血液提取RNA
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786787?技术与方法?从血液中提取总rna的一种快速高效方法?明张页张沙周柔丽?京大学医学部基础医学院细胞生物学与遗传学系?京100083摘要血液中含有大?的rna酶可引起rna的降解
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ＩＳＮ Ｓ １０ ７ ２ ０ ７． ６ ６
中 国生 物 化学 与 分 子生 物 学报
ｇ ａ ｉ ｉ ｕ ｉｏ ｈｏ ｙ ｎ ｔ ｕ ｎ ｄｎｉｍ ｓ ｔ ｉｃ ａ ａｅ．Ａｇ ｒｓ ｅ ｌｃｒ ｐ ｏｅ ｉ ｒ ｍ ｈ ｏａ ａ ｏ ｅ ｇ ｌｅｅ ｔｏ ｈ ｒ ｓｓｆｏ ｔ ｅ ｔｔ ＲＮＡｓ ｏ ｔｉ ｅ ｙ ｔ ｅ ｉ ｒｖ ｄ ｍｅｈ ｄ ｌ ｂ ａｎ ｄ ｂ ｈ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｏ
ｔ ｅ ｈ ｉ ｇ ｅｔ ｅ ｍｎ ｄ ｔａ ｕｓｎ ｉ ｒ ＴＲＩ ｎ ｈ ＺＯＬ ｏ ｕ ｎｉｉ ｉ ｍ ｓ ｔ ｉｃ ａ ａｅ ａｏ ｇ ｂ ｉ ｇ ａ ｃ ｍｂ ｎ ｔｏ ｆ Ｔ ＺＯＬ ａ ｄ ｒ ｇ ａ ｄ ｎ ｕ ｉｏ ｈｏ ｙ ｎ ｔ ｎ ｙ ｕｓｎ ｏ ｉ ａｉｎ ｏ ＲＩ ｌ ｎ
Ｈｏ ｖ ｒ ｍａ ｘ ｓｉ ｇ ＲＮＡ ｉｏａｉｎ ｍｅ ｈ ｄ ｒ ｏ ｅｙ ｓ ｔｓ ｅ ｕ ｏ ｉｃ ｍｐｅ ｅ ｎ ｉ ｉ ｏ ｆＲＮＡａ ｅ ｗｅ ｅ ． ｎｙ ｅ ｉｔｎ ｓ ｌｔｏ ｔｏ ｓ ａｅ ｎ ｔｖ ｒ ａｉｆ ｄ ｄ ｅ ｔ ｎ ｏ ｌｔ ｉｈ ｂｔ ｎ ｏ ｉ ｉ ｓ ａ ｔｖｔ ｓ Ａ ｃｉｉ ｅ ． ｍｏ ｉ ｅ ｔ ｏ ａ ｅ ｎ ｔｅ ＴＲＩ ｉ ｄｆ ｄ ｍｅ ｈ ｄ ｂ ｓ ｄ ｏ ｈ ｉ ＺＯＬ ｐ ｏ ｏ ｏ ． ｔｗａ ｏ ｎ ｈ ｔ ｍｕ ｈ ｂ ｔ ｒｒ ｓ ｌ ｒ ｂ— ｒ ｔｃ １ Ｉ ｓ ｆ ｕ ｄ ｔ ａ ， ｃ ｅｔ ｅ ｕｔ ｗｅ ｅ ｏ ｅ ｓ
无 降解 ． 异硫 氰 酸 胍被 认 为是 最 有 效 的 Ｒ Ａ酶 抑 制 Ｎ
３ ０ 氯 仿 ，充 分 振 荡 混 匀 ， 止 分 层 后 ， 即 于 ５ 静 立
４ ，２００ ｒ ｉ 心 ２ ｎ 将 上 清 转 移 至 另一 离 ℃ １ ０ ／ ｎ离 ｍ ０ｍｉ．
剂 ， 在 裂解 组 织 的 同 时也 使 Ｒ Ａ酶 失 活 ． 既 可 它 Ｎ 它 破 坏 细 胞 结 构 使 核 酸 从 核 蛋 白 中 解 离 出 来 ， 对 又 Ｒ Ａ酶有 强 烈 的 变 性 作 用 ． Ｎ 因此 ， 制 备 富 含 Ｒ Ａ 当 Ｎ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 剂 ．
