小结与讨论实验是在优选出最佳药材...

忑４６５０９３以麻杏石甘汤为例探讨“半仿生提取法”的研究模式研究生：毕云生
导师：张兆旺教授
单位：山东中医药大学（济南２５００１４）
（提要）目的：以麻杏石甘汤为例，进一步探讨中药方剂用“兰笾生埕？取法（ＳＢＥ法）”研究的基本模式。

方法：以盐酸麻黄碱、甘草次酸、氢氰酸、钙离子、干没膏为指标进行综合评判（评判值为Ｙ）。

首先在药材粒度、煎煮温度，煎煮用水量、滤过、浓缩等条件相同的前提下．用均匀设计“（９１×３３）优选出ＳＢＥ法提取用水的ｐＨ值和煎煮时间；再依此条件对方中４昧药材的１５种组合方式进行优选：然后用比例分割法优选ＳＢＥ法提取的较佳醇沉浓度：最后作ＳＢＥ法、ＳＢＡＥ法（半仿生提取醇沉法）、ＷＥ法（水提取法）、ＷＡＥ法（水提醇沉法）４种方法提取液的比较。

／结果：３煎用水
ｔ
ｐＨ依次为２．００、６．５３、８．９８；煎煮时间依次为２．１１、１．０５、０．５３ｈ；以麻黄与石膏，甘草与苦杏仁分别煎提，再合并的Ｙ值最大；ＳＢＡＥ法５种醇沉浓度的综合评判值Ｙ为：Ｙ６１２５％＞Ｙｓｓｏ／，＞Ｙ６７５％＞Ｙ西ｐＹ３０＊／ｏ：４种方法提
Ｊ
取液的综合评判值：ＹＳＢＥ渡＞ＹｗＥ渍＞ＹｓＢＡＥ液＞ＹｗＡＥ藏。

ｌ结论：结合生产实际，确定麻杏石甘汤３煎用水ｐＨ依次为２．０，６．５、９．Ｏ：煎煮时间依次为２．０、１．０、０．５ｈ：以麻黄与石膏、甘草与苦杏仁分别煎提，再合并为佳；ＳＢＡＥ法醇沉浓度以６０％为佳；ＳＢＥ法优于ＷＥ法，ＳＢＡＥ法优于ＷＡＥ法。

实验结果进一步印证了ＳＢＥ法的科学性和实用性，为中药方剂和新药研究用ＳＢＥ提取提供了基本研究模式。

【关键词）ＳＢＥ法研究模式麻杏石甘汤综合指标
×√√。

Ｍｅｔｈｏｄ＂ＳｔｕｄｉｅｓＯＲｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｍｏｄｅｏｔ“ｔｈｅＳｅｍｉ－ｂｉｏｎｉｃＥｘｔｒａｃｔｉｏｎ
（ＳＢＥＭｅｔｈｏｄ）ｗｉｔｈＭａｘｉｎｇＳｈｉｇａｎＤｅｃｏｃｔｉｏｎａｓｔｈｅｅｘａｍｐｌｅ
Ｏｒａｄｕａｔｅ：ＢｉＹｕｎ－ｓｈｅｎｇ
Ｉｎｓｔｒｕｃｔｏｒ：Ｐｒ．ＺｈａｎｇＺｈａｏ－ｗａｎｇ
Ａｄｄｒｅｓｓ：ＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴＣＭ（Ｊｉｎａｎ，２５００１４）
ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｂａｓｉｃｍｏｄｅｏｆｔｈｅｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙ‘＇ｔｈｅＳｅｍｉ－ｂｉｏｎｉｃＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄ”（ＳＢＥｍｅｔｈｏｄｌｗｉｔｈｔｈｅＭａｘｉｎｇＳｈｉｇａｎＤｅｃｏｃｔｉｏｎ船ｔｈｅｅｘａｍｐｌｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｗｉｔｈｔｈｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃｅｐｈｅｄｒｉｎｅ、ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃａｃｉｄ、ｈｙｄｒｏｃｙａｎｉｃａｃｉｄ、ｃａｌｃｉｕｍ－ｉｏｎ、ｄｒｉｅｄｅｘｔｒａｃｔａｓｔｈｅｉｎｄｅｘｅｓ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｅｓｔｉｍａｔｅｄｂｙｔｈｅｇｅｎｅｒａ／、ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（ｔｈｅｅｓｔｉｍａｔｅｄｖａｌｕｅｉｓⅥ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｕｎｄｅｒｔｈｅｐｒｅｍｉｓｅｔｈａｔｔｈｅｈｅｒｂｇｒａｎｕｌｍｑｔｙ、ｔｈｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ、ｔｈｅａｄｄｅｄⅥ嘲ｔｅｒｖｏｌｕｍｅ、ｔｈｅｆｉｌｔｅｒｅｄａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｗｅｒｅａｌｌｉｎｔｈｅｓｓ／ｎｅ，ｔｈｅｕｎｉｆｏｒｍｄｅｓｉｇｎｕＬ（９‘×３３）ＷａｓｕｓｅｄｔｏｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｖｉｉｖａｌｕｅｓａｎｄｔｈｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆＳＢＥｍｅｔｈｏｄ．Ｓｅｃｏｎｄｌｙ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅａｂｏｖｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｓｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎＷａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅ１５ｋｉｎｄｓｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｆｏｕｒｍｅｄｉｃａｌｈｅｒｂｓ．Ｔｈｉｒｄｌｙ，ｔｈｅｂｅｓｔａｌｃｏｈｏｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌｄｉｖｉｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｆｉｎａｌｉｙ，ｔｈｅｆｏｕｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇＳＢＥ、ＳＢＡＥ（Ｓｅｍｉ·ｂｉｏｎｉｃＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＡｌｃｏｈｏｌＰｒ∞ｉｖｉｔａｔｉｎｎ）、ＷＥ（ＷａｔｅｒＥｘｌｍｅｔｉｏｎ）ａｎｄＷＡＥ（ＷａｔｅｒＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＡｌｃｏｈｏｌＰｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）ｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｐＨｖａｌｕｅｓｏｆｔｈｅｗａｔｅｒｕｓｅｄｉｎｔｈｅ１ｓｔ，２ｎｄａｎｄ３ｒｄｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓａｒｅ
２．００、６．５３ａｎｄ８．９８；ａｎｄｔｈｅｔｉｍｅｓｏｆ３ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓａｒｃ２．１ｌ，１．０５ａｎｄ０．５３ｈ．１１１ｅｍａｘｖａｌｕｅｏｆＹｏｆ１５ｋｉｎｄｓｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｉＳｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｔｈａｔＥｐｈｅｄｒａａｎｄＧｙｐｓｕｍ，ＬｉｑｕｏｒｉｃｅａｎｄＢｉｔｔｅｒＡｐｒｉｃｏｔＳｅｅｄｄｅｃｏｅｔｅｄｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙａｎｄｔｈｅｄｅｃｏｃｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎｅｄｆｉｎａｌｌｙ．ＴｈｅｏｒｄｅｒｏｆＹｏｆ５ｋｉｎｄｓａｌｃｏｈｏｌｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＳＢＡＥｉｓ：Ｙ６Ｉ．２５．Ａ＞Ｙ５５％＞Ｙ６７．５％＞ｙ８０％＞Ｙ３暇．ＴｈｅｏｒｄｅｒｏｆＹｏｆｔｈｅｆｏｕｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｓ：ＹｓａＲ．＞ＹｗＥ＞ＹｓＳＡＥ＞ＹｗＡＥ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｐｒａｃｔｉｃｅ，ｔｈｅｐＨｖａｌｕｅｓｏｆｔｈｅｗａｔｅｒｆｏｒｔｈｅＩｓｔ，２ｒｉｄａｎｄ３ｒｄｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓａｒｅ２．００，６．５０ａｎｄ９．００；ａｎｄ也ｅｔｉｍｅｓｏｆ３ｄｅｃｏｃｔｉｏｎｓａｒｅ２．０，１．０ａｎｄＯ．５ｈ．ｎ圮ｏｐｔｉｍａｌｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｉｓｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｉｓＥｐｈｅｄｒａａｎｄＧｙｐｓｕｍ。

