【CN109874671A】一种南瓜单倍体植株的诱导方法及用于该诱导方法的培养基【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910185738.2

(22)申请日 2019.03.12

(71)申请人 湖南农业大学

地址 410128 湖南省长沙市芙蓉区农大路1

号

(72)发明人 邹甜　孙小武　王志伟　杨红波　

龚思　

(74)专利代理机构 长沙朕扬知识产权代理事务

所(普通合伙) 43213

代理人 杨斌

(51)Int.Cl.

A01H 4/00(2006.01)

(54)发明名称一种南瓜单倍体植株的诱导方法及用于该诱导方法的培养基(57)摘要本发明公开了一种南瓜单倍体植株的诱导方法，包括如下步骤：将南瓜未受精子房进行表面消毒，切除子房纵向两端无胚珠的部分和子房外皮，然后将其横切成厚度为1mm -2mm的子房薄片，将子房薄片消毒后接种到诱导培养基中进行诱导培养，待得到的胚状体具有明显的形态学上端和形态学下端时转移到成苗培养基中进行成苗培养，直至得到再生植株，通过倍性鉴定筛选出南瓜单倍体植株。该方法操作简单，能在60天内得到单倍体植株，且出胚率和植株再生率较高，缩短育种年限，极大地提高了育种效率，单倍体率高。本发明还提供一种诱导培养基，在MS培养基的基础上只添加一种激素，配制方便，价格低廉，能够有效应用于南瓜未受精子房离体培

养。权利要求书1页 说明书5页 附图4页CN 109874671 A 2019.06.14

C N 109874671

A

1.一种南瓜单倍体植株的诱导方法，包括如下步骤：将南瓜未受精子房进行表面消毒，切除子房纵向两端无胚珠的部分和子房外皮，然后将其横切成厚度为1mm -2mm的子房薄片，将所述子房薄片消毒后接种到诱导培养基中进行诱导培养，待得到的胚状体具有明显的形态学上端和形态学下端时转移到成苗培养基中进行成苗培养，直至得到再生植株，通过倍性鉴定筛选出南瓜单倍体植株。

2.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述南瓜未受精子房是通过以下方法得到：在南瓜雌花开花前一天对其进行套袋处理，在开花当天上午7:00-8:00取带有子房的未受精雌花，用冰盒带回后在流水下冲洗2-3min，去花后得到所述的南瓜未受精子房。

3.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述表面消毒的具体操作包括如下步骤：用体积分数为75％的酒精对所述南瓜未受精子房进行表面消毒30s -1min，然后用无菌水冲洗1-3次。

4.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述子房薄片消毒的具体操作包括如下步骤：用质量分数为2-3％的次氯酸钠溶液对所述子房薄片进行消毒5-7min，然后用无菌水冲洗4-6次。

5.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述诱导培养的具体操作包括如下步骤：将消毒后的所述子房薄片在34-36℃全黑暗条件下热激处理4-5d，待观察到胚珠膨大后将其转到温度24-26℃、光照强度2000Lx -2500Lx、光照时间14h/d的条件下进行光暗培养。

6.根据权利要求1所述的诱导方法，其特征在于，所述倍性鉴定采用的方法为流式细胞检测法。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的诱导方法，其特征在于，所述诱导培养基在MS培养基的基础上添加6-苄氨基腺嘌呤或噻苯隆，所述6-苄氨基腺嘌呤在诱导培养基中的浓度为0.2-2mg/L，所述噻苯隆在诱导培养基中的浓度为0.02-0.04mg/L。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的诱导方法，其特征在于，所述成苗培养基为MS培养基。

9.一种诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基在MS培养基的基础上添加6-苄氨基腺嘌呤或噻苯隆，所述6-苄氨基腺嘌呤在诱导培养基中的浓度为0.2-2mg/L，所述噻苯隆在诱导培养基中的浓度为0.02-0.04mg/L。

10.根据权利要求9所述的诱导培养基，其特征在于，所述诱导培养基在MS培养基的基础上添加6-苄氨基腺嘌呤，所述6-苄氨基腺嘌呤在诱导培养基中的浓度为1mg/L。

权　利　要　求　书1/1页CN 109874671 A

一种南瓜单倍体植株的诱导方法及用于该诱导方法的培养基

技术领域

[0001]本发明属于植物离体再生技术领域，尤其涉及一种南瓜单倍体植株的诱导方法及用于该诱导方法的培养基。

背景技术

[0002]南瓜(Cucurbita spp.)耐贫瘠，易栽培，适应性、抗逆性强，产量高，经济效益好，现今我国南瓜播种面积与产量均高居世界首位。我国地广物博，具有丰富的南瓜种质资源，上世纪50年代以来，全国前后开展了三次大的农作物品种资源的调查、搜集工作，其中得到约1100份南瓜种质资源，但是南瓜资源创新与育种研究基础非常薄弱，育种技术相对落后，具有自主知识产权的优质、专用优良品种严重缺乏。南瓜常规育种周期长、工作量大，自交系的获得需要经过大量的、长时间的自交、选择(至少8代)。

[0003]远缘杂交利用杂种优势培育新品种是最常用的南瓜育种的手段，但是由于不同南瓜品种间的种间杂交能力不同，经常存在种间杂交不亲和的情况，F1代结实率低或不结实，F2及其后代出现性状的剧烈分离且不易稳定等问题。而利用离体雌核发育技术诱导单倍体可以在1-2年内得到纯合系，稳定远缘杂交新性状，解决F1代结实率低或不结实等问题，大大加快了育种进程，提高了育种效率。另外，单倍体及双单倍体作为永久性群体不仅可以直接作为育种亲本，还可作为转基因载体、构建遗传连锁图、用于对数量性状的遗传分析、用于基因组测序等等，在蔬菜遗传育种中存在极大的应用价值。

[0004]邓英(2017)公开一种南瓜未受精子房离体培养诱导雌核发育的培养基及应用，该发明通过在培养基中添加一定浓度的TDZ在诱导三个月后成功获得了再生植株，但是存在出胚率低、再生植株数量少且未鉴定其倍性等问题。

[0005]因此，研究一种育种效率高、育种年限短的南瓜单倍体植株诱导方法，对本技术领域而言具有十分重要的意义。

发明内容

[0006]本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种育种效率高、育种年限短的南瓜单倍体植株诱导方法，以及用于该诱导方法的培养基。[0007]为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

[0008]一种南瓜单倍体植株的诱导方法，包括如下步骤：将南瓜未受精子房进行表面消毒，切除子房纵向两端无胚珠的部分和子房外皮，然后将其横切成厚度为1mm-2mm的子房薄片，将所述子房薄片消毒后接种到诱导培养基中进行诱导培养，待得到的胚状体具有明显的形态学上端和形态学下端时转移到成苗培养基中进行成苗培养，直至得到再生植株，通过倍性鉴定筛选出南瓜单倍体植株。

[0009]上述的诱导方法，优选的，所述南瓜未受精子房是通过以下方法得到：在南瓜雌花开花前一天对其进行套袋处理，在开花当天上午7:00-8:00取带有子房的未受精雌花，用冰盒带回后在流水下冲洗2-3min，去花后得到所述的南瓜未受精子房。