PE多标酶标仪

– 白血病：
免疫细胞分型等
• 细胞学检查
– 细胞毒试验等多种检测项目，细胞质及组织化学分析等多种检测项目
– 酶类检测及细胞受体检测（包括MHC，HLA等多种检测）
• 科研工具
– 单标记检测，双标记检测，三标记检测，四标记检测
DELFIA技术为临床检测带来的先进性
技术
特点
检验先进性
时间分辨 特异性荧光与非特异性荧光 光谱分辨 分离
• 遗传科检查
– 产前筛查：
hAFP/ HCG ，PAPPA
– 新生儿筛查：
Neo-TSH，Neo-T4，Neo-IRT，Neo-17a-OH Prog，PKU
– 核酸探针及基因杂交检测，多标记定量PCR检测。
• 肝炎系列
– 甲肝，乙肝，丙肝
• 血液科检测
– 贫血检查：
Ferritin，Vit B12，Folic acid
Cortisol
• 妇产科检查
– FSH，LH，HCG，ProlactinE2，E3，Testo，Prog，SHBG
• 肿瘤科检查
– AFP，CEA，PSA，hTG，β-2 Micro，NSE，PAP，PSA（Free/Total），PSA EQM， CA-50，CA-125，CA-199，CA-153*，CA-724*，CY-211*
1.2 检测单元
• 光敏二极管: 检测范围230nm-950nm,用于吸光度的检测
• 光电倍增管（PTM）: 检测范围230nm-850nm，用于化学 发光，荧光和时间分辨荧光的检测。
• 超敏PTM(未配)：用于极敏感的化学发光检测和HTS Alpha Screen。
1.3 反射模块和滤光片
从软件 中可以 看到机 器上安 装的滤 光片和 反射模 块
• 单色器 --可以通过软件选择所需激发光或发射光的波长， 配上三个cut-off filter就能覆盖仪器所能检测的波 长。 ---用于吸光度和荧光强度检测。
• 极敏感化学发光检测装置（超敏PTM）：可做敏 感度非常高的化学发光检测
• 激光器:做Alpha Screen检测的必须条件 • 额外激光器: 增强的时间荧光分辨检测, 包LANCE
• (7)LANCE技术:通过使用供体和受体荧光团标记，TRFRET 检测将时间分辨 (TR) 和荧光共振能量转移 (FRET) 原理的优势结合到了一起。当两个荧光团标记相互趋近时， 能量将从供体转移到受体。因此，当相互极为靠近时（~ 9 nm 或更少），供体荧光的激发将导致受体荧光的发射。 受体荧光的发光级别与供体受体络合物形成的程度成比例。
2.2 荧光强度检测
(1)光源：通用光源-闪光灯
(2)光学配件：相应荧光标记的激发光和发射光滤光片或者单 色器（带有遮光滤光片）
(3) 二色镜：发射光的信号可比普通反射镜增强3倍 (可选)
设置方案
2.3 时间分辨荧光检测(TRF) (240-850 nm)
(1) 光源：通用光源-闪光灯 (2) 相应激发光和发射光的滤光片 (3) 反射模块:
• ( 2 ) 激发光谱带较宽，可以增加激发能，提高灵敏度。
• ( 3 ) 发射光谱带很窄，5 0 ％发射谱带约10nm，利用滤光 片，只允许峰值波长± 5 n m谱段通过供测量，在如此窄 的谱段内，非特异荧光很少,可有效降低本底荧光，且能 量损失也不大。
• ( 4 ) 镧系离子螯合物的荧光寿命很长，约 1 m s 。在时间 分辨荧光仪上测量时，脉冲光源激发后，可适当延迟一段 时间，待其他短半衰期( 1 ～ 1 0 n s ) 的非特异荧光完全 衰变后再测量，从而极大地降低了本底荧光，实现了时间 分辨，大大提高了检测灵敏度。
通用反射模块：均可使用 紫外反射模块（UV mirror module）: 能获得更好的检测限 双色反射模块：最优化的用于不同螯合物的检测
DELFIA-TRF的设置方案
LANCE-TRF的设置方案
2.4 荧光偏振检测
• 需要两次检测 • 光源：闪光灯 • 滤光片：激发光需要经过用于荧光偏振的滤光片
发射荧光与激发荧光分离
零背景、高特异性
解离-增 荧光性大大提高 强 稳定的荧光螯合物
原子标记 标记位点多，可达20个 对标记物结构及活性影响小 无衰变 受环境影响小
多标记 单，双，三，四标记
线性范围更宽 重复性更好
高稳定性，高精确度 试剂保质期至少一年 标准曲线保留时间长 同一批次只需两点定 标
同一试剂盒可同时测 多个项目
PE多标酶标仪
定量检测发光或吸光标记的应用于研究和药 物发现的完整平台。
主要内容
• 1. PE多标记分析仪光学系统 — —实现各种功能应用的基础
• 2. PE多标记分析仪的主要功能
• 3. 新的免疫分析方法
• 4. 待解决的问题
1. PE多标记分析仪光学系统
光学系统简图
光电倍增管 检测单元
反射模块 （顶部）
应用
• 蛋白质定量分析 • 酶活性的检测 • 基因分析 • 蛋白质相互作用研究
时间分辨荧光用于临床和科研检测的试剂种类
• 内分泌科检查
– 甲状腺系列：
TSH，Ultra TSH，T3，T4，FT3，FT4，TBG，TG
– 糖尿病系列：
Insulin， C-Peptie
– 生长激素类：
hGH
– 其他：
样品
光源 滤光片
光路选择器
反射模块 （底部）
光敏二极管 检测单元
核心部件：
1.1 光源 1.2 检测单元 1.3 反射模块和滤光片
1.1光源
通用光源：闪光灯，一个紫外的氙闪光管,光谱范围为 230nm-1100nm.
