月季切花乙烯受体RhETR3互作蛋白RhTSPO1的筛选和鉴定

园艺学报2014，41（6）：1157–1166 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@ 月季切花乙烯受体RhETR3互作蛋白RhTSPO1
的筛选和鉴定
杨若韵1，陈雯1，薛璟祺2，田佶1，张帅1，朱春彦1，高俊平1，
马男1,*
（1中国农业大学观赏园艺与园林系，北京100193；2中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京100081）
摘要：利用已构建的月季分裂泛素酵母双杂文库，以月季乙烯受体蛋白RhETR3为诱饵，筛选能够与RhETR3结合的互作蛋白。

经酵母回转验证共得到26个阳性克隆。

在候选蛋白中发现一个TspO/MBR
蛋白家族的成员，命名为RhTSPO1。

通过RACE分离了RhTSPO1基因全长，共777 bp，开放阅读框（ORF）为579 bp，编码192个氨基酸。

在酵母中，利用酵母生长和β–半乳糖苷酶活性（β-gal）验证了RhETR3
和RhTSPO1之间确实存在互作。

将RhETR3-GFP和RhTSPO1-mCherry融合蛋白共转入烟草，激光共聚
焦显微镜观察发现RhTSPO1和RhETR3蛋白共同定位于内质网上。

月季花朵自然开放过程中，RhTSPO1
在花瓣中的表达呈现先增强后减弱的趋势，与开放和衰老过程紧密联系，表明RhTSPO1可能参与了花朵
开放过程。

本试验结果表明乙烯受体蛋白水平的互作调节可能也参与月季花朵开放和衰老的调节。

关键词：月季；花朵开放；乙烯受体；蛋白互作
中图分类号：S 685.12 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）06-1157-10 Screening and Identification of RhTSPO1，an Interacting Protein of
Ethylene Receptor RhETR3 in Cut Roses
YANG Ruo-yun1，CHEN Wen1，XUE Jing-qi2，TIAN Ji1，ZHANG Shuai1，ZHU Chun-yan1，GAO Jun-ping1，and MA Nan1,*
（1Department of Ornamental Horticulture and Landscape Architecture，China Agricultural University，Beijing 100193，China；2Institute of Vegetables and Flowers，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100081，China）
Abstract：It is known that RhETR3 plays an important role in ethylene-regulated flower opening of roses（Rosa hybrida）. Here，RhETR3 was used as a bait to screen its potential interacting proteins in rose petals by using split ubiquitin yeast two-hybrid system. Of 26 positive clones which were identified and confirmed by retransformation in yeast，a TSPO/MBR protein was isolated by RACE and was named as RhTSPO1. The full length of RhTSPO1 was 777 bp which contained a 579 bp open reading frame，encoding 192 amino acids residues. The interaction between RhETR3 and RhTSPO1 was confirmed by
β-galactosidase activity test in yeast. In addition，RhTSPO1 was fused with a mCherry fluorescent protein. The resultant RhTSPO1-mCherry fusion protein was used to conduct the fluorescence co-localization with
收稿日期：2014–01–15；修回日期：2014–05–07
基金项目：国家自然科学基金项目（30900991，31372095和31000920）
* 通信作者Author for correspondence（E-mail：ma_nan@）
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RhETR3-GFP. The results indicated that these two proteins both located in the endoplasmic reticulum. The expression of RhTSPO1 increased as flower opening in the petals of cut roses，while it started to decrease when flower reached full opening，implying that RhTSPO1 may be involved in the flower opening process.
Key words：cut rose；flower opening；ethylene receptor；protein interaction
月季（Rosa hybrida）切花的采后流通中，乙烯可导致出现僵蕾、僵花、开放畸形、开放过速以及花瓣脱落等问题，严重损害切花品质，是导致月季切花采后损耗的重要原因（高俊平等，1997；蔡蕾等，2002），因此乙烯作用机制成为月季采后生理研究的一大热点问题。

