原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法

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原料乳及乳制品中
三聚氰胺检测方法　楚雪郑州谱尼测试技术有限公司
众所周知，三聚氰胺是一种常见的工业原料，在纺织、橡胶、塑料等行业得到了广泛的应用，而且它的含氮量极高，如果添加到原料乳以及乳制品中，可以造成数据假象，让人们误以为里面含有较多的蛋白质成分。

典型的三聚氰胺检测方法
三聚氰胺是一种无色无味的晶体，低毒，微溶于乙醇，可溶于甲醇、甘油、乙酸，不溶于乙醚、苯酚。

目前，三聚氰胺的主要用途是加工塑料、胶水、涂料和阻燃剂。

虽然三聚氰胺毒性较低，但是对于幼儿而言，如果一次性摄入量过多，就会导致肾功能衰竭。

我国明确规定婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺的含量不得超过１．０ｍｇ／Ｌ，其他食品中三聚氰胺的含量不得超过２．０ｍｇ／Ｌ。

色谱检测。

第一种，高效液相色谱法。

这种方法简称ＨＰＬＣ法，适用的范围特别广，而且分析速度很快，能够实现自动化检测，是最普遍的检测方法。

目前人们已经加大了研究的力度，并且对检测条件进行了优化，明显缩短了检测时间，而且高效液相色谱法日渐成熟，已经成为了人们检测三聚氰胺的首选方法，具体的检测内容会在本文的第二章节详细介绍。

第二种，气相色谱质谱法。

这种方法简称ＧＣ－ＭＳ法，灵敏度很高，但是由于三聚氰胺的分子质量较小，不容易挥发，所以需要进行衍生处理，提高挥发性，这一过程会造成一定的样品损失。

如果使用硅烷进行衍生处理，可以降低外界环境的干扰，而结合反吹技术，可以省略固相萃取柱净化的环节，这样简化了处理流程。

第三种，液相色谱－串联质谱法。

这种方法使用三氯乙酸溶液对目标分析物进行提取，然后通过离子固相萃取柱净化，在对三聚氰胺进行检测时，方法检测低限为１８μｇ／ｋｇ，与上述两种方法相比，这种方法更加便捷，并且可以使用外标法和内标法进行测量。

光谱检测。

第一种，拉曼法。

ＳＥＲＳ技术可以增强金属表面附着物质的散射信号，并且搜集到具体的结构信息，所以检测人员可以建立一套拉曼光谱扫描系统，对原料乳与三聚氰胺颗粒的混合样本进行检测，就会发现拉曼强度与三聚氰胺的比例存在明显的线性关系。

在具体的检测过程中，需要事先对原料乳以及乳制品的样品进行提取，使用三氯乙酸溶液，浓度在１３％左右，这样能够除去样品中的氧化铝杂质，然后再进行ＳＥＲＳ检测，这样可以极大地缩短检测时间。

第二种，红外法。

红外光谱技术不会对样品造成破坏，所以可以算作绿色技术，这种技术能够对样品进行定量分析，即使不断变化样品中三聚氰胺的浓度，也可以很好地识别未知样品中三聚氰胺的真实含量。

第三种，荧光法。

这种方法需要利用还原剂将胆酸钠合成为ＡｕＮＣｓ，而三聚氰胺遇到ＡｕＮＣｓ后，会增强荧光的效果，这种方法操作比较简单，人们可以用它对超市中出售的牛奶进行检测。

另外，还可以使用试纸条对三聚氰胺进行检测，而且便于肉眼观察，检测时间大概１５分钟左右。

免疫检测。

目前，免疫检测方法不是十分常见，而且涉及到免疫反应，核心原理是抗原抗体的特异性结合，并且需要借助大孔径的微孔过滤膜。

在制作三聚氰胺抗原时，要使用活化脂法，然后将三聚氰胺抗体以及ＨＲＰ抗体作为检测层，这种方法耗时较短。

高效液相色谱法简析
试验。

使用的材料包括甲醇、氨水、三氯乙酸、柠檬酸、辛烷磺酸钠以及乙酸铅。

将５０ｍＬ的甲醇注入到含有５０ｍＬ水的试管中，得到甲醇水溶液。

用天平称取１０ｇ的三氯乙酸，然后放入到１Ｌ的容量瓶中，之后用水将容量瓶注满，并且进行均匀的晃动，得到浓度为１％的三氯乙酸溶液。

将５ｍＬ的氨水与９５ｍＬ的甲醇混合在一起，得到浓度为５％的氨化甲醇溶液。

将１ｇ乙酸铅放入到１００ｍＬ的容量瓶内，然后注满水，得到１％的乙酸铅溶液。

这里需要注意的是离子对试剂缓冲液的配制，需要将２．０５ｇ的柠檬酸钠与２．１８ｇ的辛烷磺酸钠混合在一起，然后加入９６０ｍＬ的水，混合均匀后还要加水调节ＰＨ，当ＰＨ达到３．２时，停止加水。

使用的仪器包括高效液相色谱仪、天平、固相萃取装置、氮气吹干仪等，在配制三聚氰胺储备液时，需要准确称取０．０９９６６ｇ含量为９９．９８％的三聚氰胺标准品，并且与甲醇水溶液混合在一起，这样就得到了浓度为９８６．３２４μｇ／ｍＬ的储备液，保存时要注意避光，同时温度控制在６℃左右。

在试验过程中，分别选取０．０６ｍＬ、０．１５ｍＬ、３ｍＬ以及６ｍＬ的储备液，进行分组，并且放入到１００ｍＬ的容量瓶中，用流动相定容，根据浓度的高低进行检测。

ＨＰＬＣ的检测条件：色谱柱Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００－５－Ｃ１８，流速１．２ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３８℃，波长２３０ｎｍ。

如果调节流动相ＰＨ，可以发现当ＰＨ下降时，目标峰拖尾情况出现的次数明显降低，所以可以在２．３～３．６之间合理调节ＰＨ。