临床免疫学检测的常见问题及相关规范
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应按照CNAS-RL02《能力验证规则》的要求参加相应的能力 验证/室间质评；
对没有开展能力验证/室间质评的检验项目，实验室应通 过与其他实验室（如已获认可的实验室或其它使用相同检测 方法的配套系统的同级别或高级别医院的实验室）比对的方 式判断检验结果的可接受性。并满足相关要求。
同一项目使用2套及以上检测系统时，每年至少1次内部 实验室比对：2份阴性(1份其他标志物阳性)，3份阳性样本(含弱阳性
统计学质控规则
用COI或S/CO表示结果的项目 室内质量控制数据的评价
--用Levey-Jennings质控图
统计学质控规则
判断有无出现假阳性或假阴性
临床定性免疫检验重要常规 项目分析质量要求WS/T494-2017
分析质量指标的内容：
精密度 准确度 分析敏感性 对转化血清盘的检测能力 分析特异性 干扰因素
限
25
不精密度曲线
Percent Positive Results Percent Negative Results
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
C5
C 50
Claimed Cutoff
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% C 95
现场检测实验室存在的问题
1、实验室质量控制管理体系的建立与完善 2、实验室检测系统的规范化与标准化 3、实验室生物安全防范意识
EQA活动存在的问题
技术层面
管理层面
仪器检定校准计划
检验前、中、后
仪器的维护保养
方法的性能验证
仪器维修记录
质量控制
……
……
人
机
料 法环
人员岗位职责 人员的培训
新进人员的培训 人员考核、能力评估
2份)。
分析后质量控制
结果的报告与解释、 检验后标本的保存与处理 咨询服务 ······
检测结果与临床应用的概念解析
• 初筛实验：ELISA、免疫化学发光、免疫渗 滤层析试验等。
• 确认(补充)实验：中和试验、重组免疫印（RIBA）、 蛋白印迹（WB）、核酸检测等。
梅毒感染免疫标志物检测的意义
那么，问题出在哪儿呢？
参考资料
1、医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验 领域的应用说明(CNAS-CL02-A004)
2、医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应 用说明(CNAS-CL02-A003)
3、 感染性疾病免疫测定程序及结果报告（WST 573-2018） 4、临床生物化学检验常规项目分析质量指标（WST403-2012 ） 5、临床定性免疫检验重要项目分析质量指标（WST494-2017） 6、室间质量评价结果应用指南 (WS/T 414-2013 ) 7、梅毒非特异性抗体检测操作指南(WS/T 491-2016 ) 8、无室间质量评价时实验室检测评估方法(WS/T415-2013 ) 9、临床实验室室间质量评价要求( GB/T 20470-2006) 10、临床实验室定量测定室内质量控制指南(GB/T20468-2006) 11、梅毒诊断（WS 273—2018） 12、 《2017 年世界卫生组织乙型和丙型肝炎检测指南》编译
CUT-OFF值设定的不确定性：灰区
样本数量
测定吸光度
结果报告和解释 实验室检测的结果解释 被检者免疫应答的差异
主要内容
1
EQA及现场检测工作汇总及存在的问题
2
临床免疫学检验存在的问题及探讨
临床免疫学检验质量管理相关规范探讨
3
医学实验室质量和能力认可准则 在临床免疫学定性检验领域的应用说明CNAS-CL02-A004 定量项目的质量控制
75
70 2013年
96.9
91.1
96.4 92
75.9 2014年
73.3 2015年
2016年
97.7
94.6
2017年
现场检测合格率
室间质评合格率
4
现场检测调查表内容：
1、免疫学实验室质量安全管理结构 2、分析前质量保证 3、分析中质量保证 4、分析后质量保证 5、实验室仪器设备及检测试剂管理 6、室内质量控制 7、室间质量评价
要求：
＜15%，同时不大于说明书CV的20%
29
定性测定准确度
敏感性 [临床敏感性-漏诊率]
特异性 [临床特异性-误诊率]
表述 方式
i
筛查实验：敏感性大于95%；确认实验：特异性大于98% 诊断实验：敏感性和特异性均应大于95%。
总符合率 尤登指数 Kappa指数
阳性似然比 阴性似然比
30
医学实验室质量和能力认可准则 在临床免疫学定性检验领域的应用说明CNAS-CL02-A004
临床免疫学检测的常见问题 及相关规范
主要内容
1
EQA与现场检测工作汇总及存在的问题
2
临床免疫学检验存在的问题及探讨
临床免疫学检验质量管理相关规范探讨
3