植物通过乙烯受体蛋白感受乙烯信号。

乙烯受体基因是一个小基因家族。

在拟南芥和番茄中各发现了5个和6个乙烯受体基因（Bleecker，1999；Klee & Tieman，2002）。

之前的研究表明，乙烯对月季花朵开放的影响是通过对乙烯受体基因的上调来实现的（Ma et al.，2006；Tan et al.，2006；Xue et al.，2008）。

在已发现的5个月季乙烯受体基因中，RhETR3属于亚家族Ⅱ型受体。

RhETR3
基因的表达随着月季花朵的开放逐渐升高。

乙烯处理导致RhETR3表达出现剧烈升高，乙烯抑制剂
则可完全抑制RhETR3的表达。

其余受体基因的表达量在花朵开放中均无明显变化，也不能对乙烯
和乙烯抑制剂发生响应（Ma et al.，2006）。

因此，从转录层面上看，RhETR3是月季花朵开放中响应乙烯，介导乙烯对花朵开放调节作用的重要受体基因。

乙烯受体蛋白与互作蛋白共同调节了乙烯信号输出。

乙烯受体一般形成同源二聚体定位于内质网行使功能。

又有研究发现，拟南芥的ETR1和ERS1在与其他受体基因结合时共同抑制乙烯的响应，表明乙烯受体蛋白之间存在异源结合（Liu & Wen，2012）。

近来研究发现，1个膜结合蛋白RTE1（REVESION-TO-ETHYLENE SENSITIVITY1）以一种依赖于ETR1的方式调节了拟南芥对乙烯的
响应。

RTE1是拟南芥乙烯响应的负调控因子。

亚细胞定位发现，拟南芥体内RTE1和ETR1共同定
位于内质网和高尔基体（Zhou et al.，2007；Dong et al.，2008）。

BIFC以及Co-IP试验证明了RTE1和ETR1存在直接的结合（Dong et al.，2010）。

多种形式的转录后调控模式在受体信号输出中发挥了关键作用，且这种调控具有物种和发育过程特异性。

而明确乙烯受体的互作蛋白是阐明受体作用机制的一个关键内容。

因此，对于月季，筛选RhETR3的互作蛋白，分离与ETR3结合影响乙烯信号输出的重要蛋白对于进一步明确RhETR3
在月季花瓣发育过程中的转录后调节机制及其与月季花瓣生长发育的内在关联具有重要意义。

本研究中发现了一个与RhETR3互作的膜蛋白RhTSPO1，并对其表达和亚细胞定位等特性进行了分析，所获结果对于理解乙烯受体在月季花瓣发育过程中介导乙烯的作用机制具有一定意义。

1 材料与方法
1.1 试验材料
试验于2011—2013年在中国农业大学完成。

供试材料为切花月季‗Samantha‘，采自北京市昌
平区花卉生产基地。

切花于开花级数0级（Ma et al.，2005）时采收，采后插于自来水中，2 h内运回实验室。

按照
花枝长25 cm，留3片复叶的标准修剪。

采收后的花材经复水处理后重新置于去离子水中，置于瓶
插室内观察。

瓶插室内环境保持温度23 ~ 25 ℃，相对湿度30% ~ 40%，光强40 µmol · m-2 · s-1，12 h 光照/12 h黑暗。

在花材开放过程中，分别于开花级数为0 ~ 6级时收集中层花瓣，经液氮速冻后存
于–80 ℃条件下，每个取样点至少取5朵花，作为5个生物学重复备用。

6期杨若韵等：月季切花乙烯受体RhETR3互作蛋白RhTSPO1的筛选和鉴定1159
1.2 互作蛋白的筛选
采用分裂泛素化酵母双杂交系统（DUALSYTEMS BIOTECH，Swiss）进行互作蛋白的筛选。

