贝克曼ACCESS2说明书

详情请参见操作指南和参考手册中有关定标原理、设置定标、定标要求的输入和回顾定标数据等内 容。针对不同的标本类型，如血清、肝素抗凝血浆或红细胞叶酸溶血液标本均需建立各自的定标曲 线。血清或肝素抗凝血浆检测时的测试名称是叶酸（Folate），而红细胞溶血液检测时的检测名称 是红细胞叶酸（RBCFol）。每一种样品类型的定标曲线都有单独的定标卡并在不同的样品架上进 行定标，但所用定标品为同一套。
标本采集
血清或肝素抗凝血浆叶酸
A. 空腹时的血清或肝素抗凝血浆是推荐的样品类型，样品应避光保存以防降解。如果检测不能立即进 行，将样品保存于 2 到 8°C 冰箱，如果检测不能在 8 小时内完成或要将样品分装保存，则将样品 保存于–20°C 冰箱种(7,8)。
B. 遵守以下推荐的血清标本处理、运行和储存步骤(9，10):
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3. R1c: 叶酸结合蛋白（牛源性）乳剂和小鼠抗叶酸结合蛋白单抗包含在缓冲液中，含有人血清 白蛋白，< 0.1%叠氮钠和 0.25% ProClin** 300。
4. R1d: 0.1N 盐酸溶液。
5. R1e: 0.5N 氢氧化钠溶液。
B. Access 叶酸定标品 货号：33015，4.0 毫升/瓶
血清、肝素抗凝血浆或溶血产物标本中的叶酸被处理由内源性结合蛋白中解离出来，在中和了反应混合物 后，叶酸结合蛋白，小鼠抗叶酸结合蛋白抗体，标记了碱性磷酸酶的叶酸作为酶结合物，包被了羊抗小鼠 捕获抗体的磁性颗粒被加入到反应管中。标本中的叶酸和作为酶结合物的标记了碱性磷酸酶的叶酸和定量 的叶酸结合蛋白表面的位点进行竞争结合，最后复合物通过小鼠抗叶酸结合蛋白抗体与磁性颗粒结合。在 磁性分离区域进行分离和冲洗以去除未和固相结合的游离成分。化学发光底物，Lumi-Phos* 530 加入到反 应管中，与反应体系中的碱性磷酸酶进行反应并，发出的光量子被光电倍增管检测，光量子的强度与标本 中的叶酸含量成反比，对照仪器中储存的多点定标曲线即可得知样品中叶酸的含量。
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5. 贝克曼公司推荐冻存标本最多保存 6 个月而不影响检测。
6. 标本只能复溶一次。
C. 不要使用溶血标本，红细胞中叶酸浓度大大高于血清或肝素抗凝血浆中的浓度，溶血会导致假阳性 结果。
D. 样品中最高含有 10 mg/dL (171 µmol/L)的胆红素和含有相当于 1800 mg/dL (20.32 mmol/L)甘油三 酯的脂血标本不影响叶酸浓度的检测，另外，样品中加入含有 5 g/dL (50 g/L)的人白蛋白作为内源 性白蛋白不影响叶酸浓度的检测。
叶酸 检测步骤
用 ACCESS®免疫分析系统对 人血清、血浆或红细胞内叶酸的定量检测
内容表
原理
2
标本采集
2
试剂和必须品
3
定标
6
质控
6
步骤
7
检测结果
7
开始检测
9
检测注意事项
9
参考文献
10
Beckman Coulter, Inc. • Fullerton, CA 92834
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叶酸和维生素 B12 由蛋氨酸合成的反应途径所联系在一气，两者中任何一种的缺失都将影响该途径并导致 相似的临床症状（4.5）。此外该普通的代谢途径还将引起这样的结果，即维生素 B12 的无效会破坏叶酸进 入红细胞，这将会导致红细胞内叶酸浓度的下降，即便叶酸的摄入正常。由于上述原因，在临床工作中一 般应同时检测两种维生素，治疗的方法则视是哪一种维生素缺乏而定。
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使用中 (已开瓶)
外部液体架的底物位置
最长 14 天
R2 底物：Lumi-Phos 530 (缓冲液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性 剂量)。