2018年EQA(1)与现场检测PT得分
100
99 98.5 96.5
98.8 9977..44
95.2
99.2 98.2
质控频率 质控物位置 质控记录 质控判断规则
内部质量控制方案质控判断规则
免疫定量检验程序
参考临床化学 CNAS-CL38
免疫定性检验程序
肉眼判断：阴阳性的检测结果分别为阴性和阳性即表明 在控，相反为失控 滴度(稀释度)判断：阴性质控必须为阴性，阳性质控 物结果在上下1个滴度(稀释度)内，为在控。 数值或量值判定结果的规则：可使用肉眼判定的规则； 也可以使用统计学质控规则，至少利用一个偶然误差及 一个系统误差规则。阴阳性质控物的检测结果必须为阴 性或阳性。
分析后的质量：包括结果的报告与解释、检验后标本的 保存与处理和咨询服务等方面。
分析前质量控制
• 实验室空间和工作流程的设计； • 仪器设备的正确使用、维护和校准； • 检测系统的性能验证及质检； • SOP的编写； • 人员培训等。
分析中质量控制
质控物的选择
• 质控物的类型 • 质控物的浓度 • 质控物的稳定性
98.7 98.2
99.7 99.2
94.3
95.7
90
90
89
90.2
90.9
85
HBsAg
HBsAb
HBeAg
HBeAb
86.1
HBcAb
抗-HCV
抗-TP（特 异）
抗-TP（非 特）
现场检测
EQA检测(全)
EQA检测(民)
现场检测与EQA实验室合格率比较
100
95 94.5 90
85
80
75
定性项目的质量控制
• 纯定性实验的质量控制 • 根据滴度或稀释度判定阴阳性结果的项目的质量控制 • 基于定量试验但报告定性结果（用数值判定结果）的
项目的质量控制
质量保证工作全过程
分析前质量保证：检验项目的申请、患者的准备、标本 的采集、运送、接收和保存等。
分析中的质量保证：实验室环境条件、仪器设备维护校 准、试剂方法的性能验证、标准操作程序的建立、人员培训 、标本前处理、室内质量控制、室间质量评价和实验室间比 对等，其中室内质量控制和室间质量评价是质量保证的重要 方面。
……
试剂出入库管理 试剂核查核收 试剂使用记录
试剂的性能评价
……
实验室分区 实验室温湿度控制
……
持续改进
主要内容
1
EQA及现场检测工作汇总及存在的问题
2
临床免疫学检验存在的问题及探讨
临床免疫学检验质量管理相关规范探讨
3
临床免疫学检验质量保证的若干问题
免疫检验全过程包括哪些方面？分析前影响因素 免疫检验试剂的阳性判断值如何设定？ 筛查、诊断实及确认实验？按何种标准区分？ 免疫检验的试剂方法性能验证的内容? 临床免疫学项目的室内质控怎么做 ？定性与定 量检验在室内质控的方法上有何根本性的不同？ 如何选择质控品？ 定性试验项目如何选择质控物浓度？定量呢？ 质控品应如何设置？ELISA实验的阴阳性对照？ 免疫检验的结果报告与解释？ ······
Actual Concentration 26
两种不同方法的不精密度曲线比较
Percent Positive Results
100%
90%
80% 方法2的阳性率
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
C
2 5
C
1 5
C
1 95
C
2 95
Actual Concentration 27
定性测定精密度要求：≤C50±20%
定性测定精密度
纯定性实验的精密度评价 只提供两种定性检测结果
用数值判断结果的定性实验的精密度评价 以COI（cut-off Index）或S/CO比值报告结果
24
临界值与检测限
鉴别样品，作为判断疾病、 临
C5
状态或被测量存在或不存在 界
C50
的界限量值。
值
C95
临界值浓度
检
检测方法可检测出的
测
最低被测量浓度
······
谢谢大家
28
数值判断结果的免疫定性实验 精密度
批间精密度
批内精密度
同一实验室，由同一（组）操作 员在同一仪器上，使用同一方法 和同种、同一批号试剂，在一段 时间内(一般为一个月或20个工 作日)对同一检测样本（常用质 控品）测量结果的精密度。
严格的相似条件下，所得到 的最佳的精密度
要求：
＜10%，同时不大于说明书CV的10%
检验结果的临床解释（1）
检验结果的临床解释（2）
这样的处理是正确的吗？为什么？
检验结果的临床解释（3）
新生儿，第一天检测结果：ELISA弱(+),弱TPPA(+),RPR(1:1); 第二天（不同工作人员）：TPPA(-),RPR(-);
化学发光3.27（参考值0.1） 重新采血检测：ELISA弱(+),弱TPPA(+),RPR(-); 免疫印迹法： ？？？
临床免疫学实验室常用检测技术
标记免疫技术 经典免疫技术
放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 金免疫技术 化学发光技术 流式细胞术
⋯⋯⋯
沉淀与凝集(自动化)
临床免疫学检验的检测特点
抗原抗体特异结合为基础的免疫学方法