通过蛋白拓扑结构分析，发现RhETR3具有4个跨膜域，N端游离于细胞质中，C端位于内质网膜
内，选择pBT3-STE载体，并且采用了两个Sfi I限制性酶切位点。

构建载体时，首先，用Pfu和Taq
酶通过PCR扩增RhETR3基因的ORF区段，在扩增的同时将SfiⅠ位点附加在基因的5′和3′末端，
设计引物（表1，编号1、2）电泳后回收片段，采用SfiⅠ单酶切后回收片段，定向连入酶切后的载
体pBT3-STE两个SfiⅠ位点之间，转化大肠杆菌后挑选阳性克隆，测序。

测序获得正确序列之后转
化NYM51酵母株系筛选RhETR3互作蛋白。

月季花瓣cDNA文库的筛选：将构建成功的载体转入酵母NYM51菌株，经载体活性验证之后，
通过预筛库筛选3–氨基三唑（3-aminotriazole，3-AT）浓度，最后确定于每个培养基添加2.5 mmol · L-1 3-AT。

继而进行文库筛选，挑出4种氨基酸缺陷型培养基生长的单克隆，划线备份，进行β–半乳
糖苷酶活性检测。

将显色良好的单克隆提取质粒转化大肠杆菌，用载体pPR3N引物进行PCR检测，
挑取阳性克隆测序，通过NCBI和月季库比对呈阳性的蛋白。

1.3 烟草中的亚细胞定位
根据目的基因RhETR3序列设计引物对（表1，编号3、4）；根据GFP基因的序列设计引物对
（表1，编号5、6），分别扩增RhETR3和GFP开放阅读框（不包含终止子），产生的PCR产物回
收后通过overlapping PCR扩增，得到RhETR3-GFP融合基因。

根据目的基因RhTSPO1序列设计引
物对（表1，编号7、8）；根据mCherry基因的序列设计引物对（表1，编号9、10），扩增产物回
收纯化后连接到克隆载体pGM T-easy上，测序验证后获得重组质粒，分别用Spe/ⅠKpnⅠ进行双酶
切，回收目的片段后，与经用Spe/ⅠKpnⅠ双酶切的Super1300载体用T4连接酶进行连接，构建成
瞬时表达载体pSuper1300-RhETR3-GFP和pSuper1300-RhTSPO1-mCherry。

获得的连接产物转化到
E. coli DH5α，经酶切和测序鉴定正确后，筛选阳性克隆并提取质粒。

构建好的质粒及P19质粒转化
到农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）GV3101中。

取活化的农杆菌挑取单菌落接种到5 mL液体LB中，28 ℃震荡培养14 ~ 16 h，至OD600值在
1.5 ~
2.0之间。

将RhETR3-GFP、RhTSPO1-mCherry和P19农杆菌混合，使终浓度OD600值分别为
0.5、0.5和0.3。

按终体积10 mL计算每种组合中各个菌液的用量。

混合每组菌液，集菌，用侵染液
（10 mmol · L-1 MgCl2，10 mmol · L-1 MES 和100 mmol · L-1乙酰丁香酮，pH 5.6）悬浮。

室温下静
置2 ~ 3 h。

用1 mL不含针头的注射器注射侵染烟草下表皮，暗培养1 d后，正常条件下培养2 d。

取烟草叶片的下表皮，用Olympus FV10共聚焦系统检测荧光信号。

mCherry和GFP分别在543 nm
和488 nm的激光下激发，分别于560 ~ 615 nm 和505 ~ 530 nm下观察。

1.4 RT-PCR分析
提取不同花瓣样品总RNA，利用Powerscript reverse transcriptase（Clontech）反转录成cDNA，
再根据RhTSPO1全长序列，选取非保守区设计特异引物（表1，编号11、12），用于半定量RT-PCR
分析。

扩增条件：94 ℃预变性5 min，然后94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，28 个
循环，最后72 ℃延伸8 min。