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ＫｅｙＷｏｒｄＳＢＥｍｅｔｈｏｄＲｅｓｅａｒｃｈｍｏｄｅＭａｘｉｎｇＳｈｉｇａｎｄｅｃｏｃｔｉｏｎ
Ｇｅｎｅｒａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
以麻杏石甘汤为例探讨“半仿生提取法＂的研究模式
引言
Ｉ“ＳＢＥ法＂研究概况
中药复方成分提取研究比较复杂，提取工艺能否将方剂的药效物质最大限度地提取出来，体现原方的特有疗效，这是关系到中药制剂的稳定性、有效性、适用性和经济技术的合理性，是中药剂改研究成败与水平高低的关键。

多年来，由于受到形而上学思维方式的影响，提取工艺都是以单体成分为指标，它忽视了中药治病多成分、多途径、多环节、多靶点的综合作用特点。

鉴于上述情况，张兆旺教授、孙秀梅教授利用“灰思维方式”，于１９９５年首先提出“半仿生提取法”（Ｓｅｍｉ—ｂｉｏｎｉｃＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，简称ＳＢＥ法）Ｕ－３１。

“ＳＢＥ法”是符合药物经胃肠遵转运过程，适合工业化生产，体现中医治病综合成分作用的特点，并且有利于用单体成分控制制剂质量的一种比常规提取方法更优的中药和方荆的药效物质提取新技术．这一新思路概括起来是在中药提取中坚持了“有成分论，不唯成分论，重在机体的药效学反应”，具体做法是；以一种或几种有效成分、总浸出物等作指标和（或）主要药理作用作指标，选择提取工艺，不拘泥于某化学成分或适合纯化学成分的药理模型。

而是考虑到综合成分的作用。

因为此种提取方法的工艺条件要适合工业化生产的实际，不可能完全与人体条件相同，仅“半仿生”而已，故称“ＳＢＥ法”。

又因该方法是模仿口服药物在胃肠道的转运过程，采用选定ｐＨ的酸性水和碱性水依次连续提取，其目的是提取含指标成分高的。

活性混合物”，它与纯化学观点的“酸碱法”是
－－！＋－’
不能等同的。

酸碱法是针对单体成分的溶解度与酸碱度有关的性质，在溶液中加入适量酸或碱，调节ｊＨ值至一定范围，其目的是使单体成分溶解或析出·ＳＢＥ法突破了近半个世纪水煎醇沉工艺的旧框框，将中药口服给药的传统同现代生物药剂学理论相结合，使传统用药在理论上得到升华，为如何对中药和方剂的药效物质进行提取工艺研究，提供了既符合中医药学熏视中药和方剂以综合成分发挥药效的传统理论与经验，又同西医药学重视单体有效成分和用动物试验指标评价药效与安全性的现代科技相接轨．经过多种方剂ｆ４４８］和多种中药‘１９‘２３１进行“ＳＢＥ法”的研究，结果揭示：“ＳＢＥ法”有可能替代“ＷＥ法（水提取法）”，“ＳＢＡＥ法（半仿生提取醇沉淀法）”有可能替代“ＷＡＥ法（水提取醇沉淀法）”。