收 稿 日期 ：０２０ ．５ 接 受 日期 ：０ ２０．０ ２０ ．５１ ； ２０ ． １ ７
国家 自 然科 学 基 金 项 目 （ ｏ ３ ８ ０ ６ 资 助 Ｎ ．９ ｏ ７ ） 联 系 人 ： 明 ， ， ９ ３年 ８月 生 ， 管 技 师 ． Ｔ ｌ０ ０ ６ ０ １ ７ 林 男 １５ 主 ｅ： １ ．２ ９ ４ ６
Ｔ ＩＯ Ｒ Ｚ Ｌ试 剂 盒 为博 大公 司产 品 ． 变性 液 ： ｏ Ｌ异 硫 氰 酸 胍 ，５ ｍ ｏ Ｌ柠 檬 酸 ４ｍ ｌ ／ ２ ｍ ｌ ／ 三钠 （ Ｈ ７ ０ ， ． ％ 十 二 烷 基 Ⅳ 甲基 肌 氨 酸 钠 ， ｐ ，）０５ 一
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１ ３ ＲＮＡ 提 取 ．
防止 Ｒ Ａ降 解方 面 尚不能 做 到尽 如人 意 ． 实验 将 Ｎ 本 Ｔ ＩＯ Ｒ Ｚ Ｌ方 法稍 加 改 进 ， 而 较 好 地 解 决 了 Ｒ Ａ 降 从 Ｎ
解 的 问题 ．
取 ３个离 心 管 （ Ｄ Ｐ 经 Ｅ Ｃ水 处 理 ） 分别 编 号 为 １ 、
Ａｂ ｔａ ｔ Ｂｌｏ ｏ ｔｉ ｓｌｒ ｅ ａ ｕ ｔｏ ｓｒ ｃ ｏ ｄ ｃ ｎ ａｎ ａ ｇ ｍｏ ｎ ｆＲＮＡａ ｅ ｔ ａ ａ ａ ｅ ｘｅ ｓｖ ｅ ｒｄ ｔｏ ｆＲＮＡ ｎ ｔ ｅ ｓ ｍ — ｓ ｈ ｔｃ ｎ ｃ ｕｓ ｓｅ ｔｎ ｉｅ ｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ｏ ｉ ｈ ａ ｐ ｅ Ｉ ｉ ｅ ｓ ｎ ｉ ｏ ｐ ｅ ｅ ｔｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ｏ ｌｓ．ｔ Ｓ ｓｅ ｔａ ｔ ｒ ｖ ｎ ｅ ｒｄ ｔｏ ｆＲＮＡ ｙ ＲＮＡａ ｅ ｆ ｒｏ ｔｉ ｉｇ ｉｔｃ ｌ ｂ ｓ ｏ ｂ ａｎ ｎ ｎ ａ ｔＲＮＡ ｌｃ ｌ ｓｆｏ ｂ ｏ ｄ ． ｍｏｅ ｕｅ ｒ ｍ ｌｏ
ＬＩ ｉ ｇ ，ＺＨＡＮＧ Ｎ Ｍ ｎ Ｙｅ，ＺＨＡＮＧ ｈ Ｓ ａ， ＺＨＯＵ ｕ ｌ Ｒｏ —ｉ
（ ｅａｔ ｅ ｔ ｆＭｅ ｉ ｌ ｌ Ｂｏｏ ｙａ ｄ Ｇ ｎｔ ｓ ｃｏ ｌ Ｂ ｓ ｄ ａ ｉ ｃｓ ｅ ｉ ｎ ｅ ｉ ｅ ｈＳ ｉ ｅ Ｃ ｎ ｒ，Ｂ ｉｎ １ ０ ８ ， ｈｎ Ｄｐｒ ｎ ｏ ｍ ｄ ａ Ｚ ｉ ｇ ｎ ｅ ｅ ｃ ，Ｓｈ ｏ ｏ ａｉ Ｍｅｉ ｌ ｅ ｅ ，Ｐ ｋｎ Ｕ ｉ ｒ ｔ Ｈ ａｔ ｃ ｅ ｓ ｅｔ ｃ Ｇ ｌ ｅ ｉ ｆ ｃ ｃ Ｓ ｎ ｃ ｇ ｖ ｓｙ ｎ ｅ ｃ ｅｉ ｊ ｇ ００ ３ Ｃ ／ ａ）