同时选取Actin5作为RT-PCR内标（表1，编号13、14）。

扩增条件：
94 ℃预变性5 min，然后94 ℃变性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，30个循环，最后72 ℃延
伸8 min。

PCR产物经1.2%的琼脂糖凝胶进行分离后用GoldViewTM染料染色观察，同时条带用Alpha Ease FCTM 2200（Alpha Innotech，Version 3.2.1）软件量化。

每个时间点样本均设3次生物学重复。

1160 园艺学报41卷1.5 实时定量RT-PCR
按照Real Master Mix（SYBR Green）PCR试剂盒操作指导，采用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR，RT-qPCR）的方法，检测基因的相对表达量。

扩增RhTSPO1转录本的引物见表1（编号15、16），以RhUBI2（表1，编号17、18）作为内参基因。

对反转录所得的cDNA分别进行4倍梯度稀释，实施荧光定量反应。

反应程序为：94 ℃预变性2 min，94 ℃变性20 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40次循环，每次循环第3步进行荧光采集，最后95 ℃变性1 min，退火至55 ℃（每10 s上升0.15 ℃）后保温1 min，接着检测其荧光值，绘制熔点曲线。

标准品cDNA和待测样
品均设置3次重复。

表1 各种载体构建及TSPO1表达检测引物
Table 1 Primers of vector generation and the expression of TSPO1
编号No. 引物
Primer
引物序列
Primer sequence
1 RhETR3-bait-upper 5′-ATTAACAAGGCCATTACGGCCTTAAAGGCATTAGCATCTGG-3′
2 RhETR3-bait-lower 5′-AACTGATTGGCCGAGGCGGCCCCCACAATTTTGTTTGCCTG-3′
3 RhETR3-GFP-upper SpeⅠ5′-GTCACTAGTATGTTAAAGGCATTAGCATCTGGG-3′
4 RhETR3-GFP-lower KpnⅠ5′-GGTGGTACCTTACTTACTTGTACAGCTCGTC-3′
5 GFP-over-upper 5′-CAAACAAAATTGTGATGGTGAGCAAGGGC-3′
6 GFP-over-lower 5′-GCCCTTGCTCACCATCACAATTTTGTTTG-3′
7 RhTSPO1-mCherry-upper SpeⅠ5′-ATCACTAGTATGGATTCCCAAAACCTCAAGC-3′
8 RhTSPO1-mCherry-lower KpnⅠ5′-GGTGGTACCTTACTTACTTGTACAGCTCGTC-3′
9 mCherry-over-upper 5′-CTTGTGTATCTCATGGTGAGCAAGGG-3′
10 mCherry-over-lower 5′-CCCTTGCTCACCATGAGATACACAAG-3′
11 RhTSPO1-RT-uppe r 5′-CCATGAGACCACATACAATTCG-3′
12 RhTSPO1-RT-lower 5′-TGCTAGCTTCGACATTATGCACACGA-3′
13 Actin5-upper 5′-CCATGAGACCACATACAATTCG-3′
14 Actin5-lower 5′-TGCTAGCTTCGACATTATGCACACGA-3′
15 RhTSPO1-qRT-upper 5′-TCAAGCAGCGTAGGGTTGC-3′
16 RhTSPO1-qRT-lower 5′-TCTCATGTCGCGTTTGCTTG-3′
17 RhUBI2-qRT-upper 5′-CACAAGCACGCAAACCCTAT-3′
18 RhUBI2-RT-lower 5′-GGAGCATGAGCCAAATGGAG-3′
2 结果与分析
2.1 RhETR3互作蛋白的筛选
采用酵母分裂泛素化双杂交方法，对月季花瓣cDNA文库进行互作蛋白的筛选，经β–半乳糖
苷酶活性检测后选择阳性克隆测序共计200个。

