凝血酶时间(TT)测定

凝血酶时间（TT）测定
1. 实验原理
凝固法确定量的血浆样本（100μl），加入凝血酶时间（TT）反应试剂（50μl）经过一定时间（3min）加湿后，采用波长660nm的光照射样本，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶时间。

2. 标本采集
2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。

2.2
3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。

3. 标本存放：1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。

4. 标本运输：低温条件下运输。

5. 标本拒收的标准：抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。

6. 实验材料：
6.1 德国Dade Behring Marburg 公司凝血酶时间测定试剂,每瓶5ml（用配套稀释液溶解）共50人份,未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过7天。

6.2 Dade Citrol质控血浆.用蒸馏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。

复溶后,室温保存2小时,2～8℃4小时。

7. 仪器设备：
7.1 仪器名称：xxx CA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2 仪器厂家：xx公司
7.3 仪器型号：xxx CA-1500
7.4 仪器技术参数：
7.4.1 速度：最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2 试剂位：36个,具冷藏功能。

7.4.3 样本位：50个,可自动连续添加。

7.5 仪器校准程序：
7.5.1 校准频率：当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。

7.5.2 校准操作：设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤：
8.1 检查前准备：
8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。

8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)。

8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。

8.2 开机：先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。

8.3 输入工作清单：从主菜单选出现第一架样本工作清单输入画面,
选入第一个样本号→按相应实验项目名称键并同时输入此标
本的其他测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按
组合选项选择，选中项目相应位置标记为“○”，选完项目后按认，要
删除某项目时只需按该项目（按键如为可，→用↑↓键，同样输
入其他标本编号项目。

（快速输入可用，输入重复标本数，复制同样项目的输入。

8.4 放置样本：按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5 按开始测定：盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示
“Ready”)按,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按
继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。

8.6 每日维护：完成每日的测定后,关机前维护。

8.6.1 冲冼针Rinse Probe
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。

8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。

8.7 关机：先关主机,再关打印机。

9. 检验结果的判断与分析：
9.1 仪器测定TT的线性范围在5-600秒,测定完成后仪器显示TT秒数，若不能对参数进行正确计算,将出现下列信息：
﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ.ˉ不能计算参数
＋＋＋.＋数值超出线性范围.
9.2 仪器设定TT参考范围在14-20秒,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记：
﹡出现错误信息
< 数据低于可报告的低限
> 数据高于可报告的高限
10. 质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S 为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。

质控规则详见室内质控作业指导书。

11. 临床意义：
11.1 参考范围：14-20秒（不同厂家试剂有不同参考范围，请参照试剂说明书）11.2 TT延长：患者血循环中AT-Ⅲ活性明显增高，肝素增多或类肝素抗凝物质存在，如SLE、肝病肾病等，异常纤维蛋白原血症，低（无）纤维蛋白原血症，FDP增多（如DIC），异常球蛋白增多（如MM）等。

11.3 TT缩短：常见于血样本有微小凝块或钙离子存在时。

12. 变异的潜在来源
12.1 抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查
12.2 标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。

12.3 纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。

12.4 超剂量使用肝素使凝固时间延长。

12.5 FDP增加使凝固时间延长。

12.6 某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。

13. 操作注意事项：干粉试剂及质控血浆溶解
13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。

13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。

13.3 复溶后，室温放置5-10分钟方可使用。

14. 仪器维护与保养
14.1 日常维护（见8.6）
14.2 每周维护
14.2.1 液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按按
按→按键运行此程序→完成后按
返回。

14.2.2 清洁仪器：定期用擦布擦干净仪器内外，包括试剂槽。

14.3 需要时维护：
14.3.1 调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按按
→按键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。

14.3.2 更换灯泡：关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装
上内外盖→从主菜单按再按按确认关
上遮光盖，按行调整程序。

14.3.3 更换保险管：关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上保险管盖。

15. 参考文献
15.1 xx.xx等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社.
15.2 xxx公司《xxx CA-1500操作手册》1998.6修订本.。