C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析
C2株蓝氏贾第鞭毛虫cDNA文库的构建
㊃论 著㊃[收稿日期]2017-08-31;[修回日期]2017-09-27[基金项目]国家自然科学基金(31471954);河北省自然科学基金(H 2017209143)[作者简介]刘绍伟(1987-),男,安徽利辛人,华北理工大学基础医学院医学硕士研究生,从事病原生物学研究㊂C 2株蓝氏贾第鞭毛虫cD N A 文库的构建刘绍伟,王 洋,田喜凤(华北理工大学基础医学院病原生物学与免疫学系,河北唐山063210) [摘要] 目的构建C 2株蓝氏贾第鞭毛虫c D N A 文库㊂方法T r i z o l 对C 2株贾第虫滋养体R N A 进行提取,逆转录获得c D N A 单链,L D -P C R 扩增获得d s c D N A ,经纯化后,与p G A D T 7-R e c 共转化酵母株Y 187中㊂通过营养缺陷型平板S D /-L e u 培养获得转化子即包含蓝氏贾第鞭毛虫c D N A 文库,并对文库的库容及D N A 重组率进行鉴定㊂结果以R N A 为模板,经逆转录㊁L D -P C R ㊁纯化等,得到了较为理想的双链c D N A ㊂将d sc D N A 和pG A D T 7-R e c 转化到酵母菌株,经分离培养,最终得到转化成功的酵母转化子,建立了贾第虫的c D N A 文库,文库容量为2.715ˑ107/m L ,重组率76.7%,插入片段的大小主要集中在300~1000㊂结论成功的构建了较为理想的C 2株贾第虫cD N A 文库㊂[关键词] 贾第虫属;基因文库;双杂交系统技术 d o i :10.3969/j.i s s n .1007-3205.2018.01.002 [中图分类号] R 382.2 [文献标志码] A [文章编号] 1007-3205(2018)01-0007-04C o n s t r u c t i o no fC 2s t r a i no f g i a r d i a l a m b l i a cD N Al i b r a r yL I US h a o -w e i ,WA N G Y a n g ,T I A N X i -f e n g(D e p a r t m e n t o f P a t h o g e n i cB i o l o g y a n dI mm u n o l o g y ,C o l l e g e o f B a s i cM e d i c i n e ,N o r t hC h i n a U n i v e r s i t y o f S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y ,H e b e iP r o v i n c e ,T a n gs h a n 063210,C h i n a )[A b s t r a c t ] O b je c t i v e T oc o n s t r u c tac D N A L i b r a r y of G i a r d i al a m b l i a (C 2)s t r a i n s .M e t h o d s B y e x t r a c t i o no fC 2s t r a i n so f G i a r d i al a m b l i at r o p h o z o i t e s R N A u s i ng th e T r i z o l m e t h o d ,a n db y u s i n g R N Aa s a t e m p l a t eb y r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e c D N As i n gl e s t r a n d .d s c D N A w a s o b t a i n e d b y L D -P C Ra m pl i f i c a t i o n .d s c D N A w a s p u r i f i e d a n d c o -t r a n s f o r m e dw i t h p G A D T 7-R e ci n y e a s ts t r a i n Y 187.T h r o u g h a u x o t r o p h i c m e d i u m S D /-L e u s c r e e n i n g,t r a n s f o r m a n t s i n c l u d i n g G i a r d i al a m b l i ac D N A l i b r a r y w e r eo b t a i n e d .T h e nt h es t o r a g ec a p a c i t y an d D N A r e c o m b i n a t i o n r a t eo f t h el i b r a r y w e r e i d e n t i f i e d .R e s u l t s U s i n g R N A a st e m p l a t e ,t h ei d e a l d o u b l e s t r a n d e dc D N A w a so b t a i n e db y r e v e r s et r a n s c r i p t i o n ,L D -P C R ,pu r i f i c a t i o na n do t h e r s t e ps .T h e d s c D N Aa n d p G A D T 7-R e cw e r e t r a n s f o r m e d i n t o y e a s t s t r a i n ,a n d t h e t r a n s f o r m a n t s w e r e s u c c e s s f u l l y i s o l a t e d a n d c u l t u r e d .F i n a l l y ,a c D N AL i b r a r y ofG i a r d i aw a s c o n s t r u c t e d .T h e l i b r a r y c a p a c i t y w a s2.715ˑ107/m L ,t h er e c o m b i n a t i o nr a t e w a s76.7%,a n dt h es i z eo ft h e i n s e r t e d f r a g m e n t sw a sm a i n l y b e t w e e n300b p a n d1000b p .C o n c l u s i o n A n i d e a lC 2L i b r a r y of G i a r d i a l a m b l i a c D N A w a s c o n s t r u c t e d .[K e y wo r d s ] G i a r d i a ;g e n e l i b r a r y ;t w o -h y b r i d s y s t e mt e c h n i q u e s 蓝氏贾第鞭毛虫(G i a r d i a l a m b l i a 或称G i a r d i ai n t e s t i n a l i s 或G i a r d i ad u o d i n a l i s,简称贾第虫)是一种原始的单细胞真核生物,广泛分布于世界各地,常引起贾第虫病,又被称作旅游者腹泻[1-2]㊂贾第虫病传染性强,发病率高,常呈暴发性流行,尤其在医疗卫生条件较差的第三世界国家㊂鞭毛㊁腹吸盘等与贾第虫感染过程密切相关,主要由细胞骨架构成㊂其中贾第素是贾第虫特有的骨架蛋白[3]㊂分成α㊁β㊁γ㊁δ四大类[4-5],其中α贾第素是最大的一族,共有21个成员㊂目前,大部分贾第素的定位已经清㊃7㊃第39卷第1期2018年1月河北医科大学学报J O U R N A L O F H E B E I M E D I C A L U N I V E R S I T YV o l .39 N o .1J a n . 