将测序得到的序列在本实验室已建立的月季转录组
数据库中进行比对，获得了26种候选互作蛋白。

如表2所示，获得的互作蛋白包括泛素化蛋白、钙
调素相关蛋白以及蛋白伴侣等，表明ETR3可能受多种形式的转录后调节。

2.2 回转验证证明RhTSPO1与RhETR3的互作
通过将候选互作蛋白的质粒回转到含诱饵的酵母中，可以排除His+/Ade+/LacZ+表型的假阳性
互作子的存在。

对这筛选到的26种候选互作蛋白进行回转互作验证。

结果发现16种蛋白在SD-Trp- Leu-His-Ade筛选培养基上并不生长，表明这16个蛋白为假阳性，剩余12个为阳性。

其中，一个优
选的候选互作蛋白为膜定位的转运蛋白RhTSPO1（outer membrane Tryptophan-rich Sensory Protein）。

如图1所示，RhTSPO1在SD-Trp-Leu-His-Ade筛选培养基上能够生长，同时将生长出来的克隆划线，用滤纸显色法能够检测出β–半乳糖苷酶活性，说明RhTSPO1跟RhETR3在酵母体内是互作的。

6期杨若韵等：月季切花乙烯受体RhETR3互作蛋白RhTSPO1的筛选和鉴定1161
表2 筛选到的候选阳性克隆功能注释
Table 2 Annotation of 26 positive clones
EST ID 蛋白注释Annotation 相同克隆数Number of redundant clones
RU03597 DIR1（Defective in induced resistance 1）[Arabidopsis thaliana] 10
RU01769 Gip1-like protein（Gibberellin-induced protein 1）[Petunia × hybrida] 2
RU25825 calmodulin-binding transcription activator 5 3
RU12927 BIGYIN1（BIGYIN）3
RU02240 tetraspanin7（TET7）2
RU15274 TSPO/benzodiazepine receptor 5
RU23389 Cb5-B（cytochrome b5 isoform B）[Vernicia fordii] 2
RU01532 proton pump interactor 1（PPI1）2
RU42854 chaperone DnaJ-domain containing protein 2
RU15030 protein transport protein SEC61 gamma subunit，putative [Arabidopsis thaliana] 2
RU05536 squamosa promoter-binding-like protein 1（SPL1）2
RU17532 syntaxin-132（SYP132）2
RU04516 vesicle-associated membrane protein 722（SAR1）2
RU06473 AVA-P2；ATPase/ proton-transporting ATPase 2
RU22433 plasma membrane aquaporin（PIP2；1）2
RU05405 2-methyl-6-geranylgeranylbenzoquinone methyltranferase 2
RU02929 Bet1-like SNARE 1-2（ATBET12）1
RU06102 MATE efflux family protein 1
RU03618 disease resistance protein RPP8（RPP8）2
RU24498 glutathione S-transferase（AT1G65820）2
RU03618 HR-like lesion-inducing protein-like protein 2
RU23498 L-ascorbate peroxidase（TAPX）1
RU24904 magnesium transporter MRS2-3（MGT4）2
RU15878 ATOEP16-1（OUTER PLASTID ENVELOPE PROTEIN 16-1）1
RU13015 Plasma-membrane choline transporter family protein 1
NAC domain class transcription factor（NAC13）2
图1 酵母中回转验证RhETR3和RhTSPO1的互作
SD-Trp-Leu及SD-Trp-Leu-His-Ade酵母生长试验；滤纸显色试验检测β–半乳糖苷酶活性。

Fig. 1 The confirmination of interaction between RhETR3 and RhTSPO1 by retransform in yeast
Yeast gowth assay on SD-Trp-Leu and SD-Trp-Leu-His-Ade；β-galactosidasse activity of the interaction between
RhETR3 and some candidate interacors.
2.3 RhTSPO1氨基酸序列同源性分析
通过RACE从月季花瓣中克隆得到RhTSPO1的基因全长，共777 bp，该基因ORF为579 bp，
编码192 aa。

