沙门氏菌和志贺氏菌的检测(共57张PPT)

生物学特性
1.形态
两端钝圆的革兰氏阴 性杆菌，〔0.4-0.9〕 µm ×(1-3)µm，无芽 孢，周生鞭毛，一般无 荚膜，少数有包膜。
光滑型的细菌大小均
培养和生化反响
• 兼性厌氧，最适生长温度35～37℃，最适生长 PH为6.8～7.8.本菌属对营养的要求不高，在普 通营养琼脂上生长的菌落为圆形、光滑、湿润， 半透明，边缘整齐的菌落，有时可出现粗糙型的 菌落。在肠道选择性培养基上菌落小至中等，透 明或半透明，乳糖不发酵，与志贺菌的菌落相似 ，有些能产生硫化氢的菌株，在SS琼脂上形成 中心黑色的菌落。
检验方法
• 别离培养 常规的肠道选择鉴别培养基能有效地别离 沙门菌。常用肠道鉴别培养基〔MAC或EMB〕和选 择培养基〔SS等〕，强选择性培养基〔孔雀绿和亚硫 酸铋等〕仅适用范围于爆发流行时。
别离培养
〔1〕血液和骨髓：血液5ml或骨髓液 0.5ml胆汁葡萄糖肉汤或胰化蛋白大豆肉 汤中，35-37℃孵育，假设有生长〔多 在2~4日内出现〕那么移种至血琼脂平 板和SS培养基中。
V-W变异：是指沙门菌失去Vi抗原的变异。初次别离得到的具有Vi 抗原、O抗原不凝集的沙门菌称V型菌；Vi抗原局部丧失，与O抗原 血清发生凝集又可与Vi抗血清凝集者称VW型菌。 Vi抗原完全丧失 ，与O抗原血清发生凝集又与Vi抗血清不凝集者称W型菌。V-W变 异的过程是V型菌经人工培养，逐渐丧失局部Vi抗原而成为VW型， 进而丧失全部Vi抗原而成为W型菌。
2〕食物中毒〔急性胃肠炎〕：由鼠伤寒沙门菌、 猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌引起，有发热、恶心呕吐 、水样泻，严重者致脱水、休克、肾衰而死亡〔主见 于婴儿、老人等〕，但，大多2~3天自愈。
3〕败血症 ：常由猪霍乱沙门菌、丙型副伤寒沙 门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起。有高热 、寒战、贫血等严重病症。多见于儿童及免疫力低 下者。
37 ℃ 18~24h
〔SS、EMB、MAC、血平板〕
37 ℃ 18~24h
可疑菌落
初步鉴定
〔涂染检、KIA、MIU、IMViC等生 化反响、A-F多价血清凝集〕
37 ℃ 18~24h
最终鉴定 肠道杆菌系统生化反响 单价因子血清定血清型
增菌培养
(SF、CN、TT)
检验方法
• 直接检测 将病人标本或肉汤增菌培养物直接 用商品乳胶凝集试剂进行试验，可快速检出沙门 菌和志贺菌。
5.变异性
S-R变异:自临床标本初次别离的菌株一般都是光滑型，经人工培养 ，传代后可逐渐变民粗糙型菌落。此时菌体外表的特异多糖抗原丧 失，在生理盐水中可出现自凝。
H-O变异：是指有鞭毛的沙门菌失去鞭毛的变异
位相变异：具有双相H抗原的沙门菌变成只有其中某一相的单相菌， 称位相变异。在沙门菌血清学分型时，如遇到单相菌，特别是只有 第Ⅱ相〔非特异相〕抗原时，需反复别离和诱导出第Ⅰ相〔特异相 〕抗原方可作出鉴定。
+ A~F多价+ D群+ vi+
+ A~F多价+ 肠炎+
鉴定与分型——血清学分型
2.血清学分型 用抗血清对所别离菌种的O抗原、外表Vi抗原， 第一相和第二相H抗原进行凝集试验〔O：Vi：第一相H：第二 相H〕。多数实验室先用多价O抗血清〔A-F〕对沙门菌别离株 进行分群。95%以上的沙门菌临床别离株都属A-F群，多价抗 血清凝集后再用分别代表每一个O血清群的单价因子血清定群 。O分群之后再用H因子血清检查第一相和第二相H抗原，综合 O、H及Vi因子血清的检查结果，判断血清型。
➢ H抗原：为不稳定的蛋白质抗原，加热或用乙醇处理 均被破坏。沙门菌H抗原有两个相,第一相特异性较高 称特异相,用小写英文字母a、b、c表示，直至z，z以 衙用z加阿拉伯数字表示，如z1、z2、z3等，第二相 抗原为沙门菌共有，称非特异相，直接用1、2、3表 示。同时有第一相和第二相H抗原的细菌称为双相菌 ，仅有一相者称单相菌。H抗原是定型的依据，其刺 激机体产生的抗体以IgG为主，与相应的抗血清呈絮 状反响。
抗原构造
• 菌体抗原〔o〕：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与 特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。现 有50多种，多数沙门菌含有两种以上的O抗原，有的 O抗原是一种菌独有的，有的是几种菌共有的，凡含 有共同特异性抗原成分的血清型归为一个群，可将沙 门菌化分为42群，按A-Z排列，Z以后的顺序以O51O67表示。引起人类沙门菌病的95%以上都在A-F 6 个群内。