2018楚,但每种α贾第素的具体功能尚未明晰[6]㊂酵母双杂交技术是研究蛋白质的重要方法㊂利用酵母双杂交技术,研究人员对已知蛋白的功能进行探讨,并对其功能区域进行细致分析,以便为进一步揭示蛋白质的未知功能㊁完善对蛋白质的认识提供支持㊂本研究应用酵母双杂交技术,构建C2株贾第虫c D N A文库,旨在为探索蓝氏贾第鞭毛虫的致病机制奠定基础㊂现报告如下㊂1材料与方法1.1材料和试剂实验虫株:C2株贾第虫虫株㊂T r i z o l试剂盒购于I n v i t r o g e n公司;二硫苏糖醇(d i t h i o t h r e i t o l,D T T)㊁焦碳酸二乙酯(d i e t h y p y r o c a r b o n a t e,D E P C)购自S i g m a-A l d r i c h公司;1 k bP l u s D N A L a d d e r购自L i f e公司;M a t e& P l a t e T M文库构建试剂盒购自C l o n t e c h公司;其他试剂还有G E L V I E W核酸染料㊁氯仿㊁异丙醇㊁无水乙醇等㊂改良T Y I-S-33培养基㊁D E P C水㊁R N a s e-f r e e75%乙醇㊁50ˑT A E电泳缓冲液㊁1.1ˑT E/L i A c0.9%N a C l㊁P E G/L iA c㊂P C R扩增仪T100㊁稳压稳流电泳仪D Y Y-6C㊁低温高速离心机(型号: 3K30)㊁超微量核酸蛋白测定仪S c a n d r o p2000㊁凝胶成像系统92-1292㊁低温高速离心机(型号:H e r a e u s X1R)㊁超净工作台Z H J H-C1112B㊁倒置显微镜C K X31㊁C O2孵箱2406㊁低温循环水浴㊁恒温水浴箱HH-W㊁高压蒸汽灭菌锅S Q510C㊁气浴振荡摇床Z HWY-100D㊂1.2实验方法1.2.1 C2株贾第虫的双链c D N A的合成 C2贾第虫放入含有改良T Y I-S-33培养基硼酸硅培养管中,置于37ħ培养48~72h㊂选择长势较好的培养管,4ħ冰浴15m i n㊂取出后培养管充分混合,计数虫体数㊂并将虫液调制6ˑ106~10ˑ106个滋养体/m L㊂离心收集贾第虫虫体团块,用T r i z o l法提取T o t a l R N A,并进行纯化㊂最后将收集到的R N A 溶于120μLD E P C水中㊂通过建立逆转录反应体系,以R N A为模板,合成贾第虫c D N A单链㊂建立D N A的扩增反应体系,以c D N A单链为模板,继续进行L D-P C R扩增,来合成贾第虫双链c D N A㊂用1.2%琼脂糖对P C R产物进行分析㊂经纯化后,将d s c D N A保存于-20ħ待用㊂1.2.2酵母感受态制备酵母菌株Y187接种培养基,30ħ培养直至长出克隆(约3d)㊂选取2~3 mm,小于4周的克隆,至3m L Y P D A培养基㊂30ħ250r/m i n振荡培养8~12h㊂取5L培养菌液至装有50m L Y P D A的250m L烧瓶中㊂振荡培养直至O D600为0.15~0.3(16~20h)㊂将菌液700g室温离心5m i n㊂弃上清,用100m L新鲜Y P D A重悬菌体㊂30ħ孵育直至O D值为0.4~0.5 (3~5h)㊂再次离心,弃上清,30m L去离子水重悬菌体㊂700g室温离心5m i n㊂弃上清,用1.5m L 1.1x T E/L i A c重悬菌体㊂高速瞬离15s,弃上清,用600μL1.1x T E/L i A c重悬菌体㊂此时菌体即可作为感受态㊂1.2.3酵母感受态的转化向Y187感受态酵母细胞中共转化:20μL蓝氏贾地鞭毛虫d sc D N A(2μg)和6μL p G A D T7-R e c(0.5μg/L)㊂再加入感受态细胞,2.5m LP E G/L i A c㊂30ħ孵育30m i n㊂加入D M S O160μL,轻轻混匀㊂42ħ水浴15m i n㊂700g离心5m i n㊂弃上清,加入Y P D P l u s M e d i u m㊂30ħ振荡孵育90m i n㊂700g离心5 m i n,弃上清㊂15m L0.9%(w/v)N a C l重悬㊂将50μL1/10㊁1/100稀释液分别铺板于S D/-L e u100 mm固体培养基上,30ħ,孵育3~4d;确定文库的库容㊂独立克隆数=N o.o f c f u/m Lo nS D/-L e ux 重悬液体积(15m L),将剩下的悬浮液涂布在S D/-L e u培养基上(每板150μL)㊂约使用100板㊂30ħ孵育3~4d㊂收获转化子,计算酵母细胞的密度㊂酵母细胞密度大于2ˑ107/m L则可进行分装保存㊂若细胞密度小于2ˑ107/m L,需要重新离心,去除多余的悬浮液㊂将文库分装,-80ħ贮存㊂1.2.4重组率鉴定挑取30个单克隆,溶解在100μLd d H2O中㊂交替放入沸水和液氮中(重复3~4次)㊂5500r/m i n,离心5m i n,收集上清液㊂将单克隆冻融伤情3μL㊁文库通用引物5'-p r i m e r0.3μL㊁文库通用引物3'-p r i m e r0.3μL㊁2ˑP C R M i x 10μL㊁d dH2O6.4μL加入离心管㊂扩增体系分别经:95ħ5m i n,95ħ50s,55ħ30s,72ħ2 m i n,25个循环;72ħ,10m i n㊂收集扩增产物,电泳分离提纯㊂2结果2.1 T o t a lR N A浓度及纯度鉴定提取的贾第虫R N A经紫外分光检测O D260/O D280为2.05,浓度为1.203μg/μL㊂经电泳分离出3条特异性条带(图1),分别为5S㊁18S和28S核糖体R N A㊂条带亮度显示28S约为18S的2倍㊂总R N A的浓度和纯度符合实验要求㊂2.2双链c D N A产物的鉴定双链c D N A经L D-P C R扩增,电泳分离鉴定㊂电泳结果(图2)显示,其㊃8㊃河北医科大学学报第39卷第1期长度主要分布在300~5000b p,很好地排除了小片段的双链c D N A,纯化效果较为理想㊂图1提取蓝氏贾第鞭毛虫总R N A电泳结果M a r k e r:1k bP l u sD N AL a d d e r;1:总R N AF i g u r e1T h e e l e c t r o p h o r e s i s r e s u l t so f e x t r a c t i n g t o t a lR N A f r o mG i a r d i a l a m b l i a图2蓝氏贾第鞭毛虫双链c D N A纯化后电泳结果M a r k e r:1k bP l u sD N AL a d d e r;1:纯化后的c D N AF i g u r e2G i a r d i a l a m b l i ad o u b l e s t r a n d e dc D N A p u r i f i e db ye l e c t r o p h o r e s i s r e s u l t s2.3酵母文库库容量鉴定通过对S D/-L e u板菌落计数(图3),计算库容量(稀释度1ʒ1000)=181/ 100μLˑ1000ˑ1000μL=1.81ˑ106/m L;总克隆数C F U=1.81ˑ106/m Lˑ15m L=2.715ˑ107/ m L ㊂图3转化菌1ʒ1000倍稀释后平板克隆生长情况F i g u r e3T h e g r o w t ho f t h et r a n s f o r m e d y e a s to nt h e p l a t ea f t e r1ʒ1000t i m e s d i l u t e d2.4重组率鉴定随机选取30个酵母细胞克隆,冻融裂解后,提取重组质粒D N A,用1%琼脂糖凝胶电泳对重组质粒c D N A经P C R扩增产物进行分离,结果显示,共分离出23条亮带(图4)㊂表示存在23种不同的插入片段的克隆㊂插入率为23/30=76.7%㊂而插入片段的大小主要集中在300~1000b p ㊂图4P C R鉴定酵母克隆片段插入情况F i g u r e4I d e n t i f i c a t i o no f y e a s t c l o n e d f r a g m e n t s b y P C R3讨论对于生物体的研究已经进入分子层面,但相对于浩瀚的蛋白质组学和基因组学的内容来说,对每个蛋白质㊁每段肽链的认识仍然只是很少的一部分㊂每个蛋白分子可能存在几个或十几个甚至上百个活性位点,这些活性中心是蛋白质发挥效应的真正场所,对于未知功能的活性中心㊁蛋白质的结构以及生物学作用方面,仍然有待更深入的研究㊂应用酵母双杂交技术,研究人员对已知蛋白功能区域进行细致分析,进一步发现新的结构域,进而揭示蛋白质未知的功能[7-9],从而完善对于蛋白质的认识㊂酵母双杂交技术在研究中具有很多的优势[10]:如其采用真核细胞作为宿主,最大限度地还原了生理状态下蛋白质之间的相互作用;通过生理代谢过程进行反应,很多难以检测的微弱相互作用可以利用生物学放大显现出来,该方法的灵敏度高;另外,研究在活细胞中进行,也省去了人为创造反应条件而需要的繁琐工作㊂正是有了这些优势,该方法在蛋白质的研究[11-14]㊁基因的研究[15-16]㊁蛋白连锁图的建立[17-18]㊁药物及其作用位点[19]㊁抗原抗体反应[20]㊁病毒[21]㊁寄生虫[22]等的研究中被广泛应用㊂总R