《药物分析》实验指导书

《药物分析》实验指导书
一、前言
药物分析实验是整个药物分析课的重要组成部分。

其主要目的是：
1.通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。

使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢
固。

2.通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事
药物分析科研工作的基本训练。

在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。

二、实验须知
在药物分析实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。

但只要加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。

三、实验规则
1.试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。

随时记录试验应记的项目，以作正式报告。

2.试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。

试验时不准做无关
的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应情况，仪器有否漏气，破裂等。

3.药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原处。

不可调错瓶塞，
以免污染，仪器要洗刷干净。

4.操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸石或一端封死的
毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防止爆沸冲出。

减压系统应装有安全瓶。

加液时应停火或远离火源，一般无漏气开口，冷凝水要通畅。

起封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避免开瓶口慢慢启开，以防气体冲脸上。

5.有毒具腐蚀药品应妥善保管，操作后要立即洗手。

勿粘及五官和创口，以免中毒。

6.实验中，有毒气或腐蚀性气体发生适应在通风橱中进行操作。

必要时可戴好防护用具进行工作。

7.若将玻管插入塞中时，可在塞孔中涂些水和甘油等润滑剂，用布包住波管使其旋转而入，防止
折断割伤。

8.试验台上不放无用的药品、仪器，在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地上清洁整齐。

9.试验结束时，应将门、窗、水、电、煤气关好，室内打扫干净，并清点仪器后方可离去。

四、安全防火须知
1.实验室存放易燃性有机溶剂时要远离火源，不得超过500ml 。

2.在进行易燃性有机溶剂实验时，一定要按着操作规程进行。

不可将易挥发、易燃性有机溶剂倒
入水槽或废液缸内。

3.烘箱内不能烘盛有易燃性溶剂的器皿。

4.消防器材，沙箱、石棉布、灭火器等应放在方便固定的地点，不能随意移动，均应处于备用状
态。

5.万一不慎着火，要沉着冷静积极抢救，应立即切断室内电源和火源，用石棉布将着火部位盖严，
使其断绝空气而熄灭。

或是火势情况选用适当灭火器材进行灭火。

在实验室使用二氧化碳灭火器较好，它具有不腐蚀不导电之优点。

在实验室中常发生的事故如下，应予以特别注意。

1.蒸馏或回流加热时，发现未放沸石，未等溶液冷却就补加沸石，结果溶液冲出瓶外于是引起火
灾。

2.蒸馏易燃物时，忘记通冷凝水，大量蒸汽逸出亦易引起火灾。

3.蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。

4.用三角烧瓶作减压装置的受器结果炸裂。

5.加压操作结束后，放气太快，使压力记冲破。

6.使用真空干燥器时，用完就直接开干燥器的放气阀，结果使泵内的机油被吸到干燥器中，样品
被污染。

7.实验室水槽易发生用抹布和碎拖布条堵塞而造成水灾。

实验一葡萄糖杂质检查（实验代码7403080-1）
（一般杂质检查）
一、实验目的和任务
1、实验目的：通过葡萄糖分析，了解药物的一般杂质检查的原理和意义。

2、实验任务：熟悉杂质检查的操作方法。

二、实验内容
酸度、溶液澄清度与颜色、氯化物、硫酸盐、乙醇中不溶物、干燥失重、炽灼残渣、铁盐、重金属、砷盐的检查。

三、实验仪器、设备及材料
四、实验原理
各检查项的检查原理，参见《药物分析》教材第三章第二节（第30-50页）。

五、主要技术重点、难点
1、技术重点：各检查项的操作方法和判定方法。

2、技术难点：各检查项检查限量的计算。

六、实验步骤
1．酸度取本品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与0.02mol/L氢氧化钠液0.20ml，应显粉红色。

3．氯化物
取本品0.30g，加水溶解使成10ml（如显碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中性反应），再加稀硝酸5ml，溶液如不澄清，滤过，置试管中，加水适量使成约20ml，摇匀，即得供试品溶液。

加硝酸银试液0.5ml，用水稀释使成25ml，摇匀，在暗处放置5min。

如发生浑浊，与标准氯化钠溶液一定量制成的对照液[取标准氯化钠溶液（10μg Cl/ml）3.0ml，置试管中，加稀硝酸5ml，加水稀释使成约20ml。

加硝酸银试液0.5ml，再加水适量使成25ml，摇匀，在暗处放置5min]比较，不得更深（0.010％）。

4．硫酸盐
取本品1.0g，加水溶解使成20ml（如显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性反应）。