这是中药和方剂药效物质提取工艺的一项重大革新，对中药学科的发展将会起到重大的推动作用。

２麻杏石甘汤研究概况
麻杏石甘汤源于张仲景的‘伤寒论》，由麻黄、杏仁、石膏、炙甘草四味药组成。

是一张配伍严谨，清、宣、降三法俱全，具清肺泄热、平嘴功效之名方，为历代医家所推祟．现代药理研究表明，麻杏石甘汤具有解热饼１，抗炎【２５ｌ，抗病毒∞，镇咳，祛痰鲫等药理效应。

可广泛应用于上呼吸道感染、急性气管炎、支气管炎、支气管肺炎、小儿痉挛性喉炎、小儿惫性扁桃体炎等疾病【２７】，另外对感胃、酉日咳、夏季热、白喉、遣尿瘫及皮肤科、肛肠外科、鼻喉科的一些病症［２８１也有疗效。

近几十年来，针对麻杏石甘汤临用煎制。

携带不方便，服用剂量大，不易保存等不足－人们对其剂改：进行了大量研究，取得了可喜的成绩。

有片剂Ｉ捌、合荆嗍、糖浆剂渊、微丸嗍、栓剂口”、冲剂Ｄ２Ｊ、漪丸口羽、注射荆例等剂型．但这些研究仍采用传统的水煎提和（或）水提醇沉等工艺．
因此，本论文采用ｓ腿法．对麻杏石甘酾提取工艺进行系统研究．首先，
一鲁＇－－
用均匀设计优选出ＳＢＥ法提取用水的ｐＨ值和煎煮时间；再依此条件对方中药材的不同组合方式进行优选：然后用比例分割法优选ＳＢＥ法提取的较佳醇沉浓度：最后作ＳＢＥ法、ＳＢＡＥ法、ＷＥ法、ＷＡＥ法４种方法提取液的比较。

３课题研究的意义
一、本论文以麻杏石甘汤为例，进行ＳＢＥ法基本模式研究具有一定的典型性和代表性。

因为该方是由麻黄、杏仁、石膏、炙甘草四味药组成的经典复方，在研究中既可设计每味药都有单体成分指标，又可设计有活性混合成分指标，这比目前一个复方只用一至两个指标成分选择提取工艺更全面、科学、合理，更能体现中医复方治病的特色。

同时该方药还可设计不同的提取组合方式，这对其他中药复方提取工艺研究具有很好的借鉴作用。

二、根据“有成分论，不唯成分论，重在机体的药效学反应”理论，在实验研究中对指标成分进行综合评判时，为了消除各指标的单位、量纲的不同和各指标变量范围相差悬殊所造成的影响，对各指标成分进行标准化处理，再针对指标成分主次她位给予不同加权系数，加权求和以后得到一个综合评判值，这样更科学、合理。

三、该论文初步探讨了中药复方用ＳＥＥ法进行提取的研究基本模式，进一步印证ＳＢＥ法的科学性和实用性，为中药方剂研究和中药新药研究中药效物质的提取提供了借鉴，同时也为麻杏石甘汤进行二次开发研究工艺打下坚实的基础。

一知一
研究内容
１麻杏石甘汤ＳＢＥ法提取工艺的优选
根据ＳＢＥ法理论，在药材粒度、煎煮温度、煎煮用水量、滤过、浓缩等条件相同的前提下，以盐酸麻黄碱、甘草次酸、氢氰酸、钙离子、干浸膏为指标，采用均匀设计【３４】对麻杏石甘汤ＳＢＥ法提取用水ｐＨ值、煎煮时间进行多成分综合评判，同时进行验证试验。

结果：３煎用水ｐＨ值依次为２．００、６．６１、８．９８：煎煮时间依次为２．１ｌ、１．０５、０．５３ｈ。

结合生产实际，确定其ＳＢＥ工艺条件为：３煎用水ｐＨ值依次为２：０、６．５、９．Ｏ：煎煮时间依次为２．０、１．０、０．５ｈ。

验证试验结果接近预测值．
１．１仪器与药品
ｐＨＳ一３Ｃ型精密ｐＨ计（上海雷磁仪器厂）：ＭＡｌｌ０型电子分析天平（上海第二分析仪器厂）；ＬｘＪ一Ⅲ型离心沉淀机（上海医疗器械三厂）；ＣＳ－９３０型薄层扫描仪（日本岛津）：Ｕｖ一８型紫外分析仪（Ｉ－海分析仪器厂）。

实验用药材经张兆旺教授鉴定，麻黄为麻黄科植物木贼麻黄ＥｐｈｅｄｒａｅｑｕｉｓｅｔｉｎａＢｇｅ．的干燥草质茎；苦杏仁为蔷薇科植物山杏Ｐｒｕｎｕｓａｒｍｅｎｉａｃａ屯ｖａｔ．ａｎｓａＭａｘｉｍ的干燥成熟种子：石膏为硫酸盐类矿物硬石膏族石膏ＧｙｐｓｕｍＦｉｂｒｏｓｕｍ；甘草为豆科檀物甘草ＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓＦｉｓｃｈ．的干燥根及根茎。