N A的提取是研究的第一步,不仅要保证提取过程中R N A的完整性,而且要保证其浓度和纯度达到实验的要求㊂T r i z o l法提取总R N A是目前应用较为广泛的R N A提取方法㊂一方面它能够较好地保证R N A的结构不遭到破坏,使R N A结构保持完整;另一方面,提取的R N A纯度较高㊂而且,其操作方便㊁快捷,对于样本量要求较低,很少量的组织细胞便可达到很好的分离结果㊂因此,为细菌㊁寄生虫等微生物R N A的研究提供了较好的便利㊂㊃9㊃河北医科大学学报第39卷第1期本研究通过将贾第虫虫体细胞进行破环,进一步用T r i z o l法对其R N A进行提取,经紫外分光检测最终获得了O D260/O D280为2.05㊁浓度为1.203μg/μL的R N A㊂为进一步对R N A纯度进行验证,用1%琼脂糖凝胶电泳对提取物进行电泳分离,结果分离出3条特异性条带,分别为5S㊁18S和28S 核糖体R N A,条带亮度显示28S约为18S的2倍㊂综合验证结果显示,贾第虫总R N A的浓度和纯度均已达到较理想的结果,符合下一步实验的要求㊂以R N A为模板经逆转录㊁L D-P C R扩增,得到双链c D N A㊂此时得到的c D N A纯度,还不能达到实验的要求,需进一步经过纯化柱的纯化㊁乙醇和醋酸的沉淀,方可得到相对较纯的c D N A㊂电泳结果显示,双链c D N A的长度分布宽度主要为300~5000b p,很好地排除了小片段的双链c D N A,纯化效果较为理想㊂将d sc D N A与p G A D T7-R e c共转化酵母株Y187中㊂通过营养缺陷型平板S D/-L e u培养获得转化子即包含蓝氏贾第鞭毛虫c D N A文库㊂建立的基因文库是否能够满足实验的要求,需要验证2个方面的内容,一是文库的库容量,二是c D N A的完整性㊂通过对S D/-L e u板菌落计数,计算文库容量为2.715ˑ107/m L㊂随机选取30个酵母细胞克隆,冻融裂解提取重组质粒D N A进行P C R扩增后,经电泳分离鉴定,得到23种不同插入片段的克隆,插入率为23/30=76.7%,而插入片段的大小主要集中在300~1000b p,建立的贾第虫c D N A文库满足建立文库的条件㊂本研究应用T r i z o l试剂盒对R N A进行了提取,经逆转录获得了c D N A单链,以c D N A单链为模板,通过L D-P C R扩增,得到了较为理想的双链c D N A㊂将双链c D N A和p G A D T7-R e c转化到感受态的酵母菌株,经过培养分离最终得到了满足实验需要的酵母转化子,建立了贾第虫的c D N A文库,为之后的实验内容奠定了基础㊂[参考文献][1] T a nL,Y u X,A b d u l l a h iA Y,e ta l.D e v e l o p m e n to far a p i dH R M g e n o t y p i n g m e t h o d f o r d e t e c t i o no f d o g-d e r i v e dG i a r d i al a m b l i a[J].P a r a s i t o lR e s,2015,114(11):4081-4086. 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蓝氏贾第鞭毛虫的表面抗原
蓝氏贾第鞭毛虫的表面抗原*导读：近年来的研究表明,贾第虫表面抗原的变异与致病作用有关,甚至于变异快的虫株可不受宿主免疫应答的影响,从而更有利于虫体在宿主小肠内寄生。
不同虫株及相同虫株表达不同表面抗原的克隆之间的致病力也各不相同。
……蓝氏贾第鞭毛虫( Giardia lamblia) 为一种人体致病性原虫, 可引起腹泻、营养吸收不良综合症及儿童生长障碍等, 即蓝氏贾第鞭毛虫病( giardiasis, 简称贾第虫病) , 该病呈全球性分布而且是发达国家中最常见的人体肠道寄生虫病。
在亚洲、非洲、拉丁美洲大约有20 亿有症状的贾第虫病人, 且每年约有50 万新感染病例。
在艾滋病患者中感染率也极高, 约有20%～50%的艾滋病人可合并贾第虫病的感染。
目前, 贾第虫病被认为是一种再现的传染性疾病,已被WHO 列为全世界危害人类健康的10 种主要寄生虫病之一。
特别是贾第虫在艾滋病患者中造成的致死性腹泻已引起艾滋病工作者的高度重视。
近年来的研究表明,贾第虫表面抗原的变异与致病作用有关, 甚至于变异快的虫株可不受宿主免疫应答的影响, 从而更有利于虫体在宿主小肠内寄生。
不同虫株及相同虫株表达不同表面抗原的克隆之间的致病力也各不相同。
现就贾第虫的表面变异抗原及变异抗原基因研究现状作一综述。
表面抗原贾第虫抗原根据生活史阶段的不同主要分为包囊抗原和滋养体抗原。
其中包囊抗原首先形成于成囊特异性空泡上, 然后逐渐释放到新形成的包囊壁上。
而对于滋养体抗原, 研究发现其成分复杂且易产生变异, 故在诱导宿主的保护性免疫反应、激活免疫细胞、抑制乃至杀死虫体的免疫效应中具有很重要的作用。
贾第虫滋养体和包囊外层都具有特殊的抵抗各种不良环境的包被, 其主要成分是含多种抗原的表面蛋白。
研究证明, 表面变异抗原( variant-surface-protein, VSP) 是贾第虫致病的主要蛋白, 囊壁蛋白( cyst wall protein, CWP) 是形成感染性包囊的重要成分。
蓝氏贾第鞭毛虫类高尔基体的研究_朱艳红
文章编号:1002-2694(2007)07-0672-03蓝氏贾第鞭毛虫类高尔基体的研究朱艳红1,雷清华1,彭 挺1,牛安欧2,卢思奇3摘 要:目的 探讨类高尔基体结构在蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和成囊不同时段的存在情况及其动态变化机理。
方法 用可特异性标记真核细胞高尔基体的荧光染料C6-NBD神经酰胺,标记有活性的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体及成囊6、12、18h虫体,并用荧光显微镜观察。
同时利用半定量RT-PCR方法检测高尔基体膜结合蛋白go lg in245和膜泡融合的调节蛋白R ab1在蓝氏贾第鞭毛虫对数生长期滋养体及成囊6、12、24h的虫体中的表达水平。
结果 极少数蓝氏贾第鞭毛虫滋养体被C6-NBD神经酰胺标记;多数处于成囊6、12、18h时段的虫体均可见被特异标记成亮绿色的核周围区域。
g o lg in245和Rab1在滋养体及成囊诱导6、12、24h的虫体中的表达水平无显著变化。
结论 蓝氏贾第鞭毛虫在成囊过程中出现类高尔基体结构,而在对数期滋养体中却没有。
在蓝氏贾第鞭毛虫成囊过程中,高尔基体结构成分无大量合成,出现的类高尔基体结构可能是各组分临时组装的结果。
关键词:蓝氏贾第鞭毛虫;类高尔基体;C6-NBD神经酰胺;半定量RT-PCR中图分类号:R382.2 文献标识码:AObservations on the Golgi's body-like structure in Giardia lambliaZH U Yan-hong,LEI Qing-hua,PENG Ting,NIU An-ou,LU S-i qi(D ep ar tment of B iology,T ongj i M edical College,H uaz hong Univers ity o f Scienceand T echnology,Wuhan430030,China)ABSTRAC T:T o explore the ex istence and dynamic chang es o f the Golgi bo dy-like str ucture in the lo g-phase and encysting tro phozoites(6,12,18hours)of Giar dia lamblia,these tr ophozoites w ere stained w ith C6-N BD cer amide,a specific mar ker for G olgi bo dy in eukary otic cells,and then they w ere observ ed w ith fluo rescence micro sco py.T he tr anscript expressions of a membr ane-combined pr otein go lg in-245and vesticular t raffic pr otein Rab-1of Go lg i body wer e analyzed in log-phase and encys-t ing tr opho zo