Ｒｅ ｅ ｖ ｄ： ｙ １ ２ ０ ｃ ｉｅ Ｍａ ５， ０ ２；Ａｃ ｅ ｔ ｄ： ｕ ｙ １ ２ ０２ ｃ ｐ ｅ Ｊ ｌ ０， ０
Ｓ ｐ ｏ ｔ ｙ Ｎａｉ ｎ ｌ Ｎ ｔｒ ｌＳ ｉ ｎ ｅ Ｆ ｕ ｄ ｔ ｎ ｏ ｉａ， ． ９ ０ ７ ｕｐｒ ｄ ｅ ｂ ｔ ａ ａ ｕ ａ ｃ ｅ ｃ ｏ ｎ ａｉ ｆＣｈ ｎ Ｎｏ ３ ８ ０ ６ ｏ ｏ Ｃ ｒｅ ｐ ｎ ｉ ｇ ａ ｔｏ Ｔ ｌ ０１ ． ２ ９ ４ ６ ｏｒｓｏ ｄｎ ｕｈ ｒ ｅ： ０ ６ ０ １ ７
胞 中提 取 ＲＮ Ａ．
关键 词
Ｔ ＩＯ ， ＲＺ Ｌ 异硫 氰 酸胍 ， Ｎ 降解 Ｒ Ａ Ｑ３ ３
中 图分 类 号
Ａ ｐｉ ｎｄ Ｅｆ ｃｅ ｅ ｈｏ ｏ ｔ ｌＲＮＡ ｓ ｌ ｔｏ ｒ ｍ ｏ ｄ Ｒａ ｄ ａ ｆ ｉｎｔＭ ｔ ｄ ｆ ｒ Ｔｏ ａ ｉ Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｆ ｏ Ｂｌ ｏ
ｆｏ ｏｈ ｒｃ ｌ ｒ ｍ ｔ ｅ ｅ ｌ ｓ． Ｋ ｅ ｒ ｓ Ｔ ＺＯＬ， ｇ ａ ｉ ｉ ｉｍ ｓ ｔ ｉｃ ａ ａｅ， ＲＮＡ ｅ ｒ ｄ ｔ ｎ，ｏａ ｙ ｗｏ ｄ ＲＩ ｕ ｎ ｄ ｎｕ ｉｏｈｏ ｙ ｎ ｔ ｄ ｇ ａ ａ ｉ ｔｔ ＲＮＡ ｓ ｌ ｔ ｎ ｏ ｌ ｉｏａｉ ｏ
完整 的 关键 ． 目前 提 取 Ｒ Ａ的 方法 较 多， 有 些 方法 尚不 能 完全 防 止 Ｒ Ａ 降解 ． Ｔ ＩＯ Ｎ 但 Ｎ 将 ＲＺ Ｌ方 法稍
加 改进 ， Ｔ ＩＯ 将 ＲＺ Ｌ与 异硫 氰 酸胍 联 用提 取 血液 淋 巴细胞 总 Ｒ Ａ． 脂糖 凝胶 电泳 结 果表 明 ， ２ Ｎ 琼 其 ８ｓ Ｒ Ａ与 １ Ｎ Ｎ ８ＳＲ Ａ的 比值 为 ２ １优 于 单独 使 用其 中任 何 一 种 试 剂者 ． 方 法 同样 适 用 于从 其 它 细 ：， 此
ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｈ ｒｔ ｆ ２ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔｅ ａｉ ｏ ８ Ｓ ｏ １ Ｓ ＲＮＡ ｓ ： ｉｄ ｃ ｔ ｇ ＲＮＡ ｅ ｒ ｄ ｔ ｎ Ｗａ ｆｅ ｔｖ ｌ ｉｈ ｂ ｔｄ． ８ Ｗａ ２ １．ｎ ｉａｉ ｎ ｄ ｇ ａ ａ ｉ ｓ ｅｆｃｉｅｙ ｎ ｉ ｉｅ ｏ
酶 的组织 ， 利用 它 可 取 得 满 意 的效 果… ． 外 ， 们 另 我 也 发 现 Ｔ ＩＯ ＲＺ Ｌ与 异硫 氰 酸 胍联 用 提取 的 Ｒ Ａ产量 Ｎ
心管 ， 加等 体 积 的异 丙 醇 （ ℃预 冷 ）混 匀 ． ０ ４ 一２ ℃放