盐酸麻黄碱（批号：０７１４－９９０３）、甘草次酸（批号：７２３－９００２）对照品均购自中国药品生物制品检定所．其余试剂均为分析纯．
一●，一
１．２麻杏石甘汤提取工艺优选实验设计
１．２．１确定考察因素水平
根据ＳＢＥ法理论，在药材粒度、煎煮温度、煎煮用水量、滤过、浓缩等条件相同的前提下，确定考察因素及水平，见表１·
表ｌ因素与水平
因素—广百—了—产■厂１—１—ｉ＿１一第一煎水ｐＨ（Ａ）２．００２．５０３．００３．５０４．００４．５０５．００５．５０６．００
第二煎水ｐＨ（Ｂ）６．５０６．５０６．５０７．００７．００７．００７．５０７．５０７．５０
第三煎水ｐＨ（Ｃ）８．００８．００８．００８．５０８．５０８．５０９．００９．００９．００煎煮时间（Ｄ）３．００３．００３．００４．００４．００４．００５．００５．００５．００
１．２．２均匀设计安排实验
根据中国航天工业总公司第三研究所提供的ｕ。

（９’×３３）拟水平表安排各因素水平进行实验。

实验方案见表２。

表２Ｕ。

（９１×３：）实验设计袭
壅墼量．．．垒：曼曼堡
１２．００７．００９．００５．００
４．ｏｏ２．５０３．００５．５０３．５０４．５０５．００６．５０
６．５０
７．５０
７．００
７．００
７．５０
７．∞
９．００
８．００
８．５０
８．∞
８．００
９．００
０．５０
３．ＯＯ
４．００
３．００
３．∞
５．００
４．００
４．００
１．！：笠。

！：！！！：ｉ！．！：！注：３煎时间比为２：ｈ０．５
－－ｊ－－
１．３实验方法与结果
１．３．１样品液的制备
将处方中４种药材分别粉碎，按处方比例称取ｉｏ～２０目之间的药材粗粉共２５０９，常压下加热用“双提法”提取３次（加水量依次为药材的１０、６、６倍；水的ｐＨ值及提取时间按表１），提取液用４层纱布加ｉｏｏ目筛，分别滤过，离心（２５００ｒｐｍ，２０ｍｉｎ），合并上清液并浓缩，将挥发油加入浓缩液后定容至２５０ｍ１，制得ｌ～９号样品液（每ｉｍｌ相当于原药材ｉｇ）。

１．３．２供试液的制备
１．３．２．１盐酸麻黄碱供试液的制备【ｇ】精取１．３．１项下样品液各４０ｍｌ，置蒸发皿中蒸至近干，加硅藻土ｌＯｇ，搅匀，烘干，以氯仿１５０ｍｌ索氏回流提取约２ｈ，回收氯仿，残渣以无水乙醇定容至５ｍｌ。

即得ｌ～９号盐酸麻黄碱供试液（每Ｉｍｌ相当于原药材８９）。

１．３．２．２甘草次酸供试液的制各１３５】精取１．３．１项下样品液各５ｍｌ，置干燥洁净分液漏斗中，加稀盐酸Ｉｍｌ和水３０ｍｌ，摇匀，用乙醚萃取２次，每次２０ｍｌ，弃去乙醚液，再用正丁醇饱和的水洗涤２次，每次２０ｍｌ，弃去水洗液，正丁醇液水浴蒸干，残渣用适量甲醇分次溶解，定量移至２５０ｍ１蒸馏瓶中，水浴蒸干，加盐酸３ｍｉ及氯仿２０ｍｌ，水浴回流１ｈ，放冷后移入分液漏斗中，用水洗涤２次，每次２０ｍｌ，弃去水洗液，氯仿液置水浴蒸干，残渣用无水乙醇定容至２ｍＩ，制得ｌ一９号甘草次酸供试液（每Ｉｍｌ相当于原药材２．５９）．
１．３．３对照液的制备
精密称取盐酸麻黄碱５．３５ｍｇ、甘草次酸５．１５ｍｇ，分别以无水乙醇溶解并定容至ｌＯｍｌ，即得。

阴性盐酸麻黄碱对照液除麻黄外按处方比例称取其余三味药材，混匀后按１．３．１项下和１．３．２项制备。

阴性甘草次酸对照液除甘草外按处方比例称取其余三味药材，混匀后按１．３．１项下和１．３．２项制备。

１．３．４盐酸麻黄碱的含量测定
１．３．４．１吸收曲线与标准曲线的制备精取１．３－３项下盐酸麻黄碱对照液１．０、２．０、４．０、５．０、６．０、７．０ｕｌ，点于同一块０．５％ＣＭＣ－Ｎａ－硅胶Ｇ板上，用正丁醇一冰醋酸一水（２０：５：０．５）展开１２ｃｍ，挥干溶剂，喷０．３％茚三酮正丁醇一冰醋酸（９５：５）显色剂，１００１２烘ｌＯｍｉｎ，测定吸收曲线，见图１，结果在５１５ａｍ处有最大吸收，在６８０ｈｍ有最小吸收。

色谱扫描条件：双波长反射式锯齿形扫描：＾，＝５１５ｎｍ，＾。

＝６８０ｎｍ；灵敏度：中；ＳＸ＝３；狭缝１．２ｍ×１．２ｍｍ。

以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标，见表３及图２。

盐酸麻黄碱在０．５３５ｕｇ～３．７４５ｕｇ范围内线性关系良好，回归方程为：Ｙ＝１００２３．９１＋２０８１４．３０Ｘ，ｒ＝０．９９８４（ｎ＝６）。

１．３．４．２供试液中盐酸麻黄碱的含量测定精取１．３．２．１项下供试液各１．０ｕ１与１．３．３项下盐酸麻黄碱对照液４．０、６．０ｕ１分别点子同一块的０．５％ＣＭＣ—Ｎａ＿硅胶Ｇ板上，按１．３．４．１项下方法依法展开，麻黄碱含量以盐酸麻黄碱计算，并折算成盐酸麻黄碱在原药材中的含量，结果见表４。