溶液如不澄清，滤过置试管中，加稀盐酸1ml，加25%氯化钡溶液2.5ml，加水稀释使成25ml，摇匀，放置10min，如发生浑浊，与对照标准液[取标准硫酸钾（100μg SO4/ml）溶液1ml，置试管中，加水稀释使成20ml，加稀盐酸1ml，加25%氯化钡溶液2.5ml，加水稀释使成25ml，摇匀，放置10min]比较，不得更浓（0.010%）。

9．铁盐
取本品1.0g，加水10ml溶解后，加硝酸2滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成20ml，加30%硫氰酸铵溶液1.5ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10μgFe/ml）1.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。

注：
①葡萄糖溶解而淀粉和糊精等不溶。

②存在可溶性淀粉时呈蓝色，存在亚硫酸盐时碘液褪色。

③在pH=3.5时PbS沉淀较完全。

④氯化亚锡与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续发生。

⑤如使用锌粒较大时，用量得酌情增加。

七、实验报告要求
1、应在规定的时间内完成实验报告。

2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。

3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。

八、实验注意事项
1、应注意实验室安全，按规定程序操作。

2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。

九、思考题
1、葡萄糖杂质检查药典规定测11项，是根据什么原则制定的？目的何在？
2、什么叫杂质限量？如何计算？
实验二盐酸普鲁卡因注射液的杂质检查（实验代码7403080-2）
（特殊杂质检查）
一、实验目的和任务
1、实验目的：掌握本实验中药物特殊杂质的来源和检查原理。

2、实验任务：掌握薄层层析法用于特殊杂质检查的一般操作。

二、实验内容
三、实验仪器、设备及材料
四、实验原理
五、主要技术重点、难点
1、技术重点：薄层层析法的操作。

2、技术难点：薄层层析结果的检识。

六、实验步骤
(1)薄层板的制备
取硅胶H 2g，加0.5%的羧甲基纤维素钠6ml，研磨至适宜稠度。

均匀铺于光滑、平整、洁净的5×20cm 板上（厚度0.3～0.4mm）。

待自然干燥后，于105℃活化0.5小时，置干燥器内备用。

(2)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查
取本品，加乙醇稀释成每1ml中含2.5mg的溶液，作为供试品溶液。

精密量取氨基苯甲酸对照品，加乙醇稀释成每1ml中含30μg的溶液，作为对照液。

照薄层层析法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶H薄层板上。

以苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（14：1：1：4）为展开剂，展开后，晾干，用二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

七、实验报告要求
1、应在规定的时间内完成实验报告。

2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。

3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。

八、实验注意事项
1、应注意实验室安全，按规定程序操作。

2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。

3、薄层层析时，应注意：
①点样采用微量注射器进行，在距薄层板底边2.0cm处开始，点样应少量多次点于同一原点处，原点面积应尽量小。

② 采用倾斜上行法展开，展开剂应浸入薄层板底边约1cm 深度。

③ 碱性四氮唑蓝试液应临用新配。

新鲜试剂应呈黄色，颜色如变深者不宜使用。

④ 显色后，应立即检视斑点，并用针头定位，以便记录图谱。

九、思考题
1、薄层层析法检查氢化可的松与黄体酮中其他甾体的原理是什么？为何用稀释液作对照呢？
2、试计算三种药物的杂质限量？
实验三 维生素B 1片剂的含量测定（实验代码7403080-5）
（差示分光光度法）
一、实验目的和任务
1、实验目的：掌握差示分光光度法消除可能存在干扰的原理。

2、实验任务：掌握ΔA 法的基本测定方法。

二、实验内容
采用差示分光光度法测定维生素B 1片中维生素B 1的含量。

三、实验仪器、设备及材料
四、实验原理
差示分光光度法（简称ΔA 法），既保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰。

其原理为在两种不同的pH 介质中若经适当的化学反应后，供试品中待测组分发生了特征性的光谱变化，而赋形剂或其它共存物则不受影响，光谱行为不发生变化，从而消除了它们的干扰。

在测定时，取两份相等的供试溶液，经不同的处理（如：调节不同的pH 值或加入不同的反应试剂）后，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当的波长处，测其吸收度的差值（ΔA 值），根据标准曲线或%
11cm E 值计算出组分的含量。