置 １ｈ ４ ， ２０ ０ ｒ ｉ ， ℃ １ ０ ／ ｎ离 心 ２ ｉ，沉 淀 即 总 ｍ ０ ｍｎ Ｒ Ａ． 入 ０５ ｍ ５ 乙 醇 洗 涤 ， ℃ ，１ ０ ／ ｉ Ｎ 加 ． ｌ ％ ７ ４ ２０ ０ ｒ ｎ ｍ 离 心 １ ｉ， 心 倒 掉 乙醇 ， 温 放 置 １ ｉ， 适 ０ｍ ｎ 小 室 ０ｍ ｎ 加
血 液 中含 有 大量 Ｒ Ａ酶 ， 引 起 Ｒ Ａ降 解 ． Ｎ 可 Ｎ 防 止 Ｒ Ａ酶对 Ｒ Ａ 的降 解 ， 保 证 所 得 Ｒ Ａ片 段 完 Ｎ Ｎ 是 Ｎ 整 的关键 ． 目前 提 取 Ｒ Ａ 的方 法 很 多 ， 采 用 酸 性 Ｎ 如 酚一 硫氰 酸 胍法 ， 取 肝癌 组 织 及 非 肝 癌组 织 的总 异 提 Ｒ Ａ Ｎ ， 可用 一 步法 提 取 总 Ｒ Ａ ． 多 方 法 在 也 Ｎ 许
０ １ｍ ｌ 一 、 ｏ ＬＪ巯基 乙 醇 ． ／ ３ 混合 溶 解后 ４Ｃ 存 ． ￣保
１ ２ 淋 巴细 胞 提 取 ．
Hale Waihona Puke 取新 鲜 全 血 ２Ⅱ ｄ加 １ｍ ％ 柠 檬 酸 钠 ， 匀 后 ｌ ３ 混
３０ ０ｒ ｉ 心 ，１ ｎ ４Ｃ， 血 球层 上 浅 黄色 层 ０ ｍ ｎ离 ／ ０ｍ ， ￣ 取 ｉ 即为 淋 巴细 胞 ．
加 入 １ｍ 异 硫 氰 酸胍 ， 匀 后再 加 入 １ｍ Ｒ Ｚ Ｌ ｌ 混 ｌ ＩＯ ， Ｔ 振 荡 混匀 ，冰 浴 中放置 ５ｍ ｎ ｉ． 各 管 提取 方 法 按 Ｔ ＩＯ Ｒ Ｚ Ｌ操 作 步 骤 进 行 ： 入 加
性 ． 核 细胞 ２ 真 ８ｓ和 １ Ｎ 比 值 约 为 ２： ， 明 ８ＳＲ Ａ １表 无 Ｒ Ａ降 解 ； 该 比值 为 １ １ 则 表 明有 部 分 Ｒ Ａ Ｎ 如 ：， Ｎ 降解 ． 号 管 和 ２号 管 的 ２ １ ８ｓ与 １ Ｎ ８ＳＲ Ａ比值 约 为 １１ ： ，表 明有 部分 降 解 ， ３号 管 比值 约 为 ２ １ 明 而 ：表
Ｔｈ Ｓ ｔ ｅ Ｕ ，ｈ ｍｅ ｈ ｄ Ｓ ｃ ａ ａ ｔｒｚ ｄ ｙ ｅｆｃｉｅ ｎ ｉ ｉｉｎ ｏ ｔｏ ｉ ｈ ｒｃｅ ｉｅ ｂ ｆｅ ｔｖ ｉｈ ｂ ｔ ｆ ＲＮＡ ｅ ｒｄ ｔｏ ｎ ｈ ｒ ｆｒ ｓｇ ｆｃ ｔｙ ｉ — ｏ ｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ａ ｄ ｔ ｅ ｅｏｅ ｉｎｉ ａ ｌ ｍ ｉ ｎ
・
技 术 与方 法 ・
从 血 液 中提 取 总 Ｒ ＮＡ 的 一 种 快 速 高 效 方 法
林 明 ， 张 页， 张 沙 ， 周柔丽
（ 京 大 学 医学 部 基 础 医 学 院 细 胞 生 物 学 与遗 传 学 系 ，北 京 １０８ ） 北 ００ ３
摘要
血 液 中含 有 大量 的 Ｒ Ａ酶 ， 引起 Ｒ Ａ 的降 解 ． Ｎ 可 Ｎ 防止 Ｒ Ａ酶 的 降解 ， 保 证所 得 Ｒ Ａ片段 Ｎ 是 Ｎ