薄层扫描图见图３。

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图２盐酸麻黄碱双波长薄层扫描标准曲线
表４盐酸麻黄碱的含量测定结果
实验号盐酸麻荸碱一ｘ土ｓ粤ｌ０．５０２１０．５１１００．４９３５０．５０２２±０．００５９１．１７５２０．４０１９０．３９８６０．４０４００．４０１５±０．００１９０．４７３３０．３３２１０．３３０４０．３３５００．３３２５±０．００１７Ｏ．５１ｌ４０．７９６１０．７６７５０．７５４８０．７７２８±０．０１５５２．００６５Ｏ．１０９５０．０９３６０．１０１７０．１０１６±０．００５３５．２１７６０．３２１８０．３４２１０．３０９９０．３２４６±０．０１１７３．６０４７０．３４５１０．３４６００．３１９９０．３３７０士０．Ｏｌ１４３．３８３８０．６８２１０．６４７４０．６９４３０．６７４６±０．０１８１２．６８３９０．２１６９０．２１２７０．２２４１０．２１７９±０．００４１１．８８２
ｔ９一
２．０（如
１．２００
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ｎ．４００
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１
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２．０００
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１．６００
１．６００
Ｉ
Ｉ
２．０００
２．０００Ｉ｛２．０００
－０。

２００—０．２００
２
一Ｏ．２００
—０．２００
０．８００
０．４００
０。

０００
－０．２００
图３盐酸麻黄碱薄层扫描图
１盐酸麻黄碱对照品
２样品中盐酸麻黄碱
３阴性对照品
一ｌＯ一
锄
傩
他
１．３．４．３稳定性实验选定上述一斑点，显色后立即扫描，并每隔２０ｍｉｎ扫描１次，结果面积积分值在８０ｒａｉｎ内稳定，结果见表５。

表５盐酸麻黄碱稳定性实验结果
１．３．４．４精密度实验精取１：３．３项下盐酸麻黄碱对照液６．０ｕｌ，点于同～薄层板上，共点６个点，依法展开，定位，扫描，结果见表６。

表６盐酸麻黄碱精密度实验结果
１．３．４．５加样回收率考察精取ｉ．３．Ｉ项下已知含量的５号提取液５ｍｌ（含盐酸麻黄碱０．５０８ｍｇ），加盐酸麻黄碱对照液１加ｌ（含盐酸麻黄碱０．５３５ｍｇ），按１．３．２．１项下供试液的制各方法制备，按１．３．４．１项下方法测定，结果见表７。

２１．５８４５４．２１４１９８．３０
３１．５８３３２．６７５４．２３０３９８．９５９９．０４±０．９８０．９９
４１．６１００４．２１６０９７．４２
５１．５５７８４．２４２２１００．３５
１．３．５甘草次酸的含量测定
Ｉ．３．５．１吸收曲线和标准曲线的绘制精取Ｉ．３．３项下甘草次酸对照液１．０、２．０、４．０、５．０、６．０、７．０Ｉｔｌ，点于同一块０．５％ＣＭＣ－Ｎａ－硅胶ＧＦ。

扳上，用正已烷一乙酸乙醅一冰醋酸（５０：３０：１）展开１２ｃｍ，挥干溶剂，ｉ００℃烘３０ｍｉｎ，紫外灯（２５４ｎｍ）定位，扫描，结果见图４，在２ｊｌＳｎｍ处有最大吸收，在３５０ｈｍ处有最小吸收。

色谱扫描条件：双波长反射式锯齿形扫描·＾。

＝２５５ｎｍ，＾。

＝３５０ｈｍ；灵敏度：中；ＳＸ＝３；狭缝ｌ－２ｎｅｎＸ１．２ｍ。

以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一条不过原点的直线，见图５。

甘草次酸线性范围０．５３５ｕｇ～３．与０５Ｉｔｇ，回归方程为：Ｙ＝１８３１．１４＋３４４２．７４Ｘ，ｒ＝０．９９９５（ｎ＝６）。

结果见表８。

Ｉ．３．５．２含量测定精取１．３．２．２项下供试液各４．０Ｉｔ１与１．３．３项下甘草次酸对照液４．０、６．０ＩＩｌ，分别点于同一块的０．５％ＣｋｌＣ－Ｎａ－硅胶ＧＦ。

薄层板上，按１．３．５．Ｉ硬下方法依法展开，扫描，结果见表９－薄层扫描圈见图６。

１．３．５．３稳定性实誓，谴上述一舞患最色后立即瀑定，并每隔３０ｒａｉｎ扫描一次，结果面积积分筐在２．５ｈ内稳定，结果见裹１０．
一１２一
１．３．５．４精密度考察精取１．３．３项下甘草次酸对照液４．０ｕｌ·点于同一薄层板上，共点６个点，依法展开，定位，扫描，结果见表１１。

１．３．５．５加样回收辜试验精取Ｉ．３．１项下已知含量的９号提取液５ｍｌ（含甘草次酸０．５６９ｍｇ），加甘草次酸对照液Ｉｍｌ（含甘草次酸０．５１５ｍｇ），按１．３．２．２项下供试液的制备方法，按１．３．５．１项下方法依法测定，结果见表１２。