在NCBI中，利用BLAST-Conserved Domains程序，进行了RhTSPO1基因氨基酸序列分析。

结果（图2）表明，以月季‗Samantha‘花瓣总RNA为模板克隆所得到的TSPO属于TspO/MBR 家族成员之一，具有1个特征基序TspO_MBR，故命名为RhTSPO1。

如图3所示，与其他物种中的TSPO氨基酸序列的同源性比较发现，家族成员之间的保守性较高，其中与草莓中的FvTSPO最高，达到了85.94%；同时，和其他同源TSPO类似，RhTSPO1也
具有6个跨膜结构域（Transmembrane domains，TM）。

1162 园艺学报41卷
图2 RhTSPO1氨基酸保守序列分析
Fig. 2 Analysis of conserved-domain of RhTSPO1
图3 月季RhTSPO1 main ORF推导的氨基酸序列的多重比对分析
Fig. 3 Alignment of the predicted amino acid sequences of RhTSPO1 main ORF
6期杨若韵等：月季切花乙烯受体RhETR3互作蛋白RhTSPO1的筛选和鉴定1163
为了进一步了解分析RhTSPO1进化关系，选择了12个亲缘关系较为密切和具有代表性的其他物种的TSPO氨基酸序列，利用MEGA 5.0软件，对这些植物的TSPO结构域蛋白进行进化树分析。

如图4所示，RhTSPO1和FvTSPO亚组成员同源性最高。

图4 月季RhTSPO1氨基酸序列与不同来源TSPO氨基酸序列的系统进化树
Fig. 4 Phylogenetic tree of TSPO from various species including RhTSPO1
2.4 烟草叶片中共定位验证RhETR3与RhTSPO1的互作
为了进一步确认RhETR3与RhTSPO1在植物体内的互作，在烟草叶片中进行了RhETR3和RhTSPO1的共定位试验。

在显微镜视野下找到两种荧光蛋白共表达的烟草表皮细胞，如图5所示，RhETR3-GFP的绿色荧光和RhTSPO1-mCherry的红色荧光都分布在细胞的质膜及内质网上。

在两种激发光下两者的荧光能完全重合，说明RhETR3和RhTSPO1在烟草表皮细胞内具有相同的定位。

这个结论也进一步验证了RhETR3和RhTSPO1在植物体内是互作的。

图5 RhETR3和RhTSPO1在烟草叶片中的荧光共定位
Fig. 5 Fluorescence co-localization of RhETR3 and RhTSPO1 in tobacco leaves
2.5 RhTSPO1在切花月季不同器官和不同开放级数花瓣中的表达分析
分别采用半定量RT-PCR（图6）以及实时定量RT-PCR（图7）检测RhTSPO1在不同器官以及不同开放级数的花瓣中的表达，得到了一致的结果。

结果表明，RhTSPO1在雌蕊以及花托中表达量
很低，而在雄蕊、萼片、花瓣中均有较高表达；在未开放至初开的花芽期（0 ~ 1级）的花瓣中几乎
1164 园艺学报41卷
检测不到RhTSPO1的表达，初开到接近完全开放时（2 ~ 4级）表达量逐渐增强，完全开放到衰老
（5 ~ 6级）过程表达量迅速减弱。

图6 RhTSPO1在切花月季不同器官和不同开放级数花瓣中的RT-PCR表达结果
Fig. 6 RT-PCR analysis of RhTSPO1 in different tissues and in petals during flower opening
图7 RhTSPO1在切花月季不同器官和不同开放级数花瓣中的qRT-PCR表达结果
Fig. 7 qRT-PCR analysis of RhTSPO1 in different tissues and in petals during flower opening
3 讨论
乙烯受体是植物响应乙烯的关键因子，近年来发现，多种形式的转录后调控模式在受体信号输出中发挥了关键作用。