抗原抗体的异质性： 干扰免疫测定 用于建立免疫测定方法
CUT-OFF值设定的不确定性 实验室检测的影响因素 结果的报告与解释
对没有开展能力验证/室间质评的检验项目，实验室应通 过与其他实验室（如已获认可的实验室或其它使用相同检测 方法的配套系统的同级别或高级别医院的实验室）比对的方 式判断检验结果的可接受性。并满足相关要求。
同一项目使用2套及以上检测系统时，每年至少1次内部 实验室比对：2份阴性(1份其他标志物阳性)，3份阳性样本(含弱阳性
统计学质控规则
用COI或S/CO表示结果的项目 室内质量控制数据的评价
--用Levey-Jennings质控图
统计学质控规则
判断有无出现假阳性或假阴性
临床定性免疫检验重要常规 项目分析质量要求WS/T494-2017
分析质量指标的内容：
精密度 准确度 分析敏感性 对转化血清盘的检测能力 分析特异性 干扰因素
限
25
不精密度曲线
Percent Positive Results Percent Negative Results
100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
C5
C 50
Claimed Cutoff
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% C 95
现场检测实验室存在的问题
1、实验室质量控制管理体系的建立与完善 2、实验室检测系统的规范化与标准化 3、实验室生物安全防范意识
EQA活动存在的问题
技术层面
管理层面
仪器检定校准计划
检验前、中、后
仪器的维护保养
方法的性能验证
仪器维修记录
质量控制
……
……
人
机
料 法环
人员岗位职责 人员的培训
新进人员的培训 人员考核、能力评估
2份)。
分析后质量控制
结果的报告与解释、 检验后标本的保存与处理 咨询服务 ······
检测结果与临床应用的概念解析
• 初筛实验：ELISA、免疫化学发光、免疫渗 滤层析试验等。
• 确认(补充)实验：中和试验、重组免疫印（RIBA）、 蛋白印迹（WB）、核酸检测等。
梅毒感染免疫标志物检测的意义
那么，问题出在哪儿呢？
参考资料
1、医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验 领域的应用说明(CNAS-CL02-A004)
2、医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应 用说明(CNAS-CL02-A003)
3、 感染性疾病免疫测定程序及结果报告（WST 573-2018） 4、临床生物化学检验常规项目分析质量指标（WST403-2012 ） 5、临床定性免疫检验重要项目分析质量指标（WST494-2017） 6、室间质量评价结果应用指南 (WS/T 414-2013 ) 7、梅毒非特异性抗体检测操作指南(WS/T 491-2016 ) 8、无室间质量评价时实验室检测评估方法(WS/T415-2013 ) 9、临床实验室室间质量评价要求( GB/T 20470-2006) 10、临床实验室定量测定室内质量控制指南(GB/T20468-2006) 11、梅毒诊断（WS 273—2018） 12、 《2017 年世界卫生组织乙型和丙型肝炎检测指南》编译
CUT-OFF值设定的不确定性：灰区
样本数量
测定吸光度
结果报告和解释 实验室检测的结果解释 被检者免疫应答的差异
主要内容
1
EQA及现场检测工作汇总及存在的问题
2
临床免疫学检验存在的问题及探讨
临床免疫学检验质量管理相关规范探讨
3
医学实验室质量和能力认可准则 在临床免疫学定性检验领域的应用说明CNAS-CL02-A004 定量项目的质量控制
75
70 2013年
96.9
91.1
96.4 92
75.9 2014年
73.3 2015年
2016年
97.7
94.6
2017年
现场检测合格率
室间质评合格率
4
现场检测调查表内容：
1、免疫学实验室质量安全管理结构 2、分析前质量保证 3、分析中质量保证 4、分析后质量保证 5、实验室仪器设备及检测试剂管理 6、室内质量控制 7、室间质量评价
要求：
＜15%，同时不大于说明书CV的20%
29
定性测定准确度
敏感性 [临床敏感性-漏诊率]
特异性 [临床特异性-误诊率]
表述 方式
i
筛查实验：敏感性大于95%；确认实验：特异性大于98% 诊断实验：敏感性和特异性均应大于95%。
总符合率 尤登指数 Kappa指数
阳性似然比 阴性似然比
30
医学实验室质量和能力认可准则 在临床免疫学定性检验领域的应用说明CNAS-CL02-A004
临床免疫学检测的常见问题 及相关规范
主要内容
1
EQA与现场检测工作汇总及存在的问题
2
临床免疫学检验存在的问题及探讨
临床免疫学检验质量管理相关规范探讨
3
2018年EQA(1)与现场检测PT得分
100
99 98.5 96.5
98.8 9977..44
95.2
