药物分析总结(6)

药物分析总结（六）
1，《新修本草》，这是世界上最早的一部药典。

2，国家药品（质量）标准：是国家对药品质量规格及检验方法所作的技术规定，是药品生产、供应(经营）、使用、检验和行政、技术监督管理部门共同遵循的法定技术依据。

是强制性的法定计术标准。

3，药典（Pharmacopeia ）：国家关于药品质量标准的法典。

4，
2009-6-186求
实
创
新
勤
奋
严
谨Pharmaceutical Analysis-2009.2-6
（1）新中国药典：
1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005版
始分
一二
两部
有英文
版出现
二部注
释选编
《药品红
外光谱集》
另行出版
多种配套
丛书
分为
三部
首次
收载
指导
原则
二部
药品
名称
取消
了拉
丁名
建国之后至今共出了八版
2.中国药典
5，2005年版主要内容
一部：中药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂
二部：化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品
三部：生物制品（《中国生物制品规程》）
6，其他重要规定
水浴温度：除另有规定外，均指98~100 ℃
室温：10~30 ℃
冰浴：0 ℃
放冷：指放冷至室温
阴凉处：不超过20 ℃
凉暗处：避光并不超过20 ℃
110：固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液。

溶液的滴：20℃时，1.0ml水相当于20滴
恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下。

精密称定：称取重量应准确至所取重量千分之一。

称定：称取重量应准确至所取重量的百分之一。

约：指取用量不得超过规定量的±10%
标准品&对照品：用于鉴别、检查和含量测定的标准物质，指定单位制备、标定、供应。

标准品指用于生物检定、抗生素或生化药品含量或效价测定的标准物质，一般按效价单位
计。

对照品一般指化学药品，按百分含量计。

空白试验：不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得的结果。

7，Solubility
极易溶解系指溶质1g（ml）能在溶剂不到1ml中溶解；
易溶系指溶质1g（ml）能在溶剂1～不到“10ml中溶解；
溶解系指溶质1g（ml）能在溶剂10～不到30ml中溶解；
略溶系指溶质1g（ml）能在溶剂30～不到100ml中溶解；
微溶系指溶质1g（ml）能在溶剂100～不到1000ml中溶解；
极微溶解系指溶质1g（ml）能在溶剂1000～不到10000ml中溶解；
几乎不溶或不溶系指溶质1g（ml）在溶剂10000ml中不能完全溶解。

8，空白试验不出现正反应 试剂等不干扰鉴别试验
对照试验呈正反应 试验条件正常
9，药物的杂质检查
一、药物的杂质和纯度的概念
1，杂质（Impurity，Related Substances，Product-Related Impurity ）
药物中存在的无治疗作用、或影响药物的疗效和稳定性、甚至对人体健康有害的物质。

2，纯度（Purity）
药物的纯净程度。

它是判定药品质量优劣的一个重要指标。

对药物纯度的要求是随着生产工艺的改进、变化以及分离分析技术的发展而不断提高、完善的。

3，药品质量标准中的杂质不包括变更生产工艺或变更原辅料而产生的新的杂质，也不包括参入或污染的外来物质。

二、药物中杂质的来源和分类
1.杂质的主要来源
（1）生产过程中引入
原料药生产（合成：未反应完的原料、反应的中间体、副产物、残留溶剂；提取：药物结构、性质相近的物质、残留溶剂）
制剂生产
*注意：生产设备也可能引入杂质
（2）贮藏过程中引入：受外界条件影响（温度、湿度、光线、空气、微生物）而发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉等变化
2.杂质的分类
（1）按杂质来源：一般杂质和特殊杂质。

一般杂质：指在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。

特殊杂质：指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。

（2）按杂质结构：无机杂质和有机杂质。

（3）按杂质性质：信号杂质和有害杂质。

三、杂质的限量检查
1．杂质限量的概念
在不影响药物疗效和不发生毒性的前提下，药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。