特殊光源:337nm的氮激光发射器，作为可选的第二光源 应用于均一时间分辨荧光检测中。（本机型没有）
• (5) 镧系离子由激发态跃迁到基态时发射荧光，在测量 时问内可反复激发镧系离子，相当于大大提高了标记比活 性。
• (6)此外，TRFA技术的分析动态范围宽，可达 4 ～ 5 个 数量级标记物制备简单，稳定性好，有效使用时间长，不 受半衰期影响；标记蛋白质时反应条件温和，蛋白质活性 受损少；测量快速，易于自动化。
免疫细胞分型等单标记检测双标记检测三标记检测四标记检测delfia技术为临床检测带来的先进性技术特点检验先进性时间分辨光谱分辨特异性荧光与非特异性荧光分离发射荧光与激发荧光分离零背景高特异性解离增荧光性大大提高稳定的荧光螯合物线性范围更宽重复性更好原子标记标记位点多可达20个对标记物结构及活性影响小无衰变受环境影响小高稳定性高精确度试剂保质期至少一年标准曲线保留时间长同一批次只需两点定多标记单双三四标记同一试剂盒可同时测多个项目4
• 根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析 物的浓度，达到定量分析的目的。
T R F A技术的特点：来自镧系元素螯合物的固有特点
• ( 1 ) 激发光与发射光之间的 stokes 位移大，易利用干涉 滤光片进行波长分辨，前者的散射光对后者的干扰可以基 本排除。
利用镧系元素光谱特点，将 发射荧光与激发荧光分辨开 来，实现零本底的又一保障
发射光：分别需要S和P偏振的滤光片 • 反射模块：荧光偏振专用
设置方案
2.5 化学发光
（1）不使用光源和激发光相应滤光片 （2）发射光滤光片：化学发光专用滤光片 （3）反射模块：化学发光反射模块
设置方案
2.6 总结：实现新功能所需的光学配件
检测类别 检测名称 激发光滤片 发射光滤片1 发射光滤片2 反射模块
4.目前待解决的问题
• 扩展所能进行的检测项目，深入对于新方法的研究应用 • 如需完善检测功能需要选配相应的滤光片和反射模块 • 具体实验方案的建立实施需要一定的实践经验，并根据所
需进行的检测对设置进行调整 • 报告格式中的内容不能完全自行设置，可能需要联系工程
师解决
FI
FITC measurement
Байду номын сангаас
FITC 485
FITC 535
/
FITC/general
DELFIA-TRF
Eropium
UV(TRF) 340
Europium 615
/
LANCE/ DELFIA
LANCE-TRF
homogeneous TRF
UV(TRF) 320
APC 665
Cy5 620
LANCE/ DELFIA Dual
FP
FP Fluorescein Dual
FITC FP 480
FITC FP P-pol 535
FITC FP S-pol 535
FITC FP Dual
注:红色为本机没有的
3.新的免疫分析方法介绍
Time-resolved fluorescence （时间分辨荧光）
• 定义：以镧系元素作为标记物所建立的免疫测定技术。
• 时间分辨荧光免疫原理图：
原理
• 用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物，代替荧光物质、 同位素、酶和化学发光物质，标记抗原、抗体、激素、核 酸探针等物质。
• 当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特 点 （特异性强、荧光光谱的Stokes位移、寿命长），用时 间分辨荧光分析仪，测定免疫反应最后产物的荧光强度。
和均相时间荧光分辨（HTRF） • 带有两个泵的加样器及腔室温度控制器
2. PE多标记分析仪的主要功能
主要功能
2.1 吸光度检测 2.2 化学发光检测 2.3 荧光强度检测 2.4 荧光偏振检测 2.5 时间分辨荧光检测 *以红色表示实现该功能需要购买的配件
2.1 吸光度检测:
(1)光源：通用光源-闪光灯 (2)光学配件：相应检测波长的滤光片或单色器
反射模块
作用：引导光到达检测标本，并收集来自检测标本的光线至 检测器。 分类： 1.通用反射模块：
特点：反射50%的光(所有波长)，通过50%的光。 2. 二色镜（可选）：
特点：反射低于一定波长的光，通过高于该波长的光。可 确保用合适的激发光波长对检测样品进行激发，和在正确的 波长下进行检测。
1.4 可以选配的硬件（暂不需要）