尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌A549、Calu-6细胞放射增

N→R组
NR组 R→N组
0.81581±0.00045
0.81613±0.00034 0.81668±0.00061
0.49458±0.00058*
0.52547±0.00061 0.53632±0.00027
0.87998±0.00048
0.88197±0.00123 0.88196±0.00172
克隆形成曲线
A549
Calu-6
克隆形成结果
细胞及分组 A549 D0 Dq N SER
R组
N→R组
2.47
1.22
1.56
0.34
1.88
1.32
--2.02
NR组
R→N组 Calu-6 R组 N→R组 NR组 R→N组
1.65
1.96 2.75 1.46 2.52 2.83
0.68
0.95 2.05 0.42 1.81 2.79
小结㈡
◆不同的结果
• 尼妥珠单抗对A549细胞的抑制作用更强。
• 尼妥珠单抗无论何时给药均对A549细胞产生放射增敏作用，而
Calu-6细胞仅见于放疗前给药。 • Calu-6细胞N组的G0/G1期阻滞不明显， NR组、R → N 组未见 G2/M期比例和凋亡率升高。 • A549细胞EGFR表达较高，而Calu-6细胞Akt、 pAkt表达较高。
存在问题
？EGFR抑制剂联合放疗的最佳给药时
间尚不明确。 ？ EGFR抑制剂联合放疗治疗相同类型 肿瘤时，疗效差别较大，具体原因不明，
尚缺乏预测放射增敏疗效的相关指标。
研究对象和目的
★对象 ◆细胞系：人肺腺癌A549、Calu-6细胞系 ◆主要试剂：尼妥珠单抗 ◆主要仪器：医科达直线加速器 ★目的 ●明确尼妥珠单抗联合放疗的最佳给药时间。 ●两种细胞采用相同实验方案，观察结果是否相同， 并探讨产生差异的原因。
⒋尼妥珠单抗不同作用时间对放射增敏作用的影响机制尚有待 于更深入的研究。
谢 谢！
0.57863±0.00095*
0.58624±0.00130 0.58611±0.00118
*与各个实验组比较，p＜0.05
小结㈠
◆相同的结果
• 两种细胞N→R组的SER最高。
• 两种细胞N→R组的G2/M期比例和凋亡率最高 。
• 两种细胞N→R组的Bax、 P21达最高值，Bcl-2 、phospho-DNAPK达最低值。各组Akt表达无差异。 pAkt表达在N→R组表达减至 最低 。 ☆上述改变表明两种不同的细胞系，尼妥珠单抗放疗协同效应最佳 顺序均为放疗前24h给药。
1.51
1.62 2.11 1.33 2.05 2.68
1.50
1.26 --1.88 1.09 0.97
A549细胞周期图
O N R
N→R
NR
R→N
A549细胞周期结果 组别 O组
A549
G0/G1（%） 55.85±2.32 S（%） 18.73±0.03 G2/M（%） 25.42±2.35
51.28±1.69
*表示与相同时相其它实验组比较P值均<0.05
Calu-6细胞周期图
O N R
N→R
NR
R→N
Calu-6细胞周期结果
组别
O组 N组 R组 N→R组 NR组 R→N组
G0/G1（%） 62.07±1.98 63.80±2.99 46.93±1.91 41.30±1.03 45.81±3.12 46.00±2.23
N组
R组 N→R组
81.28±2.09*
43.40±3.36 23.28±1.82
8.32±0.76
15.55±2.28 6.73±0.53
10.22±1.54
41.05±1.84 68.32±1.92*
NR组
R→N组
32.77±2.81
35.20±1.01
13.13±0.69
13.51±0.80
53.77±2.88
*表示与相同细胞系其它实验组比较P值均<0.05
WESTERN BLOT
各组Akt、pAkt灰度值
A549 组别 O组 N组 R组 Akt 0.81612±0.00071 0.81563±0.00008 0.81541±0.00042 pAkt 0.53735±0.00028 0.53576±0.00103 0.54701±0.00052 Akt 0.88267±0.00131 0.88212±0.00091 0.88424±0.00221 Calu-6 pAkt 0.58383±0.00090 0.58156±0.00045 0.58818±0.00054
Calu-6 S（%） 21.06±1.42 19.33±1.89 15.07±2.08 11.84±1.88 12.29±1.70 14.47±1.51
G2/M（%） 16.87±0.75 16.86±1.22 38.00±0.65 46.87±1.07* 41.90±1.68 39.53±0.91
*表示与相同时相其它实验组比较P值均<0.05O来自A549细胞各组凋亡图
N
R
N→R
NR
R→N
Calu-6细胞各组凋亡图
O N R
N→R
NR
R→N
A549、 Calu-6细胞凋亡结果
组别 O组 N组 R组 N→R组 NR组 R→N组 A549 （%） 1.30±0.43 10.85±0.35 17.49±0.84 57.78±1.08* 40.46±0.81 37.51±1.24 Calu-6 （%） 1.62±0.68 5.17±0.40 18.63±0.43 36.06±1.40* 20.59±1.27 19.42±0.69
实验设计
Western blot检测A549、Calu-6EGFR表达
流式细胞术 MTT实验计算
A549、Calu-6各自的IC20 /IC50值
24h前加药
原因
Western blot
凋亡指标 关卡蛋白
细胞周期 细胞凋亡
Bax BCL-2 P21
放疗
同时加药
细胞克隆 形成实验
SER
放射损伤
24h后加药
p-DNA-PK
下游通路
Akt pAkt
实验结果
WESTERN BIOT检测两种细胞EGFR表达 A:A549或者 Calu-6细胞
B:阳性对照
C:阴性对照 MTT检测尼妥珠单抗对两种细胞的增殖抑制作用 IC20 IC50 细胞系 A549 1.15±0.18 24.78±1.16 24hIC20 Calu-6 2.45±0.32 51.15±1.58
尼妥珠单抗不同给药时间对人肺腺癌 A549、Calu-6细胞放射增敏作用的研究
第一作者：刘晓斌 指导教师：袁智勇 天津医科大学附属肿瘤医院 放疗科/肺癌诊治中心
研究背景
★肺癌发病率高 ，非小细胞肺癌占80%， 总5年存活率低。 ★放疗疗效仍不理想 。 ★放射增敏剂可以提高放疗疗效。分子 靶向药物：低毒、高效，表皮生长因 子受体（EGFR）成为治疗肺癌靶点。
讨论
⒈A549、Calu-6细胞实验结果不同的潜在原因： ⑴ EGFR单抗的放射增敏作用与肿瘤细胞表面的EGFR表达水平密 切关系。 ⑵Akt、 pAkt可能是抗EGFR疗法中的耐药因子。 ⒉推测Calu-6细胞系若要进一步增强放射增敏效应，是否应加 大药量或是延长作用时间。 ⒊尼妥珠单抗对A549、Calu-6细胞系的最佳给药时间均为放疗 前，不同细胞的最佳给药量需进一步明确。