ｐ ｏ ｅ ｈ ｕ ｌｔ ｆｔｔｌＲＮＡｓ ｉｏａｅ ｒｍ ｌｏ Ｔｈ ｔ ｏ Ｓａ Ｓ ｐ ｌ ａ ｌ ｏ ｓ ｌｔｏ ｆｔｔｌＲＮＡｓ ｒ ｖ ｄ ｔ ｅ ｑ ａｉ ｏ ｏ ａ ｖ ｓ ｌｔｄ ｆｏ ｂ ｏ ｄ． ｅ ｍｅｈ ｄ ｉ Ｏ ａ ｐ ｉ ｂ ｅ ｆｒｉｏａｉｎ ｏ ｏａ ｌ ｃ
第 ６期
林 明等 ： 血 液 中 提 取 总 Ｒ Ａ的 一 种 快 速 高 效 方 法 从 Ｎ
７７ ８
２ ３ 每管 加 入淋 巴细胞 液 １０ ． 后 １号管 加 １ｍ 、， ５ 然 ｌ
通过 琼脂 糖 变 性 凝胶 电泳 ， 鉴 定 Ｒ Ａ的完 整 可 Ｎ
异硫 氰 酸 胍 ，振 荡 混 匀 ，冰 浴 中放 置 ５ｍ ｎ ２号 管 ｉ； 加 １ｍ Ｒ Ｚ Ｌ振 荡 混匀 ，冰 浴 中放置 ５ｍｎ ３号管 ｌ ＩＯ Ｔ ｉ；
Ｃ ｉ ｅ ｅ Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｉｃ ｅ ｓ ｙ ａ ｄ Ｍｏｅ ｕａ ｉｌ ｈ ｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆ Ｂ ｏ ｈ ｍｉ ｒ ｎ ｌｃ ｌ ｒＢ ｏ ｔ
２０ ０ ２年 １ ２月 １ （ ：８ ８ ６） ７ ６—７ ７ ８
Ｃ １－ ８ ０ Ｑ Ｎ ３７／ １
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ＩＳＮ Ｓ １０ ７ ２ ０ ７． ６ ６
中 国生 物 化学 与 分 子生 物 学报
ｇ ａ ｉ ｉ ｕ ｉｏ ｈｏ ｙ ｎ ｔ ｕ ｎ ｄｎｉｍ ｓ ｔ ｉｃ ａ ａｅ．Ａｇ ｒｓ ｅ ｌｃｒ ｐ ｏｅ ｉ ｒ ｍ ｈ ｏａ ａ ｏ ｅ ｇ ｌｅｅ ｔｏ ｈ ｒ ｓｓｆｏ ｔ ｅ ｔｔ ＲＮＡｓ ｏ ｔｉ ｅ ｙ ｔ ｅ ｉ ｒｖ ｄ ｍｅｈ ｄ ｌ ｂ ａｎ ｄ ｂ ｈ ｍｐ ｏ ｅ ｔ ｏ
ｔ ｅ ｈ ｉ ｇ ｅｔ ｅ ｍｎ ｄ ｔａ ｕｓｎ ｉ ｒ ＴＲＩ ｎ ｈ ＺＯＬ ｏ ｕ ｎｉｉ ｉ ｍ ｓ ｔ ｉｃ ａ ａｅ ａｏ ｇ ｂ ｉ ｇ ａ ｃ ｍｂ ｎ ｔｏ ｆ Ｔ ＺＯＬ ａ ｄ ｒ ｇ ａ ｄ ｎ ｕ ｉｏ ｈｏ ｙ ｎ ｔ ｎ ｙ ｕｓｎ ｏ ｉ ａｉｎ ｏ ＲＩ ｌ ｎ
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无 降解 ． 异硫 氰 酸 胍被 认 为是 最 有 效 的 Ｒ Ａ酶 抑 制 Ｎ
３ ０ 氯 仿 ，充 分 振 荡 混 匀 ， 止 分 层 后 ， 即 于 ５ 静 立
４ ，２００ ｒ ｉ 心 ２ ｎ 将 上 清 转 移 至 另一 离 ℃ １ ０ ／ ｎ离 ｍ ０ｍｉ．
