实验室常见菌株保存方式比较!

实验室常见菌株保存方式比较！
菌种保存方法有多种，最抱负的为真空冷冻干燥法，具有保存时间长、成活率高、变异小等优点，但操作技术难度大，花费高，需特
别设备，一般单位不易做到，而一些常规方法，常因传代次数多、
易污染、易变异，给保存带来诸多不利。

多年来，微生物学工们始终在讨论摸索简便而行之有效的菌种保存
方法，笔者查阅相关资料并吸取同行工们的实践阅历，总结了几种
方法简便、效果好的保存方法，现介绍如下。

先将液体石蜡灭菌，然后放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。

再将需要保存的菌种在最相宜的斜面培育基中培育，用无菌吸管吸
取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培育基上，用量以高出斜
面顶端1cm为准。

试管需直立，置4℃或室温下保存，一般无芽胞
细菌可保存1年左右。

2、高层半固体琼脂石蜡保存法
将需保存的菌种经平板划线分别后，挑单个菌落用接种针反复穿刺
接种到高层半固体琼脂培育基中，经37℃12小时培育后取出，用无
菌操作将灭菌的液体石蜡滴加半固体琼脂菌种管表层约0.5cm高度，存放4℃冰箱，1年转种1次。

3、蒸馏水保存法
取灭菌蒸馏水6-7ml加于试管斜面上，用吸管研磨，洗下菌苔充分混匀，将此菌液分装于灭菌的螺旋小瓶中，或用胶塞密封，置4℃保存可存活数年。

甘油一生理盐水保存液的制备：取甘油(分析纯)8份加入生理盐水2份，充分混合后，经121.3℃30分钟灭菌备用。

将纯化后的菌株依据菌种不同分别划线接种于其最相宜生长的培育基上培育后，用接种针取典型菌落接种肉汤管37℃培育6-8小时(链球菌和奈瑟氏菌接种血清肉汤管，5-10%CO2环境下8-10小时培育，真菌直接用接种环取菌洗入肉汤管，不培育)。

此为培育液。

将此培育液与保存液以5：2的比例混合分装于灭菌的微量离心管，置-20℃冰箱保存(链球菌、奈瑟氏菌置-80℃冰箱保存)。

使用时需37℃水浴中快速解冻。

用上述方法保存一般菌株可存活3年以上，链球菌、奈瑟菌可存活12-15个月，且性状未发生变异。

此方法采纳幼龄肉汤培育物效果好，且适用于链球菌、奈瑟氏菌、弧菌、真菌等需特别方法保存的菌种。

2、低温保存法
菌种保存液的配制：K2HPO412.6g，柠檬酸钠0.98g，MgSO47H2O 0.18g，KH2PO43.6g，甘油88g加蒸馏水至1000ml，103.4KPa灭菌30分钟，4℃保存备用。

将细菌接种于肉汤培育基中，37℃培育16-18小时，或斜面培育物
刮取于生理盐水中，然后加入等体积的菌种保存液，冻存于-70℃或
-20℃冰箱中。

此方法也适合甲链、肺球、流感杆菌、百日咳杆菌、绿脓杆菌等耐
受力低的细菌。

-70℃保存10年以上，-20℃可保存2年以上。

3、细菌湿种牛奶冻存法
新奇牛奶或15%奶粉煮沸，冷却脱脂，分装小试管，每管1ml，8磅
15分钟灭菌备用。

将纯种菌接种于平板，37℃16小时培育，以接种环刮取菌苔2-3环
于牛奶中混匀，试管用硅胶塞，冻存于一般冰箱冷冻室(-12℃-18℃)。

使用时取出室温溶解，待部分溶解时即可取一环接种平板，
并将试管再快速冻存，这样可反复使用3-5次。

此法一般菌株可存
活48个月，少数如奈瑟氏菌、甲链、白喉等可存活14-30个月。

4、甘油原液保存法
将各待保存的菌种纯化后用接种环直接从平板上刮取，置于盛有
0.5ml甘油原液的菌种瓶中，-20℃保存，可连续52个月存活良好。

此法尤其适合乙链、破伤风杆菌、产气荚膜梭菌、白色念珠菌等需
特别方法保存的菌种，是一种简便有用的有效保存方法。

需低温-30或-70℃冰箱保存
将脑膜炎双球菌、淋球菌、甲乙型链球菌、肺炎双球菌分别接种于
血平板培育基中，前两者置于5-10% CO2烛缸内，经35℃16-18小
时培育，后三者置37℃恒温箱培育24小时，然后无菌操作取一接
种环菌苔移种于上述新奇脱纤维羊血试管中，马上置-3O℃冰冻保存二年转种一次。

用时室温自然冰融即可接种。

2、纸片法
新华定性滤纸剪成4mm4mm，1.5ml带盖离心管消毒灭菌备用，用消毒小钳子钳上滤纸片于平板上刮取待保种的纯菌落2-3个。

放于离心管内塞盖再用封口胶布将盖边缘封好放于-30℃冰箱保存。

保存12个月后取出菌种解冻后用无菌钳取一片放于肉汤管内37℃培育12小时后转种血平板，性状未变异。

3、奶粉液菌种保存法
菌种保存液：脱脂奶粉10g，NaCL 10.5g，加双蒸水100ml，121℃5分钟高压灭菌后分装于1ml带盖无菌标本杯中(0.5ml)备用。

无菌操作用4mm10mm无菌滤纸条蘸取新奇菌少许，放存含奶粉液保存杯中，盖好，封口胶封口，低温保存。

3年存活率达99.2%。

使用时将标本杯取出，不等全部溶化，上层有少许溶化即用接种环取一少许接种于血平板分别即可。

结论。