ites(6,12,24ho ur s)w ith RT-PCR assay.I t w as found that o nly few log-phase tr opho zo ites were labeled by means of C6-N BD-cer amide,ho wev er,mo st o f t he ency sting tr opho zo ites wer e labeled in perinuclear r eg io n.No change on the transcr ipt ex pr essio n levels o f go lg in245and Rab-1pro tein w as detected dur ing g ro wth and ency station o f Go lg i bo dy.F ro m the abov e o bserv atio ns,it is ev ident that Go lg i body-like str uctr ue present in encycting tr ophozo ites are absent in the log-phase tro phozoites,and the components o f the G olgi body like st ruct ur e are not sy nt hesized in t he process of encysting,indicating that they may be a tempo rar ily assembling event in a specif ic st ag e of encystatio n.KEY WORDS:Giard ia l amblia;Golg-i like str ucture;C6-N BD ceramide;sem-i quantitativ e R T-PCR蓝氏贾第鞭毛虫(Giar dia lamblia)是一种单细胞肠道寄生原虫,进化地位较特殊,属于真核生物的最早分支,具有原核生物的某些特征。
蓝氏贾第鞭毛虫诊断
蓝氏贾第鞭毛虫诊断高正琴;贺争鸣;岳秉飞【摘要】Objective Giardia lamblia is an important pathogen of zoonosis giardiasis , it poses a potential threat to the quality of SPF (specific pathogen-free) laboratory animals cannot be ignored.The aim of this study is to establish the method of rapid diagnosis of Giardia lamblia, and analyze the test results of 516 batches form 17 manufactures.Methods Direct microscopy, Giemsa-fast staining and multiplex polymerase chain reaction (multiplex PCR) were applied to detect Giardia lamblia.Results Numerous of Giardia lamblia trophozoites and cysts were detected in SPF laboratory animals by using direct microscopy and Giemsa-fast staining, and multiplex PCR were performed to identify 18S rDNA,β-giardin, TPI and GDH genes of DNA extracted from these trophozoites and cysts identified Giardia lamblia.Direct microscopy, Giemsa-fast staining, and multiplex PCR methods can be used to detect Giardia lamblia.Of the 2562 SPF laboratory animals studied, 22.9%(586/2562) were positive for Giardialamblia.Conclusions Direct microscopy , Giemsa-fast staining , and multiplex PCR were effective techniques with high sensitivity and specificity for rapid diagnosis of Giardia lambliain.It is not satisfactory that the results of Giardia lamblia examination in 516 batches form 17 manufactures failed to meet the requirements 100%.%目的：蓝氏贾第鞭毛虫作为一种重要的人兽共患寄生虫病贾第虫病的病原，其对SPF实验动物质量造成的潜在威胁不容忽视。
C2株蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白H2B基因的克隆与同源性分析
Ｃｌ ｏ ｎｉ ｎｇ ａ ｎｄ ｈ ｏ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｏ ｕ ｓ ａ ｌ ｉ ｇ ｎｍ ｅ ｎｔ ｏ ｆ Ｈ２ Ｂ ｈｉ ｓ ｔ ｏ ｎ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｎ Ｃ２ Ｇｉ ａ ｒ ｄｉ ａ ｌ ａ ｍｂ ｌ ｉ ａ
析， 与 美 国 ＷＢ株 蓝 氏 贾 第鞭 毛 虫及 模 式 生 物 Ｈ２ Ｂ组 蛋 白基 因和 蛋 白序 列 进 行 同源 分 析 。结 果 测序 Ｃ ２ 株 蓝氏贾第鞭毛虫 Ｈ２ Ｂ组 蛋 白基 因序 列 ， 同源 比对 结 果 显 示其 基 因序 列 与美 国 ＷＢ株 完 全 一 致 ， 进 化树 分 析 表 明 贾 第 虫 Ｈ２ Ｂ组 蛋 白基 因在 进 化 过 程 中 与其 他 物 种 分 化 较 早 。结 论 蓝 氏 贾第 鞭 毛 虫 Ｈ２ Ｂ组 蛋 白基 因 同源 分 析 结 果 显 示 贾 第 虫 与 其 他 现 存 真 核 生 物 亲 缘 关 系较 为 疏 远 ， 为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的资料。
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ，Ｈｅ ｂ ｅ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｔ ｅ ｄ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｔ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ｎ ０ ６ ３ ０ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ ： Ｔ ｈｅ ａ ｉ ｍ ｏ ｆ ｔ ｈｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄｙ ｉ ｓ ｔ Ｏ ｏｂｔ ａ ｉ ｎ ｈｉ ｓ ｔ ｏｎ ｅ Ｈ２ Ｂ ｇｅ ｎｅ ｓ ｅ ｑｕ ｅ ｎｃ ｅ ｆ ｒ ｏｍ Ｃ２ Ｇｉ ａｒ ｄｉ ａ ｌ ａｍ ｂ ｌ ｉ ａ ｇ ｅ ｎｏ ｍｅ ＤＮ Ａ ａ ｎ ｄ
医学寄生虫学：蓝氏贾第鞭毛虫类高尔基体的研究
川崎病 患儿 ４ ８例冠 状动脉损害危 险因素研究 ＝Ａｎｌｓ ｆ ５ ａｙｉ ｏ ｓ
ｒｓ ｆ ｃ ｏｒ ｒ ｉｋ ａ ｔ ｓ ｏｆ ｃｏ ｏｎａ ｙ ｒｅ ｙ ｅｓｏｎ ｓ ｃ ｄａ ｙ ｔ Ｋａｗａｓ ｋｉ ｒ ａ ｔ ｒ ｌ ｉ ｅ ｏｎ ｒ ｏ ａ
０ ０ １５ ８ １１ ５ ３ ０・３ １ ４
质 病 变 者 肺 动 脉 压 力 显 著 升 高（ 尸＜００ ．１和 Ｐ＜００ ） 且雷 诺 现 ．５． 象 与肺 动脉 压 力呈 正相 关（＝０ ３ ，Ｐ ．１．肺 功 能异 常 发 生 ｒ ． １ ＜０ ） ５ ０ 率 较 高 ，以 弥 散量 降低 最 为 多 见 ． 轻 度 肺 动 脉 高压 患者 临床 表 现少 ， 治疗 可逆转 ； 重度肺 动脉 高压治疗反应差， 病死率高．结 缔组 织病合 并肺动脉高压较为 常见 ，其 中以Ｓ ｃ Ｓ 和ＭＣ Ｄ合并 Ｔ 肺动脉高压发生率最高．雷诺现象与肺动脉压力呈正相关 ，是 预测肺动脉高压的 良好指标．早期诊断和治疗，可 以改善患者 预 后 ． 表 ２参 １ ６ 关 键 词 ： 结 缔 组 织 疾病 ； 肺 动 脉 高 压