通常用百分之几（％）或百万分之几（ppm）来表示。

药物中杂质的检查，一般也不要求测定其含量，而只检查杂质的量是否超出限量——杂质限量检查（Limit Test)
2、杂质限量的计算
勤奋严谨
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09.6.18
15
示例：
例1.对乙酰基酚中的氯化物的检查(p29):已知：S = 2.0g ³25/100；C = 10μg/ml ；V = 5.0ml
求：L = ？解：
%01.0%100100
251020
.510%1006
=⨯⨯
⨯⨯=⨯∙=
S
V
C L *注意:单位要统一
勤奋严谨
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16
例2．葡萄糖中重金属的检查(p30)：已知：S = 4.0g ；C = 10μg/ml ；L = 5³10-6求：V = ？解：
)(0.210
100.41056
6m l C S L V =⨯⨯⨯=∙=--
3、一般杂质的检查方法（参考课件）
氯化物检查法 标准液：NaCl 标准液 硫酸盐检查法 标准硫酸钾溶液
铁盐检查法 盐酸酸性溶液、标准铁溶液：硫酸铁铵〔FeNH4(SO4)2²12H2O 〕
重金属检查法 标准铅溶液：硝酸铅、硫代乙酰胺法、炽灼破坏法、硫化钠法、微孔滤膜
法
％供试品量杂质的最大允许量杂质限量＝100⨯％
）供试品量（）标准溶液体积（）标准溶液浓度（＝100S V C ⨯⨯%
100⨯∙=S
V C L S
H CONH CH O H CS NH CH 223223+−→−+
砷盐检查法 标准砷溶液：三氧化二砷
方法：第一法(古蔡氏法)、第二法(二乙基二硫代氨基甲酸银法 ；Ag-DDC 法)
古蔡法 （Gutzeit ）： 加 KI 和 SnCl2目的： 还原 As5+；
抑制SbH3生成；
形成锌锡齐， 使氢气的生成连续均匀。

醋酸铅棉花：吸收H2S
酸碱度检查法
溶液颜色检查法 第一法：目视比色法:标准比色液进行比较的方法
第二法：分光光度法:规定波长处吸收度值
第三法：色差计法
易炭化物检查法
澄清度检查法 与浊度标准液比浊的进行检查 炽灼残渣检查法 目的:控制有机药物和挥发性无机药物中存在的非挥发性无机杂质。