➢ 外表抗原：在沙门菌属中已被证实的外表抗原有Vi抗原、M抗原、5
抗原三种
➢ Vi抗原：是一种不耐热的酸性多糖聚合物，加热60℃30分钟或经 石炭酸处理即被破坏，经人工培养基传代后也易失去。新别离的 伤寒及副伤寒沙门菌常带有此抗原。Vi抗原位于菌体的最表层， 有抗吞噬及保护细菌免受相应抗体和补体的溶菌作用。Vi抗原存
概述 肠道感染细菌
❖肠道感染细菌是通过粪-口传播途径进行传播的一类 细菌。
❖主要包括肠杆菌科细菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌、幽
门螺杆菌等。
❖肠杆菌科中与医学有关的包括：埃希菌属、志贺菌属、 沙门菌属、变形杆菌属等。
肠杆菌科共同特性
相似的形态染色 G-小杆菌，有鞭毛(痢疾杆菌外)
菌毛，某些有荚膜，无芽胞
鉴定与分型——血清型分型
• 注意：试验时与多价血清不凝集时，可在玻璃试管内用 生理盐水将细菌制成尝菌液，放入沸水中15~30min， 冷却后再次做凝集试验。因Vi抗原能阻断O凝集反响， 而煮沸处理能破坏菌体外表的Vi抗原。仅出现单相H抗 原〔第一相或第二相〕时，需用位相别离的方法诱导出 另一相抗原后再进行检查。
生化反响
初步鉴别：三糖铁琼脂
乳糖:蔗糖:葡萄糖=10 : 10 : 1 以酚红作指示剂
当待检菌发酵乳糖或蔗糖时，产酸量多，使整个培养基均呈黄 色；如仅发酵葡萄糖，那么产酸少，斜面由于细菌生长分解蛋 白胨而释放氨，酚红显碱性红色、而底层黄色
细菌对培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的复原作用，生 成硫化氢。硫化氢遇硫酸亚铁或柠檬酸铁铵产生不溶性黑色硫化 亚铁。
〔1〕血液和骨髓：血液5ml或骨髓液0.
生物实验室不列为常规检查工程。 美国细菌学家Salmon与Smith于1885年别离出猪霍乱沙门菌。
血清学凝集，生化反响不符合，可考虑不典型菌株。
猪霍乱沙门菌 K A + -/+ + -- + —
+
A~F多价+ C群+
MIU 触酶 氧化酶
志贺菌属是人类细菌性痢疾最常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
〔2〕粪便或肛拭：最好作床边接种，或用 卡-布〔Cary-Blair〕运送培养基。
〔3〕尿液和体液：无菌采集的中段尿、胆 汁、脑脊液、胸腹水等经3000r/min离 心沉淀后接种于增菌液、血琼脂和肠道
鉴定与分型——生化鉴定
疑为沙门菌的可疑菌落可用手工或商品生化反响进行生化 鉴定，常用三糖铁(TSI)琼脂和赖氨酸琼脂来初步鉴定。本菌在 TSI上典型的生化模式为：碱/酸，葡萄糖产气，硫化氢阳性〔 K/A++〕。少数菌株为乳糖发酵型，呈〔A/A〕，这些菌株的硫 化氢往往阴性。在赖氨酸铁琼脂上的典型生化模式为K/K和硫化 氢阳性，但亦存在赖氨酸和硫化氢阴性的菌株〔副伤寒A沙门菌 〕。初步反响疑为沙门菌的菌株必须经全面生化反响证实和血清 学分型后才能发出报告。
二、致病性与免疫性
致病物质：
1.侵袭力：菌毛帮助细菌黏附肠粘膜上皮细胞
Vi抗原 可阻断相应抗体和补体的作用，抵抗吞噬细 胞的吞噬作用。
内毒素：可激活补体系统、吸引白细胞，引起肠道炎 症，吸收入血可引起全身中毒，发热、白细胞减少、中 毒性休克。
肠毒素：类似于大肠杆菌肠毒素。
2. 所致疾病
1) 肠热症〔伤寒和副伤寒〕：由伤寒沙门菌 、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起。
方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需作出努力个复管，分别参加等量的伤寒沙门菌O、H抗原及副伤寒沙门菌甲、乙
、丙的H抗原进行试管内凝集，凡血清最高稀释度出现明显凝集者为凝集将价。
斜面、底层均黄色，出现局部黑色或全部黑色
小儿多见，为内毒素在特殊情况下的反响。
血清学诊断
• 用伤寒、副伤寒的O、H抗原，检测受检血清中有无相应的 抗体的半定量试管内凝集试验，称为肥达反响。
乙型副伤寒 K A + ++ + -- + —
+
A~F多价+ B群+