探讨川崎病 （ ） ＫＤ 患儿合并冠状动脉病变（ＡＬ 的危险因素．选 Ｃ ） 择 ２ ０ － ２０ ００－ ０ ４年 在 山西 省 ４个 地 区 的 ４所 医 院住 院 的 ４ ８例 ５ 确诊 川崎病患儿为研 究对象 ．回顾性分 析这些 患儿的 临床 资 料 ， 合 并 冠 状 动 脉 病 变 组 （Ａ ） 未 合 并 冠 状 动 脉 病 变 组 （ 对 Ｃ Ｌ和 无 Ｃ ） ＡＬ 的病例进行组 间对照研究，并对 影响Ｃ Ｌ Ａ 发生 的 １ ５种因 素进行Ｌ ｇｓ ｃ ｏ ｉｉ回归分析 ．单 因素分析显示：就诊时发热天数、 ｔ 总 发 热 天数 、血 小 板 计数 （Ｌ ） Ｐ Ｔ 、红 细 胞沉 降率 （ Ｓ ） Ｃ反 应 Ｅ Ｒ、 蛋 白（ Ｒ ） ＣＡ 的 发 生 密 切 相 关 （ Ｃ Ｐ与 Ｌ 尸＜０ ５或Ｐ＜００ ） ． ０ ．１；多 因 素 Ｌ ｇｓｃ ｏ ｉ ｉ回归 分 析 显 示 ：年 龄 、 总发 热 天 数 、Ｃ Ｐ ｔ Ｒ 与ＫＤ 并 合 Ｃ 显著独 立相关（ ＜００ ＡＬ 尸 ． ５或Ｐ ．１．年龄 ＜１岁、总发热 ＜０Ｏ ） 天 数 ＞１ 、Ｃ Ｐ 高 是ＫＤ 并Ｃ Ｌ的 高危 因素 ． 表 ３参 １ ０ ｄ Ｒ增 合 Ａ ５ 关键词：黏膜皮肤淋 巴结综合征；危险因素 ；冠状动脉损害
蓝氏贾第鞭毛虫α8-贾第素基因克隆、表达与免疫反应性的鉴定
段 。经 Ｐ Ｃ Ｒ 和酶 切 鉴 定 表 明 ，重 组 表 达 载 体 ｐ Ｅ Ｔ ３ ０ ａ（ ＋ ） 一 ０ 【 ８ － ｇ ｉ ａ ｒ ｄ ｉ ｎ构 建 成 功 。Ｓ Ｄ Ｓ — Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 和 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｍ ｂ ｌ ｏ ｔ ｔ ｉ ｎ ｇ分 析 结 果 显示， ８ 一 贾 第 素重 组 蛋 白 以非 可 溶 性 形 式 存 在 于包 涵体 中 ，相对 分子 质量 （ ）约 为 ３ ６ ０ ０ ０ ，可 被 抗 Ｈ ｉ ｓ 标 签 抗 体 和
Ｐ ｒ ｏ ｋ ａ ｒ ｙ ｏ ｔ ｉ ｃ Ｅｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｍｍ ｕ ｎ ｏ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ
０ 【 ． ８ Ｇｉ ａ ｒ ｄｉ ｎ ｉ ｎ Ｇｉ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ａ ｍｂ ｌ ｉ ａ
（ ＋ ） 一 ａ ８ 一 ｇ ｉ ａ ｒ ｄ ｉ ｎ ｗ ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｍｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ Ｅ ｃ ｏ ｌ ｉ Ｂ Ｌ ２ １（ Ｄ Ｅ ３ ） ，ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｔ ｈ ｅ ｎ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ
文章编号 ： １ ０ ０ ０ ． ７ ４ ２ ３ （ ２ ０ １ ５ ） 一 ０ ３ ． ０ １ ７ ２ ． ０ ４
【 论著 】
蓝氏贾第鞭毛虫 ｏ 【 ８ 一 贾第素基因克隆 、 表达与免疫反应性的鉴定
人卫版人体寄生虫学之蓝氏贾第鞭毛虫教学护理课件
贾第鞭毛虫感染。
03
讨论
两个病例均表明蓝氏贾第鞭毛虫感染的症状表现多样化，可能涉及消化
系统、呼吸系统等多个方面。此外，两个病例的治疗方案和预后也有所
不同，需要根据具体情况制定个性化的治疗方案。
经验总结与展望
经验总结
通过对两个典型病例的分析和讨论，我们可以得出以下经验总结：一是蓝氏贾第鞭毛虫感染的症状表 现多样化，需要提高警惕；二是确诊需要依靠实验室检查，特别是粪便检查；三是治疗需要根据患者 的具体情况制定个性化的治疗方案。
02
血液检查可检测特异性 抗体，有助于确诊。
03
鉴别诊断需与其他肠道 寄生虫病相区分，如阿 米巴病、钩虫病等。
04
根据临床表现和实验室 检查结果，可进行综合 诊断和治疗方案的制定。
03 蓝氏贾第鞭毛虫 的治疗与护理
治疗原则与方法
01
02
03
药物治疗
首选甲硝唑进行治疗，可 以有效杀死蓝氏贾第鞭毛 虫，缓解症状。
病例分析与讨论
01
分析病例一
患者李某的症状较为典型，包括腹泻、腹痛、发热等，这些症状可能与
蓝氏贾第鞭毛虫感染有关。经过检查，确诊为蓝氏贾第鞭毛虫感染，说
明该病例具有代表性。
02
分析病例二
患者张某的症状与病例一略有不同，主要以呕吐、恶心、食欲不振为主，
但也符合蓝氏贾第鞭毛虫感染的症状表现。经过检查，同样确诊为蓝氏
培训医护人员
对医护人员进行培训，提高他们对 蓝氏贾第鞭毛虫的诊断和治疗能力。
05 蓝氏贾第鞭毛虫 病例分享与讨论
典型病例介 绍
病例一
患者李某，男性，35岁，因腹泻、腹痛、发热等症状就诊，经检查确诊为蓝氏 贾第鞭毛虫感染。
蓝氏贾第鞭毛虫表面抗原与临床诊断的研究进展
８ ９ ５
［３ １ ］李志平． 支气管哮喘患者健康教育指导下规范治疗前后抑郁情绪 、 哮喘控制及生存质量的调查 ［ ］ 中国呼吸与危重监护杂志 ， ０ ， Ｊ． ２ ７ ０
３ ６ ：０ （ ） １１
［９ １ ］郭本玉 ， 季卫东． 焦虑性神经症 患者不同应对方式的调查［ ］ 中国 Ｊ． 临床康复 ，０ ３７ ５ ：０ ２０ ，（ ）８ ［０ ２ ］王玉梅 ， 泉． 杨 荆州市医院支气管哮喘患者掌握健康教育知识 的 现状与对策［ ］ 南方护理学报 ，０５ １ （Ｏ ： Ｊ． ２０ ， １ ）７ ２ ８ ［１ ２ ］杨春梅 ， 嫒 ， 张 胡君娥 ， 巧用健康教育卡对患者进行健康教育 等． ［ ］南方 护理学报 ， ０ ， （ ） ５ Ｊ． ２ ５ １ ９ ：８ ０ ２ ［２ ２ ］刘 明． 支气管哮喘患者院外规 范化护理 管理 教育 的做 法及体 会 ［ ］ 华北国防医药， ０ ， （ ） ７ Ｊ． ２ ７ １ ２ ：０ ０ ９ （ ０２— ３—３ 收稿） 岳静玲 编辑） ２１ ０ ０ （
（ ）４ １ ：７
ｄ ｓ［ ］Ｊ ｓ ｍ ， ０ ， （ ）６ １ ６９ ｏ Ｊ ． Ａ ｔ ａ２ ３ ４ ６ ： — ９ ｅ ｈ ０ ０ ９ ［０ ｏｔ Ｇ ｖｎ ｅ Ｍ ｌ ， ｅｉ Ｐ ｅ ａ Ｒ ｌ ｉ ｓｉ ｂｔｅｎｇｉ — １ ］Ｐ ｎ Ｌ ， ｒ ｏ ｎ Ｄ ｎ ，ｔ １ ｅ ｔｎｈ ｅ ｅ ｕ ｅ ａｄ ｅＴ ｇ ． ａｏ ｐ ｗ ｄ ｌ ｅｔ ａ ｅ ｔ ｎ ｅ ｔ ｅ ｔ ａ ｔ ｏ ｌｅ ｎａ ｈ ａ Ｊ ， ｕ ｅ ｉ ｅｔ ｎ ａｄｈａｈ ｌ ｅ ｑ ｌｙ ｆ ｉ ｓ ｍ ［ ］ Ｅ ｒ ． ｎ ｒ ｍ ｌ ｒ ａ ｄｕ ｉ ｉ ｔ ｆ Ｒ
ｓｉＪ２ ０ ２ （ ）７ ８—７２ ｐｒ ，０４，３ ５ ：１ ２
蓝氏贾第鞭毛虫病的病因治疗与预防
蓝氏贾第鞭毛虫病的病因治疗与预防现在通常被称为蓝氏贾第鞭毛病（giardiasis），是蓝氏贾第鞭毛虫（giardialambila）寄生在人类小肠中的原虫性疾病。
临床上以腹泻、腹痛、腹胀为主要表现，可引起胆囊炎、胆管炎和肝损伤。
除了当地的流行外，这种疾病还会导致水源性的爆发性流行。
感染在游客中也很常见。
近年来，艾滋病患者经常可以结合这种昆虫感染。
感染动物（狗、猫、水、啮齿动物）的粪便可以发现这种原始昆虫。
饮用未消毒的地表水（池塘、湖泊、溪流）会增加感染的风险。
整个感染期都是传染性的。
它会再次被感染。
蓝色贾鞭毛虫病可发生水、电解质紊乱、贫血、营养不良、生长缓慢等。
也可继发性乳糖不耐受和维生素缺乏。
蓝色贾鞭毛虫病患者应根据肠道传染病隔离，控制饮食。
抗生素应与细菌感染相结合。
确诊患者和高度怀疑患者应给予抗病原体药物治疗。
蓝色贾鞭毛虫病一般通过药物治愈，预后良好。
每个年龄组都可以感染，尤其是儿童和中年轻人。
蓝氏贾第鞭毛虫分类学属于肉足鞭毛门，动鞭毛纲，六鞭虫科，双滴虫目，贾第属。
该属下除有寄生在人体的蓝氏贾第鞭毛虫（mblia）此外，还有各种贾第鞭毛虫寄生在哺乳动物、鸟类和两栖动物中，如牛贾第虫（G.bovis）、马贾第虫（G.egui）、鼠贾第虫（G.muris）等等。
滋养体寄生在小肠，尤其是十二指肠，胆囊、肝脏、胰腺等。
