血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶
[ 08-07-14 17:06:00 ] 作者：周天保杨广
顺编辑：studa20
【摘要】目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶9
（MMP9）的表达与原发性肝细胞癌（PHCC）侵袭和转移的关系。

方法：采用免疫组织化学LSAB法和原位杂交法对40例PHCC和癌旁组织手术切除后的石蜡标本组织中的VEGF和MMP9的表达及微血管密度（MVD）进行了检测。

结果：
①VEGF、MMP9表达与MVD、PHCC组织中明显高于癌旁组织；②在PHCC中，有转移者及包膜不完整者VEGF、MMP9表达与MVD明显高于无转移者及包膜完整者；③VEGF、MMP9表达与MVD在大肿瘤（直径＞5cm）与小肿瘤（直径≤5cm）两者差异无统计学意义；④VEGF的表达与MVD呈正相关。

结论：原发性肝细胞癌组织中的VEGF、MMP9表达与肿瘤的侵袭和转移行为密切相关，可作为判定HCC发生、转移及预后的指标。

【关键词】肝肿瘤・血管内皮生长因子・明胶酶β・微血管密度・肿瘤转移
The expression and clinical significance of VEGF and MMP9 in primary hepatocellular carcinoma
【ABSTRACT】Objective:To study the relationship between the expression of VEGF and MMP9 with invasion,metastasis of primary hepatocellular carcinoma(PHCC).Methods: Paraffinembedded specimens from 40 patients with PHCC undergoing radical resection were studied.Agiogenesis was assessed by the expression of VEGF,MMP9 and MVD using LSAB immunohistochemical staining and in situ hybridization.Results:①The level of VEGF,MMP9 expression and MVD in PHCC was higher than that in the paratumorous tissue(P＜0.01).②The level of VEGF,MMP9 expression and MVD in tumor with tumor metastasis or in nonencapsulated tumors were higher than that in tumors without metastasis or in wellencapsulated tumors(P＜0.05).③There was no significant difference in the level of VEGF,MMP9 expression and MVD between large PHCC(diameter ＞5cm) and small ones (diameter≤5cm)（P ＞0.05）.④The expression of VEGF was positively correlated with MVD(P＜0.01).Conclusion:The expression of VEGF,MMP9 and MVD are highly correlated with invasion and metastasis in PHCC,which may serve as a parameter for determining tumor metastasis and prognosis.It may be a new idea to supervise and treat HCC.
【KEY WORDS】Liver neoplasms・Vascular endothelial growth factor・Gelat inase β・Density・Neoplasm metastasis 原发性肝细胞癌（PHCC）转移率和复发率高，其中以血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和基质金属蛋白酶9（matrix
metalloproteinase9,MMP9）为代表的促进微血管生成的因子及蛋白水解酶系统起着重要作用。

本文从此角度来研究PHCC，以期对PHCC的发生、发展、转移及预后能有进一步了解。

1 材料与方法
1.1 标本来源手术切除经病理证实为原发性肝细胞癌的标本40例，男29例，女11例，年龄35~60岁（中位年龄45.6岁）。

肿瘤直径＞5cm 者占45%（18/40），≤5cm者占55%（22/40）。

包膜完整者占37.5%(15/40)，包膜不完整者占6
2.5%(25/40)。

有肝外脏器转移和/或有门静脉癌栓或肝门淋巴结转移者占57.5%(23/40)，无转移者占42.5%(17/40)。

对照组为手术中取自肿瘤边缘以外的部位经HE染色病理切片证实无癌变的组织。

1.2 方法原位杂交试剂盒（博士德公司），CMIAS真彩色医学图像分析系（北京），兔抗人VEGF多克隆抗体（丹麦Dako公司），兔抗人第8因子相关抗原多克隆抗体（F8RA）（丹麦Dako公司），LSAB试剂盒（丹麦Dako公司）。

LSAB免疫组化染色按参考文献1进行，原位杂交按试剂盒说明书进行操作。

1.3 统计方法 VEGF、MMP9表达、MVD与各临床因素之间分析用卡方精确检验法，VEGF、MMP9表达与MVD之间关系用相关分析。

2 结果
2.1 阳性结果判定 VEGF、MMP9：VEGF、MMP9阳性细胞为棕黄色颗粒或棕褐色颗粒，分布于胞浆。

在显微镜100倍视野下随机选择5个阳性细胞最密集区，再在400倍视野下，转换到CMIAS真彩色医学图像分析仪并在屏幕上进行阳性肿瘤细胞计数，当阳性肿瘤细胞≥5%定为阳性，＜5%定为阴性。

MVD 凡在肿瘤细胞组织中与邻近微血管和肿瘤细胞分界清楚，并被染成棕黄或棕褐色的内皮细胞或内皮细胞簇团，均认为是新生的肿瘤血管。

计数方法：在放大100倍视野中，随机选择5个新生血管最密集区，再在400倍视野下进行计数，取其均数，即为新生血管数。