图1 差示吸收光谱
五、主要技术重点、难点
1、技术重点：差示分光光度法的具体测定方法。

2、技术难点：差示分光光度法的原理。

六、实验步骤
1、测定波长的选择（根据实验条件选作）
精密称取维生素B1100mg，用水溶解并稀释成100ml。

精密量取2.0ml二份，分别用缓冲液（pH7.0）和盐酸液（pH2.0）稀释成100ml（浓度为0.002％）。

以相应溶剂为空白，测定紫外吸收光谱再将前者放于参比池，后者放于样品池，绘制差示吸收光谱（见图1）。

差示光谱图表明在247nm处有最大差示吸收值（A
）。

确定247nm为测定波长。

2、标准曲线绘制（根据实验条件选作）
精密称取干燥至恒重的维生素B1100mg，置100ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml贮备液各二份，分别置50ml量瓶中。

一份用缓冲液稀释至刻度；另一份用盐酸液稀释至刻度，摇匀，取上述五组浓度相同、pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值（ΔA）。

以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐标绘制标准曲线。

3、样品的测定
已片重为0.072g。

精密称取0.2g维生素B1片粉末，（约相当于维生素B130mg），置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液。

精密量取续滤液2.0ml二份，分别置50ml量瓶中，分别用缓冲液和盐酸液稀释至刻度，摇匀。

将前者置参比池中，后者置样品池中。

在247nm波长处测定差示吸收值。

由标准曲线求得维生素B1浓度，计算维生素B1片含量（标示量的百分数）。

注：
(1)缓冲液（pH7.0）：取磷酸二氢钾0.68g，加氢氧化钠（0.1mol/L）29.1ml，用水稀释至100ml，即得。

(2)盐酸液（pH2.0）：取盐酸9ml，加水稀释成100ml。

取10ml，加水稀释成1000ml，即得。

(3)所给测定波长仅供参考，可照“测定波长的选择”项下自行测定。

(4)本实验线性范围为10～30μg/ml，其回归方程：ΔA＝0.002＋0.0213C，r＝0.9996。

七、实验报告要求
1、应在规定的时间内完成实验报告。

2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。

3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。

八、实验注意事项
1、应注意实验室安全，按规定程序操作。

2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。

九、思考题
1、试述差示分光光度法如何消除干扰物的影响。

2、差示分光光度发用于制剂分析或原料药测定，主要有哪几种方法类型？
验四复方乙酰水杨酸片(复方阿司匹林片)的含量测度（实验代码7403080-6）
一、实验目的和任务
1、实验目的：掌握复方制剂含量测定的原理及其特点。

2、实验任务：学习复方制剂的含量测定方法。

二、实验内容
复方乙酰水杨酸片中：乙酰水杨酸的含量测定；非那西汀的含量测定；咖啡因的含量测定。

三、实验仪器、设备及材料
四、实验原理
1、乙酰水杨酸的测定：
在低温下，以NaOH 中和乙酰水杨酸的羧基
+N aO H CO O N a O CO C H 3+ H 2O C O O H
O C O C H 3
处方中加入酒石酸或枸橼酸为稳定剂，测定时消耗NaOH 使结果偏高，采用氯仿提取可消除影响。

2、咖啡因的测定：
本品可与酸结合成盐而溶解，借以与赋形剂分离然后用碘量法测定。

N N
N N O O
C H 3C H 3C H 3+2I 2+K I +H 2SO 4[B ]H I 2I 2+K H SO 4
[B]代表咖啡因之结构
I 2（过量）＋2Na 2S 2O 3 2 NaI ＋Na 2S 4O 6
五、主要技术重点、难点
1、技术重点：复方制剂含量测定的基本方法和实验操作。

2、技术难点：消除掌握复方制剂含量测定辅料和其他药物的影响。

六、实验步骤
取本品20片，精密称定，求出平均片重，置干燥研钵中研细，待用。

1、乙酰水杨酸的测定：精密称取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.2g ）置分液漏斗中，加水15ml ，振摇，用氯仿分次振摇提取4次，第一次10ml ，以后每次各5ml ，氯仿液用同一的水5ml 洗涤，合并氯仿液，置水浴上回收氯仿至近干，加约10︒C 的中性乙醇（对酚酞指示剂显中性）10ml 溶解后，加酚酞指示液3滴，用0.1mol/L 氢氧化钠液滴定，即得（每1ml 的0.1mol/LNaOH 相当18.02mg 的C 9H 8O 4）。

2、咖啡因的测定：精密称取上述细粉适量（约相当于咖啡因50mg ），加稀硫酸5ml ，振摇数分钟，使咖啡因溶解。

滤过，滤液置50ml 量瓶中，滤器与滤渣用水洗涤三次，每次5ml ，合并洗液和滤液。

精密加0.1mol/L 碘液25ml ，用水稀释至刻度，摇匀。

在约25︒C 避光放置15分钟，滤过，弃去初滤液（15ml ）。

精密量取续滤液25ml ，用0.05mol/L 硫代硫酸钠液滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正，即得（每1ml0.1mol/L 碘液相当于5.305mg 的C 8H 10O 2N 4•H 2O ）。