剂 ， 在 裂解 组 织 的 同 时也 使 Ｒ Ａ酶 失 活 ． 既 可 它 Ｎ 它 破 坏 细 胞 结 构 使 核 酸 从 核 蛋 白 中 解 离 出 来 ， 对 又 Ｒ Ａ酶有 强 烈 的 变 性 作 用 ． Ｎ 因此 ， 制 备 富 含 Ｒ Ａ 当 Ｎ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 剂 ．
收 稿 日期 ：０２０ ．５ 接 受 日期 ：０ ２０．０ ２０ ．５１ ； ２０ ． １ ７
国家 自 然科 学 基 金 项 目 （ ｏ ３ ８ ０ ６ 资 助 Ｎ ．９ ｏ ７ ） 联 系 人 ： 明 ， ， ９ ３年 ８月 生 ， 管 技 师 ． Ｔ ｌ０ ０ ６ ０ １ ７ 林 男 １５ 主 ｅ： １ ．２ ９ ４ ６
Ｔ ＩＯ Ｒ Ｚ Ｌ试 剂 盒 为博 大公 司产 品 ． 变性 液 ： ｏ Ｌ异 硫 氰 酸 胍 ，５ ｍ ｏ Ｌ柠 檬 酸 ４ｍ ｌ ／ ２ ｍ ｌ ／ 三钠 （ Ｈ ７ ０ ， ． ％ 十 二 烷 基 Ⅳ 甲基 肌 氨 酸 钠 ， ｐ ，）０５ 一
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１ ３ ＲＮＡ 提 取 ．
防止 Ｒ Ａ降 解方 面 尚不能 做 到尽 如人 意 ． 实验 将 Ｎ 本 Ｔ ＩＯ Ｒ Ｚ Ｌ方 法稍 加 改 进 ， 而 较 好 地 解 决 了 Ｒ Ａ 降 从 Ｎ
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取 ３个离 心 管 （ Ｄ Ｐ 经 Ｅ Ｃ水 处 理 ） 分别 编 号 为 １ 、
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Ｒｅ ｅ ｖ ｄ： ｙ １ ２ ０ ｃ ｉｅ Ｍａ ５， ０ ２；Ａｃ ｅ ｔ ｄ： ｕ ｙ １ ２ ０２ ｃ ｐ ｅ Ｊ ｌ ０， ０
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胞 中提 取 ＲＮ Ａ．
关键 词
Ｔ ＩＯ ， ＲＺ Ｌ 异硫 氰 酸胍 ， Ｎ 降解 Ｒ Ａ Ｑ３ ３
中 图分 类 号
Ａ ｐｉ ｎｄ Ｅｆ ｃｅ ｅ ｈｏ ｏ ｔ ｌＲＮＡ ｓ ｌ ｔｏ ｒ ｍ ｏ ｄ Ｒａ ｄ ａ ｆ ｉｎｔＭ ｔ ｄ ｆ ｒ Ｔｏ ａ ｉ Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｆ ｏ Ｂｌ ｏ
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完整 的 关键 ． 目前 提 取 Ｒ Ａ的 方法 较 多， 有 些 方法 尚不 能 完全 防 止 Ｒ Ａ 降解 ． Ｔ ＩＯ Ｎ 但 Ｎ 将 ＲＺ Ｌ方 法稍