干燥失重测定法 概念:药品在规定条件下,经干燥后所减失的量,以百分率表示；热分析法 残留溶剂测定法
4，特殊杂质的检查方法
原理: 利用药物和杂质在物理和化学性质上的差异
勤奋严谨
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09.6.18
80
杂质
按来源分按性质分
一般杂质特殊杂质信号杂质有害杂质
杂质限量
生产过程贮藏过程最大允许量
未反应的原料、中间体、副产物
%
100⨯=
⋅S
V C L 杂质和纯度
来源
按结构分
有机杂质
无机杂质分类
小结
+
++↓−−→−+H PbS Pb S H 5
.322pH %
100%⨯-=供试品重
空坩锅重
残渣及坩锅重炽灼残渣
勤奋严
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09.6.1881
*原理、方法、
条件控制
一般杂质检查
∙氯化物(Cl -)
加HNO 3,避免弱酸银↓∙硫酸盐(SO 42-)
加HCl, 避免弱酸钡↓
∙铁盐(Fe 3+、Fe 2+)
加稀HCl,过硫酸铵、硫氰酸铵，与标准对照
♠重金属(Pb 2+)检查
（四种方法）♠砷盐检查
（四种方法）
∙溶液颜色
K 2Cr 2O 7、CuSO 4、
CoCl 2标准比色液∙易炭化物
∙溶液澄清度
1%硫酸肼+10%乌洛托品
∙炽灼残碴
700—8000C
∙干燥失重(热分析法)
∙有机溶媒残留量
10，巴比妥类药物的分析
求实创新勤
奋严谨
Pharmaceutical Analysis-2009.2-7
§1 结构和性质
NH
N
O O
H R 1R 2
1
2345
6
O
母核巴比妥酸为环状丙二酰脲结构
取代基
5,5–二取代1,5,5–三取代2位硫代
区别各种巴比妥药物特性, 区分
其它类药物
环状结构
不开环 水解开环
碱液
酸、氧化剂、还原剂
有本类药物的结构知其具有：弱酸性（1，3位等）、水解反应（碱）、与重金属离子的反应（含有丙二酰脲或酰亚胺结构；与银盐的反应可用于本类药物的鉴别和含量测定）、与香草醛（Vanillin ）的反应（丙二酰脲基团中氢比较活泼）、紫外吸收、色谱行为、晶型 11，巴比妥类药物鉴别试验
丙二酰脲类鉴别反应、测定熔点、利用特殊取代基或元素（利用不饱和取代基的鉴别试验；药典收载的有司可巴比妥钠—与高锰酸钾反应，碱性溶液；利用芳环取代基的鉴别试验；硫元素的鉴别试验--区别硫代巴比妥类药物与巴比妥类药物，药典2005对注射用硫喷妥钠的鉴别采用了此法）
12，巴比妥类药物（特殊）杂质检查 （一） 苯巴比妥
1） 酸度——控制副产物苯基丙二酰脲量
2） 溶液的澄清度——控制乙醇不溶性杂质，副反应产物苯巴比妥酸杂质的含量 （二） 司可巴比妥钠
溶液的澄清度：司可巴比妥钠极易溶于水，溶液应澄清，否则药物中含有水不溶性杂质 13，巴比妥类药物含量测定
银量法（与银离子定量成盐）、溴量法（不饱和键）
小结
结构和性质
NH
N
O O H R 1R 2
1
2345
6O
∙弱酸性
（互变异构）
∙水解反应（酰亚胺基团）
∙与重金属离子反应(钴、铜、银、汞盐呈色)
∙有紫外吸收（碱性溶液）硫喷妥钠例外，酸碱性均可
鉴别试验
C C C N C NH O O O
R 1R 2
Ag
C C C N C N O O O
R 1R 2
Ag
Ag 铜盐反应吡啶+铜吡啶试液硫喷妥钠显绿色，其它显紫色或紫色沉淀↓
∙制备衍生物测定熔点
∙钠盐鉴别（焰色反应）
∙取代基或元素反应
司可巴比妥：烯丙基的反应（I 2或KMnO 4）
苯巴比妥：苯环取代基（亚硝酸钠-硫酸、硫酸-甲醛试液）
硫喷妥钠：硫元素的反应（Pb 2+生成PbS ↓）
丙二酰脲类
∙
司可巴比妥：97℃苯巴比妥：174℃-178℃
硫喷妥钠：157℃-161℃
特殊杂质检查
∙酸度
（中间体II 的副产物）
∙中性或碱性物质（中间体I 的副产物）
∙溶液的澄清度∙中性或碱性物质
*苯巴比妥
*司可巴比妥
含量测定
304nm （对照品硫喷妥）（注射用）
UV 法硫喷妥钠淀粉指示剂
电位法指示终点
溴量法银量法司可巴比妥苯巴比妥
14，芳酸及其酯类药物的分析
14-1 结构性质 重点：阿司匹林（aspirin ） 14-2 鉴别试验 1）与铁盐的反应 紫色配合物
1-1）水杨酸及其盐
1-2）氯贝丁酯 生成羟肟酸铁配位化合物；该反应多用于羧酸及其酯类的鉴别
3） 重氮化-偶合反应
具有芳伯氨基（或潜在；贝诺酯），加酸水解后产生游离的芳伯胺基，在酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，生成重氮盐，再与碱性β-萘酚偶合生成橘红色沉淀。

4)水解反应
14-3特殊杂质检查
1-1）阿司匹林中特殊杂质检查 可能杂质：
合成过程中：未反应完的酚类，生成的副产物苯酚、醋酸苯酯、水杨酸苯酯、乙酰水杨酸苯酯，乙酰化不全产生的水杨酸；等 贮藏中阿司匹林水解产生的水杨酸 1-2）检查
a.溶液的澄清度 阿司匹林溶于碳酸钠溶液，杂质不溶
b.游离水杨酸 水杨酸氧化生成的一系列醌类有色杂质对人体有害；水杨酸可在弱酸性溶液中与高铁盐反应而成紫堇色，而阿斯匹林（无游离酚羟基）不发生该反应。

c.易碳化物 检查易被硫酸碳化显色的低分子有机杂质 2-1）对氨基水杨酸钠中特殊杂质检查
间氨基酚 2-2）检查方法 2-2-1 双相滴定法
药典2005利用间氨基酚易溶于乙醚，而对氨基水杨酸钠不溶于乙醚的特性，用乙醚提取分离杂质后，乙醚提取液中加入适量水和指示剂，用盐酸滴定，以消耗一定量盐酸滴定液来控制其限量。