壅苎苎蔓达墼登星墼堕！至选堂垡墼塑
扇觯量（崞）０．５１５１．０３２，０６２．５７５３．０９３．６０５
峰面积３５７４．６１５４４０．６３８７３３．２１１０８８９．０４１２５１３．４３１４１６１．２３
图５甘草次酸双波长薄层扫描标准曲线
一１３一
１＿碡津渴蒋爵潞
圃Ａ
Ｎ＃懈滏璐潭淘酗薄溽爵｛戋
砧斜海器酱球圃
∞ｊ羊秘哥母＊搿赐泻浔导潞
—－ｔ４－－
一耋！笪兰姿璧箜鱼苎塑塞丝墨一一
＿＿＿＿＿－－＿－＿＿＿＿＿＿－＿＿●－＿－＿＿＿－－－＿－＿＿＿＿－－—————————一一
一一
实验号
慧．次酸趸±ｓ
霉
ｇ－ｉ２０．２８６１０．２９０８０．３０４５
Ｏ．２９３８±０．００７ｌ
２．４２３０．１３７００．１４５００．１３１４０．１３７８±０．００４８
３．４８
４０．０２３００．０２４４０．０２２５
０．０２３３士０．０００７
３．００
５０．２２６１０．２１８９０．２３３９０．２２６３±０．００５１
２．２５６
０．４７８２０．４７７９０．４７２２Ｏ．４７６１±０．００２６０．５５７
０．３２１００．３４２１０．３０４１Ｏ．３２２４±０．０１３１４．０６８０．１３３８０．１３２５０．１２７９０．１３１４±０．００２３１．７５９
０．１１２０
０．１１２９
０．１１６５
０．１１３８±０．００１８
１．５８
表１０甘草次酸稳定性实验结果
表１ｌ
甘草次酸精密度实验结果
ｎ
峰面积积分值ｘ±ｓ
ＲＳＤ（％）
１８９４１．９９６
２８６７６．８９２３９０１８．６３９８９２３．１８±１２８．２２
１．４４
４９０３１．４２６
５８９４１．２１５６
８９２８．９３９
－－４１－－
表１２甘草次酸加样回收实验结果
编号訾从ｌａｇ量测触ｌａｇ回≯秽等
腭
％一一二二＿一翌ｌ３．２４６０５．３４２２１０１．７６
２３．１４８７５．２２６４１００．８６
３３．１８３６４３．１９５７５３．１９３５２．０６５．２８７５１０２．１３１０之５９士１．２１１．１８５．３４２６１０４．２２
５．３３５６１０３．９９
２．‘】【ｘ）０．８０００．０００
２．ｔ）ｔ／ｏ２．Ｕｍ１．６００１．６００１．２【ｌｏ１．２０００．８０００．８００ｏ．４１３０ｎ４１３０Ｏ．０ｃ）００．０００
－ｏ．２００｜ｉ－－０．２００－－０．２００；
１２
２舢２．ｆｒ００２．‘】０【）１．６００１．６００ｌＩ１．６００１．２００１．２００；ｌ１．２０００．８０００．８００
０．４０Ｄ０．４００
０．００００．０００
吨２００—０．２００
３
０．８００
ｏ．４００
ｎ０００
Ｏ．２００
图６甘萆次酸薄层扫插圈
ｌ甘草次酸对照品２样品中甘草次酸３阴性对照品
－－１６－－
一。

Ｈ㈠
１．３．６氢氰酸的含量测定
精密吸取１．３．１项各样品液ｉ０．Ｏｍｌ，分别加水１２０ｍｌ，稀盐酸调ＤＨ＝Ｉ．００，转移至蒸馏瓶中，即刻密封，水浴保温０．５ｈ（３５＂Ｃ～４０＂Ｃ），直火蒸馏，馏出液导入盛有０．Ｉｍｏｌ／ＬＮａＯＨ吸收液ｌＯｍｌ的三角瓶中，待馏出液达６０ｍ１停止蒸馏（用小量杯接馏出液约２ｍｌ，加氢氰化钠１滴，加苦昧酸试液数滴，溶液应不显红色），加５滴试银灵，用０．０２ｍｏｌ／Ｌ硝酸银标准液滴定，至溶液由鲜黄色变为橙红色，即为终点。

蒸馏水为随行空白（每ｉｍｌ０．０２ｍｏｌ／ＬＡｇＮＯ。

相当于ＨＣＮ约１．０８ｍｇ）［３６］ｏ计算各供试液氢氰酸含量，折算出氢氰酸在原药材中的含量见表１３。

１．３．７干浸膏的含量测定
精取１．３．１项下各样品液ｌＯｍｌ，置恒重的蒸发皿中，加硅藻土３９，搅匀，水浴蒸干。

ｉ０５＂ｃ烘至恒重，计算干浸膏得率。

结果见表１４。

１．３．８钙离子的含量测定
将１．３．７项下含硅藻土的干浸膏刮下，研匀，以９５％乙醇１５０ｍｌ索氏网流７ｈ脱色。

残渣挥干溶剂，于１０５＂Ｃ烘至恒重，精密称取０．６９（约相当于生石膏０．２９），置锥形瓶中，加稀盐酸ｌＯｍｌ，加热使溶解，加水ｌＯＯＭ与甲基红指示液１滴，滴加氢氧化钾试液至溶液显浅黄色，再继续多加５ｍｌ，加钙黄绿素指示剂少量，用０．０５ｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ滴定液滴定，至溶液的黄绿色嚣光消失，并显撵龟ｉ蒸馏水为随行窑自，，每，Ｉｍ！ＥＤＴＡ＇海定液相当于８．６０８ｍｇ的含水硫酸钙（ＣａＳＯ。

·２Ｈ：Ｏ）［３７１．计算含硅藻土干浸膏中钙离子含羹，然后折算出钙离子在原药材中的含量，结果见表１５．
－ＩＴ－－
表１３氢氰酸含量测定结果
实验号氢ｍ墨．１酸孓±ｓ警ｌ０．９２６８０．９１２６０．８８８８０．９０９４士Ｏ．０１３７１．５ｌ２０．０５７１０．０５５１０．０５６７０．０５６３土０．０００８１．４２３１．１５２１１．１６４１１．２２７７１．１８１３士０．０３０９２．６２４０．３３７４０．３２６７０．３５７４０．３４０５±０．０１１３３．３２５０．５６９８０．５８３２０，５６５１０，５７２７±０．００７０１．２２６０．３６３８０．３７７１０．３５７１Ｏ．３６６０±０．００７４２．０２７０．５２８１０．５４３９０．５１４４０．５２８８士０．０１０１１．９１８０．４３０８０．３９７５０．３８０１０．４０２８±０．０１８７４．６４９０．７０９６０．７３８５０．７７０４０．７３９５土０．０２０６２．７９
表１４千浸膏的含量测定结果
实验号干ｍ姜。