七、实验报告要求
1、应在规定的时间内完成实验报告。

2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。

3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。

八、实验注意事项
1、应注意实验室安全，按规定程序操作。

2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。

九、思考题
1、乙酰水杨酸的含量测定是否也可以采用过量碱水解后再用酸回滴法测定？
2、咖啡因的含量测定为何要作空白试验校正？
3、在咖啡因测定中，有两次过滤，第一次湿润滤纸，第二次要干燥滤纸，为什么？
实验五苯巴比妥的鉴别、区别（微晶反应）及含量测定（银量法）
（实验代码7403080-3）
一、实验目的和任务
1、实验目的：掌握苯巴比妥的鉴别反应的原理及微晶反应的观察。

2、实验任务：掌握熟悉用银量法测定巴比妥类药物含量的原理方法及其操作条件。

二、实验内容
苯巴比妥的鉴别。

苯巴比妥钠的微晶反应。

苯巴比妥的含量测定。

三、实验仪器、设备及材料
四、实验原理
苯巴比妥的鉴别的原理：参见《药物分析》教材第五章第三节（第102-104页）。

苯巴比妥钠的微晶反应的原理：苯巴比妥钠水溶液在稀硫酸作用下生成不溶于水的苯巴比妥而析出独特的结晶，可以用显微镜进行观察。

苯巴比妥的含量测定的原理：银量法。

五、主要技术重点、难点
1、技术重点：苯巴比妥的鉴别、苯巴比妥钠的微晶反应、苯巴比妥的含量测定等实验的操作。

2、技术难点：苯巴比妥钠的微晶反应的观察。

六、实验步骤
1、鉴别
(1)取供试品0.1g，加碳酸钠试液1ml，与水10ml，振摇2min，滤过（如不浑浊可不必滤过）。

滤液中逐滴加入硝酸银试液，即发生白色沉淀，振摇沉淀即溶解，继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。

(2)取供试品约50mg，加吡啶溶液稀释10倍后取5ml，溶解后加铜吡啶试液1ml，即显紫色或产生紫色沉淀。

铜吡啶试液：取硫酸铜4g,加水90ml溶解后,加吡啶30ml,即得。

(3)取本品数mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠数mg，混合，即显橙黄色。

(4)取本品约50mg，置试管中，加甲醛试液1ml，加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，使成两液层，置水浴中加热，接界面显玫瑰红色。

2、微晶反应
取3～5%的苯巴比妥钠的水溶液一滴，滴于载玻片上，在其边缘上加1滴稀硫酸，立即用显微镜观察。

苯巴比妥在开始结晶时呈现球状，然后变成花瓣状的结晶。

3、含量测定
取本品约0.4g，精密称定，加入新制的碳酸钠试液16ml使溶解，加丙酮12ml与水90ml，用0.1mol/L 的硝酸银滴定至溶液显出的浑浊在30秒内不消失，即得。

（每1ml0.1mol/L硝酸银相当于23.22mg的C12H12N2O3）。

七、实验报告要求
1、应在规定的时间内完成实验报告。

2、应按教务处规定的实验报告格式撰写实验报告。

3、实验报告应根据实验过程的情况如实写作，认真分析，不得照抄实验指导。

八、实验注意事项
1、应注意实验室安全，按规定程序操作。

2、应仔细观察实验现象，及时作好实验记录。

3、微晶反应注意事项：
(1)显微镜镜头和载玻片在使用前用绸布擦净。

(2)观察显微结晶时，显微镜应置于光线充足的地方。

(3)做显微结晶时，不可用玻棒去搅拌液滴。

而应用手轻轻地摆动载玻片使样品液滴和稀硫酸液滴自然汇合，待放置1～2min后出现自然生长的结晶时，再用显微镜观察。

4、含量测定注意事项：
(1)在接近终点时，反应较慢。

因此在近终点时需逐滴加，充分振摇，待银白色浑浊出现30秒钟不褪，即为终点。

(2)近终点时，观察出现的浑浊较难掌握，可以黑色背景衬托观察，终点较为明显。

九、思考题
1、银盐鉴别反应时，为什么不应加过多的Na2CO3试液？
2、如何用化学方法鉴别巴比妥，苯巴比妥，司可巴比妥，异戊巴比妥和含硫巴比妥？。