该法为双相滴定法，所生成的盐酸盐在乙醚中不溶，而转溶入水相中。

NH 2
COOH
OH
COO
O
NH 2
Fe
Fe
2
3
6
+ 4
+ 12 HCl
Cl
C C
CH 3
CH 3
NH O O 3
/Fe O Cl
C COOC 2H 5
CH 3
CH 3
Cl
C C
CH 3CH 3
NHOK
O O O NH 2OH HCl
KOH
H +
Fe 3+
氯贝丁酯
2-2-2 HPLC
3-1）氯贝丁酯中特殊杂质检查 对氯酚 14-4含量测定
一、酸碱滴定法 直接滴定法、水解后剩余滴定法、两步滴定法 二、亚硝酸钠滴定法 芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的药物在酸性水溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法指示反应终点。

三、双相滴定法 四、高效液相色谱法
小结
鉴别试验：
显色、沉淀、光度法
∙FeCl 3反应（pH 4.6）
含酚羟基或苯甲酸类
∙水解反应
（芳酸酯类）
∙重氮化-偶合反应1) HCl, NaNO 2, ∆2) 碱性β-萘酚
生成有色物或↓(贝诺
酯）
∙水解产物反应
（如：苯甲酸盐、丙磺舒）
∙异羟肟酸铁反应
∙UV 法
∙IR 法
含量=?
♥
酸碱滴定法
1) 直接滴定法
（ASA 原料、苯甲酸等）2) 水解剩余滴定法
(ASA 原料、羟苯乙酯)3) 两步滴定法
(ASA 片和肠溶片、氯贝丁酯)
♥双相滴定法（苯甲酸钠）
♥
亚硝酸钠滴定法
（芳伯胺或芳仲胺类药物、如对氨基水杨酸钠）
♥HPLC 法
（制剂）消除杂质、辅料和添加剂的干扰
乙醚层水层
HCl
♥紫外分光光度法
（直接、离子交换、柱分配色谱）
15，胺类药物的分析
芳胺类药物
HN
R 1C OR 2
O
R 1
R 3
R 4
NH C R 2
O ♦如R=H ，则有重氮化-偶合反应
♦弱碱性
♦易水解（OH -）
♦有UV 吸收
♦弱碱性
♦易水解，生成Ar-NH 2
♦与重金属离子反应生成↓
♦如R 1= OH ，则与FeCl 3呈色反应
H 2N
C O O
CH 2CH 2N
C 2H 5
C 2H 5
HCl
盐酸普鲁卡因注射液
HO
NH C O
CH 3
扑热息痛
鉴别试验
Ar-NH 2重氮化-偶合反应1)HCl, NaNO 2, 2) 碱性β-萘酚
Ar-OH ，FeCl 3呈色反应
Ar-NH-CO-R ，
Cu 2+或Co 2+反应(颜色)
Ar-CONHR ，羟肟酸铁反应（H 2O 2, FeCl 3）
制备衍生物测熔点
UV 法
IR 法
水解产物反应
H 2N
C O O
CH 2CH 2N
C 2H 5
C 2H 5HCl
COONa
H 2N + HOCH 2CH 2N(C 2H 5)2↑
OH -
HCl
COOH
H 2N
HCl
HOOC
NH 2HCl
盐酸普鲁卡因胺因其分子结构中具有芳酰胺结构，可被浓过氧化氢氧化成羟肟酸，再与三氯化铁形成配位化合物羟肟酸铁。

♣杂质检查
HO
NH C O
CH 3
扑热息痛
∙加乙醇应澄清；
比色检查颜色∙中间体、副产物、分解产物等TLC 检查
∙对氨基酚（合成过程或储藏不当而引入）
加甲醇和碱性亚硝基铁氰化钠(蓝色配位化合物)，比色对照即可。

