Snail启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用

Snail启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其应用
江冠民;李玲玲;张坤水;谢婉莹;张秋桂;杜军
【期刊名称】《中国现代医学杂志》
【年(卷),期】2013(23)31
【摘要】目的构建Snail启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic-Snail-luc并对其进行生物活性的鉴定及其初步的应用研究.方法通过PCR技术从人血液基因组中钓出我们需要的具有启动子活性的Snail片段,双酶切后与双酶切的pGL3-Basic 空载体连接成重组体pGL3-Basic-Snai1-luc,通过转化扩增,筛选出阳性克隆,并通过酶切,测序及生物学活性检测鉴定构建好的荧光素酶报告基因载体.结果成功地构建了pGL3-Basic-Snai1-luc荧光素酶报告基因载体,并在CNE2细胞内鉴定了其在TGF-β1的诱导下,能启动荧光素酶的表达.此外,笔者通过Western blotting检测表明TGF-β1能显著性的诱导Snail蛋白的表达,充分证明了我们构建的pGL3-Basic-Snail-luc是具有生物学功能的.结论具有生物活性的pGL3-Basic-Snai1-luc的构建成功为研究Snai1在EMT过程中的调控机制研究和以snail为靶标的抗肿瘤药物快速高通量的筛选提供了非常重要的研究工具.
【总页数】6页(P12-17)
【作者】江冠民;李玲玲;张坤水;谢婉莹;张秋桂;杜军
【作者单位】南华大学附属第一医院检验科,湖南衡阳421001;中山大学附属第五医院中心实验室,广东珠海519000;中山大学附属第二医院药剂科,广东广州510120;南华大学附属第一医院检验科,湖南衡阳421001;南华大学附属第一医院检验科,湖南衡阳421001;中山大学药学院微生物与生化药学,广东广州510006
【正文语种】中文
【中图分类】R73-3
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