肾素检测的最新发展情况 ppt课件

结果转换
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肾素检测-PRA vs PRC
肾素
血管紧张素原
血管紧张素原酶 微生物污染
血管紧张素I
血管紧张素转化酶
降解片段
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血管紧张素II
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肾素检测-PRA vs PRC 目前PRA检测存在的问题
各实验室之间差异较大，无法标准化 操作复杂，重复性差，结果无互通性
除此之外
无国际标准品可参照
肾素检测的最新发展情况
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几个问题
• 为什么传统上肾素检测活性？
• 为什么现在肾素要变为测浓度？
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肾素
肾素前体由406个氨基酸组成，其 中包含两个前片段，分别为20和 46个氨基酸。成熟的肾素包含340 个氨基酸，分子量为37KD。
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肾素检测的几个基本概念
• 肾素原，肾素与活性肾素的异同 • 肾素活性与活性肾素的区别 • 活性肾素在体内的意义
Perschel et al. Clin Chem. 2004
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美国内分泌学会原醛症指南
• 该指南同时推荐了肾素活性和浓度应用于 ARR实验，同时给出了基于美国人群的不 同方法学ARR的cut-off值
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美国目前肾素检测的应用
• 美国Quest实验室集团
• 肾素浓度检测（Renin, Direct），使用化学 发光法检测浓度，当天反馈结果，85%。
• 肾素活性检测放弃了RIA法，改用LC-MS法， 一周后出结果，15%。
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安图PRC和Aldosterone诊断效力研究
中山大学附属第一医院--曹教授
放免RIA 肾素活性与化学发光CLIA肾素浓度呈正相关（r=0.905）
放免RIA法醛固酮肾素活性比值 ARR以30为切 点，灵敏度为90.2% ，特异度为92.6% ； 化学发光CLIA法 醛固酮肾素浓度比值AARR以 25为切点，灵敏度为95.1%，特异度为83.3%； 两种方法检测结果计算所得醛固酮/肾素比值 的 ROC 曲线下面积分别为 0.94 和 0.92 ， ROC 曲 线 下 面 积 比 较 差 异 无 统 计 学 意 义 （P=0.52）。
无活性的肾素原
有活性的肾素原
肾素
肾素原
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活性肾素
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肾素检测-PRA vs PRC
• 传统肾素检测试剂——肾素活性检测
检测步骤
Ang I 转化 将预冷的200ul酶抑制剂加入200ul血浆样本中，混合均匀后，分为两份，分别置于冰 水浴和37度中孵育1小时，孵育后将37度的样本置于冰水浴中迅速冷却备用。 放免竞争法检测Ang I 加样
在多抗包被管中加入：
试剂盒组分：
抗Ang I多抗包被 管
125I标记的Ang
孵育
检测
I
校准品（6个）
校准品、质控品、待测 样本各 50ul。
加入125I标记的Ang I 200ul。 充分混匀
室 温 (18-25°C) 振 荡 孵 育2小时
质控品
酶抑制剂 洗液
将包被管用洗液洗两次后， 检测。根据标准曲线计算出 样本中的Ang I 浓度
放免RIA 与化学发光CLIA测醛固酮浓度呈正相关（r=0.967）
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已开展PRC的医院
•北大人民
•上海中山
北京阜外
上海华山
北京同仁
上海曙光 广医三附院
•中山一、二、三附院
•山东省立 中南湘雅 四川省医 郑大一附院 武汉同济
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体外的孵育条件和体内状态差异较大
加入酶抑制剂放置血管紧张素I降解
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PRA带给临床最大的困扰
• 重复性差
• 周期长 • 依ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ外送
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肾素检测-PRA vs PRC
• 如何做到活性肾素的检测？
关键在于那一个关键的抗体。
关键抗体
一般的肾素抗体
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肾素检测-PRA vs PRC
肾素检测肾素检测pravsprcpravsprc肾素检测肾素检测pravsprcpravsprc血管紧张素原血管紧张素i降解片段血管紧张素ii血管紧张素原酶微生物污染血管紧张素转化酶目前目前prapra检测存在的问题检测存在的问题各实验室之间差异较大无法标准化各实验室之间差异较大无法标准化操作复杂重复性差结果无互通性操作复杂重复性差结果无互通性除此之外除此之外无国际标准品可参照无国际标准品可参照体外的孵育条件和体内状态差异较大体外的孵育条件和体内状态差异较大加入酶抑制剂放置血管紧张素加入酶抑制剂放置血管紧张素ii降解降解肾素检测肾素检测pravsprcpravsprc如何做到活性肾素的检测