H 2N
C O O
CH 2CH 2N
C 2H 5
C 2H 5
HCl
盐酸普鲁卡因注射液
易水解产生杂质
COOH
H 2N
TLC 检查
含量=？
∙亚硝酸钠滴定法
∙非水溶液滴定法（冰醋酸溶
解；高氯酸滴定；结晶紫指示剂；盐酸盐加醋酸汞）a. Hg(Ac)2
b. 醋酐，使突跃敏锐
∙UV 法
∙比色法
∙HPLC 法
∙荧光法
Ar-NH 2或Ar-NHR 加HCl, NaNO 2, 永停法
a. 加KBr 加快反应
b. 过量HCl 加快反应
c. (10~300C) 滴定
d. 滴定管尖端插入液面下约2/3处
e. 永停法或外指示剂法
测定条件
苯乙胺类药物
CH *OH R 1CH *
R 3
NHR 2
∙手性碳有旋光性
∙弱碱性
∙如R 1为酚类，易
氧化变色，与重金属离子络合。

CH 2CH CH 3
NHCH 3
CH CH CH 3
NH 2OH
甲基苯丙胺（MATM ）“冰毒”
苯丙醇胺“PPA ”
要求记忆：
肾上腺素、盐酸多巴胺、盐酸去氧肾上腺素
鉴别试验
具有酚羟基者
♠FeCl 3呈色反应
♠甲醛-硫酸反应
♠I 2或H 2O 2等氧化剂（定性）
♠UV 法
♠Rimini 试验（亚硝基铁氰化钠反应）
R-NH 2专属反应，亚硝基铁氰化钠、丙酮、碳酸氢钠呈红紫色♣杂质检查
∙酮体：UV 法
∙相关物质：TLC
∙双胍检查：纸色谱法
含量=？
∙溴量法（盐酸去氧肾上腺素，一分子消耗三分子溴）
∙比色法
∙提取酸碱滴定法
∙荧光法（肾上腺素）
∙HPLC 法
∙非水滴定法（4）
加过量溴反应，以碘量法测定剩余溴
供试品溶剂提取
中性乙醇溶解
标准酸滴定
H +或OH
-
提取酸碱滴定法
本法是依据本类药物的盐酸盐或硫酸盐可溶于水，而药物本身为游离碱不溶于水，可以溶于有机溶剂的一般通性进行的。

常用的方法是，将供试品溶于水或矿酸中，加入适量的碱性试剂使药物游离后，用适当的有机溶剂提取。

提取液蒸干，残渣加中性乙醇溶解，用标准酸滴定液直接滴定；或在提取液中加过量的标准酸滴定液，蒸去有机溶剂后，再用标准碱滴定液回滴。

（关键词：溶解性差异，碱化，提取，滴定） 氨基醚衍生物类药物（盐酸苯海拉明和茶苯海明）
含量=？
♣非水滴定法
♣银量法
♣酸性染料比色法（盐酸苯海拉明原料）
♣阴离子表面活性剂滴定法（盐酸苯海拉明注射液）
♣HPLC 法
与溴甲酚绿结合成有色的配位化合物，即离子对，可溶于氯仿中，产生有色的溶液，可在415 nm 处比色测定，对照品比较法计算含量
供试品
H +
磺基丁二酸钠二辛酯试液滴定
有色物
二甲基黄指示剂
终点：绿色变红灰色
C H
O CH 2CH 2N
CH 3CH 3
X
X= HCl ，盐酸苯海拉明
15，杂环类药物的分析
N
C O
NHNH 2
异烟肼 (isoniazid)
鉴
别试验
♦有色schiff 碱（染料）
♦二硝基氯苯反应
（紫红色）
♦还原反应
（肼类还原性）
♦缩合反应（肼类）
♦沉淀反应
♦分解产物反应
Koenig 反应
（戊烯二醛反应）尼可刹米；苯胺
加CNBr 、苯胺
Vongerichten 反应
加2,4-二硝基氯苯、乙醇、氢氧化钾
AgNO 3+NH 3·H 2O 银镜反应
加香草醛、乙醇，结晶测熔点
加Hg 2+、Cu 2+形成沉淀
加NaOH 或HCl 生成气体
♦UV
有关物质检查
尼可刹米中的杂质：(TLC 高低浓度对照法)
异烟肼中游离肼
∙TLC 法∙UV 法
∙比浊法：加水杨醛
乙醇液
含量=？
♠非水滴定法♠溴酸钾法
甲基橙指示剂
♠溴量法加过量Br 2，再用I 2标准液滴定之
♠碘量法
加过量I 2,再用Na 2S 2O 3滴定之
♠UV 法
♠HPLC 法
先用甲醇配制供试品溶液浓度为40mg/ml,再稀释成0.4mg/ml 和0.04mg/ml 对照液(1)和(2)，三者同时点样，如有杂质斑点，与(2)比较主斑点，不得更深；如有1个超过时，应不深于对照溶液(1)的主斑点。