膏～Ｘ±Ｓ霉
ｍ卫０２’ＪＬ为ｌ０．２１０２０．２０１ｌ０．１９３８０．２０１７士０．００５７２．８３２０．１８２６０．１９０５０．１６９９０．１８ｉ±０．００７４４．０９３Ｏ．１３８７０．１４５００。

１５２８０。

１４５５±０．００４９３．３７４０．１８６００．１８９５０．１８４０ｏ．１８６５±０．００２０１．０７５０．１３４００．１３２１０．１５３００．１３９７士０．００８９６．３７６０．１６５４０．１６０００．１８１９０．１的ｌ±０．００８５５．０３７０．１５４５０．１４９６０．１６３６０．１５５９±０．００５１３．２７８０．１０６９０．１０６５０．１１２１０．Ｉ∞５±０．００２４２．２１９．Ｏ．１５２ｎ。

…ｍ１５０哇、仉１４融仉１４９６土饥００２Ｊ１．４０
—ｎ一
表１５钙离子的含量测定结果
实验号钙离．１子霄士ｓ蹙Ｄ１７２．４００２７０．２３５６６７．６８６４７０．１０７４士１．６１４０２．３０
２３２．９９４５３４．２３００３６．５０２０３４．５７５５±１．２８４３３．７１
３．８４．１３４５８６．３４６２８３．８８５７８４．７８８８±１．０３８３１．２２
４８２．０３６４８０．９６４５７９．８８８１８０．９６３０±０．７１６６０．８９
５５２．７３５９５４．０２１０５１．４８６８５２．７４７９土０．８４８７１．６１
６２８．６４８８２７．５７２０２９．８５９１２８．６９３３±０．７７７２２．７１
７４９．４５０６４９．８２５７４７．６３３４４８．９６９９士０．８９１０１．８２
８３０．１４３９３２．９７８９３０．２７４１３１．１３２３±１．２３１ｌ３．９５
９３０．７８５９３１．９７５２３３．６４８４’３２．１３６５±１．００７９３．１４１．３．９工艺条件的优化
将表４、９、１３、１４、１５中的指标成分测定的数据按公式ｘｊ２鼍≯进行标准化处理。

翰为样品液ｉ中成分ｊ的镭ｉ为９个水平样品液成分ｊ含量的平均值，毋为９个水平样品液ｉ中成分ｊ的标准差，虬，＝％标准化后的值。

根据各指标在提取
工艺选择中的主次地位，给予不同的加权系数，以标准化后的值毛加权后求和，即得综合评价Ｙ值，结果见表１６。

一１９一
表１６综合各指标成分含曩标准化处理结果
实验号瓣甘草次酸氢氰酸钙离子干浸膏Ｙ１０．４４７３１．４８７４０．７４５４０．８３６８１．４８９４２７．７６６８２．０．０２６８０．２９４４１．２１７６－０．７６７２０．７５５３１０．３２３４３．０．３５１７．０．６６４４１．６１９４１．４９９６－０．５０３５９．８１７８４１．７２１３．１．３６８２一１．０８３３１．３２６７０．９５０３１．３６５８５．１．４３８８－０．１２０５－０．３３６９０．０５３１－０．７０９２—１６．３７５６６．０．３８８９１．４１４９—１．００１３－１．０３２８０．３３３３－３．２６７
７．０．３３０５０．４７０２．０．４７８．０．１１７４－０．１３４８—３．４４５６８１．２５８９－０．７０３７—０．８８３－０．９２２７—１．８１６５－９．９４６２９．０．８９１２．０．８１１９０．１９９３－０．８７６２－０．３５８２－１６．２５１６注：Ｙ＝（盐酸麻黄碱＋甘草次酸＋氢氟酸）×８＋钙离子×４＋千没膏×２
将表ｌ中各实验水平的４个因素及表１６中相应实验水平的综合指标Ｙ值输入计算机，用·ｙｔｓＹｓｊ的数据分析模块处理，用二次多项式逐步回归得回归方程：
Ｙ＝－６５８．９０８８＋１５４．１８４Ｃ－２．０２６５１１Ａ２－２．１６２１５４８２－７．１２８ｓ２８Ｕ＋ｏ．０６９２８５Ｄ２
＋５．１０２３９３ＡＢ－４．９９８４２４ＡＣ，ｒ＝０．９９９９９５５，Ｆ＝１５７６６．６，查Ｆ表Ｆ：０，．０ｎ５：２３６．８，Ｆ黑＜Ｆ，检验通过，回归方程有意义。

再将方程在计算机上进行优化处理（３０２９１次），Ｙ的期望值方向大者为佳，最终得出麻杏石甘汤用ＳＢＥ法提取的条件为：３煎用水ｐＨ依次为２．００、６．５３、８．９８；三煎总计时间为３．６９ｈ（煎煮时间依次为２．１１、１．０５、０．５３ｈ）。