丙型副伤寒 K A + ++ + -- + —
+ A~F多价+ C群+ vi+
猪霍乱沙门菌 K A + -/+ + -- + —
+
A~F多价+ C群+
伤寒沙门菌 K A -- +/- + -- + — 其他沙门菌 K A + + + -- + —
细菌性痢疾是一种常见病，主要流行于开展中国家，全世界年病例数超过2亿，其中500万例需住院治疗，年死亡病例达65万。
别离培养原那么上于发病第1周采血，第2周取粪便或尿液，全程均可作骨髓培养。
在中肠心道 黑选色择的性菌培落踪养。基传上菌染落小源至中，等常，透在明或一半透些明，特乳殊糖不的发酵参，与考志贺实菌验的菌室落相内似，进有些行能，产生一硫化般氢的医菌株院，的在SS微琼脂上形成
简单的培养条件 需氧或兼性厌氧，营养要求不高
活泼的生化反响 致病菌
非致病菌
乳糖 发酵 实验
阴性 阳性
SS琼脂培养基 〔含胆盐、乳糖、中性红等〕
4、抗原构造复杂
鞭毛抗原〔H〕 IgG
K或Vi抗原
菌体抗原〔O〕 IgM
沙门菌检测
• 美国细菌学家Salmon与Smith于1885年别离出 猪霍乱沙门菌。1990年为纪念Salmon，定名这 类细菌为沙门菌属。
• 方法 将受检血清用生理盐水作倍比稀释，每个稀释度需 作出努力个复管，分别参加等量的伤寒沙门菌O、H抗原及 副伤寒沙门菌甲、乙、丙的H抗原进行试管内凝集，凡血清 最高稀释度出现明显凝集者为凝集将价。
1〕正常凝集价 正常人由于隐性感染或预防接种，血清中通常可含有一定 水平的凝集抗体，正常的凝集价可Fra bibliotek不同地区而有差异
鉴定与分型——Vi噬菌体分型
95%以上的沙门菌临床别离株都属A-F群，多价抗血清凝集后再用分别代表每一个O血清群的单价因子血清定群。
乙型副伤寒 K A + ++ + -- + —
+ A~F多价+ B群+
最后鉴定：全面生化反标响和准单的价血V清玻i噬片凝菌集试体验共有33型，该法可用于流行病学调查和追
➢ 斜面红色、底层黄色，出现局部黑色或全部黑色
➢ 斜面红色、底层黄色，无黑色
➢ 斜面、底层均黄色，出现局部黑色或全部黑色 ➢
➢ 除沙门菌外，变形杆菌、柠檬酸盐菌、志贺菌等 也可出现上述反响。
➢ 吲哚试验：阴性
志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产
生H2S。 大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生
二、微生物学检查
• 标本采集
•
根据疾病的类型、病情和病程的不
同分别采集不同的标本。别离培养原那
么上于发病第1周采血，第2周取粪便或
尿液，全程均可作骨髓培养。血清学诊
断应在病程的不同时期分别采集2～3份
标本。
检验程序
血液、骨髓
粪、尿、可疑食物
增菌培养
〔胆盐葡萄糖肉汤〕
37 ℃ 18~24h
分离培养
H2S 。 沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖、蔗糖，大多数产生
H2S ，多数产气。 下面照片所示2-3-4，可能是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？
沙门菌属细菌的初步鉴定
KIA
斜面 底层 产气 H2S
MIU 触酶 氧化酶
硝酸盐 复原
诊断血清凝集
甲型副伤寒 K A + -/+ + -- + —
+
A~F多价+ A群+
在时可阻止O抗原与相应抗体发生凝集，故在沙门血清学鉴定时 应加以注意，需事先加热破坏Vi抗原之后，O抗原才得以与相应 的O抗血清发生凝集。带Vi抗原的沙门菌亦可用Vi噬菌体进行分 型，有助于流行病学调查和追踪传染源。
M抗原：粘液抗原，在菌型鉴定上无特 殊意义。
5抗原：
4.抵抗力
• 不强，加热60℃1h，或 65℃15~20min即被杀死。在水中能存 活2~3周，在粪便中可存活1~2月。对 胆盐和煌绿等染料有抵抗力。因此可用 于制备沙门菌的选择培养基。
• 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。包括伤寒、副 伤寒甲、乙、丙型，肠炎，鼠伤寒等沙门菌，现 今已发现2324个血清型。
• 在世界各地的食物中毒中，沙门菌食物中毒常占 首位或第二位。规定在药品和食品中不得检出沙 门菌。美国每年报道病例45 000个左右，实际数 量可能多达200-300万。伤寒每年400-500例。