N
C O N
C 2H 5C 2H 5
尼可刹米 (nikethamide)
§2. 吩噻嗪类：
N S R 1
R 2
UV 、IR 特征吸收
易氧化呈色
能与Pd 2+络合呈色
通常是：-H 、-Cl 、-CF 3
-COCH 3、-SCH 2CH 2
通常是：
—CH 2CH 2N(CH 3)2
N
N
N
如何鉴别？
UV
IR
加硫酸、硝酸或双氧水等呈色
加PdCl 2呈红色
根据分解产物反应
含量测定
♥非水滴定法
冰醋酸溶剂、高氯酸滴定剂
♥UV 法
♥比色法
♥铈量法H +介质，硫酸铈滴定
a. pH2.1 加Pd 2+, λmax =500nm, 测∆A
b. HCl 、FeCl 3，λmax =530nm, 测∆A
§3. 苯骈二氮杂卓类药物（镇静剂） 地西泮（安定）(diazepam)
酸性染料比色法
酸性染料比色法是利用碱性药物，在一定的PH 条件下，可与某些酸性染料结合显色，而进行分光光度法测定药物含量的方法。

（P229）
酸性染料比色法
(Acidic dyes colorimetry)
一.定义：有机药物与酸性染料定量地结合成有色络合物，在一定波长
处测定此溶液有色离子对的吸收度，即可求出其含量。

二.酸性染料具备条件：
A.在有机相中溶解度要大；
B.颜色要深；
C.有机相中离子对有足够的稳定性。

三.最佳条件：
最佳的pH 值、合适的溶剂、有机相中应脱水。

常用染料
甲基橙、溴甲酚绿(BCG)、溴百里酚蓝(BTB)溴酚蓝(BPB)、溴甲酚紫(BCP)、苦味酸(PA)等
16，生物碱类药物的分析
生物碱性质规律
1.大多数为晶形固体
部分为液体2.大多数为白色固体，
少数为黄色(小檗碱、
蛇根碱)3.具有旋光性
4.酸碱性
B.两性生物碱
A.酸性生物碱
C.碱性生物碱
5.溶解度(Solubility)
6.沉淀反应
7显色反应
8.UV 、IR 特征吸收
(optical rotation)
N N N
N O
H 3C
O
H CH 3
N N N N CH 3
CH 3
H O O
既有Ar-OH 或－COOH 也有
N
如吗啡等
在N 原子周围有供电子基团，则碱性增强；反之减弱。

季铵碱>叔铵碱>仲铵碱>酰铵碱
§2. 鉴别试验
一般鉴别
1. 测熔点法
2. 显色反应(加H 2SO 4和HNO 3)
3. 沉淀反应
(加碘化铋钾、碘化汞钾等
生成沉淀)
4. UV 法(特征吸收)
5. IR
6. TLC
7.HPLC
特殊鉴别
5.Marquis 反应加甲醛－硫酸试液显色(酚羟基-异喹啉生物碱)
1.双缩脲反应(芳环侧链具有氨基醇特征反应)
CuSO 4+NaOH 显蓝紫色
2.Vitaili 反应
发烟HNO 3+C 2H 5OH+NaOH
显深紫色4.紫脲酸铵反应
咖啡因+HCl+KClO 3残渣遇氨气显紫色加NaOH 紫色消失
3.绿奎宁反应二盐酸奎宁+Br 2+NH 3
产生翠绿色
含量＝?
§4.含量测定(Assay)
6.HPLC 法
7.GC 法
5.UV-Vis 法
2.提取酸碱滴定法
3.酸性染料比色法
生物碱
B+H +BH +
BH ++In -
(BH + ·In -)水相
有机溶媒(BH + ·In -)有机相
测A 值( >400nm)
∆λ 1.非水滴定法
BH +·A -+HClO 4BH +·ClO 4-+HA
供试品溶于水或稀矿酸
游离生物碱
碱性试剂
有机相
有机溶媒提取
中性乙醇溶解
酸直接滴定
过量酸溶解碱返滴定
加过量酸碱滴定
c
b a
蒸干蒸干
无水Na 2SO 4脱水4.硫氰酸铬铵法
硫氰酸铬铵法
(Ammonium thiecyanochromatic method)
BH ++
Cr(NH 3)2(SCN)4--
BH Cr(NH 3)2(SCN)4
溶于丙酮中
加热水解
碱性酒石酸钾钠
释放出SCN -(2)银量法
(1)灼烧法Cr 2O 3
举例
硫酸阿托品、硝酸士的宁、金雀花碱、
马前子碱、喹啉生物碱等
17，维生素类药物的分析 VB1（水溶性）
氨基嘧啶环噻唑环
维生素B1（vitamin B1），又称盐酸硫胺（thiamine hydrochloride
）-季铵化合物的盐酸盐。

