秋水仙素洋葱

秋水仙素对洋葱根尖有丝分裂的影响
------诱导多倍体形成
实验目的：探究秋水仙素诱导多倍体的形成。

实验原理：秋水仙素能引起有丝分裂过程中纺锤丝断裂或抑制纺锤体的形成，但不影响染色体的复制和着丝粒的分裂。

材料用具：0.1∽0.3%的秋水仙素溶液、清水、10%的盐酸溶液、固定液（用冰醋酸和95%的酒精按1：3比例配制而成）、醋酸洋红溶液、洋葱、载玻片、盖玻片、烧杯、剪刀、镊子、显微镜。

方法步骤：
1. 根尖培养：
①取烧杯10个分别装满清水。

②取度过休眠期的洋葱鳞茎，先剪去洋葱底部的老根，分别放在10个烧杯上，在室温下培养，注意烧杯每天换一次水。

③待2∽3天后洋葱鳞茎上长出不定根，剪去细长、弱小的根，留下粗壮的根作为染色体加倍处理的材料。

④把已生根的洋葱分成A、B两组，每组各五个洋葱。

⑤把A组烧杯中的清水倒掉，换上0.1∽0.3%的秋水仙素溶液；B组烧杯的清水换上新鲜的清水，让A、B两组洋葱继续在室温下培养24小时。

对A组的洋葱根尖作非离体浸泡处理，处理时要避免阳光直射，以免改变药性。

⑥当看到A 组洋葱根尖分生区膨大时，可判断洋葱根尖分生区的细胞中染色体可能加倍；B组洋葱根尖仍然是清水培养，根尖分生区没有出现膨大现象。

2.取材和固定：
把A组洋葱根尖用流水冲洗，取2∽3mm的根尖放在固定液中固定待用；将B组洋葱根尖
2∽3mm的根尖直接放在另一固定液中固定备用。

3.制片：
①解离：把已固定好的A、B两组洋葱根尖分别放在盛有10%的盐酸的溶液的培养皿中进行解离10分钟，然后用流水冲洗（又快又好，节省时间）。

②染色：把已冲洗好的两种根尖分别放在醋酸洋红溶液中染色5分钟。

③制片：取两块洁净的载玻片分别编为1、2号，把已染色的A组根尖放在1号载玻片上；把已染色的B组根尖放在2号载玻片上，用常规压片法压片，盖上盖玻片，即临时装片制成。

4.观察：
①先把2号装片放在显微镜下观察，找到根尖分生区，观察各个时期的特点，数一数中期细
胞中染色体数目。

②再把1号装片放在显微镜下观察，先找到分生区，仔细观察各个时期的特点，数一数中期细胞中染色体的数目。

观察结果是：1号装片中细胞的体积变大，染色体数目比2号装片中染色体数目多一倍。

结果分析：
A组洋葱根尖经0.1∽0.3%的秋水仙素溶液处理后，细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体的形成受到抑制，在有丝分裂后期染色体不能移向两极，细胞加大而不分裂，着丝粒分裂后的染色体仍在一个细胞中，故细胞中的染色体数目加倍。

B组洋葱根尖始终用清水培养，根尖分生区细胞进行正常的有丝分裂，能产生正常的纺锤丝，复制的染色体平均分配到两个子细胞中去，所以细胞中的染色体数目不变。

由此可见0.1∽0.3%的秋水仙素溶液能诱导植物多倍体的形成。

注意事项：
①秋水仙素为剧毒，使用时要特别小心，切勿使药液进入眼内或口中。

②该药品价格昂贵，要节约使用，可将用过的秋水仙素溶液收集在棕色的瓶中密封，低温保存，以备再用。

③由于秋水仙素是剧毒，使用时，秋水仙素溶液浓度不能过大，否则会杀死细胞，0.2%左右的浓度诱导效果最好。