消化酶活性测定实验报告

消化酶活性测定实验报告
1材料与方法
1.1试验材料
试验用菲牛蛭于2014年6月从广西南宁市引种,引进后用山泉水养殖于塑料箱(70cmx50cmx40cm),水深30cm，每2d换新水1次，每次换水1/3,水温18~25℃，溶解氧668~1078mg/L，pH75~7.8。

饵料为新鲜猪血。

试验前挑选健康的菲牛蛭个体,根据方法分为幼体I组(021+0.01)g亚成体Ⅱ组(198006)g和成体Ⅲ组(7.49+047)g、N组(12.960.55)g共4组，3个重复。

分别于摄食前1d摄食当天6h及后每隔24h采集各试验组菲牛蛭消化道样品。

12粗酶液的制备将活体引种菲牛蛭固定于冰盘内解剖，取出整个消化道剔除其附着物，用预冷蒸馏水洗净，用滤纸吸干组织表面水分后放人2mLEppendoff管中，所得样品立即置于一20℃冰箱保存，备测。

测定时从冰箱中取不同试验组菲牛蛭消化道样品，融化，剪碎,加人适量经预冷的生理盐水，在玻璃匀浆器中冰浴匀浆，后3000r/min冷冻离心10min，取上清液进行消化酶活力测定。

酶液置于冰箱4℃保存备用，24h内测定完所有酶活力指标。

1.2指标测定
酶液蛋白浓度采用考马斯亮蓝法测定。

胰蛋白酶、冒蛋白酶和脂肪酶活力均采用南京建成生物技术有限公司生产的试剂盒测定，具体方法参照说明书。

1.3数据分析
试验数据用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析，检验各取样组间数据的差异显著性。

试验结果用平均值士标准差表示。

2结果与分析
不同阶段菲牛蛭的消化酶活性
从表看出，Ⅱ组的胰蛋白酶活力最强，显著高于工组、Ⅳ组，与皿组间差异不显著。

I~Ⅳ组的胃蛋白酶活力逐渐增高，其中，Ⅲ组、Ⅳ组间差异不显著，其活力均显著高于I组。

各组菲牛蛭的脂肪酶活力均为0U/mg。