复方红景天口服液的指纹图谱测定方式研究

复方红景天口服液的指纹图谱测定方式研究【摘要】目的研究复方红景天口服液的HPLC指纹图谱的测定方式。

方式采纳高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱：Diamosil C18 (200 mm× mm, 5 μm)，流动相：乙腈%磷酸水溶液(梯度洗脱)，柱温30℃，检测波长：223 nm，分析时刻55 min，流速1 ml·min-1。

结果标示出复方红景天口服液23个共有峰。

结论该法测定的HPLC指纹图谱为复方红景天口服液的质量操纵提供了更全面的信息。

【关键词】复方红景天口服液；高效液相色谱；指纹图谱；质量标准
Abstract：ObjectiveTo establish an RP-HPLC method for determination of the fingerprint of Compound Oral Liquid of Rhodiola. MethodsChromatographic conditions included a column of Diamosil C18 (200 mm× mm, 5 μm) and the mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile-water(gradient elution)，the detection wavelength at 223 nm,and the mobile phase flow rate was ml·min-1. Results23 peaks existed in the HPLC fingerprint of Compound Oral Liquid of method can provide more information for the quality control of Compound Oral Liquid of Rhodiola.
Key words：Compound Oral Liquid of Rhodiola； HPLC；
Fingerprint； Quality control
复方红景天口服液是沈阳药科大学研制的由红景天、刺五加、枸杞等补益中药经提取、精制而成的口服液制剂。

要紧用于高原反映所引发头晕，头痛，心悸，气喘，乏力，缺氧引发的红细胞增多症。

现代药理学研究说明，红景天具有增强机体免疫功能、抗疲劳、抗衰老及增强脑力、体力性能等作用［1～6］。

本品处方中要紧含有红景天、刺五加、枸杞3味药材，目前采纳的质量标准中除有TLC辨别外，只有一个HPLC的含量测定项目，用于测定制剂中红景天苷的含量。

最近几年来，国内众多研究工作者尝试采纳各类方式致力于中药质量操纵方式研究，并提出许多超级成心义的观点和观点。

为了全面而有效的操纵复方红景天口服液的内在质量，本研究应用RP-HPLC方式，成立了复方红景天口服液的HPLC指纹图谱分析方式，为其质量操纵提供了更全面的信息。

1 器材
仪器
HITACHI L-7100型输液泵，HITACHI L-7420型紫外检测器（UV-VIS DETECTOR）， AnaStar 色谱工作站；色谱柱Diamosil C18 (200 mm× mm, 5 μm)，（迪马公司) ； DL180型超声仪（35±5%
KHz，180 W，浙江省象山石浦海天电子仪器厂）。

试药红景天、枸杞子、刺五加购于辽宁省药材公司，经沈阳药科大学中药学院孙启时教授鉴定均为正品药材；复方红景天口服液各批号成品，由沈阳药科大学药用植物实验室提供；红景天苷对照品（中国药品生物制品检定所）。

甲醇（色谱纯，天津康科德科技）；乙腈（色谱纯，天津康科德科技）；纯净水（杭州娃哈哈集团）；其它试剂均为分析纯。

条件考察
流动相的选择实验进程当选择了3种流动相系统：①A乙腈，B水；②A甲醇-乙腈 (1∶1)， B %磷酸水溶液；③A乙腈， B %磷酸水溶液。

流动相以③A乙腈， B %磷酸水溶液系统成效最正确。

检测波长的选择依照红景天组成，实验进程中共选择了223，254，278 nm 3种波长进行检测。

在223 nm波长下显现的色谱峰数量比较理想，各色谱峰彼此之间分离度和稳固性较好。

样品溶液制备方式的选择①量取10 ml口服液，用正丁醇萃取3次10 ml/次，归并正丁醇层，回收正丁醇，残渣溶于适量甲醇并定容于10 ml量瓶中。

②量取10 ml口服液，用氯仿萃取3次，10 ml/次，弃去氯仿层，再用正丁醇萃取3次10 ml/次，归并正丁醇层，回收正丁醇，残渣溶于适量甲醇并定容于10 ml量瓶中。