结合生产实际，确定其ＳＢＥ法工艺条件为：３煎用水ｐＨ依次为２．０、６．５、９．０：煎煮时间依次为２．０、１．０、０．５ｈ。

一２０一
１．３．１０验证优化条件
按照优化的工艺条件，依１．３．１～１．３．８项下方法依法进行３次重复试验，结果见表１７。

将表１７中５个指标成分测定的数据按公式’．一’一
Ｙ：兰旦—立上进行标准化处理。

ｒ；为验证实验样品液ｉ中成分ｊ的含‘）Ｊ
量，Ｚ，、Ｊ。

分别为表４、９、１３、１４、１５中９个水平样品液ｉ中成分ｊ的平
均值和标准差，五为标准化后的值。

同上，以标准化后的值加权后求和，即得综合评价Ｙ’值，结果见表１８。

结果表明，验证实验提取液综合评价Ｙ，值接近预测值，且高于表１６中９种提取液的综合评价Ｙ值。

表１７验证实验提取液中各指标成分的含量（单位ｍｇ．ｇ－１）
表１８验证实验提取液中各指标成分标准化值及综合评价
●２ｌ一
１．４．１以盐酸麻黄碱、甘草次酸、氢氰酸、钙离子、干浸膏为指标，采用均
匀设计法对麻杏石甘汤ＳＢＥ法工艺条件进行优选，结果为：３煎用水ｐＨ值依
次为２．００、６．６１、８．９８：煎煮时间依次为２．１ｌ、１．０５、０．５３ｈ。

结合生产实际，确定其ＳＢＥ工艺条件为：３煎用水ｐＨ值依次为２，０、６．５、９．０：煎煮时
间依次为２．０、１．０、０．５ｈ。

验证试验结果接近预测值，说聪优选条件可行。

１．４．２实验结果是根据各指标在工艺选择中的主次，给予不同的加权系数，
确定综合评价Ｙ值的关系式：Ｙ＝（麻黄碱＋甘草次酸＋氢氰酸）×８＋钙离子
×４＋干浸膏×２，并对５个指标成分的数据进行标准化处理，以消除各指标
的单位和量纲的不同，以及各指标变量范围相差悬殊所造成的影响，以标准
化指标加权后求和得Ｙ值作为综合指标，优选出ＳＢＥ法最佳条件，这样更科学、合理。

１．４．３麻黄碱的层析展开系统，以《中国药典》中所载展开系统（氯仿一甲醇一
浓氨水＝２０：５：０．５）【３钔，分离效果不佳，且显色剂与浓氨水起反应，背景显浅
红色。

以氯仿一甲醇一丙酮一浓氨水（２０：１０：３：１．５）为展开系统【３９】，样品与对照
品均分离出两个点，但背景仍为浅红色。

故改用正丁醇一冰醋酸一水（２０：５：Ｏ．５）进行展开，获得了较好的分离效果，且背景为白色。

２麻杏石甘汤ＳＢＥ法提取药材组合方式的优选
将麻杏石甘汤中的４味药排列组合，得到１５种提取组合方式，然后用
优选的ＳＳＥ法分别煎提合并，样品液作盐酸麻黄碱、甘草次酸、氢氰酸、钙
离子及干漫膏的含量测定，再对这５个指标成分含量数据作综合评价，结果综合评价值Ｙ以匝蛩皿为最大，即麻黄与石膏、甘草与苦杏仁分别煎
●
－２２一
图８１５组样品中甘草次酸薄层定性鉴别
１～１５为样品液，ｓ为甘草次酸对照液，鼍。

为阴性甘草次酸对照液
一２６—
２．３小结与讨论
２．３．１对方药中的４味药１５种组合分别用优选的ＳＢＥ法提取，提取液作盐酸麻黄碱、甘草次酸、氢氰酸、钙离子及干浸膏的含量测定，对这５个指标成分的数据作标准化处理，加权后求和得综合评判的Ｙ值，结果以匹＋ｇ屯＋叫值为最大，即麻黄和石膏，甘草和苦杏仁分别合煎是最佳提取组合方式。

２．３．２实验优选组合中麻黄和石膏合煎与李轩贞等Ⅲ１报道一致，即两者合煎有利于指标成分的溶出。

２．３．３以盐酸麻黄碱、甘草次酸、氢氰酸、钙离子为主要指标，同时考虑干浸膏成分，综合选择提取工艺，这样就体现了中药方剂药效物质提取中，坚持“有成分论，不唯成份论”，发挥活性混合物综合作用特点的“ＳＢＥ法”观点，同时也有利于用单体成分控制制剂的质量。

２．３．４实验结果的处理是根据“ＳＢＥ法”理论，针对各个指标和量纲不同，对其进行标准化处理，然后根据各指标在方药中的主次确定不同的加权系数，以标准化处理加权求和后的Ｙ值为综合指标，优选“ＳＢＥ法”最佳提取组合，这样比用各个指标成分含量直接相比更科学，更合理。

２．３．５在精制盐酸麻黄碱供试液过程中，用乙醚萃取时，乳化现象容易发生，故液体在萃取后应静置较长时间。

２．３．６测定钙离子含量，因原药液色泽较深，难以分辨确定终点，故采用９５％乙醇回流脱色，滴定时终点容易观察。

２．３．７由图１２～１４、图１８～２０可以看出，方中４味药材单煎与合煎的ＨＰＬＣ图谱出峰＿致，说明单煎与合煎后没有新成分出现。

－４３—
壅ｉ！！登至旦竖亟鎏壅丝登曼鎏釜塑堡盛坌楚壅些丝墨缝墨醇≯萼慧甘草次酸氢氰酸钙吁一ｊ塑—竺竺注：Ｙ＝（盐酸麻黄碱＋甘草次酸＋氢氟馥）×８＋辑离子Ｘ４＋干浸膏×２
表３６５种不同醇沉浓度的样品液各指标成分标准化处理结果
注ｔＹ＝（盐酸麻黄碱＋甘草次酸＋氢氰瞳）×８＋钙矗子Ｘ４－Ｉ－干浸膏×２
图２２５种醇沉浓度的综合评价指标Ｙ值直方图
一”一。