当昆虫寄生在胆道系统中时，可能会引起胆囊炎或胆管炎。
如上腹痛、食欲不振、肝肿大、脂肪代谢紊乱等。
一般认为，蓝氏贾第鞭毛虫病的发病率与昆虫毒性、身体免疫和共生内环境有关。
营养物质通过吸盘吸附在肠粘膜表面，导致机械刺激和损伤，导致粘膜炎症。
当昆虫大量繁殖时，它们可以覆盖大量的肠粘膜，影响脂肪和脂溶性维生素的吸收。
昆虫还与宿主竞争，以及肠道菌群的变化，这可能会导致不同程度的肠功能障碍。
昆虫可引起小肠微绒毛病变，导致乳糖酶、木糖酶等双糖酶缺乏，导致腹胀和乳糖耐受性差。
蓝氏贾第鞭毛虫病的潜伏期一般为1~3周，平均为9~15天。
蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞核分裂过程研究进展
３ １ 交班时护士们 的思 想更加集 中 因为 白班接 班者需 背诵 ． 交班报告的所有 内容 ， 而夜班交班者需在仔细聆 听后加 以补充 ， 双方都得在精神高度集 中的状态下才能做好交班工作 。 ３ ２ 调动 了护士 的主观能动性 ． 交班 主体 的转变 ， 护士从被 动 地 了解患者病情到 主动去查 找患者信 息 的动 态变化 ， 大地调 极
［ 中图分类 号］ Ｑ２ ［ ６ 文献标识码 ］ Ａ ［ 文章 编号 ］ １０ ６ ３ （０ １０ ６ ２－ ３ ０ ８— ６ ３ ２ １ ）５－ ３ ０
蓝氏贾第鞭毛虫在动物 分类学 中属于原 生动物 门 ， 毛虫 鞭
丝分裂时 ， 核纤层 还 参与 了核 膜崩 解和重 建 、 核孔 复合 体 的锚
Ｄ Ｐ 进 行 细 胞 核 染 色 ， 荧光 显 微 镜 下 观察 发现 部 分 细 胞 具 有 ＡＩ 在
都为二倍体 ， 色体数 目为 ２ 染 ｎ＝１ 。Ｂ ｍａｄｒ 刘利用 流式 ０ ｅ ｎ ｅ 等¨ 细胞仪和荧光显微镜研究 显示 ， 第虫 滋养体 的每个细 胞核都 贾 不是单倍体 ， 而是二倍体。沈海娥 等【 过观察大量 的染色体 ｌ 通 玻 片标本 ， 确认 贾第虫滋养体的染 色体 数 目为 １ ， Ｏ条 为二倍体 。
【 关键词 ］ 贾第鞭毛 虫 滋养体 有丝分裂
管通过两极上的缺 口进入细胞核 内。 １２ 核纤层 ． 在细胞核 内膜之 下存在着 一层纤维 蛋 白网络结 构， 并与核 内膜结合 ， 这层结构就是贾第虫的核纤层。它起着维 持细胞核形状和大小 、 保持核膜结构稳定 的作用 ， 在细胞进 行有
形态 ， 染色体呈短杆状 ， 形态相近 ， 常成 对排 列。沈海娥 等 。 对 卸
中美四株蓝氏贾第虫可溶性蛋白和同工酶分析
中美四株蓝氏贾第虫可溶性蛋白和同工酶分析
卢思奇;孙铁;王凤云
【期刊名称】《寄生虫与医学昆虫学报》
【年(卷),期】1999(006)001
【摘要】对四株蓝氏贾第虫「三株分离自中国（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３）」，一株分离自美国（ＣＤＣ）的可溶性蛋白和同工酶分别用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＰＡＧＥ法进行分析，每一受试虫株在ＳＤＳ－＝ＰＡＧＥ中均显示出众多蛋白带，其主要数目分别为９、１３、１３、１。
我数带的分子量介于１７．５ＫＤａ－９４ＫＤａ之间，同工酶分析结果表明，在酯酶ＥＳＴ）分析中，ＣＤＣ出现４条带，其中３条深染，Ｃ３呈现３条浅带，但Ｃ１和Ｃ２未邮条带出现
【总页数】5页(P1-5)
【作者】卢思奇;孙铁;王凤云
【作者单位】首都医科大学寄生虫学教研室;首都医科大学寄生虫学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】Q51
【相关文献】
1.蓝氏贾第虫谷氨酸脱氢酶基因的克隆及序列分析 [J], 刘全;张西臣;赵永军;李建华;魏峰;尹继刚;杨举
2.4株蓝氏贾第虫总细胞蛋白质等电聚焦电泳分析 [J], 刘华
3.蓝氏贾第虫核纤层蛋白基因的初步研究 [J], 陈万群;文建凡;卢思奇
4.蓝氏贾第虫组蛋白的初步研究 [J], 吴刚;李靖炎;卢思奇
5.感染约氏疟原虫的斯氏按蚊可溶性蛋白含量及酯酶同工酶的分析研究 [J], 徐秀丰;李慧珠;王凤芸
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蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定
蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定王沂;赵俊暕;余源;田喜凤;李冀;刘晓莉;周英斌;李少东;王洋【摘要】目的克隆、原核表达蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,贾第虫)的胞外核酸酶编码区,并对其蛋白产物进行活性鉴定.方法对贾第虫胞外核酸酶(GeNuc)蛋白进行生物信息学分析,根据分析结果以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得GeNuc去信号肽段编码区序列,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物.Ni-NTA亲和层析纯化GeNuc蛋白,经复性后验证其对质粒DNA的水解能力.结果成功克隆了长约800 bp的GeNuc编码区并构建了原核表达载体pET-28a(+)-GeNuc,测序结果显示C2株GeNuc序列与WB株相同;在大肠杆菌中诱导表达获得了相对分子量约30.8 kDa的融合蛋白;复性后的纯化GeNuc蛋白具有降解双链DNA的能力,但活性较商品化DNase Ⅰ低.结论证明了GeNuc的存在,为GeNuc抗体的制备及贾第虫致病机制的研究提供了实验材料.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2016(032)001【总页数】6页(P65-69,82)【关键词】蓝氏贾第鞭毛虫;胞外核酸酶;生物信息学;原核表达;活性鉴定【作者】王沂;赵俊暕;余源;田喜凤;李冀;刘晓莉;周英斌;李少东;王洋【作者单位】华北理工大学附属医院检验科,唐山 063000;华北理工大学附属医院检验科,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000【正文语种】中文【中图分类】R382.21蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia，简称贾第虫)属于动鞭毛纲、双滴虫目、六鞭毛科、贾第虫属，是一种全球分布的机会致病性原虫，被认为是目前已知的最原始真核细胞，也是生物学研究中重要的模式生物。
蓝氏贾第鞭毛虫
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蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ）
生于胆囊，引起腹痛、腹泻和吸收不良等症状，致 贾第虫病（giardiasis）。
本病呈世界性分布，以往在旅游者中发病率较
高，曾有“旅游者腹泻”之称。
4
蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ）
一、形态
1
滋养体 (trophozoite)
呈纵切为半的倒置梨形，大小（9~21）µ × m （ 5~15）µ ×（ 2~4）µ m m 两侧对称，背凸腹平，腹面前半部向内凹陷成2个 吸盘 有4对鞭毛，分为前侧、后侧、腹、尾鞭毛各1对 有1对并列细胞核在吸盘底部 1对呈爪锤状的中体与轴柱1/2相交
（2）小肠液检查：用十二指肠引流或肠内试验法采集标本。
16
（3）小肠活体组织检查：借助内镜在小肠Treitz韧带附近钳取黏膜组织。标本可 先做压片，或用吉姆萨染色后镜检查滋养体。
蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ）
四、实验诊断
（二）免疫学检查
ELISA 间接荧光抗体试验
对流免疫电泳试验等。
18
蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ）
五、流行与防治
2
流行环境 （1）传染源：带虫者或患者。排囊量大，带虫者一天可排囊9亿个，包 囊抵抗力强。 （2）传播途径：人饮用被包囊污染的食物或水而感染。蝇、蟑螂等昆虫 可能成为传播媒介。 （3）易感人群：任何年龄段均有易感性。
19
在外旅游饮用生水
14
蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ）
三、致病
15
滋养体吸附在小肠黏膜
蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia ）