性状、溶解性：白色结晶或结晶性粉末，干燥品在空气中可迅速吸收4%的水分。

在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶。

水溶液显酸性。

硫色素荧光法(体液)
紫外分光光度法(制剂)非水溶液滴定法(原料)
硅钨酸重量法(原料)含量测定
氯化物反应
硝酸铅反应
硫色素反应UV 沉淀反应鉴别试验
盐酸盐
噻唑环上含有S 元素噻唑环嘧啶环碱性N 原子结构和性质
硝酸铅反应、氯化物反应
VC （水溶性）
维生素C （vitamin C ），又称抗坏血酸，在化学结构上和糖类十分相似，有四种光学异构体（两个手性碳C4/C5），其中以L 构型右旋体的生物活性最强。

中国药典及美、英、日、等国药典收载的均为L-抗坏血酸（L-ascorbic acid ）。

酸性：分子结构中二烯醇基，尤其是C3-OH ，受共轭效应的影响，酸性较强（pK1=4.17）； C2-OH 的酸性极弱（ pK2=11.57 ），故维生素C 一般表现为一元酸，能与碳酸氢钠作用生成钠盐。

（注：如图，α，β-不饱和酮结构，在电荷的分布上，表现为氧负-吸电子效应，1正，2负，3正，电荷正负交替，因此3位带正电荷，表现出强的吸电子性，故呈现酸性，2位反之）
还原性：分子结构中的二烯醇基具极强的还原性，易被氧化为二酮基而成为去氢维生素C ，加氢又可还原为维生素C 。

在碱性或强酸性溶液中进一步水解为2,3-二酮古洛糖酸而
O
OH HO C H OH CH 2OH O 6
5
3
214L-抗坏血酸C 6H 8O 6= 176.13
失去活性（内酯环开环水解）。

[维生素C 与碳酸钠可生成单钠盐，与氢氧化钠作用，内酯
环水解生成酮酸盐。

]
鉴别试验
硝酸银反应、2，6-二氯靛酚钠反应----利用了VC的还原性
鉴别试验
⏹利用维生素C具糖类性质的反应：
维生素C 三氯醋酸或盐酸水解、脱羧戊糖失水糖醛
吡咯、加热至50°C蓝色
具体反应式见本科讲义
⏹紫外分光光度法：
维生素C 在0.01mol/L盐酸中，在243nm处有唯一的最大
吸收鉴别
本法在BP（1993）采用，并规定吸收系数应为545~585。

⏹红外分光光度法
含量测定---维生素C 具有较强的还原性
碘量法
2,6-二氯吲哚酚法
直接碘量法（原料药、制剂）
⏹
原理（还原性）:
+ I 2
+ 2HI
⏹
问题：应用:(简便、快速)
1. 加稀醋酸的目的?减慢氧化中国药典测维生素C 及其制剂含量
2. 为什么加新沸过的冷水?减少溶解氧的影响美、英、日等国均采用碘量法
3. 终点如何判断?溶液呈蓝色并30s 内不褪测定维生素C 的含量
4. 注射剂测定前加丙酮的目的?消除注射剂中抗氧剂亚硫酸氢钠对测定的影响
（注：亚硫酸氢钠可与羰基进行加成反应）
O
OH
NaO C
H
OH CH 2OH O
O
C
H
OH CH 2OH O O
O
H +
V A （水不溶）
维生素A1（视黄醇，retinol ），中国药典收载的维生素A 为全反式维生素A 醋酸酯的精制植物油溶液。