加 改进 ， Ｔ ＩＯ 将 ＲＺ Ｌ与 异硫 氰 酸胍 联 用提 取 血液 淋 巴细胞 总 Ｒ Ａ． 脂糖 凝胶 电泳 结 果表 明 ， ２ Ｎ 琼 其 ８ｓ Ｒ Ａ与 １ Ｎ Ｎ ８ＳＲ Ａ的 比值 为 ２ １优 于 单独 使 用其 中任 何 一 种 试 剂者 ． 方 法 同样 适 用 于从 其 它 细 ：， 此
ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ｈ ｒｔ ｆ ２ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔｅ ａｉ ｏ ８ Ｓ ｏ １ Ｓ ＲＮＡ ｓ ： ｉｄ ｃ ｔ ｇ ＲＮＡ ｅ ｒ ｄ ｔ ｎ Ｗａ ｆｅ ｔｖ ｌ ｉｈ ｂ ｔｄ． ８ Ｗａ ２ １．ｎ ｉａｉ ｎ ｄ ｇ ａ ａ ｉ ｓ ｅｆｃｉｅｙ ｎ ｉ ｉｅ ｏ
酶 的组织 ， 利用 它 可 取 得 满 意 的效 果… ． 外 ， 们 另 我 也 发 现 Ｔ ＩＯ ＲＺ Ｌ与 异硫 氰 酸 胍联 用 提取 的 Ｒ Ａ产量 Ｎ
心管 ， 加等 体 积 的异 丙 醇 （ ℃预 冷 ）混 匀 ． ０ ４ 一２ ℃放
置 １ｈ ４ ， ２０ ０ ｒ ｉ ， ℃ １ ０ ／ ｎ离 心 ２ ｉ，沉 淀 即 总 ｍ ０ ｍｎ Ｒ Ａ． 入 ０５ ｍ ５ 乙 醇 洗 涤 ， ℃ ，１ ０ ／ ｉ Ｎ 加 ． ｌ ％ ７ ４ ２０ ０ ｒ ｎ ｍ 离 心 １ ｉ， 心 倒 掉 乙醇 ， 温 放 置 １ ｉ， 适 ０ｍ ｎ 小 室 ０ｍ ｎ 加
血 液 中含 有 大量 Ｒ Ａ酶 ， 引 起 Ｒ Ａ降 解 ． Ｎ 可 Ｎ 防 止 Ｒ Ａ酶对 Ｒ Ａ 的降 解 ， 保 证 所 得 Ｒ Ａ片 段 完 Ｎ Ｎ 是 Ｎ 整 的关键 ． 目前 提 取 Ｒ Ａ 的方 法 很 多 ， 采 用 酸 性 Ｎ 如 酚一 硫氰 酸 胍法 ， 取 肝癌 组 织 及 非 肝 癌组 织 的总 异 提 Ｒ Ａ Ｎ ， 可用 一 步法 提 取 总 Ｒ Ａ ． 多 方 法 在 也 Ｎ 许
０ １ｍ ｌ 一 、 ｏ ＬＪ巯基 乙 醇 ． ／ ３ 混合 溶 解后 ４Ｃ 存 ． ￣保
１ ２ 淋 巴细 胞 提 取 ．
Hale Waihona Puke 取新 鲜 全 血 ２Ⅱ ｄ加 １ｍ ％ 柠 檬 酸 钠 ， 匀 后 ｌ ３ 混
３０ ０ｒ ｉ 心 ，１ ｎ ４Ｃ， 血 球层 上 浅 黄色 层 ０ ｍ ｎ离 ／ ０ｍ ， ￣ 取 ｉ 即为 淋 巴细 胞 ．
加 入 １ｍ 异 硫 氰 酸胍 ， 匀 后再 加 入 １ｍ Ｒ Ｚ Ｌ ｌ 混 ｌ ＩＯ ， Ｔ 振 荡 混匀 ，冰 浴 中放置 ５ｍ ｎ ｉ． 各 管 提取 方 法 按 Ｔ ＩＯ Ｒ Ｚ Ｌ操 作 步 骤 进 行 ： 入 加