四、实验诊断
蓝氏贾第鞭毛虫滋养体染色体扫描电镜观察
蓝氏贾第鞭毛虫滋养体染色体扫描电镜观察沈海娥;李冀;路瑶;张文丽;任兴波;布仁满都呼;田喜凤【摘要】目的电镜观察蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的染色体数目及形态.方法用改良TYI-S-33培养基培养贾第虫滋养体.制备分散度较好的染色体玻片标本,对玻片标本进行扫描电镜常规处理,扫描电镜观察.结果在扫描电镜下观察到了蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的染色体,染色体数目为2n=10条,1号染色体为亚中央着丝粒染色体,2号、3号、4号、5号为端着丝粒染色体.结论通过电镜观察认为蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的染色体核型公式为2n=10=2sm+8t.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2010(026)007【总页数】3页(P696-698)【关键词】蓝氏贾第鞭毛虫;滋养体;染色体;扫描电镜【作者】沈海娥;李冀;路瑶;张文丽;任兴波;布仁满都呼;田喜凤【作者单位】华北煤炭医学院生物科学系,唐山 063000;华北煤炭医学院生物科学系,唐山 063000;北京林业大学生物科学与技术学院,北京 100083;华北煤炭医学院中心实验室电镜室,唐山 063000;华北煤炭医学院生物科学系生物技术专业,唐山063000;华北煤炭医学院生物科学系生物技术专业,唐山 063000;华北煤炭医学院生物科学系,唐山 063000【正文语种】中文【中图分类】R382.2蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的滋养体寄生于人体小肠,导致以腹泻和营养不良为主要临床表现的蓝氏贾第虫鞭毛虫病。
贾第虫是一种单细胞真核生物,是目前所知的最原始的真核生物。
由于特殊的进化地位,国内外许多学者都热衷于它的细胞学研究,以探讨原核细胞和真核细胞的进化。
从1952年起,国内外学者就对其是否具有典型染色体以及染色体的数目展开了研究〔1〕。
本实验室在光学显微镜下初步观察到了贾第虫滋养体的染色体,但染色体体积微小,呈点状,属于微小染色体〔2〕,所以关于染色体的形态还不甚清楚。
双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究
双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究刘阿倩;王洋;林志强;张亚粉;田喜凤;余源【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2015(31)6【摘要】目的建立实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative,RT-PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达水平的影响.方法分别采用100 μg/mL、200 μg/mL的双氢青蒿素改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2h、4h、8h、12h,提取总RNA,逆转录合成cDNA,实时荧光定量PCR检测Delta giardin基因mRNA表达情况.结果100 μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.44、0.26、0.25、0.02;200 μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.30,0.26,0.11,0.02.药物对照组中C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达量明显低于阴性对照组.结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的防治效果.【总页数】5页(P522-526)【作者】刘阿倩;王洋;林志强;张亚粉;田喜凤;余源【作者单位】华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000;华北理工大学生命科学学院,唐山 063000【正文语种】中文【中图分类】R382.2【相关文献】1.C2株蓝氏贾第鞭毛虫 SU MO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析及其催化活性区的原核表达 [J], 李少东;周英斌;刘晓莉;禇晗;李思瑾;田喜凤;王洋2.C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析 [J], 张亚粉;刘岩;王皓钰;郝金童;高红丹;林志强;刘阿倩;雷田田;王一同3.C2株蓝氏贾第鞭毛虫TCTP基因的克隆、表达和序列分析 [J], 王沂;余源;田喜凤;李冀;楮晗;王洋4.双氢青蒿素对 C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3 giardin 基因 mRNA 表达水平的影响 [J], 余源;田喜凤;陈阳;葛爽;王洋;李巍伟;赵丽娜;刘阿倩;林志强;高雪5.C2株蓝氏贾第鞭毛虫cDNA文库的构建 [J], 刘绍伟;王洋;田喜凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蓝氏贾第虫致病机制的研究进展
蓝氏贾第虫致病机制的研究进展武省，李国清【摘要】蓝氏贾第虫（Giardia lamblia）是一种重要的人畜共患寄生虫，可引起人和多种哺乳动物的腹泻。
近年来人们对其致病机制进行了大量研究，包括贾第虫结构蛋白（贾第素）和排泄分泌物，表面抗原变异以及贾第虫对小肠的影响等，本文对此进行了综述。
【期刊名称】中国动物传染病学报【年(卷),期】2015(000)001【总页数】7【关键词】蓝氏贾第虫；致病机制；贾第素；抗原变异；细胞凋亡·综述·蓝氏贾第虫（Giardia lamblia），简称贾第虫，是一种寄生于人和多种哺乳动物肠道内的原虫，可引起以腹泻为主的贾第虫病（giardiasis）。
该病呈世界性分布，自20世纪70年代以来，在世界各地流行或爆发流行，现已列入全世界危害人类健康的10种主要寄生虫病之一[1,2]。
据WHO估计，全世界约有1%～30%的人感染贾第虫，发达国家人的贾第虫感染率为0.4%～7.5%，发展中国家人的贾第虫感染率为8%～30%[3]。
欧洲7个国家8685只犬和4214只猫的粪样调查结果显示，分别有24.8%和20.3%的样本呈贾第虫阳性[4]，且该虫可以在人和伴侣动物之间传播[5]。
因此，蓝氏贾第虫是一种重要的人兽共患寄生虫。
一般认为，贾第虫滋养体在鞭毛的协助下借助其腹吸盘吸附于小肠上皮细胞表面，可直接损伤肠粘膜致使肠上皮细胞微绒毛变短、变粗甚至萎缩，从而导致营养物质吸收障碍而引起腹泻，但虫体导致腹泻的真正机制至今尚未明确。
为了更好地了解贾第虫的致病作用，本文对其细胞骨架蛋白和排泄分泌物、虫体表面抗原变异以及虫体对宿主小肠的影响等相关研究进行综述。
1 贾第虫细胞骨架蛋白和排泄分泌物1.1 贾第素蓝氏贾第虫具有高度发达的细胞骨架系统，由微管、微丝和细胞骨架蛋白所构成。
近年来的研究证实，贾第虫的细胞骨架蛋白与其致病力有着密切关系[6]。
在参与细胞骨架构成的众多蛋白质中，特异性细胞骨架蛋白—贾第素（Giardin）是其重要组成之一。
抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的制备和特性研究
抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的制备和特性研究
贾克东;朱育光
【期刊名称】《中国寄生虫病防治杂志》
【年(卷),期】1994(7)1
【摘要】用体外培养的四川株蓝氏贾第鞭毛虫滋养体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以免疫脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，共获得３个分泌抗蓝氏贾第鞭毛虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
这些ＭｃＡｂ经鉴定均属ＩｇＧ１亚类。
选取活性最强的１Ｅ２株ＭｃＡｂ对不同贾第虫株进行抗原定位的测定，由ＩＦＡ显示，该ＭｃＡｂ与四川株和山东株滋养体的后１／３表面呈现荧光反应，但与澳大利亚株滋养体表面不显荧光，表明国内株与国外澳大利亚株滋养体表膜