乙烯受体的功能及其调控具有较强的物种和发育过程特异性，因此，针对特定物种和发育过程，鉴定其中发挥主要作用的乙烯受体蛋白，并分析其调节机制具有不可替代性。

比如，在拟南芥的5个受体中，仅ETR1能够受银离子的影响，调节植株对乙烯的敏感性，而其余
4个受体均不具有这一功能（McDaniel et al.，2012）。

乙烯受体蛋白研究开展的时间不长，主要集中在模式植物拟南芥、烟草和番茄上。

而月季作为世界范围内最重要的花卉作物之一又被视为花朵发育研究中具有重要意义的模式植物（Debener & Linder，2009）。

本研究中以pBT3-STE-RhETR3为诱饵进行月季分裂泛素酵母双杂cDNA文库的筛选，得到26
个阳性候选互作蛋白。

包括泛素化蛋白、钙调素相关蛋白以及蛋白伴侣等。

挑选了候选蛋白RhTSPO1进行下一步验证，经酵母回转验证和烟草叶片共定位证明RhETR3及RhTSPO1确实存在互作。

TSPO是一个胁迫诱导的植物细胞早期分泌途径相关的膜蛋白，属于TspO/MBR 家族，它能够
结合卟啉（Vanhee et al.，2011）。

这个相对保守家族的成员可能与跨膜信号相关，同时被证明能够结合各种不同结构的内源复合物。

这种多样化的蛋白以前被称为外周型苯二氮卓受体，它具有一个最显著的特点，即是一个哺乳动物18 kD的易位体蛋白（Verma et al.，1987；Taketani et al.，1995；Lacapere et al.，2001；Papadopoulos et al.，2006）。

植物的TSPOs似乎并不是必需的，同时它们的
生物功能目前也并没有被阐明，尽管已有一些报道表明它们能够被非生物胁迫和ABA诱导（Frank et al.，2007；Kant et al.，2008；Guillaumot et al.，2009）。

Guillaumot等（2009）报道拟南芥中AtTSPO 是一个定位于ER以及高尔基体的膜蛋白，本试验结果与其基本一致，表明植物的TSPO相关蛋白
6期杨若韵等：月季切花乙烯受体RhETR3互作蛋白RhTSPO1的筛选和鉴定1165
定位在早期分泌途径的器官。

拟南芥的TSPO蛋白是一个潜在的多种胁迫的调节子（Brady et al.，2007；Kleine et al.，2007；Dinneny et al.，2008）。

AtTSPO转录本主要在种子、花粉、衰老叶片等
器官中被检测到（Zimmermann et al.，2004；Brady et al.，2007；Winter et al.，2007）。

在营养组织
中，AtTSPO可以被一些非生物胁迫诱导，包括渗透压、盐胁迫、ABA处理（Kreps et al.，2002；
Seki，2002；Catala et al.，2007；Dinneny et al.，2008）和镁的缺失、强光（Kleine et al.，2007；Hermans et al.，2010）等。

AtTSPO被bZIP类转录因子AREB1、AREB2、ABF3进行转录调控，这个过程涉
及ABA响应元件依赖的ABA信号（Yoshida et al.，2010）。

研究表明AtTSPO是一个能够与血红素
发生结合的膜蛋白（Vanhee et al.，2011），而血红素在真核细胞的生物学进程中扮演了一个至关重
要的角色，包括呼吸作用，蛋白质的靶向输送，转录以及翻译调节，离子通道调节和信号，小RNA
过程，以及蛋白的降解（Severance & Hamza，2009；Mochizuki et al.，2010）。

因此，推测RhETR3
与RhTSPO1的互作可能涉及ABA、乙烯以及盐信号的交叉作用，但三者之间如何协调进而影响月
季对乙烯信号以及可能的其他激素和环境信号应答目前尚不清楚。

RhTSPO1在花朵开放进程中的表
达表现出先增强再减弱的趋势，与花朵开放变化基本协调一致，表明RhTSPO1可能参与介导乙烯对
花朵开放调节作用，但具体参与方式还有待进一步研究。

References
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