(优)南京农业大学生物化学2PPT资料
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大多数酶一般都用缓冲液进行抽提，缓冲液的类 型决定于酶的种类和理化特性，抽提液pH最好远离
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
1.主要步骤：抽提、纯化、结晶 浓缩：抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，必须浓 缩富集。常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉 淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。 纯化：纯化过程就是去除杂质的过程。准绳：一方 面是要提高酶的纯度，另一方面却也使酶的总量不 可避免有所损失。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
1. 主要步骤为：抽提、纯化、结晶 结晶：浓缩液经过各种方法的纯化，可得到较纯的 结晶产品。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
2. 选择分离纯化方法 a.盐析法〔如硫酸胺） b.有机溶剂沉淀法 c.层析纯化法〔葡聚糖凝胶、阴离子交换层析） d.等电点法 e.吸附分离法
以产物浓度对反应时间作图，可得到酶促反应速度曲线
酶习惯上或测定时使用的反应速度的单位定 国际单位 (IU)
在最适条件下，酶每秒钟催化1 mol 底物转化，这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为 1个Kat 。
常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。
但只能进行酶活力的相对比较。
酶提取基本的方法
B. 材料的获取
在提取某一酶时，首先应当根据需要，选择含 此酶最丰富的材料。由于从动物内脏或植物果实中 提取酶制剂受到原料限制，成本又很大，因此，目 前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的 酶制剂。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
1.主要步骤为：抽提、纯化、结晶 抽提：破碎细胞，动植物组织一般可用组织捣碎器； 或者加石英砂研磨，将材料做成丙酮粉或进行冰冻 融解 ；对细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声 波振荡方法破碎。
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
酶活力 是酶促反应的能力。酶活 力大小就是指在一定条件所催化的 某一化学反应速度的快慢，即酶催 化的反应速度越快，酶活力越高， 反之则表示该酶活力低。
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
但是，酶的定量并非对其蛋白质进行 定量，而是对它的催化能力进行定量。
所以，酶的定量就是测定酶的活力， 也即测定酶促反应的速度。
2. 酶活力与单位
二.酶活力及其测定
B. Katal
对细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声波振荡方法破碎。 底物浓度的降低、产物的增加造成的逆反应的加快
是由国际酶学委员会于1972年规定的一种新单位 国际单位 (IU)
在标准条件(25℃、最适pH、最适底物浓度)下，酶每分钟催化 1 mmol 底物转化，这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为1个国 际单位 (IU)。 常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。 所以，酶的定量就是测定酶的活力，也即测定酶促反应的速度。
逆反应的加快
产物的抑制作用
酶本身逐渐失活
0
时间
2. 酶活力与单位
二.酶活力及其测定
常用的酶活力单位有三种：
A. 国际单位 (IU)
这种单位是由国际酶学委员会规定的。
在标准条件(25℃、最适pH、最适底物浓度)下， 酶每分钟催化 1 mmol 底物转化，这样的速度所代 表的酶的活力即酶的量定义为1个国际单位 (IU)。
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
如何测定酶活力？
以产物浓度对反应时间作图，可得到酶促反
应速度曲线
产 物 浓
留意：初速度的 度
测定是关键，为
什么？
0
时间
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
可见，反应速度只在最初一段时间内保持恒定， 随着时间的延长，反应速度逐渐下降
产
物
原因
浓 度
底物浓度的降低、产
物的增加造成的
义为酶的活力单位。 酶活力大小就是指在一定条件所催化的某一化学反应速度的快慢，即酶催化的反应速度越快，酶活力越高，反之则表示该酶活力低。