性 ． 核 细胞 ２ 真 ８ｓ和 １ Ｎ 比 值 约 为 ２： ， 明 ８ＳＲ Ａ １表 无 Ｒ Ａ降 解 ； 该 比值 为 １ １ 则 表 明有 部 分 Ｒ Ａ Ｎ 如 ：， Ｎ 降解 ． 号 管 和 ２号 管 的 ２ １ ８ｓ与 １ Ｎ ８ＳＲ Ａ比值 约 为 １１ ： ，表 明有 部分 降 解 ， ３号 管 比值 约 为 ２ １ 明 而 ：表
Ｔｈ Ｓ ｔ ｅ Ｕ ，ｈ ｍｅ ｈ ｄ Ｓ ｃ ａ ａ ｔｒｚ ｄ ｙ ｅｆｃｉｅ ｎ ｉ ｉｉｎ ｏ ｔｏ ｉ ｈ ｒｃｅ ｉｅ ｂ ｆｅ ｔｖ ｉｈ ｂ ｔ ｆ ＲＮＡ ｅ ｒｄ ｔｏ ｎ ｈ ｒ ｆｒ ｓｇ ｆｃ ｔｙ ｉ — ｏ ｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ａ ｄ ｔ ｅ ｅｏｅ ｉｎｉ ａ ｌ ｍ ｉ ｎ
・
技 术 与方 法 ・
从 血 液 中提 取 总 Ｒ ＮＡ 的 一 种 快 速 高 效 方 法
林 明 ， 张 页， 张 沙 ， 周柔丽
（ 京 大 学 医学 部 基 础 医 学 院 细 胞 生 物 学 与遗 传 学 系 ，北 京 １０８ ） 北 ００ ３
摘要
血 液 中含 有 大量 的 Ｒ Ａ酶 ， 引起 Ｒ Ａ 的降 解 ． Ｎ 可 Ｎ 防止 Ｒ Ａ酶 的 降解 ， 保 证所 得 Ｒ Ａ片段 Ｎ 是 Ｎ
ｐ ｏ ｅ ｈ ｕ ｌｔ ｆｔｔｌＲＮＡｓ ｉｏａｅ ｒｍ ｌｏ Ｔｈ ｔ ｏ Ｓａ Ｓ ｐ ｌ ａ ｌ ｏ ｓ ｌｔｏ ｆｔｔｌＲＮＡｓ ｒ ｖ ｄ ｔ ｅ ｑ ａｉ ｏ ｏ ａ ｖ ｓ ｌｔｄ ｆｏ ｂ ｏ ｄ． ｅ ｍｅｈ ｄ ｉ Ｏ ａ ｐ ｉ ｂ ｅ ｆｒｉｏａｉｎ ｏ ｏａ ｌ ｃ
第 ６期
林 明等 ： 血 液 中 提 取 总 Ｒ Ａ的 一 种 快 速 高 效 方 法 从 Ｎ
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２ ３ 每管 加 入淋 巴细胞 液 １０ ． 后 １号管 加 １ｍ 、， ５ 然 ｌ
通过 琼脂 糖 变 性 凝胶 电泳 ， 鉴 定 Ｒ Ａ的完 整 可 Ｎ
异硫 氰 酸 胍 ，振 荡 混 匀 ，冰 浴 中放 置 ５ｍ ｎ ２号 管 ｉ； 加 １ｍ Ｒ Ｚ Ｌ振 荡 混匀 ，冰 浴 中放置 ５ｍｎ ３号管 ｌ ＩＯ Ｔ ｉ；
Ｃ ｉ ｅ ｅ Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｉｃ ｅ ｓ ｙ ａ ｄ Ｍｏｅ ｕａ ｉｌ ｈ ｎ ｓ ｏ ｒ ａ ｆ Ｂ ｏ ｈ ｍｉ ｒ ｎ ｌｃ ｌ ｒＢ ｏ ｔ
２０ ０ ２年 １ ２月 １ （ ：８ ８ ６） ７ ６—７ ７ ８
Ｃ １－ ８ ０ Ｑ Ｎ ３７／ １