③量取10 ml口服液，上D101大孔树脂柱（约100 ml），用400 ml蒸馏水洗脱，弃取。

再用400 ml 70%的乙醇洗脱，搜集洗脱液，回收乙醇，残渣溶于适量甲醇并定容于10 ml量瓶中。

结果以方式③制备供试品，能够使图谱基线较平稳，并能够使各峰取得较好的分离。

2 方式
色谱条件及色谱适用性实验色谱柱：Diamosil C18 (200 mm × mm, 5 μm)，流动相：乙腈%磷酸水溶液(梯度洗脱)；柱温30℃，检测波长223 nm，分析时刻55 min，流速1 ml·min-1。

进样量：供试品溶液与对照品溶液各10 μl；理论塔板数以红景天苷峰计很多于15 000。

对照品溶液的制备
周密称取红景天苷对照品5 mg，周密称定，置于25 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备量取10 ml口服液，上D101大孔树脂柱，用400 ml蒸馏水洗脱，弃取。

再用400 ml 70%的乙醇洗脱，搜集洗脱液，回收乙醇，残渣溶于适量甲醇并定容于10 ml量瓶中，用微孔滤膜（μm）过滤，取续滤液即得。

方式学考察
周密度实验取同一复方红景天口服液供试品溶液，持续进样5次，10 μl/次，检测指纹图谱，测定要紧共有峰的相对保留时刻和相对峰面积，结果要紧共有峰1～23号峰相对保留时刻的RSD为%～%，相对峰面积的RSD为%～%，结果说明，仪器周密度好。

稳固性实验
取同一复方红景天口服液供试品溶液，别离在0，2，4，8，16 h进样，10μl/次，检测指纹图谱，测定要紧共有峰的相对保留时刻和相对峰面积，结果要紧共有峰1～23号峰相对保留时刻的RSD 为%～%，相对峰面积的RSD为%～%，结果说明供试品溶液常温下0～16 h之间可维持稳固。

重复性实验
取同一批号的复方红景天口服液样品5份，别离按供试品溶液制备方式制备供试品溶液，并别离测定其色谱图，结果其相对保留时刻稳固，要紧共有峰1～23号峰相对保留时刻的RSD(%)为%～% ，相对峰面积的RSD为%～%，符合指纹图谱要求。

说明本方式重复性较好。

共有指纹峰的标定取10批复方红景天口服液样品，别离按供试品的制备方式处置，在上述色谱条件下，测定其色谱图。

其中3号峰保留时刻与红景天苷峰保留时刻一致，作为参照峰。

综合10批样品的色谱图，发觉其中有23个峰为10批样品所共有的，因此确信为共有指纹峰。

依照10批样品的平均值，以保留时刻与红景天苷峰一致的3号峰为参照峰，标定了23个共有指纹峰及其相对保留时刻如下：1～，2～，3，4～，5～，6～，7～，8～，9～，10～，11～，12～，13～，14～，15～，16～，17～，18～，19～，20～，21～，22～，23～。

各共有指纹峰相对保留时刻RSD在%～%之间。

见图1。

拆方分析在一样色谱条件下，别离测定红景天苷对照品，方中单味药红景天样品、单味药刺五加样品、单味药枸杞子样品，并和复方红景天口服液的指纹图谱色谱峰一一对照，可知共有峰中1，2，3，6，8号峰来源于处方中红景天；9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，21，22号峰来源于方中刺五加，20，23号峰为红景天与
刺五加共有；3号峰为红景天苷。

4，5号峰暂无归属，估量为辅料峰。

见图2。

相似度评判别离采纳夹角余弦法和相关系数法计算样品的相似度，10批口服液样品的相似度计算结果见表1。

表1 10批样品指纹图谱相的相似度（略）
3 讨论
本品为复方制剂，所含成份相当复杂，而且含糖量极高，故需将样品先进行纯化、浓缩等处置，方能进行HPLC测定。

本实验中供试品溶液的制备方式是依照该制剂要紧由红景天、枸杞子、刺五加为原料制成，要紧有效成份为酚苷类、甾体苷、香豆精苷、木质素苷成份而拟订的。

在实验中发觉，10批样品的HPLC指纹图谱中，各批号样品间共有指纹峰的相对保留时刻比较吻合，但部份批号个别峰相对峰面积波动较大，以为可能是生产所用原料各批次间存在不同所致。

实验研究结果说明，在药材产地，采收，加工方式等相对固定的前提条件下，利用HPLC色谱指纹图谱来操纵中成药复方红景天口服液的质量好坏是切实可行的，它比现行质量标准要更全面、客观，该法
为复方红景天口服液的质量操纵提供了更全面的信息。

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