组织学技术分离标本制作

组织学技术分离标本制作
分离标本制作
一分离液
（一）上皮组织
1.扁平上皮细胞：
用玻璃棒或指甲将自己的颊部黏液取下，涂于载玻片上，滴加0.9%生理盐水，加盖玻片检查，可见扁平上皮
2. 肠系膜上皮细胞：
取蛙或兔的肠系膜，繃于有孔的软木轮上，四周用刺猬毛固定，蒸馏水洗。

入0.25~0.5%硝酸银水溶液15分钟或1%硝酸银水溶液5分钟，取出，蒸馏水洗，放入蒸馏水内置日光下，至肠系膜呈褐色。

从软木轮上取下，经95%酒精和石炭酸二甲苯，放置载玻片上展开，滴加树胶封固。

结果：肠系膜上皮细胞境界呈锯齿状褐色线条即细胞间质的黏合质。

毛细血管内皮细胞也可显示。

能长久保存
3.色素细胞：
取牛眼球用10%甲醛固定2天，切开眼球，取出巩膜内色素层。

色素层内面为色素上皮细胞，外层为色素结缔组织细胞。

用分离针将两层分开，放在载玻片上，滴蒸馏水检束。

也可经95%酒精和石炭酸二甲苯，放载玻片上，滴树胶加盖玻片封固。

结果：上皮性色素细胞为多角形，颗粒黄褐色，中央有圆形细胞核（空泡状），结缔组织性色素细胞有突起
4.柱状上皮细胞：
取兔或蛙小肠浸于33%酒精内6~8小时，取出，在载玻片上轻叩2~3次，上皮细胞脱落。

滴加33%酒精加盖玻片检查，可见单个的柱状上皮细胞
5.纤毛上皮细胞：
切开兔气管，将切面部在载玻片上轻轻涂抹，滴加Ringer液或生理盐水，加盖玻片检查，可见纤毛上皮细胞表面有无数纤毛。

或取蛙的口盖上皮一块按此法操作，结果相同。

或按柱状上皮细胞法处理
6.纤毛运动：
取蛙口盖肌膜一小块，铺于载玻片上，滴加生理盐水，加盖玻片检查，在黏膜边缘可见纤毛运动
7.变形虫运动：
取芦苇或枯草剪成小段，加水培养数日，取其液体检查可见变形虫
8.浆液性小腔及小管
取新鲜蛙眼球，将角膜在水蒸气上熏至角膜呈混浊的白色为止。

放入生理盐水，用毛笔将白色刷去，入0.25~1%硝酸银水溶液浸15分钟，蒸馏水洗，放蒸馏水至日光下至呈褐色为止。

剪下角膜，在角膜四周剪4个切口，放在载玻片上滴甘油水加盖玻片检查。

也可将角膜经95%酒精及石炭酸二甲苯，滴树胶加盖玻片封固。

、结果：浆液性小腔及小管无色，背景棕色
（二）结缔组织
1.疏松结缔组织：
取小白鼠皮下组织一小块，置载玻片上用针展开成薄膜，待边缘
半干燥时，滴加生理盐水加盖玻片检查。

胶原纤维为白色束状，走行不规则；弹性纤维为单条直行，有分支，末端卷曲。

若滴加0.05%冰醋酸，弹性纤维更明显
2.肥大细胞：
分离方法同上。

半干时滴0.5%美蓝、中性红、甲苯胺蓝水溶液染数分钟，倾去染液，蒸馏水洗，滴蒸馏水加盖玻片检查。

可见肥大细胞颗粒呈蓝紫色或橘红色或瓦红色。

肥大细胞常常破碎，有散在的颗粒，是分离时将细胞破损所致。

故分离时，从组织边缘向外伸展，勿将分离针在组织中间乱刺。

3.脂肪细胞：
分离方法同上
取皮下组织或蛙肠系膜，干后用10%甲醛水溶液固定10分钟，蒸馏水洗。

滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染数分钟，70%酒精冲洗，蒸馏水洗，再用苏木精染细胞核，蒸馏水洗，滴甘油水加盖玻片检查。

脂肪细胞呈橙红色，核蓝色
4.腱细胞和腱纤维：
将鼠尾的腱抽出，用针分离（愈细愈好），加生理盐水并盖盖玻片检查。

可见腱纤维呈波状走行。

若加0.05%冰酝酿水，腱纤维膨出，可显示腱细胞
5.透明软骨：
取蛙的胸骨剑突或大腿骨端的透明软骨，用剃刀切一薄片，放在载玻片上，滴生理盐水加盖玻片检查。

可见软骨细胞充满于软骨腔内，单个或成群分布。

加0.5%美蓝水溶液染色，可显示细胞核
（三）肌组织
1.肌原纤维：
取新鲜蛙骨骼肌，入0.1%铬酸水溶液24小时，蒸馏水洗。

取一块置载玻片上分离。

滴蒸馏水加盖玻片检查。

在肌纤维两端可见分离单条的肌原纤维
横纹肌末端取蛙腓肠肌浸于33%氢氧化钠水溶液约1小时，或0.1%
铬酸水溶液浸24小时。

分离方法同上。

可见横纹肌末端为钝圆形
2.横纹肌纤维：
取蛙骨骼肌一小段，放在载玻片上用针分离，滴生理盐水，加盖玻片检查。

可见横纹肌的横纹。

加0.05%冰醋酸水可显示细胞核。

另一片加自来水，可见肉膜膨胀，从肌纤维分离而突出，微透明，呈半圆形隆起
3.分枝的横纹肌纤维：
取蛙舌浸于5%硝酸20毫升加氯酸钾5克混合液24小时，用玻棒取出，放入蒸馏水多次。