这种单位是由国际酶学委员会规定的。
由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外酶。
有 的 甚 至 直 接 用 测 得 的 物 理 量 ， 如 单 位 时 间 08mg蛋白)，总活力为288单位。
比活力是酶制剂纯度的常用指标 ——
由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受到原料限制，成本又很大，因此，目前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的酶
制剂。 国际单位
(IU内) 消光值的变化
(DA/t)
表示酶活力单位。
酶分离纯化的主要步骤
浓缩：抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，必须浓缩富集。
在标准条件(25℃、最适pH、最适底物浓度)下，酶每分钟催化 1 mmol 底物转化，这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为1个国
在最适条件下，酶每秒钟催化1 mol 底物转化， 在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细胞内酶，该类酶在细胞内往往与细胞器结合，不仅有一定的区域
性，而且催化的反应具有一定顺序性。 主要步骤：抽提、纯化、结晶 常用的酶活力单位有三种：
这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为 1 比活力是酶制剂纯度的常用指标 ——
底物浓度的降低、产物的增加造成的逆反应的加快 留意：初速度的测定是关键，为什么？
个Kat 。 这种单位简单方便，省去了许多计算；
请问回收率是多少？纯化了多少倍？ 指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数
1 Kat = 60×106 IU
2. 酶活力与单位
二.酶活力及其测定
C. 自定义的活力单位
常用的酶活力单位有三种：
际单位 第五节
(I酶U)的。提取纯化与这活力种测定单位简单方便，省去了许多计算；但只能
某酶在一定条件下，5 min内使30 mmol底物转变为产物，问该酶的活力〔IU〕是多少？
进行酶活力的相对比较。其测定
第五节 酶的提取纯化与活力测定
酶提取基本的方法
A. 了解所分离酶在细胞中分布
细胞产生的酶有二类： 1. 由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外 酶。这类酶大部分属于水解酶。此类酶通常含量高，容易 得到。 2. 在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化 作用，称为细胞内酶，该类酶在细胞内往往与细胞器结合， 不仅有一定的区域性，而且催化的反应具有一定顺序性。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
1.主要步骤：抽提、纯化、结晶 浓缩：抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，必须浓 缩富集。常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉 淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。 纯化：纯化过程就是去除杂质的过程。准绳：一方 面是要提高酶的纯度，另一方面却也使酶的总量不 可避免有所损失。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
1. 主要步骤为：抽提、纯化、结晶 结晶：浓缩液经过各种方法的纯化，可得到较纯的 结晶产品。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
2. 选择分离纯化方法 a.盐析法〔如硫酸胺） b.有机溶剂沉淀法 c.层析纯化法〔葡聚糖凝胶、阴离子交换层析） d.等电点法 e.吸附分离法
以产物浓度对反应时间作图，可得到酶促反应速度曲线
酶习惯上或测定时使用的反应速度的单位定 国际单位 (IU)
在最适条件下，酶每秒钟催化1 mol 底物转化，这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为 1个Kat 。
常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。
但只能进行酶活力的相对比较。
酶提取基本的方法
B. 材料的获取
在提取某一酶时，首先应当根据需要，选择含 此酶最丰富的材料。由于从动物内脏或植物果实中 提取酶制剂受到原料限制，成本又很大，因此，目 前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的 酶制剂。
酶提取基本的方法
C. 酶分离纯化的主要步骤
