 体内
在具有筛选作用的培养基上培养
专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞
单克隆抗体
分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞
单克隆抗体制备教学反思梅胜举
单克隆抗体制备教学反思梅胜举单克隆抗体制备教学反思梅胜举单克隆抗体制备教学反思梅胜举《动物细胞融合与单克隆抗体》是《动物细胞工程》的重点内容，其中的动物细胞融合技术主要用于制备单克隆抗体。
本节内容以学过的动物细胞融合、免疫等知识为基础，如何有效开展这节内容的教学，在自己设计的基础上，在完成课堂教学的基础上反过来看，我认为应该做到以下几点：第一，情境的创设创设情境组织教学是基于建构主义的教学观。
我们创设的情境最好是一个真实的客观现实，这样基于现实的情境会让学生快速的卷入到教师的教学活动过程中来。
基于必修三免疫内容学习时曾经遇到过人被毒蛇咬伤可用经蛇毒处理过的兔子的血清来治疗。
我就以此作为切入点引出抗体的提取和制备问题。
然后以问题驱动学生看书并联系已经学过的知识来解决问题。
第二，如何处理已学知识与新课学习的关系已有知识是学生学习新课的前提。
学生的学习一定是建立在已有经验的基础上建构性学习。
是在已有知识基础上的同化和顺应的有意义学习。
如何处理两者关系和教学安排是我们教师应该设计的。
我的处理是在回顾细胞融合技术基础上，再联系必修三免疫的相关内容以问题串的形式引导学生看书思考讨论作答。
学生想到抗体的基础上自然回忆抗体的产生细胞及细胞特点（如一种实质为浆细胞的免疫过的B淋巴细胞只产生一种抗体）、相关结构、作用和作用特点，以及传统手段生产抗体的不足。
在认知冲突后猜想问题解决。
第四，关于单克隆抗体制备过程的教学我的想法很简单，基于学生看书的情况下，教师利用问题和课本图片组织教学。
需要注意的是要引导学生对图片信息的提取和语言的有效阐述。
基于图片的再次开发性讲授，让学生明白和把握全流程相关知识。
并用流程图阐述有关知识。
第五，概念的`辨析基于制备单克隆抗体过程的讲解，可以尝试对单克隆抗体的下定义，并对其特点有效阐述。
第六，单克隆抗体作用的阐述，在比较联系中内化单克隆抗体的作用相对简单，如何有效记忆。
在学生阅读的基础上提问这些应用的原理是抗原抗体杂交，同时以“生物导弹”作用的讲解呼应情境创设，使课堂教学的设计前后有效呼应。
单克隆抗体的制备-教学设计
单克隆抗体的制备-教学设计
一、教材分析
教材在植物体细胞杂交技术、动物细胞培养的基础上，迁移至动物细胞融合与单克隆抗体的知识。
内容上环环相扣，层次递进。
教材上先用灭活的病毒诱导动物细胞融合的过程，动物细胞融合意义和应用，再过渡到单克隆抗体的制备。
内容上渗透生命观念、科学思维及社会责任学科核心素养。
在学习过程中，培养学生大胆地想象，创造性地解决问题。
二、学情分析
学生已经学习了植物体细胞杂交技术、动物细胞培养及抗体等相关知识，即可结合教材，知识迁移至本节内容。
在教学的过程中，教师只需要引导学生进行知识迁移和知识归纳，在单克隆抗体制备的过程中借助于物理模型和点拨难点，利于学生突破本节内容的难点。
三、教学目标
1、阐明动物细胞融合的手段与过程。
2、培养学生大胆地想象，创造性地解决问题，并学会构建流程图，渗透生命观念、科学思维及
社会责任学科核心素养。
四、教学重难点
1、教学重点
（1）动物细胞融合技术的方法及过程。
（2）单克隆抗体制备的过程。
2、教学难点
单克隆抗体的制备过程。
五、教学设计思路：设置问题，结合书本的过程图，总结归纳。
六、教学过程
七、板书设计：
单克隆抗体技术：动物细胞培养、动物细胞融合
原理：细胞的增殖、细胞膜的流动性
过程：。
“单克隆抗体”学习中的几个问题分析
“单克隆抗体”学习中的几个问题分析“单克隆抗体”是动物细胞工程的重要内容，动物细胞融合技术的重要应用就是制备单克隆抗体，学生对这项现代生物技术既充满兴趣又深感抽象，教材仅以“单克隆抗体制备过程示意图”和简单的文字描述来介绍，因而要达到课标要求的理解、综合应用水平，还需有一定的背景知识，如：免疫学基础，细胞融合过程及其对性状表达的影响等知识。
基于此，本文围绕这些问题进行分析解答，以便于师生教与学。
1.一种抗原能使机体产生几种抗体免疫学告诉我们抗原是指能引起机体发生特异性免疫反应的任何物质或病原体，包括自身的衰老、损伤细胞和癌变细胞。
抗原具有异物性、大分子性和特异性的特点。
其特异性与抗原分子表面和分子内部的特定的化学基团——抗原决定簇有关。
一般，一个抗原分子具有多个抗原决定簇，如：流感病毒有40多个，白喉类病毒有8个。
抗原决定簇是免疫细胞识别抗原的重要依据，也是诱导淋巴细胞分化的刺激因素，又是同相应抗体结合的部位。
抗原注射到人和哺乳动物体内，一个B淋巴细胞只能接受一种抗原决定簇的刺激，分化为效应B 淋巴细胞和记忆细胞，并能产生与该抗原决定簇特异性结合的特异抗体。
即一种抗原决定簇指引起一种特异抗体，因而一种复杂的抗原进入机体后，可刺激机体不同的B细胞分化产生多种抗体。
这些抗体各不相同，只能与相应的抗原决定簇结合，因而都可以和该抗原结合，但结合部位不同，即一种抗原引起机体产生多种特异的抗体，但每一个效应B淋巴细胞只能产生其中一种特异的抗体。
这样血清抗体就是由多个不同的B淋巴细胞应答一个抗原的结果，即不同淋巴细胞产生的特异抗体能与该抗原的不同抗原决定簇结合，因此，血清抗体纯度低、灵敏度低、特异性差。
单克隆抗体是由同一种B淋巴细胞群体（克隆化）合成并分泌的，这些抗体均一，只识别同一种抗原决定簇，因而特异性强、灵敏度高。
2.为什么在得到杂交瘤细胞后，还要进行抗体检测和筛选经过选择培养基筛选，得到的杂交瘤细胞不一定能产生所需的特异抗体。