移入试管，加少许蒸馏水，用力振荡至舌肌分离为止
取少许液体滴于载玻片上加盖玻片检查。

可见横纹肌末端分枝呈树枝状
4.平滑肌细胞：
取蛙胃或肠管一小块置33%氢氧化钠水溶液20~60分钟，取出，轻轻地载玻片上叩,平滑肌细胞脱落在载玻片上,滴生理盐水加盖玻片观察，可见单个平滑肌细胞。

或用蛙膀胱一小块置载玻片上，上皮面朝上，用刀轻轻刮去上皮，再用分离针展开，愈薄愈好。

半干时，入10%甲醛固定数分钟，蒸馏水洗，苏木精伊红染色，滴甘油水加盖玻片检查。

或经酒精脱水，二甲苯透明，封固。

结果：平滑肌细胞成束或单个，核蓝色，细胞浆红色
5.心肌细胞：
与平滑肌细胞相同
（四）神经组织
1.神经节细胞：
取蛙神经节，放置载玻片上。

用分离针先除去外面的被囊，滴生理盐水再分离。

加盖玻片检查。

可见淡黄色的神经节细胞。

若滴加0.05%冰醋酸水则核更明显
2.分离的脊髓前角细胞：
取牛脊髓一段，去掉白质，将灰质切成小块，浸于0.05%铬酸水
溶液或0.1%重铬酸钾水溶液几天。

小心取出，入硼砂卡红或钾矾卡红液染色10~20小时，蒸馏水洗，放入试管内，加少量蒸馏水，用力振荡，将细胞的突起完全分离。

取一滴滴于载玻片上，待其干燥，加树胶封固，可见单个前角细胞的细胞核深红色，细胞质淡红色
3.神经纤维：
取蛙坐骨神经一段，滴生理盐水分离，加盖玻片观察，可见髓鞘折光性较强，纤维表面有结和切迹，雪旺氏细胞核椭圆形
4.神经胶质网：
取蛙坐骨神经一段，入乙醚酒精等量混合液或95%酒精于试管内，置水浴加温至酒精沸腾15~30分钟，取出，蒸馏水洗，Hansen苏木精染色12~24小时，自来水冲洗数小时，用针分离，加盖玻片镜检。

长期保存则经自来水冲洗，95%酒精脱水，用针分离，滴加石炭酸二甲苯，加盖玻片封固。

结果：神经角质网和轴索蓝黑色，雪旺氏细胞核深蓝色，郎飞氏结非常清楚
5.环层小体
肉眼观察，猫肠系膜环层小体，椭圆形呈白色，位于肠系膜血管边缘的脂肪内。

连同肠系膜取下，绷紧于有孔软木轮上，四周用刺猬毛固定。

0.5~1%硝酸银水溶液在暗处浸30~60分钟。

蒸馏水洗，蒸馏水内置阳光下，至轴索呈棕褐色。

蒸馏水洗。

9%酒精及石炭酸二甲苯，滴树胶加盖玻片封固。

结果：轴索棕褐色
临时观察，则休在载玻片上，滴加生理盐水加盖玻片观察
（五）其他
1.小动脉：
取人或动物软脑膜的小动脉，尽量细小的动脉，用苏木精染色，95%酒精及石炭酸二甲苯脱水，加树胶封固。

结果：内皮细胞核椭圆形，纵行；平滑肌细胞核呈细长杆状，横行
2.高铁血红色（Heamin）结晶：
取干燥的血粉于载玻片上，加等量氯化钠，滴加少量冰醋酸，小
火上加热至沸腾，冷后观察。

可见杆状褐色结晶。

滴树胶加盖玻片封固。

3.血红素结晶：
将载玻片涂以树胶的圆圈，圈中央滴加豚鼠新鲜血液一滴，加盖玻片，10~30分钟后观察。

血滴四周可见形的血红素结晶
4.肝细胞：
取肝脏一块，将创口面轻压于载玻片上，滴生理盐水加盖玻片观察。

可见单独或成群的肝细胞。

加0.05%冰醋酸水溶液可见细胞核。

用苏丹3染色，可见脂肪滴呈橙红色。

精子：取蛙或其他动物的新鲜睾丸小块，浸于少量生理盐水或Rnger液内，用剪刀剪碎，使精子分离。

取其液体滴于载玻片上，加盖玻片观察，可见精子。