按照 Access 仪器操作指南中介绍的使用方法使用。
D. Access 冲洗缓冲液 货号：81907 4 x 1950 ml/箱
概述 叶酸是一种必须维生素，可由多种食物提供，如深叶蔬菜，柑橘类水果，酵母菌类，大豆，鸡蛋和牛奶。 它在小肠吸收，在肝脏储存。自然状态下叶酸可存在多种形式，该些形式均可通过同功酶的形式表达它的 生物学功能，即转运单个的碳单位（2.3.4），它对于正常细胞的生长和 DNA 的合成至关重要。叶酸的缺 乏可导致巨细胞贫血和最终导致多种神经症状（4.5）。
1. R1a: 标记了碱性磷酸酶（牛源性）的叶酸酶结合物和悬浮于缓冲液中的包被了羊抗小鼠 IgG 的磁性颗粒，含有人血清白蛋白，< 0.1%叠氮钠和 0.25% ProClin** 300。
2. R1b: 抗坏血酸钠溶液，PH~7。
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1. 用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。
2. 血清标本应在离心前使标本完全自然形成凝块。
3. 全程保证样品管的密闭状态。
4. 离心获得血清后的两小时内，至少将 500 µl 血清或肝素抗凝血浆转移到一个密闭的储存试管中 备用。
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未开瓶
前提
储存 2 到 8°C
稳定性
可一直保存到标签注明的 失效期
使用前的平衡(未开瓶)
15 到 30°C (室温条件)
至少 18 小时 最长 14 天
使用中(已开瓶)
内部底物支持位置
最长 5 天
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货号：33010， 100 个测试，50 测试/盒。
• 现成可用 • 在 2 到 10°C 冰箱中顶端朝上存放 • 试剂盒必须在2到 10°C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用 • 在 2~10°C 冰箱中可一直保存到标签中注明的失效期 • 试剂盒被吸取使用后，在 2 到 10°C 条件下可稳定 14 天 • 一旦发现有试剂盒上弹性体破裂或质控结果超出范围等现象出现即代表试剂盒失效 • 所有的抗血清是多抗，除非特殊说明
定量检测的定标是用已知分析浓度的标本，象病人标本一样进行检测以观察光量子值。光量子值和 已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。定标曲线可将样本检测中得到的光量子值转化成特定 的分析浓度。
• 现成可用 • −20°C 保存，只可复溶一次 • 使用前轻轻颠倒混匀，避免产生气泡 • −20°C 保存可稳定至失效期 • 2-10°C 可稳定三个月 • 质控结果不在范围表明失效
1. S0: 以人血清白蛋白(HSA)为基质的缓冲液，离子表面活性剂，< 0.1%叠氮钠和 0.25% ProClin** 300，含有 0.0 ng/mL (nmol/L)的叶酸。
2. S1, S2, S3, S4, S5: 在缓冲基质中的叶酸（蝶酰谷氨酸）的浓度约为 1.0，2.5，5.0，10.0 和 20.0 ng/mL (大约 2.3, 5.7, 11.3, 22.7, and 45.3 nmol/L)，另外含有人血清白蛋白，离子表面 活性剂和< 0.1%叠氮钠和 0.25% ProClin** 300。准确浓度请参见各定标品瓶上的注明。
叶酸缺乏可由食物摄入过少，无效吸收或过度叶酸利用等原因引起，过度利用在怀孕时的发生非常普遍， 其它例如酗酒、肝炎或其它肝脏损害性疾病均可导致叶酸的过度利用（5.6）。血清和红细胞内叶酸水平的 检测均可反应体内的叶酸状态，血清中叶酸的浓度提示近期的叶酸摄入情况，红细胞内叶酸浓度是提示长 时期内叶酸的储存的最佳指标。红细胞内叶酸水平的过低提示长期的叶酸缺乏。
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原理
