组织培养实验-MS培养基及配制注意事项

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一、 MS 培养基母液的配制注意：

1．除 CaCl22H2O 单独配制外，大量元素按照使用时高 10 倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在 500ml 烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl22H2O 配制同上置于另一小口瓶中。

2．微量元素母液的配制按要求浓缩 100 倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（ FeSO47H2O 和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，母液成分 1 倍培养基用量浓缩倍数称取量（mg）母液体积（ml）配制 1 升培养基吸取量（ml）编号种类 1 大量元素KNO3 1900 10 19000 1000 100 NH4NO3 1650 10 16500 MgSO4 7H2O 370 10 3700 KH2PO4 170 10 1700 2 CaCl2 2H2O 440 10 4400 1000 100 3 微量元素 MnSO4 4H2O 22.3 100 2230 1000 10 ZnSO4 7H2O 8.6 100 860 H3BO3 6.2 100 620 KI 0.83 1000830 1000 1 Na2MoO4 7H2O 0.25 1000250 CuSO4.5H2O 0.025 100025 CoCL2.6H2O 0.025 100025 4 铁盐 Na2-EDTA 37.3 100 3730 1000 10 FeSO4.4H2O 27.8 100 2780 5 有机物甘氨酸 2.0 50 100 500 10 盐酸吡哆醇（VB6） 0.5 50 25

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盐酸硫铵素（VB1） 0.1 50 5 烟酸 0.5 50 25 6 肌醇 100 50 5000 500 10 定容在 1000ml 容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将 FeSO47H2O 和 Na2-EDTA.2H2O 分别溶于450ml 蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调 PH 至 5.5 加水定容至 1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。

4．有机物母液配制，按母液要求浓缩 50 倍，除蔗糖按 3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在 500ml 容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。

5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。

A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。

B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。

二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序 (一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列 A. 大量元素；B. CaCl2. 2H2O ； C. 微量元素；D. 铁盐； E. 有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：

配制 0. 5mg/ml 的 NAA 称取 50mg ， NAA 用少量 95% 酒精

---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 溶解后加蒸馏水定容至 1000ml； G.. 细胞分裂素、激动素（KT）配制 0. 5mg/ml 的 KT 称 50mgKT用少量 1N HCL 溶解后,加蒸馏水定容至 100ml。

(三) 配制培养基（1000ml） 1. 琼脂: 称取 5~7g 琼脂，加入 300ml 蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止. 2. 蔗糖 3%用质量较好的白糖代替，称取 30g 白糖，溶于溶有琼脂的 300ml 蒸馏水中。

3. 各种母液的吸取（培养基 1L）（1）用 50ml 量筒量取大量元素母液（A）和 CaCl22H2O 母液（B）各 100ml （2）分别用 10ml 移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各 10ml （3）用 10ml 移液管或吸管吸取有机物（H） 10ml （4）移取激素将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，用酸度计或精密 PH 试纸测定培养基的 PH 一般要求 5.8~6.0，过酸过碱则用 1N NaoH 和 1N HCL 调整。

二．分装：

用一个接有胶管的分装器趁热装培养基， 1000ml 培养基分装到 25-30 个三角瓶中，每个三角瓶约 30ml 左右（一般占试管、三角瓶容量 1/4~1/3 左右）注：

培养基勿碰瓶壁。

三. 包装：

分装好的三角瓶用封口膜包扎好，标明培养基代号即可进行灭

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菌。

用具清理和洗涤：

各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。

三、高压蒸汽灭菌锅的使用方法具体操作步骤：

1. 高压锅放水至平把架；

2. 把包扎好的培养基装入高压锅;

3. 盖上热压锅盖,上紧螺帽(注意对角拧紧螺帽)关上气阀和安全阀.

4. 然后接通电源.

5. 压力计升至 0.05MPa 时，打开放气阀,排除冷空气(此步很重要)。

6. 排除冷空气后,关闭放气阀，待压力升到 0.11MPa 位置时，开始计算灭菌时间，具体方法：

当压力锅指针升至 0.12MPa 时，关闭电源，待指针下降至0.11MPa 时接通电源，不断重复此操作过程，维持 20 分钟。

7. 灭菌时间达到 20 分钟后，除去电源，打开放气阀(注意要逐渐放气)待高压锅内的空气完全排除后，打开热压灭菌锅盖(注意对角扭松螺帽)稍待冷后再把培养基取出。

8. 经过灭菌的营养培养基不宜放置太长，应尽早使用，但为了在使用前能检查培养基有无微生物污染，可将培养基置于25℃下保存 4 天，如果培养基需要贮存较长时间，可在4℃低温下保存。

灭菌高压锅有大型卧式、中型立式、小型手提式等多种型号和规格，无论哪种型号，操作的步骤都很相近。