99.2 98.2
质控频率 质控物位置 质控记录 质控判断规则
内部质量控制方案质控判断规则
免疫定量检验程序
参考临床化学 CNAS-CL38
免疫定性检验程序
肉眼判断：阴阳性的检测结果分别为阴性和阳性即表明 在控，相反为失控 滴度(稀释度)判断：阴性质控必须为阴性，阳性质控 物结果在上下1个滴度(稀释度)内，为在控。 数值或量值判定结果的规则：可使用肉眼判定的规则； 也可以使用统计学质控规则，至少利用一个偶然误差及 一个系统误差规则。阴阳性质控物的检测结果必须为阴 性或阳性。
分析后的质量：包括结果的报告与解释、检验后标本的 保存与处理和咨询服务等方面。
分析前质量控制
• 实验室空间和工作流程的设计； • 仪器设备的正确使用、维护和校准； • 检测系统的性能验证及质检； • SOP的编写； • 人员培训等。
分析中质量控制
质控物的选择
• 质控物的类型 • 质控物的浓度 • 质控物的稳定性
98.7 98.2
99.7 99.2
94.3
95.7
90
90
89
90.2
90.9
85
HBsAg
HBsAb
HBeAg
HBeAb
86.1
HBcAb
抗-HCV
抗-TP（特 异）
抗-TP（非 特）
现场检测
EQA检测(全)
EQA检测(民)
现场检测与EQA实验室合格率比较
100
95 94.5 90
85
80
75
定性项目的质量控制
• 纯定性实验的质量控制 • 根据滴度或稀释度判定阴阳性结果的项目的质量控制 • 基于定量试验但报告定性结果（用数值判定结果）的
项目的质量控制
质量保证工作全过程
分析前质量保证：检验项目的申请、患者的准备、标本 的采集、运送、接收和保存等。
分析中的质量保证：实验室环境条件、仪器设备维护校 准、试剂方法的性能验证、标准操作程序的建立、人员培训 、标本前处理、室内质量控制、室间质量评价和实验室间比 对等，其中室内质量控制和室间质量评价是质量保证的重要 方面。
……
试剂出入库管理 试剂核查核收 试剂使用记录
试剂的性能评价
……
实验室分区 实验室温湿度控制
……
持续改进
主要内容
1
EQA及现场检测工作汇总及存在的问题
2
临床免疫学检验存在的问题及探讨
临床免疫学检验质量管理相关规范探讨
3
临床免疫学检验质量保证的若干问题
免疫检验全过程包括哪些方面？分析前影响因素 免疫检验试剂的阳性判断值如何设定？ 筛查、诊断实及确认实验？按何种标准区分？ 免疫检验的试剂方法性能验证的内容? 临床免疫学项目的室内质控怎么做 ？定性与定 量检验在室内质控的方法上有何根本性的不同？ 如何选择质控品？ 定性试验项目如何选择质控物浓度？定量呢？ 质控品应如何设置？ELISA实验的阴阳性对照？ 免疫检验的结果报告与解释？ ······
Actual Concentration 26
两种不同方法的不精密度曲线比较
Percent Positive Results
100%
90%
80% 方法2的阳性率
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
C
2 5
C
1 5
C
1 95
C
2 95
Actual Concentration 27
定性测定精密度要求：≤C50±20%
定性测定精密度
纯定性实验的精密度评价 只提供两种定性检测结果
用数值判断结果的定性实验的精密度评价 以COI（cut-off Index）或S/CO比值报告结果
24
临界值与检测限
鉴别样品，作为判断疾病、 临
C5
状态或被测量存在或不存在 界
C50
的界限量值。
值
C95
临界值浓度
检
检测方法可检测出的
测
最低被测量浓度
······
谢谢大家
28
数值判断结果的免疫定性实验 精密度
批间精密度
批内精密度
同一实验室，由同一（组）操作 员在同一仪器上，使用同一方法 和同种、同一批号试剂，在一段 时间内(一般为一个月或20个工 作日)对同一检测样本（常用质 控品）测量结果的精密度。
严格的相似条件下，所得到 的最佳的精密度
要求：
＜10%，同时不大于说明书CV的10%
检验结果的临床解释（1）
检验结果的临床解释（2）
这样的处理是正确的吗？为什么？
检验结果的临床解释（3）
新生儿，第一天检测结果：ELISA弱(+),弱TPPA(+),RPR(1:1); 第二天（不同工作人员）：TPPA(-),RPR(-);
化学发光3.27（参考值0.1） 重新采血检测：ELISA弱(+),弱TPPA(+),RPR(-); 免疫印迹法： ？？？
临床免疫学实验室常用检测技术
标记免疫技术 经典免疫技术
放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 金免疫技术 化学发光技术 流式细胞术
⋯⋯⋯
沉淀与凝集(自动化)
临床免疫学检验的检测特点
抗原抗体特异结合为基础的免疫学方法
抗原抗体的异质性： 干扰免疫测定 用于建立免疫测定方法
CUT-OFF值设定的不确定性 实验室检测的影响因素 结果的报告与解释