性质
⏹
性质：
⏹
1. 溶解性: 维生素A 能与氯仿、乙醚、环己烷、石油醚任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。

⏹
2. 易氧化变质: 维生素A 中有多个不饱和键性质不稳定空气中氧或氧化剂紫外光裂解（如果在加热和金属离子存在更易氧化变质）生成无活性的环氧化物维生素A 醛及维生素A 酸。

⏹
3. 紫外吸收性质: 结构中共轭多烯醇侧链，325nm~328nm 有强烈最大吸收。

⏹
4. 呈色反应: 维生素A 在氯仿中与三氯化锑试剂作用
不稳定的蓝色。

三氯化锑反应（Carr-Price 反应）---维生素A 和亲电试剂氯化高锑（V ）作用形成不稳定的正碳离子,显蓝色。

反应在无水、无醇条件下进行。

紫外吸收光谱 薄层色谱
含量测定
生物学方法
三氯化锑比色法
紫外分光光度法
（最初）
（目前强化食品或饲料）
（目前各国药典）
操作烦琐、费时
专属性差方法准确度与重现性较差
呈色极不稳定维生素A +三氯化锑
325~328nm 最大吸收
（无水氯仿）
蓝色
含量测定（618~620nm 最大吸收）
测维生素A 含量
注意：溶剂不同 max 、E 不同
VE （水不溶）
维生素E （vitamin E ）：α-生育酚（tocopherol ）及其各种酯类。

中国药典收载的维生素E 为消旋-α-生育酚醋酸酯（ dl –α– tocopheryl ），收载的制剂有粉剂、片剂、注射剂、胶丸。

维生素E （vitamin E ）：苯并二氢吡喃(色满醇)衍生物, 苯环上有一个乙酰化的酚羟基
结构决定性质：1）长的烷基链决定其水不溶性 2）苯环决定其紫外吸收性
3）乙酰化的酚羟基水解后体现出酚类易被氧化的性质
CO O H 3C O
CH 3CH 3
CH 3
CH 3CH 3
CH 3CH 3CH 31
2
3
456
781'3'5'7'9'11'13'
硝酸反应酸性水解再氧化酚羟基
三氯化铁反应碱性水解再络合酚羟基
紫外光谱0.01%无水乙醇液在波长284nm处有最大吸收, 在波长254nm处有最小吸收.
薄层色谱法薄层板: 硅胶G薄层板
展开剂: 环己烷-乙醚(4:1)
显色剂: 硫酸
结果: α–生育酚、α–生育酚醋酸酯、α–生育醌的Rf值分别为0.5、
0.7、0.9。

HPLC
IR
杂质检查
酸度（制备过程中引入的游离醋酸）
生育酚（乙酰化不完全）
中国药典采用硫酸铈滴定法检查维生素E中的游离生育酚，限量为2.15%。

原理：
游离生育酚具强还原性，可被硫酸铈定量氧化，用消耗硫酸铈滴定液的体积控制游离生育酚的限量。

显色剂：二苯胺（此反应可用于含量测定）
正己烷（残留溶剂：GC-FID、HP-5、外标法）
含量测定
利用水解产物游离生育酚易被氧化的性质铈量法
将铁(III)还原为铁(II)后，与不同试剂生成配位化合物进行比色测定。

硝酸氧化、邻苯二胺缩合测定荧光。

高效液相色谱法日本药局方
色谱柱：id 4mm，长15~30cm的不锈钢柱。

固定相：ODS
流动相：甲醇-水（49:1）
检测器：紫外
检测波长：292nm
分离度：应大于2.6(生育酚与其醋酸酯)
精密度：峰高的相对标准偏差应小于0.8%(n=3)
气相色谱法：简便快速、专属性强。

各国药典多采用，适于VE尤其制剂测定。

载气：氮气
固定相：硅酮（OV-17）
柱温：265°C
检测器：FID。