【总页数】4页(P42-45)
【作者】贾克东;朱育光
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R392－33
【相关文献】
1.抗鸡IgA单克隆抗体的研究Ⅲ.抗鸡IgMμ链单克隆抗体的制备及生物… [J], 钱建飞;毛洪先
2.抗弓形虫单克隆抗体试剂的研究：抗弓形虫单克隆抗体理化特性的测定 [J], 郭志刚;杜重波
3.蓝氏贾第鞭毛虫α-19贾第素的单克隆抗体制备与亚细胞定位研究 [J], 李汶霖;
李淑凝;沈海娥;章曾思琦;田喜凤;王洋
4.与顶体反应相关的抗人精子单克隆抗体及其抗原的特性Ⅰ顶体反应的诱导及抗顶体反应精子的单克隆抗体的制备 [J], 王云美;贲昆龙;曹筱梅
5.抗人Ig轻链系列单克隆抗体的研制1．抗人λ轻链亚型／亚群单克隆抗体的制备及特性鉴定 [J], 赵蓉;郑志竑;谢捷明;包少佳;吴国华;邱文萱
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蓝氏贾第鞭毛虫基因快速标记载体的构建
蓝氏贾第鞭毛虫基因快速标记载体的构建巨红妹;王乙惠;张霞;王云华;李雅杰【期刊名称】《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》【年(卷),期】2012(30)3【摘要】目的构建可快速标记蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)基因的重组载体。
方法采用重叠PCR法将新霉素(Neo)基因置于gdh启动子调控下,并插入pGEM-5zf 载体,获得带有Neo筛选标记的重组载体pGL gdh-Neo;并将基因合成所得3′末端带有3×HA标签的多克隆位点区克隆至重组载体pGL gdh-Neo,构建可快速标记贾第虫基因的重组载体pGLMCS-3HA-gdh-Neo。
以该载体标记贾第虫H2A基因验证其可用性。
PCR扩增组蛋白H2A基因序列,用EcoRⅠ和SpeⅠ双酶切后克隆至重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo多克隆位点区。
重组质粒线性化后转染虫体,并对G418筛选所获得的H2A贾第虫重组株进行基因组PCR、蛋白质印迹(Western blotting)和免疫荧光分析。
结果构建了带有多克隆位点区和3×HA标签的可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo,其长度为4 260 bp;H2A重组质粒稳定转染至贾第虫滋养体并正确整合至其基因组,可表达相对分子质量(Mr)为16 900的H2A(含3×HA标签)。
结论构建了可快速标记贾第虫基因的重组载体pGL MCS-3HA-gdh-Neo。
【总页数】5页(P174-178)【关键词】蓝氏贾第鞭毛虫;HA标签;快速标记载体【作者】巨红妹;王乙惠;张霞;王云华;李雅杰【作者单位】大连大学医学院【正文语种】中文【中图分类】R382.213【相关文献】1.绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达 [J], 刘伟;王杰;幸永明;赵宏;龚德军2.无标记转Fat-1基因真核表达载体的构建及转基因绵羊细胞系的建立 [J], 阿力玛;朱和平;王瑞瑶;闫涛;苏小虎;李璐;王丙萍;那顺温都乐;齐贵春3.PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及其在雪柑转基因中的应用 [J], 曾黎辉;徐海峰;王会全;吴少华;朱艺萱4.Epsps基因为筛选标记的多基因抗虫表达载体构建 [J], 邓力华;于元杰;李宝健;肖国樱5.一种带有可视化筛选标记的桉树基因编辑载体构建及验证研究 [J], 王泽琛;刘亚梅;欧阳乐军;李莉梅;梁楚炎;潘璟茵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
蓝氏贾第鞭毛虫的基因及基因型
蓝氏贾第鞭毛虫的基因及基因型杨志宏;田喜凤;卫茹【期刊名称】《热带病与寄生虫学》【年(卷),期】2007(5)1【摘要】蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia）是一种多鞭毛的单细胞真核生物,其滋养体寄生在人体的小肠,引起以腹泻为主的贾第虫病（giardiasis）.本病世界范围的感染率约为30%,我国感染率各地区不等,约在1%～20%左右（平均约2.54%）.目前,贾第虫病已被列为全世界危害人类健康的十种主要寄生虫病之一.贾第虫在生物进化上处于特殊地位（属“源真核生物”）.随着分子生物学研究技术的发展,国内外学者对本虫的基因及基因型研究不断深入,本文就近年来这方面的研究综述如下.【总页数】4页(P58-61)【作者】杨志宏;田喜凤;卫茹【作者单位】063000,河北唐山市,华北煤炭医学院生物科学系病原生物学学科;063000,河北唐山市,华北煤炭医学院生物科学系病原生物学学科;063000,河北唐山市,华北煤炭医学院生物科学系病原生物学学科【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.丙型肝炎病毒单基因型感染与非单基因感染患者基因型分析 [J], 石玉如; 岳莉; 姚余有; 赵长城; 谷妍; 刘杨; 王云; 戚应杰2.蓝氏贾第鞭毛虫基因型和腹泻的关系 [J], 蔡明志3.安徽省部分地区山羊蓝氏贾第鞭毛虫流行病学调查及基因型分析 [J], 顾有方;王立克;李阳;李磊;褚星海;辛迪薇;马成祥;徐文汉;吴胜兵;汪贺银;李文超4.基于ORF2的基因型-1和基因型-4ELISA检测抗-HEV-IgM和IgG的评价与人类基因型-4HEV感染的研究 [J], 曹婕（摘译）;张占卿（审校）5.蓝氏贾第鞭毛虫河北株的分离及其基因型研究 [J], 陈小宁;卢思奇;李继红;王凤芸;王日失星;王锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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表 达 了重 组 蛋 白。结 论 成 功 克 隆 、 表达并分析 Ｃ ２株 蓝 氏贾 第 鞭 毛 虫 Ｉ Ｌ Ｐ 蛋 白， 为蓝 氏贾第鞭毛 虫 Ｉ Ｌ Ｐ’ 蛋 白结 构 与功 能 的 研 究 提 供 了有 价 值 的 资 料 。 关键词 ： Ｃ ２ 株 蓝 氏 贾 第鞭 毛 虫 ； 克隆 ； 表达 ； Ｉ Ｌ Ｐ蛋 白 中 图分 类 号 ： Ｒ ３ ８ ２ ． ２ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２ —２ ６ ９ ４ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７ —０ ６ １ ８ —０ ５ ・
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Ｃ ２株 蓝 氏贾 第鞭 毛 虫 Ｉ Ｌ Ｐ基 因的 克 隆 表 达 及 蛋 白结构 分析
张 亚粉 ， 刘 岩， 王 皓钰 ， 郝金童， 高红丹 ， 林 志强 ， 刘 阿倩 ， 雷田 田 ， 王一 同， 余 源
摘 要 ： 目的 利 用 大 肠 杆 菌 对 ｃ ２株 蓝 氏 贾 第 鞭 毛 虫 Ｉ Ｌ Ｐ蛋 白（ Ｉ ｍｐ ａ ｃ ｔ — ｌ ｉ ｋ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ） 进 行 克 隆表 达 ， 运 用 生 物 信 息 学 软 件 进 行 蛋 白结 构 分 析 。方 法 提取 Ｃ ２株 蓝 氏 贾第 鞭 毛 虫基 因组 Ｄ ＮＡ， Ｐ Ｃ Ｒ扩增 Ｉ Ｌ Ｐ基 因 ， 构建 ｐ ＧＭ－ Ｔ 重 组 载体 ， 挑 选 阳性 克隆并进行序列分析； 将Ｉ Ｌ Ｐ基 因连 入 原 核 表 达 载 体 ｐ Ｅ Ｔ 一 ２ ８ ａ （ ＋） ， 并 转化大 肠杆 菌 Ｒ ｏ ｓ ｅ ｔ ｔ ａ （ ＤＥ ３ ） ， Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 诱 导 表 达 。运 用 Ｐ Ｓ Ｉ Ｐ ＲＥ Ｄ和 ｓ ｗＩ ｓ ＭＯ ＤＥ Ｌ进 行 蛋 白结 构分 析 。结 果 成 功 构 建 了原 核 表 达 载 体 ｐ Ｅ Ｔ 一 ２ ８ ａ （ ＋） 一 Ｉ Ｌ Ｐ ， 该 基 因全 长 ８ ３ １ ｂ ｐ 。
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
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