检测原理 Access 中叶酸检测是一种竞争结合受体的分析方法，再此检测中，血清或肝素抗凝血浆不需要预处理即可 对所含叶酸进行检测。对于红细胞中叶酸的检测，全血标本首先用溶血剂进行手工溶血，该溶血剂由抗坏 血酸和与叶酸游离的人血清白蛋白组成。前处理液溶解了红细胞并将红细胞中以聚合谷氨酸形式存在的叶 酸转化为血清中的存在形式，即单谷氨酸形式（1），经全血预处理后得到的标本被定义为溶血产物。
F. 样品中最高含有 10 mg/dL (171 µmol/L)的胆红素和含有相当于 1800 mg/dL (20.32 mmol/L)甘油三 酯的脂血标本不影响叶酸浓度的检测，另外，样品中加入含有 5 g/dL (50 g/L)的人白蛋白作为内源 性白蛋白不影响叶酸浓度的检测。
试剂和仪器
Beckman Coulter, Inc. 4300 S. Harbor Blvd. Fullerton, CA 92834 A. R1: Access 叶酸试剂盒： 2 盒装
E. Access 红细胞溶血液 Access Red Blood Cell Folate Lysing Agent 货号 33017：2×25 毫升; 1 毫升/测试 Cat. No. 33017: 2 x 25 mL; 1 mL/test
瓶内含有：抗坏血酸（0.05g）和人血清白蛋白（HAS），每瓶可配置 25 毫升 0.2%的抗坏血酸， 在 2~8°C 存放。
3. 病人样品和血制品应按照阐述的最底危险性的常规操作进行操作，将这些物品当作潜在的传 染物品，按照常规操作注意点和优秀实验室的操作常规进行处理，无论该些物质是原型、处 理物或离心前。用合适的消毒剂进去污。按照各实验室规定和操作规程存放和处理该些物品 及其容器 (11)。
4. 试剂中所含的叠氮钠可以和铅和铜反应形成有高度腐蚀性的重氮金属盐，如果被溅到含该物 质的液体，则可用大量水冲洗来防止重氮的堆积(12)。
3. 定标卡：一张是提供给血清或肝素抗凝标本检测所用，标记有 Access Folate ，另一张是提 供给红细胞叶酸检测所用，标记有 Access RBC Folate 。
C. Ac现成可用，下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。
现成可用。在室温条件下(15 到 30°C)可稳定到包装上注明的失效期。底物本底检测值的增高或在 “双抗”体夹心法中的 0 点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。
R3 冲洗缓冲液：Tris 盐缓冲液，离子表面活性剂，< 0.1 %的叠氮钠和 0.1% ProClin 300。
按照 Access 仪器操作指南中介绍的使用方法使用。
C. 慢慢的颠倒混匀全血标本数次以确定完全混匀，吸取 50 微升全血用 1 毫升溶血剂进行溶血。
D. 慢慢的颠倒混匀数次并在室温下避光保存至少 90 分钟以使其稳定，90 分钟后可在 3 小时内检测该 溶血液或在–20°C 下保存标本或分装标本。在–20°C 条件下该溶血液最长可稳定 30 天。
E. 检测冷冻后的溶血液，复溶并使避光使标本恢复室温，用颠倒混匀的方法混匀标本，3 小时内分析 样品。
红细胞叶酸测定
A. 采集全血标本，用 EDTA 或肝素抗凝，检测并计算公式中需要的红细胞压积，在准备溶血前于 2 到 8°C 至多保存 4 小时。
B. 将 Access 红细胞叶酸溶血剂用 25 毫升去离子水复溶，放置至少 40 分钟，直到完全溶解。使用前 缓慢的旋转混合，在 2 到 8°C 至多保存 2 周，每次使用前要使该液体恢复至室温。
F. 质控品：商用血清和全血质控品。
G. Access 免疫分析系统和消耗品 H. 警告和注意点
1. 只可用于体外诊断。
2. 用来制备试剂和红细胞叶酸溶血液的人源性材料已作检测，未发现已肝病毒抗原(HBsAg)、丙 肝抗体(HCV-Ab)和人免疫缺陷病毒抗体(HIV1-Ab 和 HIV2-Ab)存在。因为没有一个测试方法 的阴性能完全保证没有感染源，因此处理试剂和样品时应视为在传递感染性疾病样品一样 (11)。