临床细菌培养鉴定流程及报告

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基本设备
▪ 生物安全柜 ▪ 孵育温箱（有条件的要有二氧化碳培养
箱） ▪ 显微镜 ▪ 接种器具 ▪ 冰箱、冰柜 ▪ 高压灭菌设备 ▪ 火焰灯
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二、医学微生物学检验的基本技术
▪ 基本染色 ▪ 基本接种方法
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基本染色
主要用于形态学检查，因为形态学检查是鉴定 细菌的重要手段，有助于细菌的初步鉴别， 也是决定采用何种生化鉴定的重要提示。有 时通过形态学检查可得到初步诊断，如痰中 的抗酸杆菌和泌尿生殖器官分泌物中的淋病 柰瑟菌等，染色方法主要有革兰氏染色法， 抗酸染色法，鞭毛染色法，异染颗粒染色法， 墨汁荚膜染色法等。
萄球菌,其他葡萄球菌 微球菌，消化链球菌，消
化球菌 肠球菌 真杆菌，丙酸杆菌，乳酸
杆菌 放线菌，奴卡苗，结核分
枝杆菌 白喉棒状杆菌，类白喉棒
状杆菌 念珠菌
革兰氏阴性菌
韦荣球菌 脑膜炎奈瑟菌，其他Байду номын сангаас瑟
菌 卡他莫拉菌 肺炎克雷伯菌及其他克雷
伯菌 沙雷菌，变形杆菌 大肠埃希氏菌及其他肠杆
菌科细菌 百日咳鲍特菌，不动杆菌 铜绿假单胞菌及其他假单
⑶培养基的选择 一般革兰氏阳性菌选血琼脂， 革兰氏阴性球菌选血琼脂、巧克力琼脂，革兰 氏阴性杆菌再加一个中国兰或麦康凯培养基， 真菌需转种于真菌培养基。根据生长情况，挑 取纯菌落进行进一步鉴定。
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4.结果报告 ⑴阳性结果报告 初级报告：阳性血培养结果非常重要，应该立 即口头报告给医生，包括革兰氏染色特性和形 态，疑似何种菌等。同时记录报告日期、时间、 内容以及接受报告人的姓名。 中级报告：报告直接抗菌药物敏感试验结果和 细菌种属的初步鉴定结果。 最终报告：报告细菌种属名和标准抗菌药物敏 感试验结果。 ⑵阴性结果报告 普通血培养3天无菌生长可报告为“72小时培 养未见细菌生长”但培养瓶要继续培养至7天， 如果发现有菌生长，可发补充报告，某些特殊 致病菌培养时间需延长。
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（二）痰（即下呼吸道感染标本）
临床通常将正常人喉以上部位称为上呼吸道， 上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下 包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无 菌。下呼吸道感染包括急性气管～支气管炎、 慢性支气管炎急性发作，支气管扩张继发感染 及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。病原体有 细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次 氏体和原虫等。
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⑵采血时间及采血量 采血培养应该尽量在使用 抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血培 养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为 单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒战 或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液， 或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～ 1：10。
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⑶标本运送 采血后应立即送检，如不能立即 送检，需室温保存或置35～37℃孵箱中，切勿 冷藏。自动化连续检测系统虽有允许延迟上机 检测微生物生长的原理，还是应该尽量减少延 迟上机时间。
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3.分离培养
⑴血培养操作过程中应注意生物安全防护。
⑵血培养瓶处理 传统手工法血培养每天至少检 查一次，注意微生物生长可视信号，应无菌抽 取培养物，涂片革兰氏染色，选择合适的培养 基转种，同时做药敏试验。
革兰氏阳性菌 金黄色葡萄球菌 凝固酶阴性葡萄球菌 肺炎链球菌 A群B群链球菌 肠球菌
革兰氏阴性菌
大肠杆菌 肺炎克雷伯菌 阴沟肠杆菌 产气肠杆菌 伤寒沙门菌 绿脓杆菌 鲍曼不动杆菌
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2. 标本的采集与运送
⑴ 采血指征 一般患者出现以下体症时可作为 采血的重要指征：发热（≥38℃）或低温 （≤36℃ ）、寒战、白细胞增多（计数＞ 10000×109/L），特别有“核左移”未成熟 的或杆状核白细胞，皮肤黏膜出血，昏迷，多 器官衰竭，血压降低，CRP升高及呼吸快，特 殊患者（如血液病）出现粒细胞减少，（成熟 的多形核细胞＜1000×109/L ）血小板减少等， 或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症 应采集血培养。新生儿菌血症应该增加尿液和 脑脊液培养。最好在感染患者未进行系统性抗 菌药物治疗之前及时采集血培养。
▪ 细菌实验室 ▪ 无菌实验室 ▪ 基本设备
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细菌实验室
细菌实验室是细菌检验的场所，在此完 成标本接种、孵育、分离、细菌鉴定和 药物敏感试验。所以细菌实验室必须具 备空气及桌面消毒的条件，确保室内相 对无菌。如：足够强度的紫外线灯管， 耐酸碱的桌面等。
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无菌实验室
无菌实验室仅限于制备、分装无菌培养 基的操作，不进行有菌标本的分离及其 它操作。无菌室应达到绝对无菌的标准， 使用的前后均应严格消毒灭菌（一般均 为紫外线照射），仅限操作人员进入， 操作时应严格关门。
胞菌属细菌 嗜肺军团菌，气单胞菌 流感嗜血杆菌，付流感嗜
血杆菌 拟杆菌，梭杆菌
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2.标本采集及运送
对可疑烈性呼吸道传染病(如SARS，肺炭疽， 肺鼠疫等)的患者采集痰标本时必须注意生物安 全防护。
临床细菌培养鉴定常规报告流程
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思考题
❖ 1、血培养阳性结果如何分级报告？ ❖ 2、如何根据尿液菌落计数分析尿培养结果
是感染还是污染？
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▪ 医学微生物实验室基本条件及设备 ▪ 医学微生物学检验的基本技术 ▪ 临床各种标本的采集、分离培养及
报告方式 ▪ 临床常见细菌的分离鉴定
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一、医学微生物实验室基本条件及设备
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰，痰 呈脓性、粘稠或血性，是下呼吸道感染细菌检 查的主要标本。细菌学检验能明确感染病原， 并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性，有 助于疾病的治疗、流行病学调查研究和医院感 染的监测。
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1.呼吸道标本(痰)中常见的分离细菌
革兰氏阳性菌 草绿色链球菌，肺炎链球
菌，化脓性链球菌 表皮葡萄球菌 ,金黄色葡
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基本接种方法
曲线划线法（又称连续划线法）、分区 划线法、棋盘格划线法、倾注平板法、 斜面接种法、穿刺培养法、液体培养基 接种法等。
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三、临床各种标本的采集、分离培养及 报告方式
▪ 血（适用胸腹水） ▪痰 ▪尿 ▪便 ▪脓
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（一） 血
当微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系统清除这 些微生物的能力时形成菌血症或真菌血症。 1.血培养中常见的分离菌