1.主要步骤为：抽提、纯化、结晶 抽提：破碎细胞，动植物组织一般可用组织捣碎器； 或者加石英砂研磨，将材料做成丙酮粉或进行冰冻 融解 ；对细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声 波振荡方法破碎。
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
酶活力 是酶促反应的能力。酶活 力大小就是指在一定条件所催化的 某一化学反应速度的快慢，即酶催 化的反应速度越快，酶活力越高， 反之则表示该酶活力低。
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
但是，酶的定量并非对其蛋白质进行 定量，而是对它的催化能力进行定量。
所以，酶的定量就是测定酶的活力， 也即测定酶促反应的速度。
2. 酶活力与单位
二.酶活力及其测定
B. Katal
对细菌，常采用加砂或加氧化铝研磨和超声波振荡方法破碎。 底物浓度的降低、产物的增加造成的逆反应的加快
是由国际酶学委员会于1972年规定的一种新单位 国际单位 (IU)
在标准条件(25℃、最适pH、最适底物浓度)下，酶每分钟催化 1 mmol 底物转化，这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为1个国 际单位 (IU)。 常用的浓缩方法有：加中性盐或冷乙醇沉淀后再溶解，胶过滤浓缩以及超过滤浓缩法等。 所以，酶的定量就是测定酶的活力，也即测定酶促反应的速度。
逆反应的加快
产物的抑制作用
酶本身逐渐失活
0
时间
2. 酶活力与单位
二.酶活力及其测定
常用的酶活力单位有三种：
A. 国际单位 (IU)
这种单位是由国际酶学委员会规定的。
在标准条件(25℃、最适pH、最适底物浓度)下， 酶每分钟催化 1 mmol 底物转化，这样的速度所代 表的酶的活力即酶的量定义为1个国际单位 (IU)。
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
如何测定酶活力？
以产物浓度对反应时间作图，可得到酶促反
应速度曲线
产 物 浓
留意：初速度的 度
测定是关键，为
什么？
0
时间
1. 酶活力概念
二.酶活力及其测定
可见，反应速度只在最初一段时间内保持恒定， 随着时间的延长，反应速度逐渐下降
产
物
原因
浓 度
底物浓度的降低、产
物的增加造成的
义为酶的活力单位。 酶活力大小就是指在一定条件所催化的某一化学反应速度的快慢，即酶催化的反应速度越快，酶活力越高，反之则表示该酶活力低。
这种单位是由国际酶学委员会规定的。
由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外酶。
有 的 甚 至 直 接 用 测 得 的 物 理 量 ， 如 单 位 时 间 08mg蛋白)，总活力为288单位。
比活力是酶制剂纯度的常用指标 ——
由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受到原料限制，成本又很大，因此，目前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的酶
制剂。 国际单位
(IU内) 消光值的变化
(DA/t)
表示酶活力单位。
酶分离纯化的主要步骤
浓缩：抽提液或发酵液中酶浓度往往很低，必须浓缩富集。
在标准条件(25℃、最适pH、最适底物浓度)下，酶每分钟催化 1 mmol 底物转化，这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为1个国
在最适条件下，酶每秒钟催化1 mol 底物转化， 在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化作用，称为细胞内酶，该类酶在细胞内往往与细胞器结合，不仅有一定的区域
性，而且催化的反应具有一定顺序性。 主要步骤：抽提、纯化、结晶 常用的酶活力单位有三种：
这样的速度所代表的酶的活力即酶的量定义为 1 比活力是酶制剂纯度的常用指标 ——
底物浓度的降低、产物的增加造成的逆反应的加快 留意：初速度的测定是关键，为什么？
个Kat 。 这种单位简单方便，省去了许多计算；
请问回收率是多少？纯化了多少倍？ 指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数
1 Kat = 60×106 IU
2. 酶活力与单位
二.酶活力及其测定
C. 自定义的活力单位
常用的酶活力单位有三种：
际单位 第五节
(I酶U)的。提取纯化与这活力种测定单位简单方便，省去了许多计算；但只能
某酶在一定条件下，5 min内使30 mmol底物转变为产物，问该酶的活力〔IU〕是多少？
进行酶活力的相对比较。其测定
第五节 酶的提取纯化与活力测定
酶提取基本的方法
A. 了解所分离酶在细胞中分布
细胞产生的酶有二类： 1. 由细胞内产生后分泌到胞外发挥作用的酶，称为细胞外 酶。这类酶大部分属于水解酶。此类酶通常含量高，容易 得到。 2. 在细胞内合成后并不分泌到细胞外，而在细胞内起催化 作用，称为细胞内酶，该类酶在细胞内往往与细胞器结合， 不仅有一定的区域性，而且催化的反应具有一定顺序性。